專利名稱：一種治療疤痕的皮膚外用基質(zhì)及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種皮膚外用基質(zhì)，特別是一種治療疤痕的皮膚外用基質(zhì)及其制備方法，用于抑制成纖維增生、抑制和消除疤痕增生。
背景技術(shù)：
創(chuàng)傷愈合(Wound healing)是指由于機體遭受外力作用，皮膚等組織出現(xiàn)離斷或缺損后的愈復過程，為包括各種組織的再生和肉芽組織增生、疤痕組織形成的復雜組合，表現(xiàn)出各種過程的協(xié)同作用。創(chuàng)傷愈合本質(zhì)上是機體對各種有害因素作用所致的組織細胞損傷的一種固有的防御性適應性反應。創(chuàng)傷愈合的基礎(chǔ)是炎癥細胞如巨噬細胞、中性粒細胞以及修復細胞如成纖維細胞、表皮細胞等的一系列生物學活動，同時，細胞基質(zhì)也參與其中。創(chuàng)面愈合過程主要與損傷的深度有關(guān)，比較一致的觀點認為，整個愈合過程可以分為以下三個既有區(qū)別，又互有聯(lián)系、相互交叉重疊進行的時期炎癥期、修復期和成熟期。疤痕形成始于修復期。大約從第3天開始從傷口底部及邊緣長出肉芽組織，填平傷口。毛細血管大約以每日延長0. 1 0. 6mm的速度增長，其方向大都垂直于創(chuàng)面，并呈袢狀彎曲。第5 6天起纖維母細胞產(chǎn)生膠原纖維，其后一周膠原纖維形成甚為活躍，以后逐漸緩慢下來。隨著膠原纖維越來越多，出現(xiàn)瘢痕形成過程，大約在傷后一個月疤痕完全形成。隨著燒傷治愈率的提高，深度燒傷創(chuàng)面愈合后瘢痕遺留問題日益成為燒傷整形治療的主要難題。瘢痕的基本病理學改變是細胞外基質(zhì)大量堆積，主要是膠原蛋白的無序堆積和比例失衡，成纖維細胞是膠原合成和分泌的主要功能細胞，成纖維細胞的生長增殖、膠原合成活動與瘢痕形成密切相關(guān)。目前，國內(nèi)外對各種類型的疤痕治療尚無特別有效的方法。目前國內(nèi)外對于疤痕的治療常見的有硅凝膠治療、加壓治療、類固醇皮質(zhì)激素治療、激光治療、冷凍治療、放射治療、手術(shù)治療、干擾素、中醫(yī)藥，以及重組人表皮生長因子、A型肉毒毒素、高壓氧、基因治療等等。本發(fā)明人之一曾申請了中國發(fā)明專利一植物基質(zhì)(ZL02120138.2)，該專利詳細描述了一種100%純的可食用的植物原汁的基質(zhì)，同時還涉及一種包括100%純的可食用的植物原汁和食用油的基質(zhì)。并提供了這種基質(zhì)的應用領(lǐng)域一“利用這種基質(zhì)可以制備成各種具有各種美容、皮膚護理、護發(fā)定型和治療作用的產(chǎn)品?！钡?，未發(fā)現(xiàn)它具有抑制疤痕增生的作用，及其藥用用途。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種治療疤痕的皮膚外用基質(zhì)及其制備方法，主要解決對上述現(xiàn)有技術(shù)所存在的技術(shù)問題，本發(fā)明提供的皮膚外用基質(zhì)可以抑制疤痕成纖維細胞增殖、抑制和消除疤痕增生。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的。一種治療疤痕的皮膚外用基質(zhì)，其特征在于它由按照重量百分比的第一混合物 68. 4%、第二混合物31%和瓜爾膠0. 6%組成；其中第一混合物是由仙人掌汁66. 