專利名稱：：網(wǎng)地藻目提取物、其制備方法和含有這類提取物的組合物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及生物學領域，更精確地說是涉及來自海洋生物的活性物質。本發(fā)明涉及從網(wǎng)地藻目類植物提取的新型生物活性物質、其制備方法和含這類提取物的組合物。本發(fā)明的組合物用于改善動物和人組織細胞外基質(MEC)糖基化組分的合成。網(wǎng)地藻目類植物一詞，更具體地說是能夠以所謂霰石的的結晶形式，在其葉狀體上固定、縮合、沉淀或合成碳酸鈣的植物。所述植物一詞可以指干燥或新鮮的、粉碎的或未處理的植物。用于提取本發(fā)明的生物活性物質的植物是褐藻類，巖藻綱，網(wǎng)地藻目，網(wǎng)地藻科類。只有一些屬是屬于網(wǎng)地藻目類，它們是團扇藻屬、圈扇藻屬或網(wǎng)地藻屬。團扇藻屬包括大多數(shù)常見的種。例如，可以在地中海沿岸發(fā)現(xiàn)的種pavomca、boyana(P.tenuis)和boergesenii，在太平洋沿岸的(不包括已經(jīng)提到的)樹狀團扇藻、南方團扇藻、boryana、caulens、三層團扇藻、concrescens、大團扇藻、durvillei、elegans、fernandeziana、fraseri和gymnospora，以及在大西洋沿岸的glabra、haitensis、distromatica和dubia。還有印度洋的典型種。這些植物的特征之一是在其葉狀體上固定一層碳酸鈣霰石或在葉狀體表面有正交晶型碳酸鈣。該特征通過從這些植物得到的粉末的X-射線衍射分析來檢測。X-射線衍射表明在2θ角，這些植物有明顯的強峰-3.393°，-3.268°，-2.699°，-2.682°，-2.371°，-2.336°(雙重峰)，-1.976°和-1.877°(雙重峰)。這些衍射角是霰石的特征。本發(fā)明涉及新型生物活性物質，它們改善動物和人組織細胞外基質糖基化組成的合成，而且是從網(wǎng)地藻目類植物中提取的。這些新型生物活性物質的特征在于是多環(huán)結構，所述多環(huán)具有直鏈或支鏈的含有4-10個碳原子的側鏈，且該側鏈具有一個或兩個雙鍵。還將進一步用更精確的分析數(shù)據(jù)表征所述新型物質。本發(fā)明還涉及從網(wǎng)地藻目類植物中提取所述生物活性物質的方法。第一步，在收集后，干燥網(wǎng)地藻目類植物，如果可能的話，蔭干以保持其藥理學特性。通過日曬緩慢干燥會導致物質的活性不高，而且也不穩(wěn)定。因此優(yōu)選使用更適宜的方法來干燥，其主要條件是可以得到活性物質。出于該原因，通過通風而不是加熱來干燥粉碎的或未處理的植物，由此得到深栗色的植物原料，在其上白色碳酸鈣粉層對比強烈。另一種方法，盡管不太經(jīng)濟，但令人滿意該方法包括高度瀝干植物中的水分，然后真空干燥。凍干粉碎的或未粉碎的植物，以有利的方式得到無水產(chǎn)物。后兩種技術可以得到很脆并易還原成粉末的深棕綠色物質，有利于用溶劑提取以得到生物活性物質。高度干燥的植物的優(yōu)點是可以得到保持很好的植物原料(不含水)，從中可以提取一種或多種穩(wěn)定的或不穩(wěn)定的活性物質，而不會因極性溶劑的存在而受到影響。此外，更容易將完全干燥的植物粉碎成粉末。制備生物活性物質的方法的特征在于使網(wǎng)地藻目類植物干燥和/或凍干，然后粉碎，接著用選自下列的有機溶劑將植物原料提取一次或多次以得到植物的有機提取物低級鏈烷醇(乙醇……)、脂肪酮(丙酮……)、鏈烷烴(戊烷、己烷，庚烷……)、環(huán)烷烴(環(huán)己烷……)、鹵代溶劑(氯仿、二氯甲烷……)、芳族溶劑、酯(乙酸乙酯……)、醚等，通過蒸發(fā)掉溶劑來干燥有機提取物，通過液/液接觸、通過低壓或高壓柱色譜或高效液相色譜，連續(xù)完成一個或多個純化步驟，從而純化干燥的有機提取物以得到網(wǎng)地藻目類植物的活性物質?？