專利名稱：測(cè)定包括化學(xué)治療劑在內(nèi)的活性劑精確效力的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包括化學(xué)治療劑在內(nèi)的活性劑的篩選和測(cè)試方法，以預(yù)測(cè)其在打算使用這種試劑來(lái)治療的各患者中的潛在效力。
引言在美國(guó)，包括化學(xué)治療劑再內(nèi)的所有活性劑都應(yīng)在批準(zhǔn)用于醫(yī)療前進(jìn)行效力和安全性的嚴(yán)格測(cè)試。評(píng)價(jià)效力的方法包括對(duì)給定治療方法和/或活性劑用雙盲試驗(yàn)(double blind study)在大量試驗(yàn)者中進(jìn)行細(xì)致的研究，然后對(duì)獲得的數(shù)據(jù)作統(tǒng)計(jì)學(xué)整理分析，但是這些結(jié)論必定是根據(jù)患者總數(shù)作為一個(gè)整體來(lái)作出的。然而，在許多藥物學(xué)上，尤其在化學(xué)治療領(lǐng)域上，單個(gè)患者治療的結(jié)果可能與總結(jié)的數(shù)據(jù)并不相符，這對(duì)單個(gè)患者是不利的。長(zhǎng)期以來(lái)認(rèn)識(shí)到需要有這樣一種方法，該方法能在對(duì)給定的各個(gè)患者治療前測(cè)定治療活性劑(包括但不局限于化學(xué)治療劑)對(duì)該患者的治療潛力。
已有技術(shù)測(cè)定方法早已存在，該方法是將各類惡性組織暴露在多種活性劑下以評(píng)價(jià)治療給藥的最佳選擇。例如，在Kruczynski，A.等，″Evidence of a directrelationship between the increase in the in vitro passage number of human non-small-cell-lung cancer primocultures and their chemosensitivity，″Anticancer Research，vol.13，no.2，pp.507-513(1993)中，在體內(nèi)移植物、體外初始培養(yǎng)物(primoculture)和商業(yè)上購(gòu)得的長(zhǎng)期生長(zhǎng)癌細(xì)胞系中，研究了非肺癌小細(xì)胞(non-small-cell-lungcancer)的化學(xué)敏感性。記錄下化學(xué)敏感性的增加，并使其與出現(xiàn)問(wèn)題的細(xì)胞的形態(tài)變化關(guān)聯(lián)。有時(shí)用預(yù)期的治療劑來(lái)測(cè)試動(dòng)物模型惡性細(xì)胞和/或建立的細(xì)胞培養(yǎng)物，例如參見(jiàn)Arnold，J.T.，″Evaluation of chemopreventive agents in differentmechanistic classes using a rat tracheal epithelial cell culture transformation assay，″Cancer Res.，vol.55，no.3，pp.537-543(1995)。
當(dāng)針對(duì)各個(gè)患者用真正的患者細(xì)胞來(lái)進(jìn)行體外測(cè)定方法時(shí)，在典型的已有技術(shù)方法中，細(xì)胞通過(guò)獲取(活體檢查)和胰蛋白酶消化(用胰蛋白酶消化結(jié)締組織)來(lái)產(chǎn)生適于變成所需組織培養(yǎng)物形式的細(xì)胞懸液。從這些方法獲得的體外組織培養(yǎng)細(xì)胞收集物通常受到這樣的困擾，即它們不能準(zhǔn)確地模擬原來(lái)的腫瘤或其它活體檢查細(xì)胞的化學(xué)敏感性。而且，標(biāo)準(zhǔn)的克隆和組織培育技術(shù)在用于不同患者的測(cè)定設(shè)置時(shí)顯得非常復(fù)雜和昂貴。因此仍需要一種組織培育方法，該方法能為藥物篩選提供細(xì)胞培養(yǎng)物，該細(xì)胞培養(yǎng)物在簡(jiǎn)單地制備后能以等價(jià)于其體內(nèi)反應(yīng)性的方式進(jìn)行反應(yīng)，從而能對(duì)打算進(jìn)行這種篩選的特定患者進(jìn)行藥物或化學(xué)治療劑的篩選。
