專利名稱：含Rho激酶抑制劑的藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用Rho激酶抑制劑作藥物制劑治療多種疾病的方法。此外，本發(fā)明涉及Rho激酶抑制劑作為治療劑或診斷試劑的用途。
背景技術(shù)：
自從1981年發(fā)現(xiàn)Ras，已發(fā)現(xiàn)了若干與Ras相似的小GTP結(jié)合蛋白(小G蛋白)，并已對它們具有的很多生理功能進(jìn)行了研究。這些小G蛋白分子量為20000-30000且無亞單位結(jié)構(gòu)。它們都特異性結(jié)合GDP和GTP，并水解如此結(jié)合的GTP(GTP酶活性)(Hall,A.,Science,249,635-640,1990；Bourne,H.R.等，Nature,349,117-127,1991)。
至今，由酵母至哺乳動物中已發(fā)現(xiàn)超過50種基因編碼這些小G蛋白，從而形成了一個超家族。按照氨基酸序列的相似性，這些小G蛋白大致分為5組Ras、Rho、Rab、Arf及其它。
其中，Rho如此命名是因為由海兔屬神經(jīng)肌肉分離的其基因編碼一種多肽，該多肽與Ras具有約35％的同源性(Ras同源物)(Madaule,P.,Cell,41,31-40,1985)。
Rho是被一種肉毒桿菌毒素C3酶和葡萄球菌毒素EDIN特異性ADP核糖基化并被滅活(Narumiya,S.and Morii,S.,Cell Signal,5,9-19,1993；Sekine,A.等，J.Biol.Chem.,264,8602-8605，1989)。因此，C3酶和EDIN用于從多方面研究Rho參與的細(xì)胞功能。
例如，由肌球蛋白輕鏈(MLC)激酶磷酸化使肌動蛋白和肌球蛋白相互作用并引起平滑肌的收縮，而將MLC脫磷酸化的平滑肌肌球蛋白磷酸酶的結(jié)構(gòu)業(yè)已明確(Shimizu H.等，J.Biol.Chem.,269,30407-30411,1994)。已明確肌球蛋白磷酸酶的活性類似MLC激酶，是在細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的控制下，且Rho參與了此機(jī)制。此外，已發(fā)現(xiàn)結(jié)合有GTP的活化Rho提高平滑肌去皮纖維樣本中鈣離子依賴性收縮(Hirata,K.,J.Biol.Chem.,267,8719-8722,1992)，因此暗示平滑肌收縮中鈣離子敏感性的增加是由通過Rho對肌球蛋白磷酸酶活性的抑制引起的。
此外，在Swiss 3T3細(xì)胞和3Y1細(xì)胞中，酪氨酸磷酸化的Rho依賴性啟動(Kumagai,N.等，J.Biol.Chem.,270,8466-8473,1993)及多種絲氨酸/蘇氨酸激酶的活化(Kumagai,N.等，F(xiàn)EBS Lett.,366,11-16,1995)是已知的。由此，暗示在通過Rho的信號啟動途徑中的Rho下游中存在多種蛋白激酶，且實際上當(dāng)Rho活化伴隨絲氨酸/蘇氨酸激酶(Rho激酶)活化時，已報告了ROCα(Leung,T.等，J.Biol.Chem.,270,29051-29054,1995)(另一個名稱為Rho激酶，ROCK-Ⅱ)和p160ROCK(Ishizaki,T.等，The EMBO J.,15(8),1885-1893,1996)(另一個名稱為ROCβ,ROCH-Ⅰ)。也已報道了這兩種酶的生物分布不同(Nakagawa,O.等，F(xiàn)EBS Lett.392 189-193,1996)。此外，還報道了此Rho激酶對肌球蛋白磷酸酶直接進(jìn)行磷酸化并抑制其活性(Kimura,K.等，Science,273,245-248,1996)。
已發(fā)現(xiàn)Rho不僅對蛋白激酶的活化起作用，對脂激酶的活化也起作用(Zang,J.等，J.Biol.Chem.,268,22251-11154,1993)，而且還暗示存在Rho活化的磷脂酶(PLD)(Siddiqi,A.R.等，J.Biol.Chem.,268,24535-24538,1995)。
已報告了用Rho控制在血清中的Swiss 3T3成纖維細(xì)胞的遷移性，HGF和TPA(12-O-十四酰基佛波醇-13-乙酸酯)控制的成角質(zhì)細(xì)胞303R的遷移性，自動發(fā)生及化學(xué)誘導(dǎo)物介導(dǎo)的嗜中性白細(xì)胞的遷移性(Takai,Y.等，Trends Biochem.Sci.,20,227-231,1995)，并且也報道了通過活化Rho控制腫瘤轉(zhuǎn)移模型之一即肝癌細(xì)胞(MM1細(xì)胞)經(jīng)培養(yǎng)的間皮層的透過(Yoshioka,K.等，REBS Lett.,372,25-28,1995)，由此暗示了Rho參與了細(xì)胞的遷移性。
同時，在來源于神經(jīng)的細(xì)胞如成神經(jīng)細(xì)胞瘤、PC-12細(xì)胞等中，由溶血磷脂酸引起的軸突退縮和細(xì)胞球形化是已知的，而溶血磷脂酸是Rho的活化刺激劑。由于此退縮可被C3酶治療抑制(Jalink,K.等，J.Cell Biol.,126,801-810,1994)并足體環(huán)狀結(jié)構(gòu)的形成被C3酶處理抑制，該環(huán)狀結(jié)構(gòu)分離了溶解骨和在破骨細(xì)胞的透明區(qū)域發(fā)生的從周圍吸收骨的位點(Zhang,D.等，J.Cell Sci.,108,2285-2292,1995)，暗示細(xì)胞形態(tài)變化中有Rho的深度參與。
此外，C3酶處理抑制粘著分子如LFA(白細(xì)胞功能相關(guān)抗原)的活化，且C3酶處理抑制Swiss 3T3成纖維細(xì)胞的增殖(Yamamoto,M.等，Oncogene,8,1449-1455,1993)。因此，Rho通過肌動蛋白細(xì)胞支架控制細(xì)胞粘著和細(xì)胞分裂，并還涉及c-fos基因的轉(zhuǎn)錄控制(Hill,C.S.等，Cell,81,1159-1170,1995)和細(xì)胞的轉(zhuǎn)化(Khosravi-Far,R.等，Mol.Cell Biol.,15(11),6443-6453,1995)。
基于C3酶抑制痢疾桿菌對上皮細(xì)胞的侵入，最近有報告稱Rho深度參與了細(xì)菌感染(Adam,T.等，The EMBO J.,15(13),3315,1996)。
此外，懷孕鼠與非懷孕鼠比較，其Rho和Rho激酶水平較高(Niiro,N.等，Biochem.Biophys.Res.Commun.,230,356-359,1997)，已知Rho和Rho激酶深度參與了生產(chǎn)時子宮的肌肉收縮。進(jìn)而，認(rèn)為整聯(lián)蛋白(Sueoka,K.等，F(xiàn)ertility&Sterility,67(5)799-811,1997)在受精、胚胎產(chǎn)生和胚胎化階段參與了細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-細(xì)胞內(nèi)基質(zhì)粘著，該蛋白已知被Rho活化(Morii,N.等，J.Biol.Chem.,267,20921-20926,1992)。
因此，現(xiàn)已清楚表明在接收來自多種細(xì)胞膜受體的信號后Rho被活化，并且活化的Rho通過肌動球蛋白系統(tǒng)成為范圍很廣的如平滑肌收縮、細(xì)胞流動、細(xì)胞粘著、細(xì)胞形態(tài)變化、細(xì)胞生長等細(xì)胞現(xiàn)象的分子開關(guān)。
平滑肌收縮明顯牽涉高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、外周循環(huán)紊亂、早產(chǎn)等疾?。患?xì)胞遷移性在癌癥的轉(zhuǎn)移、動脈硬化、視網(wǎng)膜病、免疫反應(yīng)等中扮演重要角色；細(xì)胞粘著深度涉及癌癥的轉(zhuǎn)移、炎癥、自身免疫疾病、AIDS、受精和受精卵的著床等；細(xì)胞的形態(tài)變化極大地牽涉了腦功能紊亂、骨質(zhì)疏松、消化道的細(xì)菌感染等；而細(xì)胞生長高度涉及了癌癥、動脈硬化等。因此，阻斷Rho功能的藥物被當(dāng)成了Rho扮演重要角色的這些疾病的治療劑。
但是，目前只有C3酶和EDIN可抑制Rho的作用。這些蛋白不能透過細(xì)胞質(zhì)，這妨礙了將其開發(fā)為藥物制劑。
另一方面，Rho激酶的抑制被認(rèn)為導(dǎo)致對多種與Rho有關(guān)細(xì)胞現(xiàn)象的反應(yīng)的抑制。該激酶存在于通過Rho信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的下游。但是，至今尚不知Rho激酶的特異性抑制劑。
因此，寄希望尋找到一種抑制Rho激酶的化合物，這些Rho激酶抑制劑可以作為預(yù)防和或治療與Rho有關(guān)的上述疾病和現(xiàn)象，例如，高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、外周循環(huán)紊亂、早產(chǎn)、動脈硬化、癌癥、炎癥、自身免疫疾病、AIDS、受精和受精卵的著床、骨質(zhì)疏松、視網(wǎng)膜病、腦功能紊亂、消化道的細(xì)菌感染等。
已知式(Ⅰ)化合物已用作預(yù)防和治療冠狀動脈、腦、腎和外周動脈等中循環(huán)紊亂的預(yù)防和治療劑(例如，一種治療高血壓、心絞痛、腎和外周循環(huán)紊亂的強效和長效治療劑，及腦血管痙孿等的抑制劑)，以及哮喘的治療劑(日本未審查專利No.62-89679，日本未審查專利No.3-218356，日本未審查專利No.4-273821，日本未審查專利No.5-194401，日本未審查專利No.6-41080和WO95/28387等)。
已知式(Ⅱ)化合物已用作血管舒張劑、高血壓治療劑、腦功能改善劑、抗哮喘劑、心臟保護(hù)劑、血小板凝集抑制劑、精神癥狀治療劑、抗炎劑及粘滯性過高癥狀的預(yù)防和治療劑(日本未審查專利No.57-20036，日本未審查專利N.61-227581，日本未審查專利N.2-256617，日本未審查專利No.4-264030，日本未審查專利No.6-56668，日本未審查專利No.6-80569，日本未審查專利No.6-293643，日本未審查專利No.7-41424和日本未審查專利No.7-277979)。
但是，尚不知道式(Ⅰ)或(Ⅱ)的這些化合物具有阻斷Rho功能或Rho激酶抑制作用。
發(fā)明概述本發(fā)明旨在以一種新的藥物制劑提供Rho激酶抑制劑。作為深入研究的結(jié)果，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)抑制Rho激酶的化合物具有抗高血壓作用、抗心絞痛作用、腦血管痙孿抑制作用、抗哮喘作用、改善外周循環(huán)作用、防止早產(chǎn)作用、抗動脈硬化作用、抗癌作用、抗炎作用、免疫抑制作用、改善自身免疫疾病作用、抗AIDJ作用、防止受精和受精卵著床作用、治療骨質(zhì)疏松作用、治療視網(wǎng)膜病作用、腦功能改善作用、預(yù)防消化道細(xì)菌感染作用，并且Rho激酶抑制劑可用作藥物制劑，特別是高血壓的治療劑、心絞痛的治療劑、腦血管痙孿的抑制劑、哮喘的治療劑、外周循環(huán)紊亂的治療劑、早產(chǎn)的預(yù)防劑、動脈硬化的治療劑、抗癌藥、抗炎劑、免疫抑制劑、自身免疫性疾病的治療劑、抗AIDS藥、骨質(zhì)疏松的治療劑、視網(wǎng)膜病的治療劑、改進(jìn)腦功能藥、避孕藥及消化道感染的預(yù)防劑。
還發(fā)現(xiàn)抑制Rho激酶的化合物可抑制Rho和Rho激酶研究用試劑及與其有關(guān)疾病的診斷試劑，這樣就完成了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明提供了如下方面(1)含Rho激酶抑制劑的藥物制劑。
(2)含Rho激酶抑制劑的藥物制劑，它至少選自下列之一高血壓的治療劑、心絞痛的治療劑、腦血管痙孿的抑制劑、哮喘的治療劑、外周循環(huán)紊亂的治療劑、早產(chǎn)的預(yù)防劑、動脈硬化的治療劑、抗癌藥、抗炎劑、免疫抑制劑、自身免疫性疾病的治療劑、抗AIDS藥、骨質(zhì)疏松的治療劑、視網(wǎng)膜病的治療劑、改進(jìn)腦功能藥、早產(chǎn)預(yù)防劑、避孕藥及消化道感染的預(yù)防劑。
(3)含治療有效量的Rho激酶抑制劑和一種藥用添加劑的藥物組合物。
(4)含Rho激酶抑制劑的試劑。
(5)含Rho激酶抑制劑的診斷試劑。
(6)含式(Ⅰ)酰胺化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽的Rho激酶抑制劑，
(Ⅰ)其中Ra是下式基團(tuán)
(a)
(b)或
(c)在式(a)和(b)中，R是氫原子、烷基或環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、苯基或芳烷基，其環(huán)上可選擇性帶有取代基，或R是下式的基團(tuán)，