梢詥为毣蚪M合使用有機溶劑。通常，可以使用可與水混溶的有機溶劑，以及所有能夠從植物葉狀體中提取活性物質的溶劑。優(yōu)先選用揮發(fā)性溶劑，因為可以得到不含溶劑的生物活性物質。事實上，可以從載體，如纖維素或其衍生物，硅膠，高分子量鏈烷烴如石蠟，兩性溶劑如聚乙二醇(PEG)，丙二醇或惰性產(chǎn)物如甘油等上蒸發(fā)掉溶解生物活性物質的揮發(fā)性溶劑。優(yōu)選的有機溶劑是丙酮或乙醇。所用的比例優(yōu)選為每5ml溶劑溶解1g干燥的植物原料，植物原料和有機溶劑的接觸時間優(yōu)選為4-5天。但是，在浸漬過程中，干燥原料與溶劑的比例很不同會得到良好的結果。對于相同量干燥原料所用的總量可以從1到50。此外，有機溶劑與植物原料的接觸時間為12小時到5天。另外，盡管使用更困難，但用氨介質進行含水提取會得到滿意的結果。為了完成生物活性物質的提取，不需用所選的溶劑浸漬植物原料，可以使溶劑連續(xù)在粉末上通過(滲流)。調節(jié)流速并濃縮提取物足以得到具有所選活性的溶液。在本發(fā)明中，在干燥和/或凍干并粉碎后，通過使植物與丙酮以每5ml丙酮1g原料的比例與丙酮接觸，可以一次或多次提取網(wǎng)地藻目類植物。通過蒸發(fā)掉溶劑來干燥丙酮提取物，然后通過下列純化步驟來純化。第一個純化步驟是通過液/液接觸而完成的。將在甲醇/水混合物中的干燥丙酮殘留物或提取物與己烷接觸。在第二步，在濃縮和用水稀釋后，使水-甲醇相與醚接觸。用該方法，最后的醚相是有生物活性的。第二個純化步驟是用低壓柱色譜表征的。所用的載體是SephadexLH20型凝膠。用氯仿/甲醇進行梯度洗脫。用97/3(體積/體積)的氯仿甲醇洗脫生物活性組分。在用氯仿/甲醇70/30混合物柱洗的過程中，洗脫了殘留的第二活性組分。用半制備性高效液相色譜(HPLC)完成下列純化步驟。柱的大小為250mm(長)和10mm(直徑)。所用的載體是C18接枝的二氧化硅和二醇接枝的二氧化硅。流速為8ml/分。在二醇接枝的二氧化硅載體上，洗脫劑為92/8的己烷/異丙醇，在20-25分鐘和35-40分鐘之間洗脫出活性組分。在C18接枝的二氧化硅載體上，洗脫劑為85/15的乙腈/水，在15-17分鐘之間洗脫活性組分，或洗脫劑為85/15/0.05的乙腈/水/乙酸，在17-20分鐘和30-40分鐘之間洗脫活性組分。在這些純化步驟結束時，得到黃綠色的生物活性物質。用各種分析方法(UV，IR，NMR譜，薄層色譜……)來表征從網(wǎng)地藻目類植物提取的一種或多種生物活性物質。在甲醇中記錄的最終活性組分的UV譜的特征在于有數(shù)個吸收帶，分別位于202nm(在228nm有一肩峰)，在260-270nm之間，400-460nm之間和630nm。在這些純化步驟結束時，還進行了帶有化學顯色的薄層色譜(TLC)(所用的顯色劑為硫酸茴香醛、硫酸香草醛、磷鉬酸鹽和硫酸乙醇溶液)。顯色后，出現(xiàn)了數(shù)個斑點。前沿的保留時間為Rf＝0.15和0.90，0.95，相當于源自在相同條件下完成的制備性TLC的生物活性區(qū)，即用二醇接枝的二氧化硅，用85/15己烷/異丙醇洗脫的TLC板。質譜、IR譜及質子NMR譜或13CNMR譜同樣可以完全提供根據(jù)本發(fā)明從網(wǎng)地藻目類植物提取的新型生物活性物質的結構信息。13CNMR譜分析特別表明該多環(huán)結構帶有含4-10個碳原子的側鏈，該側鏈為直鏈或支鏈形式且?guī)в幸粋€雙鍵。通過在5ml純乙醇中將1g干燥的植物原料浸漬或浸提12小時，同樣可以從網(wǎng)地藻目類植物中提取生物活性物質。