發(fā)明概述為了滿足這一需求，本發(fā)明是用來(lái)為具體患者篩選多個(gè)候選治療劑或化學(xué)治療劑的效力的改進(jìn)系統(tǒng)，其中，先獲取患者的組織樣品，培育并使其分別暴露在多種處理劑和/或治療劑下，以客觀地確定對(duì)患者的培育細(xì)胞的最佳處理劑。具體的方法革新，如組織樣品制備方法，使得該方法在實(shí)踐和理論上均適用。對(duì)于制備最初的組織培養(yǎng)單層來(lái)說(shuō)，一個(gè)特別重要的組織樣品制備方法是初步制備組織樣品的粘合性多細(xì)胞顆粒，而不是酶解離的細(xì)胞懸液或制備液。例如對(duì)于惡性細(xì)胞的培育，認(rèn)為(不擬受理論束縛)通過(guò)將惡性細(xì)胞保持在原來(lái)組織的多細(xì)胞顆粒內(nèi)，惡性細(xì)胞本身的生長(zhǎng)比成纖維細(xì)胞或其它細(xì)胞的過(guò)分生長(zhǎng)(當(dāng)懸浮的腫瘤細(xì)胞在培養(yǎng)物中生長(zhǎng)時(shí)很容易發(fā)生這種情況)更容易。因此可以形成實(shí)用的單層細(xì)胞，以便能有意義地篩選多種處理劑和/或試劑。檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)以確定開(kāi)始試驗(yàn)的時(shí)間，并測(cè)定培育細(xì)胞的生長(zhǎng)速度；另外對(duì)藥物加入的次序和時(shí)間也進(jìn)行監(jiān)控和優(yōu)化。通過(guò)使均勻的細(xì)胞樣品受各種活性劑(及其各種濃度)的作用，就可確定最有效的試劑。對(duì)于有關(guān)癌癥治療的測(cè)定，考慮采用兩階段評(píng)價(jià)方法，在該方法中對(duì)給定的抗癌試劑的急性細(xì)胞毒性和長(zhǎng)期抑制效果均可進(jìn)行研究。
發(fā)明詳述本發(fā)明是用來(lái)為具體患者篩選多種候選治療劑或化學(xué)治療劑的效力的系統(tǒng)，其中，先獲取患者的組織樣品，并使其分別暴露在多種處理劑和/或治療劑下，以客觀地確定最佳的處劑理或試劑。具體的方法革新，如組織樣品制備方法，使得該方法在實(shí)踐和理論上均適用。對(duì)于制備最初的組織培養(yǎng)單層來(lái)說(shuō)，一個(gè)特別重要的組織樣品制備技術(shù)是初步制備組織樣品的粘合性多細(xì)胞顆粒(外值體)，而不是酶解離的細(xì)胞懸液或制備液。對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、藥物加入的次序和時(shí)間進(jìn)行監(jiān)控和優(yōu)化。
本發(fā)明的一個(gè)重要應(yīng)用是篩選出抗惡性細(xì)胞(該惡性細(xì)胞從患者體內(nèi)活體檢查獲得)組織培養(yǎng)制備物的化學(xué)治療劑和其它抗贅生治療劑?？捎帽景l(fā)明系統(tǒng)來(lái)篩選的有關(guān)抗癌癥治療劑是，放射治療劑和增強(qiáng)放射致細(xì)胞毒性的試劑，以及抗癌癥免疫治療試劑。非惡性綜合征的處理劑或治療劑的篩選方法也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)，然而，它還包括抗過(guò)度增生綜合征(如牛皮癬)的試劑，或傷口愈合劑。本發(fā)明的效力測(cè)定法不僅僅局限于篩選可加速細(xì)胞生長(zhǎng)(愈合情況)或減緩細(xì)胞生長(zhǎng)(抗癌癥、抗過(guò)度增生)的活性劑，因?yàn)楸景l(fā)明的組織培育系統(tǒng)也可用于測(cè)試增強(qiáng)或抑制細(xì)胞內(nèi)生物化學(xué)功能的試劑。例如，在對(duì)患者進(jìn)行治療之前，可用本發(fā)明的測(cè)定方法來(lái)篩選酶、神經(jīng)傳遞介質(zhì)和其它生物化學(xué)物質(zhì)的形成或阻斷。
