專利名稱：扯根菜提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及扯根菜提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
扯根菜(Penthorum chinense Pursh),在民間又名趕黃草、水澤蘭、水楊柳等，是虎耳草科(Saxifragaceae)扯根菜屬(Penthorum Gronvexl)植物扯根菜(PenthorumGronvexl)的干燥地上部分。始載于明代《救荒本草》，在苗家民間有上千年的用藥史，是治療肝病的著名經(jīng)驗方，苗人世代沿用，流傳至今。現(xiàn)收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部部頒標準中藥成方制劑十三冊》附錄。其性溫、味甘、無毒，具有清熱、利尿、消腫、解毒、活血、平肝、健脾、醒酒、祛黃疸等功效，主治黃疸、脾虛、水腫、跌打損傷，以及各型肝炎、脂肪肝等。已知的扯根菜的化學(xué)成分主要有熊果酸、喬松素、東莨菪內(nèi)酯、沒食子酸， 槲皮素，熊果酸-28-木糖-(1-3)-葡萄糖苷、槲皮素-3-0-a-L-吡喃李糖苷，喬松素-7-0-β -D-卩比喃匍萄糖苷、喬松素-7-新澄皮糖苷、沒食子酸匍萄糖苷、2，6- 二輕基苯乙酮4-0-β -D-吡喃葡萄糖苷、東莨菪苷，β -谷留醇以及兩個具有二氫黃酮骨架的化合物和26個組分組成的揮發(fā)油，其中苷及苷元在制備防治肝炎、肝損傷、肝纖維化、肝硬化、酒精肝、肝癌和高血脂相關(guān)藥物中應(yīng)用，為已知具有抗乙肝病毒和保肝作用的成分。但目前尚未見對總黃酮進行精制的報導(dǎo)。因此，現(xiàn)在研究把總黃酮作為藥用活性部位精制具有極大的臨床應(yīng)用價值和市場開發(fā)價值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是要解決現(xiàn)有的扯根菜總黃酮提取物含量低、操作方法復(fù)雜、無法大規(guī)模生產(chǎn)等問題，而提供的扯根菜提取物的制備方法。本發(fā)明中扯根菜總黃酮提取物的制備方法是按下述步驟進行的一、將扯根菜用去離子水煎煮兩次，合并兩次煎煮液，過濾得濾液，將濾液在真空度為-O. 085MPa，溫度為50 80°C下進行減壓濃縮得到清膏；其中，所述煎煮中第一次煎煮去離子水的質(zhì)量是扯根菜質(zhì)量的10 16倍，第二次煎煮去離子水的質(zhì)量是扯根菜質(zhì)量的6 10倍，所述清膏相對密度為I. 10 I. 16 ;二、按質(zhì)量比為I : (O. 5 2)將步驟一中獲得的清膏與去離子水進行混合，調(diào)節(jié)PH值至6. O 7. O后靜置，然后收集上清液，調(diào)節(jié)上清液pH值至2. O 3. O后靜置，收集上層液體即得到提取液；三、將步驟二得到的提取液進行聚酰胺樹脂層析純化，再用去離子水洗脫，棄去水洗液后使用體積濃度為50% 90%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，然后收集乙醇洗脫液；四、對步驟三中收集的乙醇洗脫液在真空度為-O. 08MPa，溫度為50 80°C下進行減壓蒸餾回收乙醇洗脫液，調(diào)節(jié)乙醇洗脫液pH值至6. O 7. 0，減壓濃縮，干燥，即得到扯根菜提取物。發(fā)明效果
本發(fā)明采用聚酰胺樹脂處理之前，先采用酸處理提取液，使提取液中的黃酮及有機酸均已非成鹽狀態(tài)下進入樹脂柱中，并且能夠較完全的被樹脂吸附，并且針對性較好。同時采用乙醇能夠較完全的解吸黃酮與有機酸。該工藝除乙醇外，不使用其他有機溶劑，使得工藝流程簡單，生產(chǎn)設(shè)備要求較低，制造成本降低，同時該方法的的提取物收率較高超過6.0%,該提取物總黃酮含量超過80 %，達到國家中藥注射劑原料的技術(shù)要求，該提取物可作為中藥注射劑原料或口服制劑的原料。本發(fā)明方法獲得的扯根菜提取物中總黃酮含量以無水蘆丁(C27H3tlO16)計，不少于80% ;單體成分槲皮素(C15HltlO7)含量不少于6.0%。還含有沒食子酸、喬松素、喬松素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖苷、喬松素-7-新橙皮糖苷、沒食子酰葡萄糖苷、熊果酸-28-木糖-(1-3)-葡萄糖苷、沒食子酸、熊果酸等。