乙醇是很容易被細胞接受的溶劑，而且與細胞浸沒在其中的含水營養(yǎng)液容易完全可混溶。然后完成下列純化步驟。在正常二氧化硅柱上完成高壓色譜。將20μl生物舌性組分注射入高壓色譜中，然后用庚烷/醚混合物(90/10)，以2ml/分鐘的流速洗脫組分。在6.9-8.5分鐘洗脫的組分中，發(fā)現(xiàn)了所有從網(wǎng)地藻目類植物中提取的物質的活性。用C18接枝的二氧化硅裝HPLC柱，洗脫劑是甲醇/水(80/20)混合物，流速為4ml/分鐘。在16-18分鐘的保留時間后洗脫的組分中，濃縮了所有提取物質的活性。光散射檢測譜圖顯示出了一定量減壓操作條件下構成植物活性組分的物質，故而移動相的蒸發(fā)并不帶走活性組分。因此，在純化步驟中并用丙酮浸取從網(wǎng)地藻目類植物提取的新型生物活性物質，由下列分析數(shù)據(jù)表征在二醇接枝的二氧化硅載體上半制備性高效液相色譜中，洗脫劑為己烷/異丙醇(92/8)，保留時間為20-25分鐘和35-40分鐘，-在C18接枝的二氧化硅載體上半制備性高效液相色譜中，洗脫劑為乙腈/水(85/15)，保留時間為15-17分鐘，在C18接枝的二氧化硅載體上半制備性高效液相色譜中，洗脫劑為乙腈/水/乙酸(85/15/0.05)。保留時間為17-20分鐘和30-40分鐘，在純化步驟中，和用乙醇浸取，則分析數(shù)據(jù)是-在標準二氧化硅柱上高壓色譜中洗脫劑為庚烷/醚(90/10)，保留時間為6.9-8.5分鐘，-在C18接枝的二氧化硅裝的高效液相色譜柱中，洗脫劑為甲醇/水(80/20)，保留時間為16-18分鐘。在純化步驟后，用丙酮浸取，由下列分析數(shù)據(jù)表征生物活性物質-在甲醇中UV譜有數(shù)個吸收帶，分別位于202nm(在228nm有一肩峰)，260-270nm之間，400-460nm之間和630nm。-有化學顯色的薄層色譜(TLC)(所用的顯色劑為硫酸茴香醛、硫酸香草醛、磷鉬酸鹽和硫酸乙醇溶液)，化學顯色后，前沿保留時間為Rf＝0.15，0.90和0.95。用有機溶劑提取的物質常常很難處理(蒸發(fā)、水合作用、暴燃……)。因此，需要將其固定在一種或多種固體載體如有機吸附劑聚合物如纖維素，礦物質或礦物吸附性組分或吸附劑(硅膠……)，更惰性的產(chǎn)品如石蠟，聚乙二醇(PEG)，丙二醇，聚乙烯基吡咯烷酮等……。所有低度氧化的惰性載體均是適宜的。根據(jù)網(wǎng)地藻目類植物物質的提取條件、固定材料、穩(wěn)定條件和固定提取溶劑的材料，固定物質的特征可以有很大不同。因此，稠度可以變化，顏色可以從純綠到栗色。本發(fā)明還涉及吸附在無機或有機惰性材料上，然后去溶劑化的生物活性物質。根據(jù)本發(fā)明，從網(wǎng)地藻目類植物中提取的生物活性物質有很令人感興趣的藥理學特性，因此可用于治療、化妝品、食用、人和家畜營養(yǎng)、植入和骨或關節(jié)外科。這些物質可以以藥物、化妝品和/或營養(yǎng)組合物或植入物的形式使用?？梢杂脧木W(wǎng)地藻目類植物提取的生物活性物質改變動物和人組織細胞外基質(ECM)糖基化成分的合成。這些物質刺激氨基葡糖聚糖(GAG)如透明質酸、軟骨素、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸類肝素、肝素和硫酸角質素的合成，以及蛋白多糖，如聚集蛋白聚糖、核心蛋白聚糖、雙糖鏈蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、纖調蛋白聚糖、纖維蛋白聚糖、多配體蛋白聚糖、β-蛋白聚糖和磷脂酰肌醇蛋白聚糖的合成。因此，用本發(fā)明的生物活性物質制備用于改善動物和人組織細胞外基質(ECM)糖基化成分的合成，特別是用于刺激動物和人組織細胞外基質(ECM)的氨基葡糖聚糖(GAG)和蛋白多糖的合成。