4%和三乙醇胺1組成，第二混合物是由芝麻油20%、硬脂酸8%和單硬脂酸甘油酯3%組成；該皮膚外用基質(zhì)主要體現(xiàn)為抑制疤痕成纖維細胞增殖、抑制和消除疤痕增生的藥用用途。一種治療疤痕的皮膚外用基質(zhì)的制備方法，其特征在于它采用如上所述的組分和比例形成基質(zhì)，具體采用如下步驟(1)選采摘新鮮仙人掌，去刺后清洗3次，切碎，然后將切碎后的仙人掌用膠體磨研磨，得到仙人掌懸液，用離心機轉(zhuǎn)速為IOOOrpm離心，再用150 - 250目濾網(wǎng)過濾除去固體物，收集于容器中，將濾液置于自然沉降分層，得仙人掌組織及上清液；該仙人掌組織及上清液與三乙醇胺放入水相罐，SOrpm攪拌，同時加熱到 95° C，保溫消毒60分鐘，得第二混合物；(2)將的芝麻油、硬脂酸、單硬脂酸甘油酯放入油相罐，SOrpm攪拌，同時加熱到88° C士2° C，保溫消毒40分鐘，得第一混合物；(3)將得到的第一和第二混合物與瓜爾膠在真空乳化機中混合，攪拌速度為120prm ；待充分混合后， 在溫度為90° C下，將攪拌速度控制為SOrpm，啟動均質(zhì)器4分鐘，待溫度降到30° C 士 2° C 時，轉(zhuǎn)速控制在lOrpm，打入無菌空氣后，即可得到用于治療的基質(zhì)。本發(fā)明中，發(fā)明人第一次在體外試驗中證實一定濃度含量的仙人掌提取液對于真皮和疤痕成纖維細胞的體外增殖有明顯的抑制作用。進而，在實際應用中發(fā)現(xiàn)含有該提取物的基質(zhì)可以顯著抑制疤痕增生，并具有相應的藥用用途。本發(fā)明是對發(fā)明專利 ZL02120138. 2在用途方面的進一步拓展。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的優(yōu)點在于，它同時具備了如下功能和用途1、本發(fā)明產(chǎn)品使用后，可抑制成纖維細胞增生，降低膠原蛋白合成，促進表皮細胞增殖。從而調(diào)整了正在形成的疤痕和已形成疤痕的皮膚組織結(jié)構(gòu)和營養(yǎng)供給，抑制和消除了疤痕增生，實現(xiàn)預防和消除疤痕的目的。2、本發(fā)明產(chǎn)品使用后，可喚醒激活皮膚潛能再生細胞的形成，原位再生皮膚組織器官，更新疤痕皮膚。3、本發(fā)明產(chǎn)品使用后，可增強皮膚油脂保護層，提高皮膚保濕和防御能力。4、本發(fā)明產(chǎn)品使用后，可促進皮膚新陳代謝，增加皮膚柔軟度和柔韌性。本發(fā)明是皮膚原位再生復原技術(shù)形成的新型產(chǎn)品，主要成分包括食用芝麻油、蜂蠟、仙人掌汁等，產(chǎn)品含有功能性脂肪酸、黃酮內(nèi)酯、生物堿、植物留醇、維生素E、芝麻素、氨基酸等。通過特殊技術(shù)萃取的仙人掌液中富含酪氨、微量元素、維生素、氨基酸、多糖、植物膠原、黃酮等多種營養(yǎng)功效成分，能提供皮膚所需的有效營養(yǎng)成分，可促進肌膚細胞新陳代謝，有利于維護皮膚生理平衡。蜂蠟在本專利技術(shù)中構(gòu)成網(wǎng)狀框架結(jié)構(gòu)，溶含有多種營養(yǎng)促進組織恢復正常結(jié)構(gòu)與功能的再生物質(zhì)形成的劑型，具有與組織高黏著性、通透性、乳化性、光滑性等特點。作為組分之一的芝麻油，其特殊成分一芝麻素有著多重生理功效，具有較強的抗氧化活性，有消除有機自由基、過氧化物及羥自由基的作用。對皮膚來說，它起到保護及抗衰老的作用。同時，本發(fā)明的提取物中富含黃酮內(nèi)酯、生物堿等功效成分，一方面黃酮有改善血液循環(huán)、促進疤痕局部的新陳代謝，具有活血化瘀的作用；另一方面這些成分能夠激活皮膚組織中潛能再生細胞，有序增殖分化，促進表皮細胞增殖、促進毛囊、皮脂腺的再生，抑制成纖維細胞無序過度生長，恢復皮膚正常組織結(jié)構(gòu)和生理功能。