具體實施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間的任意組合。
具體實施方式
一本實施方式中扯根菜提取物的制備方法是按下述步驟進行的一、將扯根菜用去離子水煎煮兩次，合并兩次煎煮液，過濾得濾液，將濾液在真空度為-O. 085MPa，溫度為50 80°C下進行減壓濃縮得到清膏；其中，所述煎煮中第一次煎煮去離子水的質(zhì)量是扯根菜質(zhì)量的10 16倍，第二次煎煮去離子水的質(zhì)量是扯根菜質(zhì)量的6 10倍，所述清膏相對密度為I. 10 I. 16 ;二、按質(zhì)量比為I : (O. 5 2)將步驟一中獲得的清膏與去離子水進行混合，調(diào)節(jié)PH值至6. O 7. O后靜置，然后收集上清液，調(diào)節(jié)上清液pH值至2. O 3. O后靜置，收集上層液體即得到提取液；三、將步驟二得到的提取液進行聚酰胺樹脂層析純化，再用去離子水洗脫，棄去水洗液后使用體積濃度為50% 90%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，然后收集乙醇洗脫液；四、對步驟三中收集的乙醇洗脫液在真空度為-O. 08MPa，溫度為50 80°C下進行減壓蒸餾回收乙醇洗脫液，調(diào)節(jié)乙醇洗脫液pH值至6. O 7. 0，減壓濃縮，干燥，即得到扯根菜提取物。本實施方式效果本實施方式采用聚酰胺樹脂處理之前，先采用酸處理提取液，使提取液中的黃酮及有機酸均已非成鹽狀態(tài)下進入樹脂柱中，并且能夠較完全的被樹脂吸附，并且針對性較好。同時采用乙醇能夠較完全的解吸黃酮與有機酸。該工藝除乙醇外，不使用其他有機溶齊U，使得工藝流程簡單，生產(chǎn)設(shè)備要求較低，制造成本降低，同時該方法的的提取物收率較高超過6.0%，該提取物總黃酮含量超過80%，達到國家中藥注射劑原料的技術(shù)要求，該提取物可作為中藥注射劑原料或口服制劑的原料。本實施方式獲得的扯根菜提取物中總黃酮含量以無水蘆丁(C27H3tlO16)計，不少于80% ;單體成分槲皮素(C15HltlO7)含量不少于6.0%。還含有沒食子酸、喬松素、喬松素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖苷、喬松素-7-新橙皮糖苷、沒食子酰葡萄糖苷、熊果酸-28-木糖-(1-3)-葡萄糖苷、沒食子酸、熊果酸等。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟一中煎煮時間為每次I 3小時。其它步驟和參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是步驟二中靜置時間為12 24小時。其它步驟和參數(shù)與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一至三之一不同的是步驟三中聚酰胺樹脂純化中聚酰胺樹脂質(zhì)量與扯根菜的質(zhì)量比為I : 3。其它步驟和參數(shù)與具體實施
方式一至三之一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一至四之一不同的是步驟三中去離子水洗脫時去離子水與樹脂柱的體積比為6 10 I。其它步驟和參數(shù)與具體實施方式
一至四之一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一至五之一不同的是步驟三中洗脫樹脂柱時體積濃度為50% 90%的乙醇溶液與樹脂柱的體積比為5 I。其它步驟和參數(shù)與具體實施方式
一至五之一相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
一至六之一不同的是步驟三中的聚酰胺樹脂純化中提取液通過聚酰胺柱的流速是I 4BV/h。其它步驟和參數(shù)與具體實施方式
一至六之一相同。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