特別是將本發(fā)明的物質制備用于改善皮膚中氨基葡糖聚糖(GAG)和蛋白多糖糖基化合成的化妝品或皮膚組合物。本發(fā)明的物質刺激結締組織或間質細胞的蛋白質合成和糖苷合成。用所述物質制備通過直接作用于上皮細胞而用于間接再建結締或間質細胞活性的局部用組合物。從網(wǎng)地藻目類植物提取的物質刺激ECM氨基葡糖聚糖的高爾基體和膜合成以及ECM蛋白多糖的高爾基合成。因此這些物質增加例如膠原蛋白、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、透明質酸等的合成。用這些物質制備用于刺激ECM氨基葡糖聚糖的高爾基體和膜合成以及ECM蛋白多糖的高爾基合成的組成。本發(fā)明的物質在皮膚細胞(成纖維細胞、角質化細胞)、骨細胞(成骨細胞、軟骨細胞)和非骨關節(jié)組織細胞(滑膜細胞)上有活性。在人體中，攝入從網(wǎng)地藻目類植物提取的生物活性物質，如其本身為干燥狀態(tài)的植物也同樣會增加間質組織，特別是皮膚(真皮和上皮)，以及骨(軟骨、松質骨、小梁骨、骺軟骨……)ECM糖基化成分的合成。因此，特別用從網(wǎng)地藻目類植物提取的物質制備用于預防和/或治療皮膚、骨和軟骨組織損傷的藥物組合物。通常，用這些物質制備用于預防和/或治療與動物和人組織細胞外基質的糖基化成分有關的疾病的組合物。本申請人在其研究中還表明該活性不同于由大部分激活物質，如雌甾二醇和維生素D3(1-25-(OH)2D3)、維生素C等所誘導的活性。在植物中所含的一種或多種活性物質甚至在存在不利試劑，如白細胞介素(如IL-1)的條件下也表現(xiàn)其活性，因此，這些生物活性物質有修復活性。這些生物活性物質還通過中間信使如細胞因子、生長因子或激素的作用對細胞產(chǎn)生間接活性，所述中間信使由從植物提取的活性物質所達到的第一細胞種群分泌出的，并作用于靶細胞。在源自屬于不同分支的動物種，如環(huán)節(jié)動物門、囊狀體、節(jié)肢動物門、軟體動物、雙殼類軟體動物(Conchiferes)、棘皮動物門、鳥和哺乳動物的細胞上可以表達從網(wǎng)地藻目類植物提取的物質的活性。還用從網(wǎng)地藻目類植物提取的生物活性物質制備用于改進節(jié)肢動物門和Conchiferes的飼養(yǎng)，并改善卵殼的質量。在骨外科手術中，從網(wǎng)地藻目類植物提取的物質有很大優(yōu)點。事實上，這些物質在移植過程中保持了人成骨細胞的表型，而且可以用植入的生物材料插入到關節(jié)附近以便再生骨和關節(jié)表面。因此用所述物質制備同樣用于預防和/或治療關節(jié)病的組成。還用本發(fā)明的物質制備局部使用的用于預防和/或治療與細胞外基質的糖基化成分有關之局部區(qū)域性疾病的組合物。還可以用生物活性物質制備用于預防和/或治療與細胞外基質變性有關之疾病的組合物，以及用于再生軟骨組織或添加到食物中的組合物。本發(fā)明還涉及藥物、化妝品和/或食物組合物，所述組合物改變動物和人組織細胞外基質之糖基化組分的合成，其特征在于作為活性成分，它們含有一種或多種從網(wǎng)地藻目類植物提取的生物活性物質，與惰性、非毒性賦形劑或適用的載體以及需要的話，與一種或多種有補充作用的活性成分，相結合或相混合。本發(fā)明的藥物、化妝品和/或食物組合物于消化道、腸胃外、皮、局部或直腸施用。因此，所述組合物是非包被或包被片劑、糖丸、膠囊、膠囊劑、丸劑、小片、淀粉膠囊、糖漿、粉末形式以便吞服或外用，用于手術后斑痕形成燒傷或創(chuàng)傷的佐劑組合物；栓劑；裝在安瓿瓶中的可注射水溶液或懸浮液；軟膏，凝膠或藥膏；或經(jīng)皮使用在穿透性極性溶劑中的溶液。