在治療患者腫瘤時(shí)，在本發(fā)明的較佳實(shí)例中，采用本領(lǐng)域已知的任何合適的活體檢查或外科方法，來(lái)從患者體內(nèi)獲得腫瘤活體檢查物，即大于100mg的無(wú)壞死、無(wú)污染組織。活體檢查樣品制備通常在層流罩超凈臺(tái)(應(yīng)在使用前至少20分鐘前打開(kāi))上按照以下步驟進(jìn)行。在開(kāi)始制備樣品前，用試劑級(jí)乙醇擦干凈超凈臺(tái)表面。然后在無(wú)菌條件下，從運(yùn)輸容器中取出腫瘤，并用消毒剪剪碎。如果獲得的樣品已經(jīng)粉碎，則應(yīng)將各腫瘤部分分成四組。然后用消毒鑷子將每一未分組的組織的1/4部分放入3ml消毒生長(zhǎng)培養(yǎng)基(標(biāo)準(zhǔn)的F-10培養(yǎng)基，含有17％小牛血清和標(biāo)準(zhǔn)量的青霉素和鏈霉素)中，并用兩把類似剪刀運(yùn)動(dòng)方式的消毒手術(shù)刀、或機(jī)械上等效的手工或自動(dòng)的相反切齒刀片(incisor blade)來(lái)進(jìn)行有規(guī)則的切削。這種交錯(cuò)切割的運(yùn)動(dòng)很重要，因?yàn)樵摲椒ㄔ讷@得的腫瘤多細(xì)胞顆粒上產(chǎn)生了平滑的切割邊緣。較佳的(但不是必需的)，每個(gè)腫瘤顆粒的大小為1mm3。在每個(gè)腫瘤的1/4部分被切碎后，用消毒的巴斯德毛細(xì)吸管將顆粒種在培育瓶中(每個(gè)T-25瓶中有9個(gè)外值體，或每個(gè)T-75瓶中有20個(gè)顆粒)。然后在每個(gè)瓶上標(biāo)上患者代碼、外植日期以及任何其它辨別的數(shù)據(jù)。外值體應(yīng)均勻地分布在瓶底表面上，先在37℃培養(yǎng)箱中倒置培育5-10分鐘，然后加入約5-10ml消毒的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，以正常的非倒置位置進(jìn)行進(jìn)一步培養(yǎng)。此瓶放在35℃、沒(méi)有CO2的培養(yǎng)箱中。應(yīng)每天檢查瓶中的生長(zhǎng)和污染情況。在幾個(gè)星期后(每周取出并更換5ml生長(zhǎng)培養(yǎng)基)，外值體會(huì)使細(xì)胞生長(zhǎng)形成單層。對(duì)于惡性細(xì)胞的培養(yǎng)，認(rèn)為(不擬受理論束縛)通過(guò)將惡性細(xì)胞保持在原來(lái)組織的多細(xì)胞顆粒內(nèi)，惡性細(xì)胞本身的生長(zhǎng)比成纖維細(xì)胞(或其它不要的細(xì)胞)的過(guò)度生長(zhǎng)(懸浮的腫瘤細(xì)胞在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)經(jīng)常產(chǎn)生此情況)更容易。
用上述步驟來(lái)形成細(xì)胞單層培養(yǎng)物，可以使來(lái)自組織樣品的惡性細(xì)胞的生長(zhǎng)最大化，因而優(yōu)化了隨后進(jìn)行的各種待測(cè)試劑化學(xué)治療作用的組織培養(yǎng)測(cè)定。然而，真正的惡性細(xì)胞生長(zhǎng)增強(qiáng)只是本發(fā)明的一個(gè)方面；本發(fā)明的另一重要特征是用來(lái)監(jiān)視一旦形成的單層的生長(zhǎng)情況的生長(zhǎng)速度監(jiān)控系統(tǒng)。一旦初始培養(yǎng)及其衍生的次級(jí)單層組織培養(yǎng)開(kāi)始，就對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，以確定開(kāi)始化學(xué)治療試驗(yàn)的時(shí)間并測(cè)定培育細(xì)胞的生長(zhǎng)速度。