一至七之一不同的是步驟三中去離子水洗脫中去離子水用量為6 10BV，流速為I 4BV/h。其它步驟和參數(shù)與具體實施方式
一至七之一相同。
具體實施方式
九本實施方式與具體實施方式
一至八之一不同的是步驟三中體積濃度為50% 90%的乙醇溶液洗脫樹脂柱時乙醇溶液用量為4 8BV，流速為I 4BV/h。其它步驟和參數(shù)與具體實施方式
一至八之一相同。
具體實施方式
十本實施方式與具體實施方式
一至九之一不同的是步驟四中干 燥為減壓干燥、噴霧干燥和冷凍干燥。其它步驟和參數(shù)與具體實施方式
一至九之一相同。通過以下試驗驗證本發(fā)明有益效果試驗I :一、取扯根菜粗粉100kg，將扯根菜用去離子水煎煮兩次，煎煮時間分別為I. O小時，合并兩次煎煮液，過濾得濾液，將濾液于60°C、-O. 085MPa進行減壓濃縮得到清膏；其中，所述煎煮中第一次煎煮去離子水的質(zhì)量是扯根菜中藥材質(zhì)量的12倍，第二次煎煮去離子水的用量是扯根菜中藥材質(zhì)量的10倍，所述清膏相對密度為I. 10 I. 16 ;二、按質(zhì)量比為I : I將步驟一中獲得的清膏與去離子水進行混合，調(diào)節(jié)pH值至6. 5 7. O后靜置24小時，，然后收集上清液，沉淀棄去，調(diào)節(jié)上清液pH值至2. O后靜置24小時，然后收集上層液體即得到提取液；三、將步驟二得到的提取液進行聚酰胺樹脂層析純化，再用去離子水洗脫，棄去水洗液后使用體積濃度為80%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，然后收集乙醇洗脫液；其中，所述聚酰胺樹脂純化中聚酰胺樹脂質(zhì)量與扯根菜的質(zhì)量比為I : 3，去離子水洗脫時去離子水與樹脂柱的體積比為7 1，洗脫樹脂柱時體積濃度為80%的乙醇溶液與樹脂柱的體積比為5 1，聚酰胺樹脂純化中提取液通過聚酰胺柱的流速是I. 5BV/h，去離子水洗脫中去離子水用量為7BV，流速為I. 5BV/h，體積濃度為80%的乙醇溶液洗脫樹脂柱時乙醇溶液用量為5BV，流速為 I. 5BV/h ；
四、對步驟三中收集的乙醇洗脫液進行回收乙醇洗脫液，調(diào)節(jié)乙醇洗脫液pH值至6. 5 7. 0，于60°C、-O. 08MPa減壓濃縮，減壓干燥，即得到扯根菜提取物；本試驗得到的扯根菜提取物收率> 6. 2% ；本試驗中扯根菜提取物的主 要成分含量測定按以下步驟進行通過標準品定位，初步認為扯根菜提取物中包括總黃酮和有機酸，其中總黃酮中含有喬松素、喬松素苷、槲皮素，有機酸中含有沒食子酸、沒食子酰葡萄糖苷、熊果酸-28-木糖-(1-3)-葡萄糖苷、熊果酸七種成分；由本試驗采用紫外分光光度法在350nm吸光度下測定總黃酮含量；本試驗中總黃酮含量以無水蘆丁(C27H3tlO16)計，無水蘆丁(C27H3tlO16)化學(xué)對照品批號110080-200306，由中國藥品生物制品檢定所提供；采用高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VID)測定槲皮素含量，其中，高效液相法中十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水-磷酸系統(tǒng)為流動相，檢測波長350nm，本試驗中高效液相色譜儀采用安捷倫1100系列液相色譜儀，配有在線脫氣機，四元梯度洗脫栗，柱溫禮，色譜柱為Penomenex Luna C18 250 X 4. 6mm 5 urn，色譜純(DIKMA)，其它試劑為市售分析純，本試驗中的槲皮素化學(xué)對照品為批號100081-200406，由中國藥品生物制品檢定所提供；以扯根菜批號110601、110201、110501與110701為測定材料重復(fù)試驗I四次，然
后分別進行了四次總黃酮與槲皮素含量測定，取四次重復(fù)測定結(jié)果，結(jié)果如表I所示表I扯根菜提取物質(zhì)量控制含量測定結(jié)果
權(quán)利要求