(d)其中R6是氫原子、烷基或式-NR8NR9，其中R8和R9可相同或不同并各表示氫原子、烷基、芳烷基或苯基，R7是氫原子、烷基、芳烷基、苯基、硝基或氰基，或R6和R7一起形成雜環(huán)基團(tuán)，在其環(huán)上選擇性含有氧原子、硫原子或選擇性取代的氮原子；R1是氫原子、烷基或環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、苯基或芳烷基，其環(huán)上可選擇性帶有取代基，或R和R1與相鄰的氮原子一起形成雜環(huán)基團(tuán)，在其環(huán)上選擇性含有氧原子、硫原子或選擇性取代的氮原子；R2是氫原子或烷基；R3和R4可相同或不同并各表示氫原子、烷基、芳烷基、鹵原子、硝基、氨基、烷基氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、芳烷氧基、氰基、酰基、巰基、烷基硫基、芳烷基硫基、羧基、烷氧羰基、氨基甲酰基、烷基氨基甲?；虔B氮基，且A是下式基團(tuán)
(e)其中R10和R11相同或不同并各表示氫原子、烷基、鹵代烷基、芳烷基、羥基烷基、羧基或烷氧羰基，或R10和R11結(jié)合在一起表示環(huán)烷基，而l、m和n各表示0或1-3的整數(shù)，在式(c)中，L是氫原子、烷基、氨基烷基、單或二烷基氨基烷基、四氫呋喃基、氨基甲酰基烷基、苯二酰亞氨基烷基、脒基或下式基團(tuán)
(f)
(g)
(h)或
(i)其中B是氫原子、烷基、烷氧基、芳烷基、芳烷氧基、氨基烷基、羥基烷基、烷酰氧基烷基、烷氧羰基烷基、α-氨基芐基、呋喃基、吡啶基、苯基、苯氨基、苯乙烯基或咪唑并吡啶基，Q1是氫原子、鹵原子、羥基、芳烷氧基或噻吩甲基，W是亞烷基，Q2是氫原子、鹵原子、羥基或芳烷氧基，X是亞烷基，Q3是氫原子、鹵原子、羥基、烷氧基、硝基、氨基、2,3-二氫呋喃基或5-甲基-3-氧-2,3,4,5-四氫噠嗪-6-基；而Y是單鍵、亞烷基或亞烯基，并且在式(c)中，虛線是單鍵或雙鍵，且R5是氫原子、羥基、烷氧基、烷氧羰基氧基、烷酰氧基或芳烷氧羰基氧基；Rb是氫原子、烷基、芳烷基、氨基烷基或單或二烷基氨基烷基；且
Rc是選擇性取代的含氮雜環(huán)。
(7)含式(Ⅰ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽的藥物制劑，它是至少下列一種疾病的治療劑高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘和外周循環(huán)紊亂，這些疾病是Rho引起的。
(8)含式(Ⅰ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽的藥物制劑，它是至少下列一種治療劑動脈硬化的治療劑、抗癌藥、抗炎藥、免疫抑制劑、自身免疫性疾病的治療劑、抗AIDS藥、骨質(zhì)疏松的治療劑、視網(wǎng)膜病的治療劑、腦功能改善藥物、早產(chǎn)的預(yù)防劑、避孕藥及消化道感染的預(yù)防劑。
(9)具有Rho激酶抑制活性的試劑，其中含有式(Ⅰ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽。
(10)Rho激酶引起疾病的診斷試劑，其中含有式(Ⅰ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽。
(11)含式(Ⅱ)的取代的異喹啉磺酰胺衍生物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽的Rho激酶抑制劑，
(Ⅱ)其中R12是氫原子、氯或羥基，而當(dāng)R12是氫原子時，Alk是含2至6個碳原子的亞烷基，它選擇性帶有含1至10個碳原子的烷基，芳基或芳烷基取代基；R13是氫原子；R14是氫原子，或含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，芳基或芳烷基；R15是氫原子，含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，芳基或芳烷基，苯甲酰基，肉桂基、肉桂?；?、呋喃甲?；蛳率交鶊F(tuán)，
(j)其中R16是含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或下式基團(tuán)，
(k)其中R17和R18為氫原子或直接連接形成含2至4個碳原子的亞烷基；或者R13和R14直接連接形成含4個或少于4個碳原子的亞烷基，該基團(tuán)可選擇性被含1至10個碳原子的烷基、苯基或芐基取代，或R14和R15直接或通過氧原子結(jié)合并與相鄰的氮原子一起形成雜環(huán)，并且當(dāng)R12是氯原子或羥基時，Alk是含2至6個碳原子的亞烷基，它與碳原子連接的氫原子位置上選擇性地取代有含1至6個碳原子的烷基，R13和R14各為氫原子、含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或直接互相連接為亞乙基或1,3-亞丙基，其中與碳原子連接的氫原子位置是選擇性地取代有含1至6個碳原子的烷基；或者R15是氫原子、含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或脒基。
(12)含式(Ⅱ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽的藥物制劑，它是至少下列一種疾病的治療劑高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、炎癥和腦功能紊亂，這些疾病是Rho引起的。
(13)含式(Ⅱ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽的藥物制劑，它是至少下列一種治療劑外周循環(huán)紊亂的治療劑、動脈硬化的治療劑、抗癌藥、免疫抑制劑、自身免疫性疾病的治療劑、抗AIDS藥、骨質(zhì)疏松的治療劑、視網(wǎng)膜病的治療劑、早產(chǎn)的預(yù)防劑、避孕藥及消化道感染的預(yù)防劑。
(14)具有Rho激酶抑制活性的試劑，其中含有式(Ⅱ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽。
(15)Rho激酶引起疾病的診斷試劑，其中含有式(Ⅱ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽。
(16)式(Ⅲ)的化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽，
(Ⅲ)其中Rc’是選擇性取代的含氮雜環(huán)，它是除吡啶之外的Rc，而其它符號定義如上。
(17)上述(1)的藥物制劑，其中含有式(Ⅲ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽作為Rho激酶抑制劑。
(18)含式(Ⅲ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽的藥物制劑，它是至少下列一種治療劑高血壓治療劑、心絞痛的治療劑、腦血管痙孿抑制劑、哮喘的治療劑、外周循環(huán)紊亂的治療劑、動脈硬化的治療劑、抗癌藥、抗炎藥、免疫抑制劑、自身免疫性疾病的治療劑、抗AIDS藥、骨質(zhì)疏松的治療劑、視網(wǎng)膜病的治療劑、腦功能改善藥物、早產(chǎn)的預(yù)防劑、避孕藥及消化道感染的預(yù)防劑。
(19)上述(3)的藥物組合物，其中含有式(Ⅲ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽作為Rho激酶抑制劑。
(20)具有Rho激酶抑制活性的試劑，其中含有式(Ⅲ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽作為Rho激酶抑制劑。
(21)Rho激酶引起疾病的診斷試劑，其中含有式(Ⅲ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽。
(22)基于抑制Rho激酶的治療疾病的方法，其中包括給患者使用藥學(xué)有效量的Rho激酶抑制劑。
(23)上述(22)的治療方法，其中通過抑制Rho激酶治療的疾病至少選自下列之一高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、外周循環(huán)紊亂、動脈硬化、癌癥、炎癥、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨質(zhì)疏松、視網(wǎng)膜病、腦功能紊亂、早產(chǎn)、受精及受精卵著床及消化道感染。
(24)治療至少一種選自如下疾病的方法高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、外周循環(huán)紊亂，以上這些疾病是Rho激酶引起的，以及動脈硬化、癌癥、炎癥、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨質(zhì)疏松、視網(wǎng)膜病、早產(chǎn)、受精及受精卵著床及消化道感染，其中包括使用藥學(xué)有效量的式(Ⅰ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽。
(25)治療至少一種選自如下疾病的方法高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、炎癥及腦功能紊亂，以上這些疾病是Rho激酶引起的，以及外周循環(huán)紊亂、動脈硬化、癌癥、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨質(zhì)疏松、視網(wǎng)膜病、早產(chǎn)、受精及受精卵著床及消化道感染，其中包括使用藥學(xué)有效量的式(Ⅱ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽。
(26)治療至少一種選自如下疾病的方法高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、外周循環(huán)紊亂、動脈硬化、癌癥、炎癥、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨質(zhì)疏松、視網(wǎng)膜病、腦功能紊亂、早產(chǎn)、受精及受精卵著床及消化道感染，其中包括使用藥學(xué)有效量的式(Ⅲ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽。
(27)Rho激酶抑制劑在制備通過抑制Rho激酶可治療疾病的治療劑方面的用途。
(28)上述(27)的Rho激酶抑制劑的用途，其中通過抑制Rho激酶可治療的疾病至少選自下列疾病之一高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、外周循環(huán)紊亂、動脈硬化、癌癥、炎癥、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨質(zhì)疏松、視網(wǎng)膜病、腦功能紊亂、早產(chǎn)、受精及受精卵著床及消化道感染。
(29)式(Ⅰ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽在制備選自至少下列疾病之一的治療劑方面的用途，所述疾病包括高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、Rho激酶引起的外周循環(huán)紊亂、動脈硬化、癌癥、炎癥、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨質(zhì)疏松、視網(wǎng)膜病、腦功能紊亂、早產(chǎn)、受精及受精卵著床及消化道感染。
(30)式(Ⅱ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽在制備選自至少下列疾病之一的治療劑方面的用途，所述疾病包括高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、炎癥、Rho激酶引起的腦功能紊亂、外周循環(huán)紊亂、動脈硬化、癌癥、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨質(zhì)疏松、視網(wǎng)膜病、早產(chǎn)、受精及受精卵著床及消化道感染。
(31)式(Ⅲ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽在制備選自至少下列疾病之一的治療劑方面的用途，所述疾病包括高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、外周循環(huán)紊亂、動脈硬化、癌癥、炎癥、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨質(zhì)疏松、視網(wǎng)膜病、腦功能紊亂、早產(chǎn)、受精及受精卵著床及消化道感染。