對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的監(jiān)控這樣來(lái)進(jìn)行不殺死細(xì)胞或不對(duì)細(xì)胞染色，也不從培養(yǎng)瓶中取出任何細(xì)胞，對(duì)單層細(xì)胞進(jìn)行定期計(jì)數(shù)。可用肉眼觀察或自動(dòng)的方法，采用或不采用本領(lǐng)域已知的估計(jì)方法(例如，計(jì)數(shù)網(wǎng)格的代表性區(qū)域內(nèi)的數(shù)量，再乘以網(wǎng)格數(shù))來(lái)進(jìn)行計(jì)數(shù)。然后用定期計(jì)數(shù)獲得的數(shù)據(jù)來(lái)確定生長(zhǎng)速度是否與同類細(xì)胞在患者體內(nèi)的生長(zhǎng)速度平行。例如，如果記錄了生長(zhǎng)速度周期，則可以為患者制定某些活性劑的劑量。相同的生長(zhǎng)速度也可用來(lái)評(píng)價(jià)放射治療的周期性。應(yīng)當(dāng)注意，當(dāng)單層在中生長(zhǎng)時(shí)進(jìn)行生長(zhǎng)速度測(cè)定時(shí)，本發(fā)明的方法不需用血細(xì)胞計(jì)數(shù)、流式細(xì)胞計(jì)數(shù)或用顯微鏡載玻片和染色，也沒(méi)有這些方法附加的勞力和成本。
細(xì)胞單層生長(zhǎng)速度的步驟通常是用相差倒置顯微鏡檢測(cè)在37℃培養(yǎng)箱(5％CO2)中培育的培養(yǎng)瓶。將瓶放在相差倒置顯微鏡下，用10X物鏡檢測(cè)10個(gè)網(wǎng)格區(qū)域(瓶上固有一個(gè)網(wǎng)格區(qū)域)，其條件是10個(gè)區(qū)域不應(yīng)相鄰，也不相隔非常遠(yuǎn)，這樣10個(gè)區(qū)域是整個(gè)瓶的代表性取樣。記錄每個(gè)區(qū)域被的細(xì)胞占據(jù)的百分?jǐn)?shù)，對(duì)這些百分?jǐn)?shù)取平均值，然后評(píng)價(jià)細(xì)胞培養(yǎng)物中總的鋪滿百分?jǐn)?shù)(percentconfluency)。當(dāng)患者樣品被分到兩個(gè)或三個(gè)或多個(gè)瓶中時(shí)，應(yīng)計(jì)算總的患者樣品的平均細(xì)胞計(jì)數(shù)值。計(jì)算得到的平均鋪滿百分?jǐn)?shù)應(yīng)輸入工序記錄中，以便能匯編這些數(shù)據(jù)，并繪制時(shí)間-生長(zhǎng)曲線?？蓪?duì)單層培養(yǎng)物進(jìn)行照相，以記錄細(xì)胞形態(tài)和培養(yǎng)物生長(zhǎng)模式。適用的公式如下細(xì)胞占據(jù)面積的估計(jì)值鋪滿百分?jǐn)?shù)＝ 觀察區(qū)域的總面積因此，例如，當(dāng)細(xì)胞占據(jù)的面積的估計(jì)值為30％而總區(qū)域的面積為100％時(shí)，鋪滿百分?jǐn)?shù)為30/100，或30。
采納上述步驟可直接用于非腫瘤細(xì)胞，它大致上形成了等價(jià)的步驟。
采用培育細(xì)胞的活性劑篩選不在原先的培育瓶中進(jìn)行，而通常在板(如微量滴定板)中進(jìn)行。用于篩選目的的化學(xué)敏感性測(cè)定方法的實(shí)施取決于將可再現(xiàn)細(xì)胞數(shù)量輸遞到一塊板和/或一系列板每行中的能力，以及在給定孔中使細(xì)胞平均分布的能力。下列步驟確保了細(xì)胞能再現(xiàn)地從瓶轉(zhuǎn)移到微量滴定板中，且細(xì)胞均勻地分布在每個(gè)孔的表面上。