皮膚用的但有系統(tǒng)作用的組合物是特別原始的，因為已經(jīng)表明，在這些條件下，當將從網(wǎng)地藻目類植物提取的生物活性物質用于角質化細胞(表皮)時，能夠通過作用于軟骨細胞、滑膜細胞、成骨細胞，而且勿用置疑，包括其它間質細胞可以刺激因子的分泌。本發(fā)明還涉及植入物，其特征在于作為活性成分它們含有的一種或多種從網(wǎng)地藻目類植物提取的生物活性物質與惰性、非毒性賦形劑或適用的載體以及如果需要的話，一種或多種有補充作用的活性成分相結合或混合。下列實施例和結果說明本發(fā)明。它們不以任何方式對本發(fā)明構成限制。實施例I從網(wǎng)地藻目類的植物提取物質的活性研究1)活性研究對所有在高效液相色譜或高壓色譜中能分離的組分進行了活性研究，以表明所觀察到的作用歸因于特定植物的生物活性物質。本申請人使用兩種半定量評估方法來研究這些植物的活性。從組織或細胞培養(yǎng)，通過免疫標記因其特異性抗體而固定的細胞，或在檢測細胞破碎后，通過特異性抗體揭示及鑒定物質而完成的凝膠色譜或電泳(在電場中進行色譜)篩選了細胞外基質組分。在這兩種情況下，通過與熒光分子或與酶結合的第二抗體來揭示特異性抗體，所述酶活性通過底物攜帶的色基來顯示。在使用著色底物時(Western印跡)，通過圖分析(免疫熒光)或簡單的分光光度測定法可以完成有關的定量分析。在必需進行圖分析時，使用可以對數(shù)種細胞培養(yǎng)得到的數(shù)種射線照相結果進行定量分析的BIOCOM200分析儀。在每種情況下，表示成與對照和/或合成蛋白質的總質量的相對值(半定量評估)。半定量評估能夠在結果之間對比。此外，不可能將一種組分的合成與另一種組分的合成進行比較，因為盡管抗體有特異性，但兩種抗原-抗體結合物的抗體親和性不同。對于同種抗體，彼此間的結果是可以進行比較的。從在手術過程中取出的組織片段，對分離的細胞進行了基質合成研究。用單層一級培養(yǎng)得到了培養(yǎng)物，通過三維細胞培養(yǎng)物可以確認結果。組織片段、皮膚、關節(jié)、骨的培養(yǎng)物得到了相同的結果。2)結果用與收到的信號數(shù)值相應的數(shù)目來表示結果。在下列表中，《BAS)字母表示從網(wǎng)地藻目類植物提取的生物活性物質。在單層一級培養(yǎng)中通過人成纖維細胞合成的硫酸皮膚素</tables>在單層一級培養(yǎng)中，通過人成纖維細胞合成的透明質酸</tables>在單層培養(yǎng)中，通過軟骨細胞合成的硫酸軟骨素</tables>在單層培養(yǎng)中，通過軟骨細胞合成的透明質酸</tables>3)活性對照按照有關三維培養(yǎng)的文字說明，完成了該對照。在此，使用了藻酸凝膠。在三維培養(yǎng)中，通過人軟骨細胞合成的硫酸軟骨素</tables>在三維培養(yǎng)中，通過人軟骨細胞合成的透明質酸</tables>用從不同哺乳動物骨樣品收集的成骨細胞培養(yǎng)物得到了很相似的結果。此外，為了證實所述結果，將從網(wǎng)地藻目類植物提取的生物活性物質用于正常或被破壞軟骨的組織培養(yǎng)物。已證明，在硫酸軟骨素和透明質酸型氨基葡糖聚糖儲量方面被損傷的軟骨合成能力差。用從網(wǎng)地藻目類植物提取的生物活性物質治療的被損壞的軟骨表明，比未用活性物質治療過的健康對照，有更高的合成率。4)生物活性物質的藥理學作用從網(wǎng)地藻目類植物提取的生物活性物質的藥理學作用表現(xiàn)在a)在細胞外基質的不利抑制劑存在的情況下，所述物質的愈合活性。b)經(jīng)信使，如細胞因子、生長因子或激素，所述物質的間接作用?，F(xiàn)在，文獻上均認為大多數(shù)關節(jié)病是現(xiàn)象是由于關節(jié)表面變性的結果。