(32)一種商業(yè)試劑盒，其中包括Rho激酶抑制劑和說明書，該說明書陳述Rho激酶抑制劑可或應(yīng)用于治療至少下列疾病之一高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、外周循環(huán)紊亂、動脈硬化、癌癥、炎癥、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨質(zhì)疏松、視網(wǎng)膜病、腦功能紊亂、早產(chǎn)、受精及受精卵著床及消化道感染。
(33)一種商業(yè)試劑盒，其中包括式(Ⅰ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽以及一份說明書，該說明書陳述該化合物可或應(yīng)用于治療至少下列疾病之一高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、外周循環(huán)紊亂，這些疾病是由Rho激酶引起的，以及動脈硬化、癌癥、炎癥、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨質(zhì)疏松、視網(wǎng)膜病、腦功能紊亂、早產(chǎn)、受精及受精卵著床及消化道感染。
(34)一種商業(yè)試劑盒，其中包括式(Ⅱ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽以及一份說明書，該說明書陳述該化合物可或應(yīng)用于治療至少下列疾病之一高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、炎癥和腦功能紊亂，這些疾病是由Rho激酶引起的，以及外周循環(huán)紊亂、動脈硬化、癌癥、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨質(zhì)疏松、視網(wǎng)膜病、腦功能紊亂、早產(chǎn)、受精及受精卵著床及消化道感染。
(35)一種商業(yè)試劑盒，其中包括式(Ⅲ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽以及一份說明書，該說明書陳述該化合物可或應(yīng)用于治療至少下列疾病之一高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、外周循環(huán)紊亂、動脈硬化、癌癥、炎癥、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨質(zhì)疏松、視網(wǎng)膜病、腦功能紊亂、早產(chǎn)、受精及受精卵著床及消化道感染。
發(fā)明詳述本發(fā)明的Rho激酶抑制作用、抗高血壓作用、抗心絞痛作用、腦血管痙孿抑制作用、抗哮喘作用、改善外周循環(huán)作用、防止早產(chǎn)作用、抗動脈硬化作用、抗癌作用、抗炎作用、免疫抑制作用、改善自身免疫疾病作用、抗AIDS作用、防止受精和受精卵著床作用、預(yù)防消化道細(xì)菌感染作用、治療骨質(zhì)疏松作用、治療視網(wǎng)膜病作用及腦功能改善作用可通過Rho激酶抑制活性、血管減壓作用、氣管松弛作用、外周血流增加作用、細(xì)胞粘著誘導(dǎo)抑制作用、噁性腫瘤轉(zhuǎn)移抑制作用、骨吸收抑制作用、小鼠同種異體MLR抑制活性、腫瘤細(xì)胞增殖抑制作用、血管生成抑制作用、血管平滑肌細(xì)胞增殖抑制作用等證實。
本發(fā)明Rho激酶抑制劑治療有效的、與Rho有關(guān)的疾病包括，例如，高血壓、心絞痛、腦血管痙孿、哮喘、外周循環(huán)紊亂、早產(chǎn)、動脈硬化、癌癥、炎癥、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、消化道細(xì)菌感染、骨質(zhì)疏松、視網(wǎng)膜病、腦功能紊亂等，以及生理現(xiàn)象如受精及受精卵著床。
在本文中，本發(fā)明的Rho激酶指同Rho一起活化的活化絲氨酸/蘇氨酸激酶，例如上述ROCα(ROCKⅡ)、p160ROCK(ROCβ,ROCK-Ⅰ)及具有絲氨酸/蘇氨酸激酶活性的其它蛋白。
癌癥包括骨髓白血病、淋巴細(xì)胞性白血病、胃癌、直腸癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、卵巢癌、乳腺癌、皮膚癌、宮頸癌、睪丸瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、尿道上皮癌、多發(fā)性骨髓瘤、子宮癌、黑素瘤、腦瘤等，而抗癌指抑制這些腫瘤的形成、侵潤、轉(zhuǎn)移、生長等。
免疫性疾病包括過敏反應(yīng)、器官移植排斥等。
自身免疫性疾病包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、Ⅰ型糖尿病、內(nèi)分泌眼病、原發(fā)性膽汁肝硬變、節(jié)段性回腸炎、腎小球性腎炎、肉樣瘤病、牛皮癬、天皰瘡、再生不良性貧血、自發(fā)性血小板減少紫癜等。
呼吸道細(xì)菌感染指由沙門氏菌、痢疾桿菌、腸道病原性大腸桿菌等侵入腸粘膜上皮細(xì)胞引起的多種疾病。
視網(wǎng)膜病指血管病視網(wǎng)膜病、動脈硬化視網(wǎng)膜病、中樞血管痙攣視網(wǎng)膜病、中樞嚴(yán)重視網(wǎng)膜病、環(huán)形視網(wǎng)膜病、血內(nèi)蛋白異常視網(wǎng)膜病、高血壓視網(wǎng)膜病、白血病視網(wǎng)膜病、脂血癥視網(wǎng)膜病、腎病性視網(wǎng)膜病、增殖性補網(wǎng)膜病、鐮刀貧血性視網(wǎng)膜病、孕婦的毒血癥性視網(wǎng)膜病等。
腦功能紊亂包括由于如下原因引起的精神病狀態(tài)，其病因包括腦出血、腦血栓、腦栓塞、蛛網(wǎng)膜下出血、暫時性腦局部缺血性休克、高血壓腦病、腦動脈硬化、硬膜下血腫、硬膜外血腫、腦缺氧癥、腦水腫、大腦炎、腦腫瘤、腦外傷、精神病、代謝物中毒、藥物中毒、暫時性呼吸抑制、手術(shù)過程中深度麻醉、身體紊亂等，以及上述疾病引起的后遺癥、注意力下降、機(jī)能亢進(jìn)、言語障礙、智力發(fā)育遲緩、記憶缺失、癡呆(包括與癡呆有關(guān)的游動、夜游、侵犯行為等)。
因此，本發(fā)明的Rho激酶抑制劑是有效的藥物制劑，特別是預(yù)防和治療Rho引起的這些疾病的藥物制劑，例如高血壓的治療劑、心絞痛的治療劑、腦血管痙孿的抑制劑、哮喘的治療劑、外周循環(huán)紊亂的治療劑、早產(chǎn)的預(yù)防劑、動脈硬化的治療劑、抗癌藥、抗炎劑、免疫抑制劑、自身免疫性疾病的治療劑、抗AIDS藥、避孕藥及消化道感染的預(yù)防劑/骨質(zhì)疏松的治療劑、視網(wǎng)膜病的治療劑及改進(jìn)腦功能藥。
式(Ⅰ)和式(Ⅱ)化合物對Rho激酶具有高度親和力。因此，其放射活性物質(zhì)(放射配體)可在產(chǎn)業(yè)上用作Rho激酶的選擇性放射配體。式(Ⅰ)和式(Ⅱ)化合物及其修飾后化合物(如這些化合物的放射配體等)為Rho激酶的抑制劑，可用作研究Rho和Rho激酶的試劑，及與其有關(guān)疾病的診斷試劑。
本發(fā)明的用作Rho激酶抑制劑的化合物可以是具有Rho激酶抑制劑作用的任何一個。例如，使用式(Ⅰ)和式(Ⅱ)的化合物。
在本說明書中，式(Ⅰ)的每個符號定義如下。
R和R1位的烷基是含1至10個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等，優(yōu)選含1至4個碳原子的烷基。
R和R1位的環(huán)烷基含3至7個碳原子，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基等。
R和R1位的環(huán)烷基烷基中環(huán)烷基部分為上述含3至7個碳原子的環(huán)烷基，而烷基部分是含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基(例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、戊基、己基等)，例如，環(huán)丙基甲基、環(huán)丁基甲基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基甲基、環(huán)庚基甲基、環(huán)丙基乙基、環(huán)戊基乙基、環(huán)己基乙基、環(huán)庚基乙基、環(huán)丙基丙基、環(huán)戊基丙基、環(huán)己基丙基、環(huán)庚基丙基、環(huán)丙基丁基、環(huán)戊基丁基、環(huán)己基丁基、環(huán)庚基丁基、環(huán)丙基己基、環(huán)戊基己基、環(huán)己基己基、環(huán)庚基己基等。
R和R1位的芳烷基中烷基部分含1至4個碳原子，例如苯基烷基如芐基、1-苯乙基、2-苯乙基、3-苯丙基、4-苯丁基等。
R和R1位上選擇性取代的環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、苯基和芳烷基環(huán)上的取代基為鹵原子(例如，氯原子、溴原子、氟原子和碘原子)、烷基(與R和R1烷基相同)、烷氧基(含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等)、芳烷基(與R和R1芳烷基相同)或鹵代烷基(即被1-5個鹵原子取代的R和R1烷基，例如氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、2,2,3,3,3-五氟丙基等)、硝基、氨基、氰基、疊氮基等。
R和R1與相鄰氮原子一起形成基團(tuán)，所形成的雜環(huán)在環(huán)中選擇性地含有氧原子、硫原子或選擇性取代的氮原子，該雜環(huán)優(yōu)選為5或6元環(huán)及其結(jié)合的環(huán)。其實例包括1-吡咯烷基、哌啶子基、1-哌嗪基、嗎啉代、硫代嗎啉代、1-咪唑基、2,3-二氫噻唑-3-基等。選擇性取代氮原子的取代基例如是烷基、芳烷基、鹵代烷基等。此處，烷基、芳烷基和鹵代烷基定義如R和R1。
R2烷基定義如R和R1。
R3和R4鹵原子、烷基、烷氧基和芳烷基定義如R和R1。
R3和R4酰基為含2至6個碳原子的烷?；?如乙?；?、丙?；?、丁酰基、戊酰基、新戊?；?、苯甲?；虮交轷；?，其中烷?；糠趾?至4個碳原子(例如苯乙?；⒈奖；?、苯丁?；?。
R3和R4烷基氨基中烷基部分含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基。其實例包括甲氨基、乙氨基、丙氨基、異丙氨基、丁氨基、異丁氨基、仲丁氨基、叔丁氨基、戊氨基、己氨基等。
R3和R4酰氨基中?；糠譃楹?至6個碳原子的烷?；?、苯甲?；蛲轷；糠趾?至4個碳原子的苯基烷?；?，例如乙?；被⒈；被?、丁?；被?、戊酰基氨基、新戊酰基氨基、苯甲?；被⒈揭阴；被?、苯丙酰基氨基、苯丁?；被?。
R3和R4烷硫基中的烷基部分為含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲硫基、乙硫基、丙硫基、異丙硫基、丁硫基、并丁硫基、仲丁硫基、叔丁硫基、戊硫基、己硫基等。
R3和R4芳烷氧基中，烷基部分是含1至4個碳原子的烷基，例如芐氧基、1-苯基乙氧基、2-苯基乙氧基、3-苯基丙氧基、4-苯基丁氧基等。
R3和R4芳烷基硫基中，烷基部分為含1至4個碳原子的烷基，例如芐硫基、1-苯基乙硫基、2-苯基乙硫基、3-苯基丙硫基、4-苯基丁硫基等。
R3和R4烷氧羰基中，烷氧基部分為含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，例如甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、異丙氧羰基、丁氧羰基、異丁氧羰基、仲丁氧羰基、叔丁氧羰基、戊氧羰基、己氧羰基等。
R3和R4烷基氨基甲?；鶠楹?至4個碳原子的烷基單或二取代的氨基甲酰基，例如甲基氨基甲?；?、二甲基氨基甲酰基、乙基氨基甲?；?、二乙基氨基甲酰基、丙基氨基甲?；⒍被柞；?、丁基氨基甲?；⒍』被柞；?。
R5烷氧基定義如R和R1。
R5烷氧羰基氧基中，烷氧基部分是含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，例如，甲氧羰基氧基、乙氧羰基氧基、丙氧羰基氧基、異丙氧羰基氧基、丁氧羰基氧基、異丁氧羰基氧基、仲丁氧羰基氧基、叔丁氧羰基氧基、戊氧羰基氧基、己氧羰基氧基等。
R5烷酰氧基中，烷?；糠譃楹?至6個碳原子的烷酰基，例如乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、戊酰氧基、新戊酰氧基等。
R5芳烷氧羰基氧基中，芳烷基部分為含C1-C4烷基的芳烷基，例如，芐氧羰基氧基、1-苯乙氧羰基氧基、2-苯乙氧羰基氧基、3-苯丙氧羰基氧基、4-苯丁氧羰基氧基等。
R6烷基定義如R和R1；R8和R9烷基定義如R和R1；而R8和R9芳烷基也定義如R和R1。
R7烷基定義如R和R1,R7芳烷基定義如R和R1。