制備微量滴定板的第一步當(dāng)然是如上所述的制備和檢測(cè)細(xì)胞單層。下列步驟是示范性的，對(duì)其所作的變動(dòng)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯然的。從培育瓶中取出細(xì)胞，通過(guò)離心制備細(xì)胞沉淀。然后將從單層獲得的細(xì)胞沉淀懸浮在5ml生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，并用渦流攪拌器在錐形試管中混合6-10秒。然后來(lái)回振蕩試管10次。從錐形試管中心吸取36μl的液滴，滴在96孔板的一個(gè)孔中。然后用一新的移液管吸取36μl等份的臺(tái)盼藍(lán)溶液加入同一孔中，靠移液管的反復(fù)抽吸來(lái)使兩液滴混合。然后將獲得的混合物分到血細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)的兩個(gè)小室中，用標(biāo)準(zhǔn)的光學(xué)顯微鏡檢測(cè)。在10x放大倍數(shù)下，對(duì)血細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)的四個(gè)象限中的兩個(gè)進(jìn)行計(jì)數(shù)。只對(duì)那些沒(méi)有接受臺(tái)盼藍(lán)染料的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。對(duì)第二個(gè)計(jì)數(shù)小室重復(fù)該過(guò)程。這樣就測(cè)得了每個(gè)室的平均細(xì)胞計(jì)數(shù)。用本領(lǐng)域已知的方法核定象限計(jì)數(shù)值，作記錄(log)，乘以10-4，給出細(xì)胞數(shù)/毫升，并相應(yīng)地計(jì)算出使其余細(xì)胞等份懸浮必需的液體(生長(zhǎng)培養(yǎng)基)總量。
在測(cè)定了培養(yǎng)基中所需的細(xì)胞濃度后，用渦流攪拌機(jī)和振蕩使來(lái)自單層的其余細(xì)胞等份懸浮在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，并裝入本領(lǐng)域已知的Terasaki分裝器中。用本領(lǐng)域已知的Terasaki分裝技術(shù)將制得的細(xì)胞懸液按等份轉(zhuǎn)移到微量滴定板上。根據(jù)需要可以從一個(gè)細(xì)胞懸液制得多個(gè)培養(yǎng)板。然后根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法，用消毒的濕棉紗布包裹平板，并放在培養(yǎng)箱中培育。
在制得微量滴定板后，根據(jù)下述示范性的步驟使其中的細(xì)胞暴露在活性劑下。在本發(fā)明測(cè)定方法的這部分中，將合適量的特定活性劑轉(zhuǎn)移到如上所述制得的微量滴定板中。通用步驟可作如下改變。解開(kāi)每個(gè)微量滴定板的濕棉紗布，并用顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞的粘附情況。將對(duì)照溶液分散在微量滴定板網(wǎng)格中標(biāo)記行的孔中，在其余行的其余孔中加入合適等份的待測(cè)試活性劑。通常是，依次將濃度漸增的待測(cè)試活性劑加入培養(yǎng)板中數(shù)字逐漸增高的行中。然后將培養(yǎng)板重新包在紗布內(nèi)，并在37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在暴露了預(yù)定的時(shí)間后，解開(kāi)包布取出培養(yǎng)板，用消毒紗布吸除試劑，用Hank′s Balance Salt Solution洗滌，注入生長(zhǎng)培養(yǎng)基，并再次在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)預(yù)定的時(shí)間，然后固定培養(yǎng)板和染色，并進(jìn)行評(píng)價(jià)。