在本發(fā)明之前，在針對皮膚疤痕增生的治療領(lǐng)域，在中國發(fā)明專利申請中也曾有一些案例。其中
1. “一種具有抑制皮膚纖維增生功能的藥用化妝品(申請?zhí)?01010(^9006. 3)”，該發(fā)明涉及一種具有抑制皮膚纖維增生功能的藥用化妝品。該產(chǎn)品是將積雪草、洋蔥、仙人掌藥材進行提取，精制，將提取液濃縮后與尿囊素、輔料混合，制成適合臨床使用的劑型。2. “用于刺激前膠原蛋白或膠原蛋白和透明質(zhì)酸合成的方法200880114867. 2”，本發(fā)明涉及用于改善皮膚外觀、肌理和/或水分的方法。該發(fā)明方法包括給予皮膚包含野鼠尾草籽油、梨果仙人掌提取物或二者的組合，以在皮膚中刺激膠原蛋白或透明質(zhì)酸合成或降低白介素-Ib合成。3. “治療燒傷的無疤痕中藥制劑201010132067. 2”，該發(fā)明提供了一種治療燒傷的無疤痕中藥制劑。由下列重量份的組分配比制成虎杖190份，地榆160份，大黃135份， 蜂膠145份，降龍草85份，仙人掌90份，麻風樹皮30份，牛膝85份，三七60份，滿江紅55 份，紫珠35份，血竭30份，黃柏30份，槐角觀份，蟬衣15份，麝香0. 7份，冰片7. 5份，95% 醫(yī)用酒精4500份。本發(fā)明具有止血收斂、止痛止癢、抗菌效果好、傷口愈合快、不留疤痕等特點。使用該發(fā)明治療燒傷，簡便、快捷，不需要嚴格的無菌操作，只需將創(chuàng)面簡單清理后敷藥即可。它能讓創(chuàng)面上皮組織與膠原組織成比例生長，使創(chuàng)面的修復較完全，明顯地減少了色素沉積和疤痕的產(chǎn)生。4. “用于治療傷口的基于TGF-b單體的藥物和蛋白質(zhì)200780016^9. 7”，該發(fā)明提供了單體TGF-b或其片段或其衍生物作為藥物的用途。這些藥物優(yōu)選地包括單體TGF-b3 或其片段或其衍生物。提供的藥物可用于加速傷口愈合和/或抑制瘢痕形成、促進上皮再生、或預防和/或治療纖維化疾病。5. “祛除疤痕的藥物及其制備方法-200710193044.0”，該發(fā)明涉及一種祛除因各種原因而留下的疤痕的藥物及其制備方法，由下列各原料按重量份數(shù)制備而成桃仁 100-500份、鴉膽子50-300份、冰片5-50份、樟腦5-50份、石堿30-300份、甘油200-600 份、凡士林100-500份、十八醇5-50份、單硬脂酸甘油酯5-50份，具有使用方便、不受疤痕形成時間的限制、不受形成原因限制的優(yōu)點。6. “一種促進傷口愈合、減少瘢痕形成的外用中藥及制備方法200710017859. 3”， 該發(fā)明公開了一種促進傷口愈合、減少瘢痕形成的外用中藥及其制備方法，制得該藥物的原料藥為白及、當歸、降香的復方配伍，其組方還有五倍子，以三類不同的溶劑分別提取的有效成分作為藥效成分、輔以可以接受的藥用輔料制成便于臨床使用的多種外用制劑。本發(fā)明的制備方法包括有效成分的提取和配制分別以水、乙醇和植物油為溶劑，提取組方的有效成分(簡稱水提物、醇提物和油提物)，輔以保濕劑、成膜劑、抑菌劑、乳化劑、增稠劑及凝膠、膜劑、涂膜劑及軟膏等的基質(zhì)和適宜容器制成可供臨床選擇應用的外用制劑。