1.扯根菜提取物的制備方法，其特征在于扯根菜提取物的制備方法按以下步驟實現(xiàn) 一、將扯根菜用去離子水煎煮兩次，合并兩次煎煮液，過濾得濾液，將濾液在真空度為-O. 085MPa，溫度為50 80°C下進行減壓濃縮得到清膏；其中，所述煎煮中第一次煎煮去離子水的質(zhì)量是扯根菜質(zhì)量的10 16倍，第二次煎煮去離子水的質(zhì)量是扯根菜質(zhì)量的6 10倍，所述清膏相對密度為I. 10 I. 16 ; 二、按質(zhì)量比為I: 0.5 2將步驟一中獲得的清膏與去離子水進行混合，調(diào)節(jié)pH值至6. O 7. O后靜置，然后收集上清液，調(diào)節(jié)上清液pH值至2. O 3. O后靜置，收集上層液體即得到提取液； 三、將步驟二得到的提取液進行聚酰胺樹脂層析純化，再用去離子水洗脫，棄去水洗液后使用體積濃度為50% 90%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，然后收集乙醇洗脫液； 四、對步驟三中收集的乙醇洗脫液在真空度為-O.08MPa，溫度為50 80°C下進行減壓蒸餾回收乙醇洗脫液，調(diào)節(jié)乙醇洗脫液pH值至6. O 7. 0，減壓濃縮，干燥，即得到扯根菜提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的扯根菜提取物的制備方法，其特征在于步驟一中煎煮時間為每次I 3小時。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的扯根菜提取物的制備方法，其特征在于步驟二中靜置時間為12 24小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的扯根菜提取物的制備方法，其特征在于步驟三中聚酰胺樹脂純化中聚酰胺樹脂質(zhì)量與扯根菜的質(zhì)量比為I : 3。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的扯根菜提取物的制備方法，其特征在于步驟三中去離子水洗脫時去尚子水與樹脂柱的體積比為6 10 : I。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的扯根菜提取物的制備方法，其特征在于步驟三中洗脫樹脂柱時體積濃度為50% 90%的乙醇溶液與樹脂柱的體積比為5 I。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的扯根菜提取物的制備方法，其特征在于步驟三中的聚酰胺樹脂純化中提取液通過聚酰胺柱的流速是I 4BV/h。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的扯根菜提取物的制備方法，其特征在于步驟三中去離子水洗脫中去離子水用量為6 10BV，流速為I 4BV/h。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的扯根菜提取物的制備方法，其特征在于步驟三中體積濃度為50 % 90%的乙醇溶液洗脫樹脂柱時乙醇溶液用量為4 8BV，流速為I 4BV/h。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的扯根菜提取物的制備方法，其特征在于步驟四中干燥為減壓干燥、噴霧干燥和冷凍干燥。
全文摘要
本發(fā)明涉及扯根菜提取物的制備方法。本發(fā)明是要解決現(xiàn)有的扯根菜總黃酮提取物含量低、操作方法復(fù)雜、無法大規(guī)模生產(chǎn)等問題，而提供的扯根菜提取物的制備方法。方法一、將扯根菜用去離子水煎煮后減壓濃縮得到清膏；二、將清膏與去離子水進行混合靜置收集上層液體即得到提取液；三、將提取液進行聚酰胺樹脂純化收集乙醇洗脫液；四、乙醇洗脫液進行減壓蒸餾回收乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得到扯根菜提取物。本發(fā)明應(yīng)用于扯根菜提取物的制備領(lǐng)域。
文檔編號A61P3/06GK102920755SQ201210490728
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月27日
發(fā)明者任瑞濤, 李云濤, 吳志軍, 王麗娜, 單鈺毓, 李殿明 申請人:哈藥集團中藥二廠