固定和染色可根據(jù)許多合適的步驟來(lái)進(jìn)行；下面是典型的步驟。從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)板，倒去培養(yǎng)基，用Hank′s Balance Salt Solution注滿培養(yǎng)板。在重復(fù)注滿倒去后(每次伴隨攪拌)，注入試劑級(jí)乙醇保持2-5分鐘。然后倒去乙醇。每個(gè)培養(yǎng)板用約5ml Giemsa Stain液進(jìn)行染色，但是體積并不是關(guān)鍵，注滿才是目的。Giemsa染色應(yīng)放置5分鐘±30秒，因?yàn)闀r(shí)間長(zhǎng)短會(huì)影響染色強(qiáng)度。然后倒去Giemsa染色液，將板浸泡在燒杯中的3倍冷自來(lái)水中。然后，翻轉(zhuǎn)平板用力振動(dòng)，并在實(shí)驗(yàn)室工作臺(tái)支架上空氣干燥過(guò)夜(除去平板蓋子)。然后人工或用自動(dòng)和/或計(jì)算機(jī)方法對(duì)每個(gè)孔中的細(xì)胞計(jì)數(shù)，以獲得暴露在不同濃度活性劑下時(shí)細(xì)胞的化學(xué)敏感性數(shù)據(jù)。一種特別適用于細(xì)胞計(jì)數(shù)的計(jì)算機(jī)操作環(huán)境是商業(yè)上購(gòu)得的OPTIMATE編譯程序，該編譯程序被設(shè)計(jì)成能執(zhí)行光學(xué)計(jì)數(shù)功能，該功能非常適用于計(jì)算機(jī)化細(xì)胞計(jì)數(shù)步驟以及隨后的計(jì)算。
當(dāng)測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)促進(jìn)劑而不是細(xì)胞抑制劑(如化學(xué)治療劑)時(shí)，上述步驟沒(méi)有作明顯改變。本發(fā)明測(cè)定方法使細(xì)胞死亡或細(xì)胞生長(zhǎng)能同樣容易地被檢測(cè)。在任何一種情況下，本發(fā)明系統(tǒng)應(yīng)用的優(yōu)化包括各種候選活性劑的對(duì)比測(cè)試，從而根據(jù)體外測(cè)試結(jié)果為患者選擇最佳的治療候選物。上述發(fā)明的一個(gè)特別有利的實(shí)例包括一個(gè)兩階段的測(cè)定，在測(cè)定細(xì)胞毒性后再評(píng)價(jià)藥物的長(zhǎng)期抑制效果。因此，可以分開(kāi)評(píng)價(jià)化學(xué)治療劑的直接化學(xué)治療效果及其較長(zhǎng)期的持續(xù)效力。
一種或多種活性劑或化學(xué)治療劑的鑒定在本發(fā)明的范圍內(nèi)，其目的是為給定患者篩選任何或所有試劑的效力。幾乎所有的活性劑均可用本發(fā)明的方法來(lái)進(jìn)行篩選；因此這里省略了典型活性劑的一覽表。
因此，本發(fā)明的精髓包括本發(fā)明系統(tǒng)重要特征的簡(jiǎn)單性用待測(cè)試患者組織的粘合性多細(xì)胞顆粒來(lái)形成細(xì)胞單層；對(duì)那些單層的生長(zhǎng)進(jìn)行監(jiān)控以精確地預(yù)測(cè)相同細(xì)胞在體內(nèi)的相關(guān)生長(zhǎng)；可對(duì)多種活性劑的不同濃度進(jìn)行測(cè)試，目的不但是確定最合適的試劑，而且是確定用于真實(shí)患者治療時(shí)該試劑的最佳濃度(根據(jù)計(jì)算的細(xì)胞生長(zhǎng)速度)。也應(yīng)注意在本發(fā)明的內(nèi)容中，本發(fā)明系統(tǒng)允許在組織培養(yǎng)單層(該培養(yǎng)物在快速生長(zhǎng)條件下(約幾周)在營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng))的懸液中進(jìn)行體外測(cè)試，而不是用稀釋克隆經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間產(chǎn)生的單一細(xì)胞子代來(lái)測(cè)試。在一些情況下，本發(fā)明是測(cè)定細(xì)胞毒性和長(zhǎng)期生長(zhǎng)抑制作用的兩階段測(cè)定法。