R6和R7結(jié)合形成的基團(tuán)，其形成環(huán)中選擇性含有氧原子、硫原子或選擇性取代的氮原子的雜環(huán)，是咪唑-2-基、噻唑-2-基、噁唑-2-基、咪唑啉-2-基、3,4,5,6-四氫吡啶-2-基、3,4,5,6-四氫嘧啶-2-基、1,3-噁唑啉-2-基、1,3-噻唑啉-2-基或選擇性取代的苯并咪唑-2-基、苯并噻唑-2-基、苯并噁唑-2-基等，其中取代基如鹵原子、烷基、烷氧基、鹵代烷基、硝基、氨基、苯基、芳烷基等。此處，鹵原子、烷基、烷氧基、鹵代烷基及芳烷基定義如R和R1。
上述選擇性取代的氮原子的取代基如烷基、芳烷基、鹵代烷基等。此處，烷基、芳烷基和鹵代烷基定義如R和R1。
R10和R11的羥基烷基中，烷基部分含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基被1至3個羥基取代，例如，羥甲基、2-羥乙基、1-羥乙基、3-羥丙基、4-羥丁基等。R10和R11烷基定義如R和R1；R10和R11鹵代烷基及烷氧羰基定義如R和R1；R10和R11芳烷基定義如R和R1；R10和R11結(jié)合形成的環(huán)烷基與R和R1形成的相同。
L烷基定義如R和R1。
L氨基烷基是被氨基取代的含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如氨基甲基、2-氨基乙基、1-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、6-氨基己基等。
L位上的單或二烷基氨基烷基是用含1至4個碳原子的烷基單或二取代的氨基烷基，例如甲基氨基甲基、二甲基氨基甲基、乙基氨基甲基、二乙基氨基甲基、丙基氨基甲基、二丙基氨基甲基、丁基氨基甲基、二丁基氨基甲基、2-二甲基氨基乙基、2-二乙基氨基乙基等。
L位的氨基甲?；榛鶠橛冒被柞；〈?、含1至6個碳原子的、直鏈或支鏈烷基，例如，氨基甲?；谆?、2-氨基甲?；一?、1-氨基甲?；一?、3-氨基甲?；?、4-氨基甲?；驶?、5-氨基甲?；旎?、6-氨基甲?；夯?。
L位的苯二酰亞氨基烷基是被鄰苯二甲酰亞胺取代的、含1至6個碳原子的、直鏈或支鏈烷基。其實例包括苯二酰亞氨基甲基、2-苯二酰亞氨基乙基、1-苯二酰亞氨基乙基、3-苯二酰亞氨基丙基、4-苯二酰亞氨基丁基、5-苯二酰亞氨基戊基、6-苯二酰亞氨基己基等。
B烷基定義如R和R1。
B烷氧基定義如R和R1。
B芳烷基定義如R和R1。
B芳烷氧基定義如R3和R4。
B氨基烷基定義如L。
B羥基烷基定義如R10和R11。
B位烷酰氧基烷基中，直鏈或支鏈烷基含1至6個碳原子，該烷基被具有含2至6個碳原子的烷酰基部分的烷酰氧基取代，例如乙酰氧基甲基、丙酰氧基甲基、丁酰氧基甲基、戊酰氧基甲基、新戊酰氧基甲基、乙酰氧基乙基、丙酰氧基乙基、丁酰氧基乙基、戊酰氧基乙基、新戊酰氧基乙基等。
B位烷氧羰基烷基中，直鏈或支鏈烷基含1至6個碳原子，該烷基被具有含1至6個碳原子的烷氧基部分的烷氧羰基取代，例如甲氧羰基甲基、乙氧羰基甲基、丙氧羰基甲基、異丙氧羰基甲基、丁氧羰基甲基、異丁氧羰基甲基、仲丁氧羰基甲基、叔丁氧羰基甲基、戊氧羰基甲基、己氧羰基甲基、甲氧羰基乙基、乙氧羰基乙基、丙氧羰基乙基、異丙氧羰基乙基、丁氧羰基乙基、異丁氧羰基乙基、仲丁氧羰基乙基、叔丁氧羰基乙基、戊氧羰基乙基、己氧羰基乙基等。
Q1、Q2和Q3鹵原子定義如R和R1。
Q1和Q2芳烷氧基定義如R3和R4。
Q3烷氧基定義如R和R1。
W、X和Y亞烷基為含1至6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，例如亞甲基、亞乙基、1,3-亞丙基、1,2-亞丙基、1,4-亞丁基、1,5-亞戊基、1,6-亞己基等。
Y亞烯基為含2至6個碳原子的直鏈或支鏈亞烯基，例如1,2-亞乙烯基、亞丙烯基、亞丁烯基、亞戊烯基等。
Rb烷基定義如R和R1。
Rb芳烷基定義如R和R1。
Rb氨基烷基定義如L。
Rb單或二烷基氨基烷基定義如L。
當(dāng)Rc位含氮原子單環(huán)是吡啶、嘧啶、噠嗪、三嗪、吡唑、三唑等時，并當(dāng)雜環(huán)為稠環(huán)時，該雜環(huán)例如是吡咯并吡啶(如1H-吡咯并[2,3-b]吡啶、1H-吡咯并[3,2-b]吡啶、1H-吡咯并[3,4-b]吡啶等)、吡唑并吡啶(如1H-吡唑并[3,4-b]吡啶、1H-吡唑并[4,3-b]吡啶等)、咪唑并吡啶(如1H-咪唑并[4,5-b]吡啶等)、吡咯并嘧啶(如1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶、1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶、1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶等)、吡唑并嘧啶(如1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶、1H-吡唑并[1,5-a]嘧啶、1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶等)、咪唑并嘧啶(如1H-咪唑并[1,2-a]嘧啶、1H-咪唑并[4,5-d]嘧啶等)、吡咯并三嗪(如吡咯并[1,2-a]-1,3,5-三嗪、吡咯并[2,1-f]-1,2,4-三嗪)、吡唑并三嗪(如吡唑并[1,5-a]-1,3,5-三嗪等)、三唑并吡啶(如1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶等)、三唑并嘧啶(如1,2,4-三唑并[1,5-a]嘧啶、1,2,4-三唑并[4,3-a]嘧啶、1H-1,2,3-三唑并[4,5-d]嘧啶等)、鄰二氮萘、喹唑啉、喹啉、吡啶并噠嗪(如吡啶并[2,3-c]噠嗪等)、吡啶并吡嗪(如吡啶并[2,3-b]吡嗪等)、吡啶并嘧啶(如吡啶并[2,3-d]嘧啶、吡啶并[3,2-d]嘧啶等)、嘧啶并嘧啶(如嘧啶并[4,5-d]嘧啶、嘧啶并[5,4-d]嘧啶等)、吡嗪并嘧啶(如吡嗪并[2,3-d]嘧啶等)、萘啶(如1,8-萘啶等)、四唑并嘧啶(如四唑并[1,5-a]嘧啶等)、噻吩并吡啶(如噻吩并[2,3-b]吡啶等)、噻吩并嘧啶(如噻吩并[2,3-d]嘧啶等)、噻唑并吡啶(如噻唑并[4,5-b]吡啶、噻唑并[5,4-b]吡啶等)、噻唑并嘧啶(如噻唑并[4,5-d]嘧啶、噻唑并[5,4-d]嘧啶等)、噁唑并吡啶(如噁唑并[4,5-b]吡啶、噁唑并[5,4-b]吡啶等)、噁唑并嘧啶(如噁唑并[4,5-d]嘧啶、噁唑并[5,4-d]嘧啶等)、呋喃并吡啶(如呋喃并[2,3-b]吡啶、呋喃并[3,2-b]吡啶等)、呋喃并嘧啶(如呋喃并[2,3-d]嘧啶、呋喃并[3,2-d]嘧啶等)、2,3-二氫吡咯并吡啶(如2,3-二氫-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶、2,3-二氫-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶等)、2,3-二氫吡咯并嘧啶(如2,3-二氫-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶、2,3-二氫-1H-吡咯并[3,2-d]吡嘧啶)、5,6,7,8-四氫吡啶并[2,3-d]嘧啶、5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶、5,6,7,8-四氫喹啉等。當(dāng)這些環(huán)形成氫化芳香環(huán)時，環(huán)中碳原子可以是羰基，并包括，例如，2,3-二氫-2-氧代吡咯并吡啶、2,3-二氫-2,3-二氧代吡咯并吡啶、7,8-二氫-7-氧代-1,8-萘啶、5,6,7,8-四氫-7-氧代-1,8-萘啶等。
這些環(huán)可被如下取代基取代，例如，鹵原子、烷基、烷氧基、芳烷基、鹵代烷基、硝基、氨基、烷基氨基、氰基、甲?；Ⅴ；被榛?、單或二烷基氨基烷基、疊氮基、羧基、烷氧羰基、氨基甲?；?、烷基氨基甲酰基、烷氧基烷基(如甲氧基甲基、甲氧基乙基、甲氧基丙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、乙氧基丙基等)、選擇性取代的肼基等。
在本文中，選擇性取代的肼基的取代基包括烷基、芳烷基、?；?、氰基等，其中烷基和芳烷基定義如R和R1，例如甲基肼基、乙基肼基、芐基肼基等。
在本說明書中，式(Ⅱ)中的每個符號定義如下。
R13、R14、R15和R16位的含1至6個碳原子的、直鏈或支鏈烷基為甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。
R14和R15位上的芳基為苯基、萘基等。
R14和R15芳烷基定義如R和R1。
R13和R14直接彼此鍵合形成的含有4個或4個以下碳原子的亞烷基，為亞甲基、亞乙基、1,3-亞丙基、1,2-亞丙基、1,4-亞丁基等。
含1至10個碳原子的、取代R13和R14直接彼此鍵合形成的含有4個或4個以下碳原子的亞烷基的烷基，是含1至10個碳原子的直鏈或支鏈烷基。其實例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。
含1至6個碳原子的、取代R13和R14直接彼此鍵合形成的亞乙基的烷基，是含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，其與R13為烷基時相同。
R14和R15直接或通過氧原子鍵合在一起與相鄰的氮原子形成的雜環(huán)，是吡咯烷子基、哌啶子基、嗎啉代、高哌啶子基、高嗎啉代等。
由R17和R18直接彼此鍵合形成的含2至4個碳原子的亞烷基，是亞乙基、1,3-亞丙基、1,2-亞丙基、1,4-亞丁基等。
Alk上含2至6個碳原子的亞烷基是亞乙基、1,3-亞丙基、1,2-亞丙基、1,4-亞丁基、1,5-亞戊基、1,6-亞己基等。
Alk上含2至6個碳原子的亞烷基的取代基，即含1至6個碳原子的烷基和含1至10個碳原子的烷基，與R13定義相同。
Alk是含2至6個碳原子的亞烷基的取代基，即芳基和芳烷基的定義如R14。
可用作本發(fā)明Rho激酶抑制劑的化合物，例如，是式(Ⅰ)的化合物，比如下列化合物。
(1)4-(2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶(2)1-芐氧羰基-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶
(3)1-苯甲?；?4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(4)1-丙基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶(5)[3-(2-(2-噻吩基甲基)苯氧基)-2-羥丙基]-(4-吡啶基氨基甲?；?-哌啶(6)4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶(7)1-芐基-4-(4-吡啶基氨基甲?；?-1,2,5,6-四氫吡啶(8)3-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(9)1-芐基-3-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(10)1-(1-2-(4-芐氧基苯氧基)乙基)-4-(N-(2-吡啶基)-N-芐基氨基甲?；?哌啶(11)1-甲?；?4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(12)4-(3-吡啶基氨基甲?；?哌啶(13)1-異丙基-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(14)1-甲基-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(15)1-己基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶(16)1-芐基-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(17)1-(2-苯乙基)-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(18)1-(2-(4-甲氧基苯基)乙基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶(19)1-(2-(4-甲氧基苯基)乙基)-4-(2-吡啶基氨基甲?；?哌啶(20)1-(2-(4-氯苯基)乙基)-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(21)1-聯(lián)苯基甲基-4-(2-吡啶基氨基甲?；?哌啶(22)1-[2-(4-(5-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫噠嗪-6-基)苯基)乙基]-4-(2-吡啶基氨基甲?；?哌啶(23)1-(4-(4,5-二氫-2-呋喃基)苯基)-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(24)1-(2-硝基苯基)-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(25)1-(2-氨基苯基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶(26)1-煙?