a)愈合活性一種物質的治療活性看作為通過對引起病理學過程的生物干擾劑的有害作用作出反應的可能性。白細胞介素1(IL-1)是最大的病理學干擾劑。這就是為什么通過在IL-1存在的條件下培養(yǎng)的間質細胞生產(chǎn)氨基葡糖聚糖的情況來評估網(wǎng)地藻目科植物提取的生物活性物質的活性?！ぴ贗L-1存在的條件下的培養(yǎng)結果·在單層培養(yǎng)中，通過人成纖維細胞合成的透明質酸</tables>在單層培養(yǎng)中通過人成纖維細胞合成的硫酰皮膚素和硫酸軟骨素·在單層培養(yǎng)中、通過人成骨細胞合成的透明質酸在單層培養(yǎng)中，通過人成骨細胞合成的軟骨素透明質酸在三維培養(yǎng)中，通過人軟骨細胞合成的透明質酸在三維培養(yǎng)中，通過人軟骨細胞合成的硫酸軟骨素用其它型細胞和外植組織培養(yǎng)，得到了相同的結果。因為必須要考慮斷面，所以用外植組織進行半定量評估很困難。b)間接作用本申請人驚奇地觀察到用網(wǎng)地藻目類植物提取的生物活性物質(BAS)溫育的細胞能將信號傳遞給其他細胞，這種細胞的信號是在與生物活性物質接觸時觀察到的。因此，這些生物活性物質可以刺激第二信使的分泌。該信使到達其他類型的細胞并刺激蛋白多糖的合成。為了說明該現(xiàn)象，用下列方法進行試驗。在角質化細胞培養(yǎng)物(人上皮細胞)中，將生物活性物質加到培養(yǎng)基中。培養(yǎng)數(shù)小時后，將細胞漂洗數(shù)次以便除去殘留的生物活性物質(BAS)。然后，加入不含小牛血清也不含動物血清的新培養(yǎng)基(例如K.E.M.或MacCoy)。新的培養(yǎng)后，再吸出該培養(yǎng)基。凍干由此得到的符合技術條件的培養(yǎng)基。吸出凍干物，然后用特異性培養(yǎng)基一1/4或1/10稀釋，在所述特異性培養(yǎng)基中開始第二次培養(yǎng)(例如DMEM用于成纖維細胞，MacCoy用于成骨細胞)。經(jīng)從角質化細胞所得的符合技術條件的培養(yǎng)基處理的細胞培養(yǎng)物以相同的比例增加蛋白多糖的合成，如果已直接用生物活性物質對其自身進行了處理，而存在角質化細胞的符合技術條件的培養(yǎng)基存在下培養(yǎng)的，但不是用生物活性物質培養(yǎng)的那些幾乎沒有改變其合成。此外，根據(jù)是否在用醇或含水培養(yǎng)基稀釋前，吸出凍干物，對符合技術條件的培養(yǎng)基的反應會有所不同。在某些試驗條件下，當用醇吸出用角質化細胞符合技術條件的培養(yǎng)基時，成骨細胞有最好的反應，而如果用培養(yǎng)基直接吸出凍干物時，相同的處理(一方面是成纖維細胞，另一方面是成骨細胞)產(chǎn)生較好的反應。這表明由細胞分泌的并且對于相同種群產(chǎn)生相同信號的信使是不同的。該試驗使得考慮通過將含活性組分的組合物應用于皮膚角質形成細胞或上皮組織上，改善皮下深層組織中蛋白多糖合成的可能性。實施例II組合物1)作為實施例，可以制備下列一種提取物(含有生物活性物質)</tables>或</tables>將含生物活性物質(BAS)的提取物固定在載體上；</tables>蒸發(fā)掉在纖維素衍生物載體上的有機溶液?；?lt;/tables>在P.E.G.液體或固體中的蒸餾有機溶液。有機溶液/載體比例可以有很大的變化，而且與所想要的作用(質量作用、延遲配制、原位的作用、一般的全身作用等)有關。2)一般使用的組合物膠囊和片劑的配方(其中用乙醇提取活性物質，然后固定在惰性載體上)是最簡單的。為了得到它們，將用乙醇提取的生物活性物質與微晶纖維素、潤滑劑(如滑石)和壓片佐劑(如山崳酸甘油酯)混合。通過使用經(jīng)乙醇提取的、固定在聚乙二醇4000或6000上，并用Aerosil或Sippernat型硅膠稀釋的生物活性物質的被吸附物制備膠囊。