盡管本發(fā)明已就上述特定材料和方法進(jìn)行了描述，但應(yīng)認(rèn)為，本發(fā)明只局限在附加的權(quán)利要求提出的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種評(píng)價(jià)患者細(xì)胞化學(xué)敏感性的方法，該方法包括下列步驟a)收獲患者組織、細(xì)胞腹水或滲出液的樣品；b)將所述樣品分成多細(xì)胞顆粒；c)從所述粘合性多細(xì)胞顆粒中長(zhǎng)出組織培養(yǎng)單層；d)將所述單層的細(xì)胞接種入分隔的多個(gè)部位；和e)用至少一種活性劑處理所述多個(gè)部位，然后評(píng)價(jià)所述部位中的細(xì)胞對(duì)至少一種活性劑的化學(xué)敏感性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟a)還包括步驟a)制備一個(gè)樣品，該樣品從患者腫瘤組織的樣品中獲得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述分隔的多個(gè)部位還包括其中含有多個(gè)孔的平板。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟e)還包括步驟e)用不同濃度的多種活性劑來(lái)處理所述多個(gè)部位，然后評(píng)價(jià)單種活性劑在單個(gè)濃度下的最優(yōu)化學(xué)敏感性。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟e)還包括步驟e)用多種活性劑對(duì)所述多個(gè)部位處理充分長(zhǎng)的時(shí)間，以評(píng)價(jià)所述多種活性劑的至少一種的初始細(xì)胞毒性效果和長(zhǎng)期抑制效果。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中根據(jù)步驟e)測(cè)得的化學(xué)敏感性是抗癌敏感性。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟d)用Terasaki分裝器來(lái)實(shí)現(xiàn)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在步驟d)中，細(xì)胞在接種入培養(yǎng)板的多個(gè)孔中之前，先制備成懸液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述活性劑是化學(xué)治療劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述活性劑是傷口愈合劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述活性劑是放射治療劑和/或放射治療致敏劑或改進(jìn)劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述活性劑是免疫治療劑。
全文摘要
一種用來(lái)為具體患者篩選多個(gè)候選治療劑或化學(xué)治療劑的效力的改進(jìn)系統(tǒng),其中,先獲取患者的組織樣品,培育并使其分別暴露在多種處理劑和/或治療劑下,以便客觀地確定對(duì)特定患者的最佳治療劑。具體的方法革新,如組織樣品制備方法,使得該方法在實(shí)踐和理論上均適用。對(duì)于初始組織培養(yǎng)單層制備來(lái)說(shuō),特別重要的組織樣品制備方法是初步制備組織樣品的粘合性多細(xì)胞顆粒,而不是酶解離的細(xì)胞懸液或制備液。通過(guò)使均勻的細(xì)胞樣品受各種活性劑(及其各種濃度)的作用,就可確定治療特定患者最為有效的試劑和濃度。
文檔編號(hào)A61P17/02GK1275885SQ97196143
公開(kāi)日2000年12月6日 申請(qǐng)日期1997年7月10日 優(yōu)先權(quán)日1996年7月12日
發(fā)明者P·L·科恩布里斯 申請(qǐng)人:精密治療學(xué)股份有限公司