；?4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(27)1-異煙酰基-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(28)1-(3,4,5-三甲氧基苯甲酰基)-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(29)1-乙?；?4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶(30)1-(3-(4-氟苯甲?；?丙基)-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(31)1-(3-(4-氟苯甲酰基)丙基)-4-(2-吡啶基氨基甲?；?哌啶(32)1(1-(4-羥基苯甲?；?乙基)-4-(2-吡啶基氨基甲?；?哌啶(33)1-(1-(4-芐氧基苯甲酰基)乙基)-4-(2-吡啶基氨基甲?；?哌啶(34)1-(2-(4-羥基苯氧基)乙基)-4-(2-吡啶基氨基甲?；?哌啶(35)1-(4-(4-氟苯基)-4-羥基丁基)-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(36)1-(1-甲基-2-(4-羥基苯基)-2-羥乙基)-4-(2-吡啶基氨基甲?；?哌啶(37)1-肉桂基-4-(2-吡啶基氨基甲?；?哌啶(38)1-(2-羥基-3-苯氧基丙基)-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(39)1-(2-羥基-3-苯氧基丙基)-4-(3-吡啶基氨基甲?；?哌啶(40)1-(2-羥基-3-苯氧基丙基)-4-(2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶(41)1-(2-苯乙基)-4-[N-(2-吡啶基)-N-(2-(N,N-二甲基氨基)乙基)-氨基甲?；鵠哌啶(42)1-芐氧羰基-4-(2-吡啶基氨基甲?；?哌啶(43)1-(3-氯苯基)氨基甲?；?4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(44)1-[N-(2-吡啶基)-N-(2-(N,N-二甲基氨基)乙基)-氨基甲酰基]哌啶(45)1-甲基-4-(4-吡啶基氨基甲?；?-1,2,5,6-四氫吡啶(46)1-煙酰基-3-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(47)1-[2-(4-氟苯甲?；?乙基]-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(48)1-(6-氯-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶
(49)1-(4-硝基芐基)-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(50)1-己基-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(51)1-芐氧羰基-4-(2-氯4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶(52)4-(2-氯-4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(53)1-(2-氯煙?；?-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶(54)3-(2-氯-4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(55)1-(4-苯二酰亞氨基丁基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶(56)1-(3,5-二叔丁基-4-羥基肉桂酰基)-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(57)1-氨基甲酰基甲基-4-(4-吡啶基氨基甲?；?哌啶(58)1-芐氧羰基-4-(5-硝基-2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶(59)4-(5-硝基-2-吡啶基氨基甲?；?哌啶(60)反式-4-芐氧基甲酰氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)環(huán)己烷(61)反式-4-氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(62)反式-4-甲酰氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)環(huán)己烷(63)反式-4-二甲基氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(64)N-亞芐基-反式-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己基甲胺(65)反式-4-芐基氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(66)反式-4-異丙基氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(67)反式-4-煙?；被谆?1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(68)反式-4-環(huán)己基氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(69)反式-4-芐氧基甲酰氨基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)環(huán)己烷(70)反式-4-氨基-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(71)反式4-(1-氨基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(72)反式-4-氨基甲基-順式2-甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)環(huán)己烷(73)(+)-反式-4-(1-芐氧基甲酰氨基丙基)-1-環(huán)己烷甲酸(74)(+)-反式-4-(1-芐氧基甲酰氨基丙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)環(huán)己烷(75)(-)-反式-4-(1-芐氧基甲酰氨基丙基)-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷
(76)(+)-反式-4-(1-氨基丙基)-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(77)(-)-反式-4-(1-氨基丙基)-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(78)(-)-反式-4-(1-芐氧基甲酰氨基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(79)(+)-反式-4-(1-芐氧基甲酰氨基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(80)(+)-反式-4-(1-氨基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)環(huán)己烷(81)(-)-反式-4-(1-氨基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(82)反式-4-(4-氯苯甲?；?氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(83)反式-4-氨基甲基-1-(2-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(84)反式-4-芐氧基甲酰氨基甲基-1-(2-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(85)反式-4-甲基氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(86)反式-4-(N-芐基-N-甲基氨基)甲基-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(87)反式-4-氨基甲基-1-(3-吡啶氨基甲酰基)環(huán)己烷(88)反式-4-氨基甲基-1-[(3-羥基-2-吡啶基)氨基甲?；鵠環(huán)己烷(89)反式-4-芐氧基甲酰氨基甲基-1-(3-吡啶氨基甲酰基)環(huán)己烷(90)反式-4-芐氧基甲酰氨基甲基-1-[(3-芐氧基-2-吡啶基)氨基甲?；鵠環(huán)己烷(91)反式-4-苯二酰亞氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(92)反式-4-芐氧基甲酰氨基甲基-1-(3-甲基-4-吡啶基氨基甲?；?環(huán)己烷(93)反式-4-氨基甲基-1-(3-甲基-4-吡啶基氨基甲酰基)環(huán)己烷(94)4-(反式-4-芐氧基甲酰氨基甲基環(huán)己基羰基)氨基-2,6-二甲基吡啶-N-氧化物(95)4-(反式-4-氨基甲基環(huán)己基羰基)氨基-2,6-二甲基吡啶-N-氧化物
(96)反式-4-氨基甲基-1-(2-甲基-4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(97)反式-4-(1-芐氧基甲酰氨基乙基)-1-(4-吡啶基氨基甲酰基)環(huán)己烷(98)反式-4-(1-氨基-1-甲基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(99)反式-4-(2-氨基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(100)反式-4-(2-氨基-1-甲基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(101)反式-4-(1-氨基丙基)-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(102)反式-4-氨基甲基-反式-1-甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)環(huán)己烷(103)反式-4-芐基氨基甲基-順式-2-甲基-1-(4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(104)反式-4-(芐氧基甲酰氨基-1-甲基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)環(huán)己烷(105)反式-4-芐氧基甲酰氨基甲基-1-(N-甲基-4-吡啶氨基甲?；?環(huán)己烷(106)反式-4-(1-乙酰氨基-1-甲基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)環(huán)己烷(107)反式-N-(6-氨基-4-嘧啶基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(108)反式-N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(109)(+)-反式-N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-(氨基乙基)環(huán)己烷甲酰胺(110)反式-N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基-1-甲基乙基)環(huán)己烷甲酰胺(111)反式-N-(1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(112)(+)-反式-N-(1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)環(huán)己烷甲酰胺(113)反式-N-(1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基-1-甲基乙基)環(huán)己烷甲酰胺