本發(fā)明的藥物，以水提物、醇提物和油提物作為藥效成分，均具有顯著的促進創(chuàng)傷愈合、減少瘢痕形成的功效。上述專利申請，在劑型、制備方法等方面同本發(fā)明有很多不同點。本發(fā)明最大的區(qū)別在于在最優(yōu)選方案中，本發(fā)明選擇最簡便、有效的成分組合，積極促進疤痕局部的新陳代謝，能夠激活皮膚組織中潛能再生細胞，促進表皮細胞增殖，促進毛囊、皮脂腺的再生，有效抑制成纖維細胞的無序過度生長，恢復皮膚正常組織結(jié)構(gòu)和生理功能。
另外，在治療燒燙傷的現(xiàn)有技術(shù)方面，具有遠期抑制疤痕增生的發(fā)明專利有如下幾個案例。1. “治療燒燙傷的外用膏劑及制備方法200910219313. 5”，該發(fā)明公開了一種治療燒燙傷的外用膏劑及制備方法，按重量百分比，包括下述組分仙人掌30-40%，一枝蒿提取物5-15%，獾油50-60%。其制備方法為，首先將仙人掌剝皮搗碎陰干備用，再將一枝蒿提取物經(jīng)80°C烘干備用；然后將獾油加熱至80°C，倒入容器中，將備用一枝蒿提取物緩慢加入獾油中，邊加入邊攪拌，再加入備用仙人掌攪拌成糊狀，保溫攪拌均勻后，冷卻即制得治療燒、燙傷的外用膏劑。2. “一種治療燒燙傷的凝膠膏劑200810084916. 4”，該發(fā)明涉及一種治療燒燙傷的凝膠膏劑，其特征在于用羧甲基纖維素鈉與其它凝膠復合成膏劑基質(zhì)，藥物載有燒傷靈滲漉液及其余渣灼焙而成的炭粉。該發(fā)明的有益效果是膏劑本身具有止血功能；膏劑本身具有抑制菌類生長的功能；能夠延長釋放藥物的時間；膏劑產(chǎn)生生物粘附性，牢牢地粘附于患處；膏劑對燒燙傷后產(chǎn)生的組織液有吸附作用；有抑制纖維細胞生長，減少疤痕的作用；膏劑在體溫作用與自然條件下，在患處形成膜狀；不粘連皮膚，揭取容易，不會造成二次出血和傷害；使制劑更加穩(wěn)定；使用方便。3. “一種治療燙傷、燒傷的外用中藥制劑及其制備方法200910071186. 9”，該發(fā)明涉及用于治療燙傷、燒傷的外用中藥制劑及其制備方法，它是由龜板、馬桑根皮、大黃、硼砂、芝麻殼、栗樹葉組成，其重量組成為龜板1-50份，馬桑根皮1-20份，大黃0. 3-5份，黃柏 0. 1-3份，硼砂0.05-2份，芝麻殼0. 1-2份，栗樹葉1_30份。該發(fā)明的外用中藥制劑(膏劑或糊劑)與同類藥相比見效快，療效短，無毒副作用。對于輕度燙傷、燒傷的患者無須換藥， 有抗感染的作用，治愈后不留疤痕，可促進新皮膚的生長，有去腐生肌的功效。上述三個專利主要針對燒燙傷的早期創(chuàng)面處理，在制備和臨床應用及后期治療效果上與本發(fā)明專利有著明顯區(qū)別。


圖1是仙人掌提取液對真皮和疤痕成纖維細胞增殖的影響(**p<0. 01)。
具體實施例方式實施例1 仙人掌固態(tài)提取物的制備。(1)實驗選用墨西哥仙人掌(Opuntia Milpa Alta)。(2)仙人掌提取物的制備過程為一定量新鮮的仙人掌，去刺、洗凈、切碎后用高速組織搗碎機勻漿成糊狀，加2倍95%的乙醇充分震蕩、攪拌，浸提3小時，取上清液，置冰箱中保存；渣中再加入等量乙醇，充分震蕩、攪拌，再浸提3小時，取上清液與第一次清液合并，抽濾，減壓濃縮，回收1乙醇，將濃縮液進行冷凍干燥，得到新鮮仙人掌乙醇提取物。實施例2 正常真皮及疤痕組織中成纖維細胞的分離與培養(yǎng)。