用或不用容器、并使用Transcutol型的典型賦形劑常規(guī)配制經(jīng)皮制劑?？梢杂眉兓纳锘钚晕镔|配制可注射用制劑，是通過將所述純化的生物活性物質溶解在適宜注射用的溶液或懸浮液中而制備的。制劑實施例a)以從網(wǎng)地藻目類植物提取的生物活性物質(BAS)為基礎的膠囊藥物用途的優(yōu)選組合物是可以口服給藥的形式，如片劑、糖丸、膠囊劑、膠囊，它們至少含一種從網(wǎng)地藻目類植物提取的生物活性物質或在惰性載體上的生物活性物質的被吸附物作為活性成分，以及或與惰性、非毒、可與藥物相容的用途的稀釋劑或賦形劑，和如果需要時的一種或多種有補充作用的活性成分結合或混合。對于食物用途來講，用營養(yǎng)性的食物載體如面粉或惰性物如纖維素或富含纖維素的制品稀釋從網(wǎng)地藻目類植物提取的食物活性物質。這些組合物主要涉及甲殼類動物，如蝦的飼養(yǎng)。以蝦為例在一個月內，對一池中的180000只蝦用藥劑量1.5kg，該制劑可以提高孵出存活率30％并增加成熟動物體重10％±2％。因此，生物活性物質可以增加動物平均體重和/或縮短成熟期。對產(chǎn)蛋雞所進行的類似試驗表明在第二產(chǎn)蛋期，破裂的雞蛋數(shù)減少2％。3)局部-區(qū)域使用的組合物植入物的使用(片放在皮膚下的小片劑)已是通常的。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在替代性激素治療中有較大的應用。它可以進行長期的治療?？紤]通過外科手術，將浸漬從網(wǎng)地藻目類植物提取的活性物質構成的活性成分的生物材料如合成聚合物(多乳酸、聚丙烯酸)，礦物質羥基磷灰石、磷酸鈣，生物材料珍珠母、珊瑚……植入，而且毫無疑問，對于刺激細胞外基質蛋白多糖的合成會產(chǎn)生有益的結果。4)通用、皮膚學或化妝品用目的的局部組合物對于化妝品或皮膚學用途，優(yōu)選使用軟膏或凝膠，在該領域其應用是最方便和有效的。這些制劑非限制性地使用水包油或油包水型乳劑。在化妝品領域的一些應用中，將這些乳劑設計成乳液、日或晚霜，在皮膚學應用中，設計成軟膏、凝膠、凝膠-霜混合的制劑。例如，可以列舉乳劑制劑；這些制劑均至少含有三種組分水、脂肪體、乳化劑或表面活性劑。顯然，在最終配方中還可以加入其它物質如著色劑、質地改善劑、相關或無關的活性成分、防腐劑、pH穩(wěn)定劑、氧化穩(wěn)定劑。油膏是只是將親脂賦形劑組合在一起的制劑。凝膠是有半透明外觀的組合物，其中水和有時加入的親脂組分(或硅氧烷)呈膠體或膠體懸浮液狀態(tài)。生物活性物質(BAS)的濃度可以有很大的變化，其范圍可以在乳液劑量的0.01-20％之間，0.01％是最低限劑量。同樣還可以考慮使用生物活性物質的包被形式(脂質體、納球、納膠囊等)，因為這些能提高活性。當活性成分為20％時，就需要注意調整制劑，以便可使活性保持在平穩(wěn)的水平?，F(xiàn)代制劑形式同樣選定凝膠。許多是用稱之為Carbomeres的丙烯酸衍生的聚合物來配制。其它類型的方法可以得到凝膠，如纖維素或其衍生物、硅膠、糖醛酸聚合物、甘露聚糖、半乳甘露聚糖、黃蓍膠等。實施例含預先干燥的用乙醇提取的活性物質的水包油軟膏</tables>顯然可以配制其他局部的、藥物和化妝品應用制劑，如海綿制品、具有局部作用的貼劑、粉、棒(唇膏)等。權利要求1從網(wǎng)地藻目類植物提取的改善動物和人組織細胞外基質糖基化組分合成的生物活性物質。2根據(jù)權利要求1的生物活性物質，其特征在于它們有一多環(huán)結構，所述多環(huán)結構具有直鏈或支鏈側鏈，其上攜帶4-10個碳原子，并具有一個或多個雙鍵。