(114)(+)-反式-N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)環(huán)己烷甲酰胺(115)反式-N-(1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-4-基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(116)(+)-反式-N-(1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)環(huán)己烷甲酰胺(117)反式-N-(1H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-4基)-4-(1-氨基-1-甲基乙基)環(huán)己烷甲酰胺(118)反式-N-(4-嘧啶基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(119)反式-N-(3-氨基-4-吡啶基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(120)反式-N-(7H-咪唑并[4,5-d]嘧啶-6-基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(121)反式-N-(3H-1,2,3-三唑并[4,5-d]嘧啶-7-基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(122)反式-N-(1-芐基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(123)反式-N-(1H-5-吡唑基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(124)反式-N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(125)反式-N-(4-噠嗪基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(126)反式-N-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(127)反式-N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(128)反式-N-(噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(129)反式-N-(5-甲基-1,2,4-三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(130)反式-N-(3-氰基-5-甲基吡唑唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(131)反式-N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基-1-甲基乙基)環(huán)己烷甲酰胺(132)反式N-(2-(1-吡咯烷基)-4-吡啶基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(133)反式-N-(2,6-二氨基-4-嘧啶基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(134)(+)-反式-N-(7-甲基-1,8-萘啶-4-基)4-(氨基乙基)環(huán)己烷甲酰胺(135)反式-N-(1-芐氧基甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(136)(+)-反式-N-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)環(huán)己烷甲酰胺(137)反式-N-芐基-N-(2-芐基氨基-4-吡啶基)4-(1-氨基-1-甲基乙基)環(huán)己烷甲酰胺(138)反式-N-(2-疊氮基-4-吡啶基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(139)反式-N-(2,3-二氫-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(140)反式-N-(2,3-二氫-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基-1-甲基乙基)環(huán)己烷甲酰胺(141-1)反式-N-(2-羧基-4-吡啶基)-4-氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(141-2)R-(+)-反式-N-(3-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)環(huán)己烷甲酰胺(142)反式-N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-胍基甲基環(huán)己烷甲酰胺(143)反式-N-(1H-吡唑并[3,4-b]-4-基)-4-胍基甲基環(huán)己烷甲酰胺(144)反式-N-(4-吡啶基)-4-胍基甲基環(huán)己烷甲酰胺(145)反式-N-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-胍基甲基環(huán)己烷甲酰胺(146)反式-N-(1-甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-(2-咪唑啉-2-基)氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(147)反式-N-(1-芐氧基甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-胍基甲基環(huán)己烷甲酰胺(148)反式-N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-胍基甲基環(huán)己烷甲酰胺(149)反式-N-(1-芐氧基甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-(2-咪唑啉-2-基)氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(150)反式-N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)4-(3-芐基胍基甲基)環(huán)己烷甲酰胺(151)反式-N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)4-(3-苯基胍基甲基)環(huán)己烷甲酰胺(152)反式-N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)4-(3-丙基胍基甲基)環(huán)己烷甲酰胺(153)反式-N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-(3-辛基胍基甲基)環(huán)己烷甲酰胺(154)反式-N-(1-芐氧基甲基吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-(2-芐基-3-乙基胍基甲基)環(huán)己烷甲酰胺(155)反式-N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)4-(咪唑-2-基)氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(156)反式-N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-(噻唑-2-基)氨基甲基環(huán)己烷甲酰胺(157)(R)-(+)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)苯甲酰胺(158)N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基-1-甲基乙基)苯甲酰胺(159)N-(4-吡啶基)-4-氨基甲基-2-芐氧基苯甲酰胺(160)N-(4-吡啶基)-4-氨基甲基-2-乙氧基苯甲酰胺(161)(R)-(-)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)-3-硝基苯甲酰胺(162)(R)-(-)-N-(4-吡啶基)-3-氨基-4-(1-氨基乙基)苯甲酰胺(163)(R)-(+)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)-3-氯苯甲酰胺(164)N-(4-吡啶基)-3-氨基甲基苯甲酰胺(165)(R)-(+)-N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)苯甲酰胺(166)(R)-(+)-N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)苯甲酰胺(167)N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-胍基甲基苯甲酰胺(168)N-(4-吡啶基)-4-胍基甲基苯甲酰胺(169)(R)-(+)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)-3-氟苯甲酰胺
(170)N-(4-吡啶基)-4-氨基甲基苯甲酰胺(171)N-(4-吡啶基)-4-氨基甲基-2-羥基苯甲酰胺(172)N-(4-吡啶基)-4-(2-氨基乙基)苯甲酰胺(173)N-(4-吡啶基)-4-氨基甲基-3-硝基苯甲酰胺(174)N-(4-吡啶基)-3-氨基-4-氨基甲基苯甲酰胺(175)(S)-(-)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)苯甲酰胺(176)(S)-(-)-N-(4-吡啶基)-2-(1-氨基乙基)苯甲酰胺(177)(R)-(-)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)-2-氯苯甲酰胺(178)(R)-(+)-N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-(1-(丙基胍基)乙基)苯甲酰胺(179)(R)-(-)-N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)-3-疊氮基苯甲酰胺(180)(R)-(+)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)-2-硝基苯甲酰胺(181)(R)-(+)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)-3-乙氧基苯甲酰胺(182)(R)-(+)-N-(3-碘-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)苯甲酰胺(183)(R)-(+)-N-(3-碘-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)-3-疊氮基苯甲酰胺(184)(R)-(-)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)-3-羥基苯甲酰胺(185)N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-胍基甲基-3-硝基苯甲酰胺(186)(R)-N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-(1-胍基甲基)-3-硝基苯甲酰胺(187)(R)-N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)-2-硝基苯甲酰胺(188)N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-胍基苯甲酰胺(189)(R)-N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)-3-硝基苯甲酰胺(190)(R)-N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-(1-胍基乙基)苯甲酰胺(191)N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基-2-羥乙基)苯甲酰胺(192)N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-氨基甲基-3-硝基苯甲酰胺(193)N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺(194)N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺(195)N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-1-氨基乙?；?4-哌啶甲酰胺(196)N-(1-甲氧基甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺(197)N-(2,3-二氫-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺(198)N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-(2-苯乙基)-4-哌啶甲酰胺(199)N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-脒基-4-哌啶甲酰胺(200)N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-(3-苯丙基)-4-哌啶甲酰胺(201)N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-芐基-4-哌啶甲酰胺(202)N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-1-(2-苯乙基)-4-哌啶甲酰胺(203)N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-1-(3-苯丙基)-4-哌啶甲酰胺優(yōu)選化合物為(80)、(109)、(110)、(112)、(115)、(142)、(143)、(144)、(145)、(153)、(157)、(163)、(165)、(166)和(179)。
