專利名稱：一種疫苗耐熱凍干保護劑及制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種疫苗耐熱凍干保護劑，尤其是ー種豬瘟疫苗耐熱凍干保護劑，及其制備方法，屬于獸藥生產(chǎn)領域。
背景技術：
目前，在我國獸用生物制品中，活的凍干疫苗占相當大的比例，國內常用的保護劑主要為牛奶、蔗糖、明膠等，組方簡單，保護功能差。如果在2°C 8°C條件下，保存期只有4 6月，多需要在_15°C以下保存。加上國內傳統(tǒng)的獸用生物制品保護劑的研制相對滯后，使成品的長期保存和運輸受限。所以，耐熱凍干保護劑的研究是非常急需的，在20世紀80年代，發(fā)達國家就已開始進行耐熱凍干保護劑的研究。我國在耐熱凍干保護劑方面的研究起步較晚，加上中國市場巨大，國外生物制品涌入，市場競爭加劇。為了本國生物制品業(yè)的生存和發(fā)展，新型有效的耐熱凍干保護劑的研究和應用顯得尤為迫切。耐熱凍干保護劑的種類按分子量分類分為低分子量和高分子量化合物以及天然混合物和其它物質。低分子量化合物，又可以分為酸性物質、中性物質和堿性物質。酸性物質主要為谷氨酸、天冬氨酸、蘋果氨酸、乳酸等；中性物質主要為葡萄糖、肌醇、乳糖、蔗糖、棉籽糖、海藻糖、山梨醇DL-蘇氨酸、肌醇、木糖醇等；堿性物質主要為精氨酸和組氨酸等；高分子化合物主要為白蛋白、鼓性蛋白、明膠、蛋白陳?？扇苄缘矸?、糊精、肉汁、果膠、阿拉伯膠、羥甲基纖維素(CMC)、藻類等；天然混合物如脫脂牛奶、血清等；其它物質如抗壞血酸、半胱氨酸、羥胺、胺基源等。低分子化合物在凍干過程中直接發(fā)揮作用，高分子化合物促進低分子化合物的保護作用。一般制備保護劑時，多將低、高分子化合物配合使用。其它ー些物質是為了防止對凍干活性物質有害的胺基、羥基起氧化反應，可選擇添加使用。按保護劑功能和性質分類分為填充劑、防凍劑、抗氧化劑、酸堿調整劑、緩沖劑、羥基中和剤。填充劑能防止有效物質隨水蒸氣一起升華飛散并使之成形，如甘露醇、乳糖、明膠等；防凍劑能防止和減少冷凍過程結晶水的形成，如甘油、ニ甲亞砜(DMS0)、蔗糖、聚こ烯吡咯烷酮(PVP)等；抗氧化劑能防止保存過程中的氧化反應，如維生素D、維生素E、蛋白質水解物、硫代硫酸鈉等；酸堿調整劑能將PH值調整到活性物質的最穩(wěn)定區(qū)域，如磷酸、山梨醇、EDTA (こニ胺四醋酸ニ納)、氨基酸等；其他物質如葡聚糖、脫脂乳、谷氨酸鈉、硫服、碘化鉀等。低聚木糖又稱木寡糖由2-7個木糖分子以β-1，4糖苷鍵結合而成的功能性聚合糖。酸、熱穩(wěn)定性好，難發(fā)酵，與其他低聚糖相比，低聚木糖的突出特點是穩(wěn)定性非常好。即使在酸性條件下(ΡΗ=2. 5-7)加熱至100°C也基本不分解，根據(jù)文獻，低聚木糖中的木三糖、木ニ糖和木糖都有還原性，木四糖以上沒有。亞硒酸鈉研究表明，硒顯著地影響免疫系統(tǒng)所包含的全部三種調節(jié)機制，即細胞免疫、體液免疫和非特異免疫。硒還能促進淋巴細胞產(chǎn)生抗體，使血液免疫球蛋白水平增高或維持正常，因此臨床中給腫瘤患者適量補硒，可有效提高患者機體免疫功能，增強機體防癌和抗癌能力。硒作為谷胱甘肽過氧化酶的成分，具有抗氧化作用；調節(jié)免疫、抗腫瘤作用。硒具有抗氧化作用，參與輔酶QlO的合成，保持細胞膜完整性，維持動物肌體的正常生長發(fā)育，缺硒可引發(fā)多種疾病和癌癥。硒是人體免疫調節(jié)營養(yǎng)素，既能激活細胞免疫中淋巴細胞，又能刺激免疫球蛋白及抗體產(chǎn)生。免疫調節(jié)作用是通過抗氧化劑輔酶Q、半胱氨酸、維生素E來完成，而這些都要在硒的參與下才能激活，缺硒必然導致免疫力下降，各類疾病相繼出現(xiàn)。硒不但能維持動物體正常的生長發(fā)育，與機體抗氧化機制密切相關，還能提高動物的體液免疫和細胞免疫功能，增強機體對傳染性疾病的抵抗能力，是加強機體免疫系統(tǒng)和抗感染能力必不可少的微量元素之一。補硒能增強體液免疫。給動物補硒能夠提高羊紅細胞抗原，還能提高免疫球蛋白(IgM、IgA)的含量。豬瘟疫苗耐熱凍干保護劑的研究，?，F(xiàn)用5%蔗糖脫脂奶為保護劑的豬瘟細胞凍干疫苗，在2°C 8°C保存僅12個月，加耐熱凍干保護劑疫苗，在2°C 8°C可保存2年后。說明耐熱凍干保護劑比常規(guī)的保護劑更能有效地保護疫苗，保存時間更長久。耐熱凍干保護劑的種類和配比是影響疫苗的質量和保存效果的重要因素。