3根據(jù)權利要求1或2的生物活性物質，其特征在于它們有下列分析數(shù)據(jù)-在二醇接枝的二氧化硅載體半制備性高效液相色譜中的保留時間為20-25分鐘和35-40分鐘之間，洗脫劑為己烷/異丙醇，比例為92∶8；-在C18接枝的二氧化硅半制備性高效液相色譜中的保留時間為15-17分鐘之間，洗脫劑為乙腈/水，比例為85∶15；-在C18接枝的二氧化硅半制備性高壓液相色譜中的保留時間為17-20分鐘和30-40分鐘之間，洗脫劑為乙腈/水/乙酸，比例為85∶15∶0.05；-普通硅膠柱高壓色譜中的保留時間為6.9-8.5分鐘，洗脫劑為庚烷/醚，比例為90∶10；-在C18-接枝的硅膠柱高壓液相色譜柱中的保留時間為16-18分鐘，洗脫劑為甲醇/水，比例為80∶20。4根據(jù)權利要求1-3之一的生物活性物質，其特征在于其在甲醇中的UV譜有數(shù)個吸收帶，分別位于202nm，在228nm有一肩峰，在260-270nm之間，400-460nm之間和630nm，在薄層色譜化學顯色(硫酸茴香醛、硫酸香草醛、磷鉬酸鹽、硫酸/乙醇)后，前沿的保留時間為0.15，0.90，0.95。5根據(jù)權利要求1-4之一的生物活性物質，其特征在于將它們吸附在惰性礦物質或有機材料上，然后去溶劑化。6制備權利要求1-4之一的生物活性物質的方法，其特征在于將網(wǎng)地藻目科的植物干燥和/或凍干，然后粉碎，接著用選自下列的有機溶劑進行一次或多次植物原料的提取，以得到植物的有機提取物，通過蒸發(fā)溶劑干燥所述有機提取物，通過液體/液體接觸、低壓或高壓柱色譜、高效液相色譜中的一種或多種連續(xù)完成的純化步驟來純化干燥的有機提取物以生產(chǎn)網(wǎng)地藻目類的活性物質，所述有機溶劑選自低級鏈烷醇、脂肪酮、烷烴、環(huán)烷烴、鹵代溶劑、芳香族溶劑、酯、醚等。7根據(jù)權利要求6的制備生物活性物質的方法，其特征在于優(yōu)選用乙醇或丙酮作為有機溶劑。8根據(jù)權利要求6和7的制備生物活性物質的方法，其特征在于植物原料(植物)與有機溶劑的比例優(yōu)選為5ml溶劑1g植物材料，而且植物材料與有機溶劑的接觸時間為12小時-5天。9改善動物或人組織細胞外基質糖基化組分之合成的藥物、化妝品和/或食物組合物，其特征在于它們含有作為活性成分的一種或多種權利要求1-5之一的生物活性物質，所述活性物質與惰性非毒的、適用于所需目的的載體以及任選的一種或多種有補充作用的活性成分混合或組合。10根據(jù)權利要求9的組合物，其中所述惰性載體是適用于經(jīng)消化道、胃腸外、經(jīng)皮、局部或直腸施用的那些。11根據(jù)權利要求1-5之一的生物活性物質的用途，用于合成改變動物和人組織細胞外基質糖基化組分的合成的組合物。12根據(jù)權利要求1-5之一的生物活性物質的用途，用于合成刺激動物和人組織細胞外基質氨基葡糖聚糖和蛋白多糖的合成的組合物。13根據(jù)權利要求1-5之一的生物活性物質的用途，用于合成刺激細胞外基質氨基葡糖聚糖的高爾基體和膜之合成和蛋白多糖的高爾基體的合成的組合物。14根據(jù)權利要求1-5之一的生物活性物質的用途，用于合成預防和/或治療與動物和人組織的細胞外基質的糖基化組分有關的疾病的組合物。全文摘要本發(fā)明涉及生物學領域,更精確地說是涉及海洋生物活性物質。本發(fā)明還涉及從網(wǎng)地藻目類植物提取的并且用其分析的特性來表征的新型活性物質。本發(fā)明還涉及制備這些新型物質的方法,以及含這類物質的藥物、化妝品和/或者食物的組成。本發(fā)明的生物活性物質使用目的在于獲得準備用于改善動物和人組織細胞外基質糖基化成分的合成。文檔編號A61K8/31GK1183045SQ97190218公開日1998年5月27日申請日期1997年1月20日優(yōu)先權日1996年1月18日發(fā)明者G·古鐵雷斯申請人:特克辛芬尼有限公司,拉法爾實驗室