例如式(Ⅱ)的化合物用作本發(fā)明的Rho激酶抑制劑，例如以下化合物。
(204)1-(5-異喹啉基磺?；?高哌嗪(205)1-(5-異喹啉基磺酰基)-2-甲基高哌嗪(206)1-(5-異喹啉基磺?；?-3-甲基高哌嗪(207)1-(5-異喹啉基磺?；?-6-甲基高哌嗪(208)1-(5-異喹啉基磺?；?-2,3-二甲基高哌嗪
(209)1-(5-異喹啉基磺?；?-3,3-二甲基高哌嗪(210)1-(5-異喹啉基磺酰基)-3-乙基高哌嗪(211)1-(5-異喹啉基磺?；?-3-丙基高哌嗪(212)1-(5-異喹啉基磺?；?-3-異丁基高哌嗪(213)1-(5-異喹啉基磺酰基)-3-苯基高哌嗪(214)1-(5-異喹啉基磺?；?-3-芐基高哌嗪(215)1-(5-異喹啉基磺?；?-6-乙基高哌嗪(216)1-(5-異喹啉基磺?；?-6-丙基高哌嗪(217)1-(5-異喹啉基磺酰基)-6-丁基高哌嗪(218)1-(5-異喹啉基磺?；?-6-戊基高哌嗪(219)1-(5-異喹啉基磺酰基)-6-己基高哌嗪(220)1-(5-異喹啉基磺?；?-6-苯基高哌嗪(221)1-(5-異喹啉基磺酰基)-6-芐基高哌嗪(222)1-(5-異喹啉基磺?；?-4-甲基高哌嗪(223)1-(5-異喹啉基磺?；?-4-乙基高哌嗪(224)1-(5-異喹啉基磺?；?-4-丙基高哌嗪(225)1-(5-異喹啉基磺?；?-4-丁基高哌嗪(226)1-(5-異喹啉基磺?；?-4-己基高哌嗪(227)N-(2-氨基乙基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(228)N-(4-氨基乙基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(229)N-(2-氨基-1-甲基乙基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(230)N-(2-氨基-1-甲基戊基)-1-氯-5-異喹啉(231)N-(3-氨基-2-甲基丙基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(232)N-(3-二正丁基氨基丙基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(233)N-(N-環(huán)己基-N-甲基氨基乙基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(234)N-(2-胍基乙基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(235)N-(2-胍基丁基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(236)N-(2-胍基-1-甲基乙基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(237)N-(2-胍基甲基戊基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(238)N-(2-胍基-3-甲基丁基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(239)N-(3-胍基-2-甲基丙基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(240)N-(4-胍基-3-甲基丁基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺
(241)2-甲基-4-(1-氯-5-異喹啉磺酰基)哌嗪(242)2-乙基-4-(1-氯-5-異喹啉磺?；?哌嗪(243)2-異丙基-4-(1-氯-5-異喹啉磺?；?哌嗪(244)2,5-二甲基-4-(1-氯-5-異喹啉磺酰基)哌嗪(245)1-甲基-4-(1-氯-5-異喹啉磺?；?哌嗪(246)1-脒基-4-(1-氯-5-異喹啉磺酰基)哌嗪(247)1-脒基-4-(1-氯-5-異喹啉磺?；?高哌嗪(248)1-脒基-3-甲基-4-(1-氯-5-異喹啉磺?；?哌嗪(249)1-脒基-2,5-二甲基-4-(1-氯-5-異喹啉磺酰基)哌嗪(250)N-(2-氨基乙基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(251)N-(4-氨基丁基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(252)N-(2-氨基-1-甲基乙基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(253)N-(2-氨基-1-甲基庚基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(254)N-(3-氨基-2-甲基丁基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(255)N-[3-(N,N-二丁基氨基)丙基]-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(256)N-[2-(N-環(huán)己基-N-甲基氨基)乙基]-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(257)N-(2-胍基乙基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(258)N-(4-胍基丁基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(259)N-(2-胍基-1-甲基乙基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(260)N-(1-胍基甲基戊基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(261)N-(2-胍基-3-甲基丁基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(262)N-(3-胍基-2-甲基丙基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(263)N-(4-胍基-3-甲基丁基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(264)2-甲基-4-(1-羥基-5-異喹啉基磺?；?哌嗪(265)2-乙基-4-(1-羥基-5-異喹啉基磺酰基)哌嗪(266)2-異丁基-4-(1-羥基-5-異喹啉基磺?；?哌嗪(267)2,5二甲基-4-(1羥基-5-異喹啉基磺?；?哌嗪(268)1-甲基-4-(1-羥基-5-異喹啉基磺酰基)哌嗪(269)1-脒基-4-(1-羥基-5-異喹啉基磺?；?哌嗪(270)1-脒基-4-(1-羥基-5-異喹啉基磺?；?高哌嗪
(271)1-脒基-3-甲基-4-(1-羥基-5-異喹啉基磺?；?哌嗪(272)1-脒基-2,5-二甲基-4-(1-羥基-5-異喹啉基磺?；?哌嗪(273)N-(2-甲基氨基乙基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(274)N-(2-乙基氨基乙基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(275)N-(2-丙基氨基乙基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(276)N-(2-丁基氨基乙基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(277)N-(2-已基氨基乙基)-1-氯-5-異喹啉磺酰胺(278)1-(1-氯-5-異喹啉基磺?；?哌嗪(279)1-(1-氯-5-異喹啉基磺?；?高哌嗪(280)N-(2-甲基氨基乙基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(281)N-(2-乙基氨基乙基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(282)N-(2-丙基氨基乙基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(283)N-(2-丁基氨基乙基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(284)N-(2-己基氨基乙基)-1-羥基-5-異喹啉磺酰胺(285)1-(1-羥基-5-異喹啉基磺?；?哌嗪(286)1-(1-羥基-5-異喹啉基磺酰基)高哌嗪(287)1-(5-異喹啉基磺?；?-4-甲基哌嗪(288)1-(5-異喹啉基磺酰基)-4-正己基哌嗪(289)1-(5-異喹啉基磺?；?-4-肉桂基哌嗪(290)1-(5-異喹啉基磺?；?哌嗪(291)N-(2-氨基乙基)-5-異喹啉磺酰胺(292)N-(4-氨基丁基)-5-異喹啉磺酰胺(293)N-(3-二正丁基氨基丙基)-5-異喹啉磺酰胺(294)1-(5-異喹啉基磺酰基)-3-甲基哌嗪(295)1-(5-異喹啉基磺?；?-3-異丁基哌嗪(296)1-(5-異喹啉基磺?；?-2,5-二甲基哌嗪(297)N-(3-胍基-2-苯丙基)-5-異喹啉磺酰胺(298)N-(6-胍基-1-甲基庚基)-5-異喹啉磺酰胺(299)2-[2-(5-異喹啉磺酰胺)乙基氨基]-2-咪唑啉(300)2-脒基-1-(5-異喹啉基磺?；?哌嗪(301)4-脒基-2,5-二甲基-(5-異喹啉基磺?；?哌嗪(302)4-脒基-1-(5-異喹啉基磺?；?高哌嗪
(303)4-(N1,N2-二甲基脒基)-1-(5-異喹啉基磺酰基)哌嗪(304)4-脒基-3-丁基-1-(5-異喹啉基磺?；?哌嗪(305)4-己基-1-(5-異喹啉基磺?；?亞乙基二胺(306)N-(4-胍基丁基)-5-異喹啉磺酰胺(307)N-(2-胍基丁基)-5-異喹啉磺酰胺(308)1-(5-異喹啉基磺?；?-2-甲基哌嗪。
優(yōu)選化合物為(204)和(308)。
本發(fā)明的用作Rho激酶抑制劑的化合物可以是酸加成鹽的形式。例如，該酸可以是無機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸等，以及有機(jī)酸如甲磺酸、富馬酸、馬來酸、扁桃酸、枸櫞酸、酒石酸、水楊酸等。帶有羧基的化合物可用金屬轉(zhuǎn)變?yōu)辂}，這些金屬如鈉、鉀、鈣、鎂、鋁等，或與氨基酸如賴氨酸等形成鹽。此外，它們的一水合物、二水合物、1/2水合物、1/3水合物、1/4水合物、2/3水合物、3/2水合物等也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
按照日本未審專利No.62-89679、日本未審專利No.3-218356、日本未審查專利No.5-194401、日本未審專利No.6-41080、WO95/28387等公開的方法可合成式(Ⅰ)化合物。
按照日本未審專利No.57-156463、日本未審專利No.57-200366、日本未審專利No.58-121278、日本101279未審專利No.58-121279、日本未審專利No.59-93054、日本未審專利No.60-81168、日本未審專利No.61-152658、日本未審專利No.61-227581、日本未審專利No.62-103066、USP-4678783等公開的方法可制備式(Ⅱ)的化合物。