(1)消化將外科手術(shù)遺棄的正常皮膚剪成碎塊，用0. 1%的膠原酶在37°C消化2 小時，經(jīng)150目不銹鋼濾網(wǎng)過濾，以lOOOr/min離心5分鐘，棄去上清，加入無鈣鎂PBS清洗 3次。加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液10ml，混勻，臺盼藍染色計數(shù)。(2)原代培養(yǎng)計數(shù)后制成單細胞懸液，按l-2X 106/75cm2密度接種培養(yǎng)，含10%
6胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，在37°C，5%C02,100%相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液3天換一次。(3)傳代培養(yǎng)當細胞融合到60%_75%密度時，用IOml無鈣鎂PBS沖洗，經(jīng)0. 25% 胰酶37°C消化5分鐘，加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液終止消化，移入離心管中，IOOOr/ min離心5分鐘。棄去上清液，加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液10ml，混勻，計數(shù)，按1 3的比例傳代培養(yǎng)。2-3日換一次培養(yǎng)液，直到細胞融合至60%-75%密度時，再傳代培養(yǎng)。(4)同法分離培養(yǎng)疤痕成纖維細胞。實施例3 仙人掌提取物對真皮和疤痕成纖維細胞增殖的影響。a.實驗方法
(1)實驗選用培養(yǎng)第3代的真皮來源的成纖維細胞(Dermal Fibroblast，DF)和疤痕來源的成纖維細胞(Scar Fibroblast, SF)。(2)每孔4000個細胞接種到96孔板中，37° C、5% C02，在含有10%胎牛血清的 DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)12小時。(3) 12小時后，每孔更換培養(yǎng)液，重新加入含有仙人掌提取物的培養(yǎng)液(含10%胎牛血清的DMEM)，仙人掌提取物的在培養(yǎng)液中的最終濃度分別為10，50，200mg/mL。繼續(xù)孵育48小時。(4) 48小時后，每孔加入20ml MTS,再繼續(xù)孵育2小時。(5)用自動酶標儀測定每孔的吸光度(Absorbance)。b.實驗結(jié)果
各組吸光度值見圖1。從結(jié)果中可以看出，提取液10，50mg/mL組對真皮和疤痕成纖維細胞的增殖沒有明顯影響，200mg/mL組的仙人掌提取液對于真皮和疤痕成纖維細胞的增殖有明顯的抑制作用(P<0. 01)。實施例4 仙人掌汁的制備。選采摘新鮮仙人掌100kg，去刺后清洗3次，切碎。將切碎后的仙人掌用膠體磨研磨，得到仙人掌懸液。用離心機轉(zhuǎn)速為IOOOrpm離心，再用150 — 250目濾網(wǎng)過濾除去固體物，收集于容器中。將濾液置于自然沉降分層，得仙人掌組織及上清液約480kg。將66. 4kg 得到的仙人掌組織上清液、2kg三乙醇胺放入水相罐，SOrpm攪拌，同時加熱到95° C，保溫消毒60分鐘，得第二混合物。實施例5 含仙人掌汁的疤痕基質(zhì)的制備。將20kg的芝麻油、8kg硬脂酸、3kg單硬脂酸甘油酯放入油相罐，SOrpm攪拌，同時加熱到88° C士2° C，保溫消毒40分鐘，得第一混合物。