凍干保護劑可影響生物制品的質量、效價和穩(wěn)定性，改變生物制品的生產(chǎn)エ藝，提高產(chǎn)品預測能力并增大產(chǎn)品批次間的穩(wěn)定性。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供了一種疫苗耐熱凍干保護劑，尤其是ー種豬瘟疫苗耐熱凍干保護劑，目的是將疫苗耐熱凍干保護劑與豬瘟弱毒疫苗混合，解決豬瘟活疫苗僅能在-I 5°C條件下保存和運輸?shù)募夹g瓶頸。一種疫苗耐熱凍干保護劑，制成的疫苗凍干生產(chǎn)液成分為羧甲基纖維素鈉I 2 %、低聚木糖4 6 %、谷氨酰胺I 2 %、亞硒酸鈉0.2 0.4%，余量為蒸餾水。上述疫苗耐熱凍干保護劑的制備方法如下I)將羧甲基纖維素鈉3 6 %，作為A液；
2)將低聚木糖I2 I 8 %，作為B液；
3)谷氨酰胺3 6%，亞硒酸鈉0 . 6 I . 2 %，作為C液；
4)將A液、B液和C液，按I:I :1 (V/V)構成疫苗耐熱凍干保護劑；
上述疫苗耐熱凍干保護劑的應用，將疫苗凍干保護劑按3:1 (V/V)與豬痕疫苗病毒液混合，制成豬瘟凍干疫苗生產(chǎn)液。 將上述豬瘟凍干疫苗生產(chǎn)液分裝后進行冷凍干燥。產(chǎn)品在2 8°C保存24個月，仍保持凍干后的外形，病毒含量均超過國家獸醫(yī)生物制品規(guī)程的標準。凍干前后病毒損失率低，凍干產(chǎn)品耐老化程度高，產(chǎn)品在2 8で保存2 4個月，病毒含量不發(fā)生改變。本發(fā)明解決豬瘟活疫苗僅能在-I 5 °C條件下保存和運輸?shù)募夹g瓶頸。
具體實施例方式實施例I豬瘟疫苗耐熱凍干疫苗的制備
I)將市售化學純羧甲基纖維素鈉按4 8%與去離子水混合，98 100°C，加熱30min，冷卻至室溫(20°C )，作為A液。2)將市售食品級低聚木糖按4 8%與去離子水混合，攪拌混勻，作為B液。
3)將谷氨酰胺按4 8%，亞硒酸鈉按0. 8 I. 6%，與去離子水混合，攪拌混勻，作為C液。4)將A液、B液和C液，按1:1 :1 (V/V)作為疫苗凍干保護劑。5)將疫苗凍干保護劑按3:1 (V/V)與豬瘟疫苗病毒液混合，制成豬瘟凍干疫苗生產(chǎn)液。6)分裝后進行冷 凍干燥。7)密封、包裝。-20V -40V冷凍保存，或2°C 8°C保存。
權利要求
1.一種疫苗耐熱凍干保護劑，其特征在于耐熱凍干保護劑由下述重量百分比的物質混配而成羧甲基纖維素鈉I 2 %、低聚木糖4 6 %、谷氨酰胺I 2 %、亞硒酸鈉0.2 0.8%，余量為蒸餾水。
2.權利要求I所述的疫苗耐熱凍干保護劑的制備方法，包括如下步驟 1)將羧甲基纖維素鈉與蒸餾水混合，作為A液； 2)將低聚木糖與蒸餾水混合，作為B液； 3)將谷氨酰胺、亞硒酸鈉與蒸餾水混合，作為C液； 4)將A液、B液和C液按I:1 :1 (V/V)混合，作為耐熱凍干保護劑。
3.根據(jù)權利要求2的制備方法，其特征在于步驟I)中，羧甲基纖維素鈉與蒸餾水在98°C 100°C混合，加熱30min，冷卻至室溫(20°C )，制成A液。
4.權利要求I所述耐熱凍干保護劑的應用，其特征在于將疫苗凍干保護劑按3:1(V/V)與豬瘟疫苗病毒液混合，制成豬瘟凍干疫苗生產(chǎn)液。
5.權利要求4所述的應用，其特征在于將上述豬瘟凍干疫苗生產(chǎn)液分裝后進行冷凍干燥。
6.權利要求4所述的應用，其特征在于豬瘟活疫苗在2 8で保存24個月。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種疫苗耐熱凍干保護劑及制備方法，尤其涉及一種豬瘟疫苗耐熱凍干保護劑，由下述重量百分比的物質混配而成羧甲基纖維素鈉１～２％、低聚木糖４～６％、谷氨酰胺１～２％、亞硒酸鈉0.2～0.8％，余量為蒸餾水。其制備方法，包括如下步驟1)將羧甲基纖維素鈉與蒸餾水混合，作為A液；2)將低聚木糖與蒸餾水混合，作為B液；3)將谷氨酰胺、亞硒酸鈉與蒸餾水混合,作為C液；4)將A液、B液和C液按111(V/V)混合,作為耐熱凍干保護劑。本發(fā)明設計的豬瘟活疫苗耐熱凍干保護劑, 在凍干過程及保存過程會保持病毒活性,減緩豬瘟病毒弱毒活疫苗活性下降。
文檔編號A61K47/18GK102641504SQ201210108539
公開日2012年8月22日 申請日期2012年4月14日 優(yōu)先權日2012年4月14日
發(fā)明者單虎, 常維山, 張傳美, 楊瑞梅, 秦曉冰, 韓先杰, 黃娟 申請人:青島農業(yè)大學