將得到的第一和第二混合物與0. 6kg的瓜爾膠在真空乳化機中混合，攪拌速度為 120prm ；待充分混合后，在溫度為90° C下，將攪拌速度控制為SOrpm，啟動均質(zhì)器4分鐘。待溫度降到30° C士2° C時，轉(zhuǎn)速控制在IOrpm，打入無菌空氣后，即可得到用于治療的基質(zhì)。實施例6 將實施例4、5的產(chǎn)品用于疤痕增生的臨床治療?；颊?，李XX，女，21歲，額部外傷性疤痕1年半。使用發(fā)明人制備的疤痕制劑外用，每天3 — 4次，連續(xù)使用4周。從對患者的隨訪可以看出，治療后疤痕顏色變淺，局部變軟、變平、彈性增加，患者自感痛癢消失。
綜上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并非用來限定本發(fā)明的實施范圍。即凡依本發(fā)明申請專利范圍的內(nèi)容所作的等效變化與修飾，都應為本發(fā)明的技術(shù)范疇。
權(quán)利要求
1.一種治療疤痕的皮膚外用基質(zhì)，其特征在于它由按照重量百分比的第一混合物 68. 4%、第二混合物31%和瓜爾膠0. 6%組成；其中第一混合物是由仙人掌汁66. 4%和三乙醇胺1組成，第二混合物是由芝麻油20%、硬脂酸8%和單硬脂酸甘油酯3%組成；該皮膚外用基質(zhì)主要體現(xiàn)為抑制疤痕成纖維細胞增殖、抑制和消除疤痕增生的藥用用途。
2.一種治療疤痕的皮膚外用基質(zhì)的制備方法，其特征在于它采用如權(quán)利要求1所述的組分和比例形成基質(zhì)，具體采用如下步驟(1)選采摘新鮮仙人掌，去刺后清洗3次，切碎，然后將切碎后的仙人掌用膠體磨研磨，得到仙人掌懸液，用離心機轉(zhuǎn)速為IOOOrpm離心，再用150 - 250目濾網(wǎng)過濾除去固體物，收集于容器中，將濾液置于自然沉降分層，得仙人掌組織及上清液；該仙人掌組織及上清液與三乙醇胺放入水相罐，SOrpm攪拌，同時加熱到95° C，保溫消毒60分鐘，得第二混合物；(2)將的芝麻油、硬脂酸、單硬脂酸甘油酯放入油相罐，SOrpm攪拌，同時加熱到88° C士2° C，保溫消毒40分鐘，得第一混合物； (3)將得到的第一和第二混合物與瓜爾膠在真空乳化機中混合，攪拌速度為120prm ；待充分混合后，在溫度為90° C下，將攪拌速度控制為SOrpm，啟動均質(zhì)器4分鐘，待溫度降到 30° C士2° C時，轉(zhuǎn)速控制在IOrpm，打入無菌空氣后，即可得到用于治療的基質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種皮膚外用基質(zhì)，特別是一種治療疤痕的皮膚外用基質(zhì)及其制備方法。該基質(zhì)由按照重量百分比的第一混合物68.4%、第二混合物31%和瓜爾膠0.6%組成；其中第一混合物是由仙人掌汁66.4%和三乙醇胺2%組成，第二混合物是由芝麻油20%、硬脂酸8%和單硬脂酸甘油酯3%組成。本發(fā)明提供的皮膚外用基質(zhì)可以抑制疤痕成纖維細胞增殖、抑制和消除疤痕增生。
文檔編號A61K36/33GK102266373SQ20111022205
公開日2011年12月7日 申請日期2011年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月4日
發(fā)明者商慶新, 徐榮祥 申請人:上海美寶生命科技有限公司