式(Ⅰ)化合物中，其中Ra是式(c)基團(tuán)而Rc是Rc′的化合物，即式(Ⅲ)的酰胺化合物，
(Ⅲ)其中Rc′是除吡啶外的上述Rc中的選擇性取代的含氮雜環(huán)，而其它符號定義如上，該化合物為新化合物，可通過如下方法合成。
方法1式(Ⅳ)化合物Rc′-NH-Rb(Ⅳ)其中各符號定義如上，與式(Ⅴ)化合物
(Ⅴ)其中各符號定義如上，或其反應(yīng)性衍生物反應(yīng)得到此化合物。羧酸化合物的反應(yīng)性衍生物如酰鹵、酯、酸酐、混合酸酐等。
通過在對本反應(yīng)呈惰性的溶劑中攪拌進(jìn)行該反應(yīng)是有利的，這些溶劑如四氫呋喃、二噁烷、氯仿、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、苯、甲苯、乙醇等。通過本領(lǐng)域已知方法，例如共沸蒸餾、形成復(fù)合物、轉(zhuǎn)變?yōu)辂}等，將反應(yīng)過程中釋放的水、醇或酸由反應(yīng)混和物中除去。
方法2式(Ⅲ)的化合物中，L帶有氫以外的取代基的化合物可通過L為氫的化合物與式(Ⅵ)化合物反應(yīng)制備。
L1-M (Ⅵ)其中L1上述L基團(tuán)中的氫原子外的取代基而M是反應(yīng)原子，反應(yīng)按照本領(lǐng)域已知的N-烷基化或N-?；磻?yīng)進(jìn)行。
方法3式(Ⅲ)的化合物中，L是烷基或帶有式(ⅰ)取代基的化合物，可通過L是氫原子的化合物和式(Ⅶ)的化合物進(jìn)行還原氨基化制備，L2=C=O(Ⅶ)其中L2是可通過還原氨基化反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)橥榛幕鶊F(tuán)或式(Ⅰ)的基團(tuán)。
方法4式(Ⅲ)的化合物中，L是式(l)基團(tuán)的化合物，
(l)其中Q1定義如上而W1是W取代基中的羥基-1,3-亞丙基，可通過其中L是氫原子的式(Ⅲ)化合物與式(Ⅷ)化合物反應(yīng)制備，
(Ⅷ)其中Q1定義如上。
此反應(yīng)在適當(dāng)溶劑中進(jìn)行是有利的，該溶劑應(yīng)不影響反應(yīng)，例如醇(如甲醇、乙醇、2-丙醇等)、脂族或脂環(huán)族酮(如2-丙酮、2-丁酮、環(huán)己烷等)等。加入堿如堿金屬碳酸鹽、碳酸氫鹽等可加速該反應(yīng)。該反應(yīng)溫度較高，優(yōu)選該反應(yīng)混和物的回流溫度。
方法5式(Ⅲ)的化合物中，其中L是氫原子的化合物可由式(Ⅲ-a)的化合物制備，
(Ⅲ-a)其中B1是上述取代基B中的烷氧基或芳烷氧基，而其它符號定義如上。
化合物(Ⅲ-a)中，B1是烷氧基的化合物在不影響反應(yīng)的適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中攪拌，例如醇(如甲醇、乙醇、2-丙醇等)及醚(如四氫呋喃等)，該反應(yīng)中存在適當(dāng)?shù)膲A，如堿金屬或堿土金屬氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽(如氫氧化鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉等)，在必要時進(jìn)行加熱以得到L為氫原子的式(Ⅲ)。
在化合物(Ⅲ-a)中，B1是芳烷氧基的化合物在不影響反應(yīng)的適當(dāng)溶劑中，在適當(dāng)?shù)拇呋瘎┤玮Z碳等的存在下，用氫氣、肼、甲酸、甲酸銨等氫來源，在室溫或需要時的壓力下進(jìn)行還原分解反應(yīng)。
此外，化合物(Ⅲ-a)在5-35％，優(yōu)選15-30％乙酸中在溴化氫的存在下攪拌，此化合物可轉(zhuǎn)化。式(Ⅲ-b)的化合物進(jìn)行催化氫解反應(yīng)，
(Ⅲ-b)其中Y1是上述取代基Y中的亞甲基，而其它符號定義如上。該反應(yīng)在不影響反應(yīng)的適當(dāng)溶劑中、在適當(dāng)催化劑如鈀碳等的存在下、在氫氣中得到L為氫的式(Ⅲ)化合物。
可用本領(lǐng)域已知的如重結(jié)晶、色譜等方法從反應(yīng)混和物中分離并純化這樣得到的式(Ⅲ)化合物。
此外，式(Ⅲ)化合物通過常規(guī)方法可形成藥用鹽。用于形成鹽的酸可適當(dāng)?shù)剡x自無機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸等，有機(jī)酸如甲磺酸、富馬酸、馬來酸、扁桃酸、枸櫞酸、酒石酸、水楊酸等，氨基酸如賴氨酸等，以及金屬鈉、鉀、鈣、鎂、鋁等。通過與堿如氫氧化鈉、氫氧化鉀等按照已知方法反應(yīng)可將這些酸加成鹽轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的游離堿。此鹽還可轉(zhuǎn)化為季銨鹽。
式(Ⅲ)的化合物可存在旋光異構(gòu)體、其外消旋體或順反異構(gòu)體，所有這些包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。這些異構(gòu)體可通過常規(guī)方法分離或用不同的起始化合物制備。
當(dāng)本發(fā)明的Rho激酶抑制劑用作藥物制劑，特別是高血壓治療劑、心絞痛的治療劑、腦血管痙孿抑制劑、哮喘的治療劑、外周循環(huán)紊亂的治療劑、早產(chǎn)的預(yù)防劑、動脈硬化的治療劑、抗癌藥、抗炎藥、免疫抑制劑、自身免疫性疾病的治療劑、避孕藥、消化道感染的預(yù)防劑、抗AIDS藥、骨質(zhì)疏松的治療劑、視網(wǎng)膜病的治療劑或腦功能改善藥物時，可制備為一般藥物制劑。例如，本發(fā)明的Rho激酶抑制劑與藥用載體(如賦形劑、粘合劑、崩解劑、矯味藥、乳化劑、稀釋劑、助溶劑等)混合得到藥物組合物或藥物制劑，其形式為片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊、錠劑、糖漿、溶液劑、乳液、混懸劑、注射劑(如液體、懸液等)、栓劑、吸入劑、透皮吸收劑、滴眼劑、眼藥膏等，它們適于口服或非腸道給藥。
當(dāng)制備固體制劑時，可使用添加劑如蔗糖、乳糖、纖維素、D-甘露醇、麥芽糖醇、葡聚糖、淀粉、瓊脂、藻酸鹽、殼多糖、殼聚糖、果膠、黃蓍膠、阿拉伯膠、明膠、膠原、酪蛋白、白蛋白、磷酸鈣、山梨醇、甘氨酸、羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素、羥丙甲基纖維素、甘油、聚乙二醇、碳酸氫鈉、硬脂酸鎂、滑石等。如果需要片劑可進(jìn)行典型的包衣，得到糖包衣片劑、腸溶衣片劑、膜包衣片劑、雙層片劑和多層片劑。
當(dāng)制備半固體制劑時，可使用動物脂肪和植物油(例如橄欖油、玉米油、蓖麻油等)、礦物油(如凡士林、白凡士林、固體石蠟等)、蠟(西蒙得木油、巴西棕櫚蠟、蜂蠟等)、部分或全部合成甘油脂肪酸酯(如月桂酸、豆蔻酸、棕櫚酸等)等。其可商購產(chǎn)品的例子包括Witepsol(Dynamitnovel Ltd.制造)、Farmazol(NOF Corporation)等。
當(dāng)制備液體制劑時，使用添加劑如氯化鈉、葡萄糖、山梨醇、甘油、橄欖油、丙二醇、乙醇等。具體地講，當(dāng)制備注射劑時，使用滅菌水溶液如生理鹽水、等滲液體、油狀液體(如芝麻油和大豆油等)等。如果需要，通?？墒褂眠m當(dāng)?shù)闹鷳覄┤玺燃谆w維素鈉、非離子表面活性劑，穩(wěn)定劑(如苯甲酸芐基酯和芐醇)等。此外，當(dāng)制備滴眼劑時，使用含水液體或水溶液，特別是滅菌注射用水溶液。滴眼劑液體可適當(dāng)含有多種添加劑如緩沖劑(優(yōu)選刺激小的硼酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、碳酸鹽緩沖劑等)、等滲劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、增稠劑、螯合劑、pH調(diào)節(jié)劑(優(yōu)選pH一般為約6-8.5)和芳香劑。
這些制劑中的活性組分的含量為制劑重量的0.1-100％，優(yōu)選1-50％。當(dāng)根據(jù)患者的病情、體重、年齡等進(jìn)行變化時，對成人來說，一般以單劑量或多劑量形式每天口服活性組分約1-500mg。
實施例本發(fā)明通過實施例、制劑實施例和藥學(xué)作用詳述如下，而本發(fā)明不限于此。
在下文中，參照實施例描述了本發(fā)明式(Ⅲ)新化合物的合成方法。
實施例1(a)將N-芐氧羰基異哌啶甲酰氯(5g)加入到4-氨基-1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(3g)和二亞丙基乙胺(2.16g)的乙腈(40ml)溶液中，并將此混和物室溫攪拌2小時。將此反應(yīng)混和物倒入冰水中并用氯仿萃取。將用水洗滌、干燥并減壓濃縮得到的殘余物通過硅膠柱色譜進(jìn)行純化得到6.3g N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-芐氧羰基-4-哌啶甲酰胺。PMR(CDCl3):1.67(9H,s),1.79(2H,m),1.95(2H,m),2.53(1H,m),2.89(2H,m),4.29(2H,m),5.15(2H,s),6.48(1H,d,J=4.4Hz),7.36(5H,m),7.59(1H,br),7.61(1H,d,J=4.4Hz),7.99(1H,d,J=5.4Hz),8.43(1H,d,J=5.4Hz)(b)將N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-芐氧羰基-4-哌啶甲酰胺(2g)溶解于甲醇(30ml)中并加入10％鈀碳?xì)溲趸?0.5g)進(jìn)行氫化(常壓)。反應(yīng)完畢后，濾出催化劑并減壓濃縮此濾液得到1.2g N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺。PMR(DMSO-d6):1.59(9H,s),1.83(2H,m),2.01(2H,m),2.89(2H,m),3.01(1H,m),3.32(2H,m),7.19(1H,d,J=4.4Hz),7.68(1H,d,J=4.4Hz),7.97(1H,d,J=5.4Hz),8.24(1H,d,J=5.4Hz),8.81(1H,br),10.45(1H,s)(c)將甲酸(10ml)加到N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺(1g)中并將此混和物室溫攪拌2小時。用1N氫氧化鈉水溶液中和此混和物并用氯仿萃取。將用水洗滌、干燥并然后減壓濃縮得到的結(jié)晶溶解于15％鹽酸-甲醇(5ml)中。通過將所得溶液濃縮得到的結(jié)晶在乙醇-乙酸乙酯中重結(jié)晶得到650mg N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺單鹽酸鹽一水合物，熔點為273℃(分解)。PMR(DMSO-d6):1.52(2H,m),1.69(2H,m),2.51(2H,m),2.70(1H,m),2.97(2H,m),3.32(1H,br),6.79(1H,d,J=3.4Hz),7.31(1H,d,J=3.4Hz),7.79(1H,d,J=5.4Hz),8.04(1H,d,J=5.4Hz),9.82(1H,s),11.54(1H,br)實施例2(a)將N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺(0.6g)、乙氧苯基溴(390mg)和碳酸鉀(290mg)在二甲基甲酰胺(10ml)中的溶液在80℃攪拌2小時。將此反應(yīng)混和物倒入冰水中并用氯仿萃取。將用水洗滌、干燥并減壓濃縮得到的殘余物通過硅膠柱色譜進(jìn)行純化得到550mg N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-(2-苯乙基)-4-哌啶甲酰胺。PMR(DMSO-d6):1.59(9H,s),1.66(2H,m),1.80(2H,m),1.98(2H,m),2.50(2H,m),2.56(1H,m),2.74(2H,m),3.01(2H,m),7.05(1H,d,J=4.4Hz),7.23(5H,m),7.68(1H,d,J=4.4Hz),7 97(1H,J=5.4Hz),8.23(1H,d,J=5.4Hz),10.03(1H,s)(b)將甲酸(5ml)加到N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-(2-苯乙基)-4-哌啶甲酰胺(550mg)中并將此混和物室溫攪拌2小時。用1N氫氧化鈉水溶液中和此混和物并用氯仿萃取。將用水洗滌、干燥并然后減壓濃縮得到的結(jié)晶溶解于15％鹽酸-甲醇(1ml)中。通過將所得溶液濃縮得到的結(jié)晶在乙醇-乙酸乙酯中重結(jié)晶得到250mg N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-(2-苯乙基)-4-哌啶甲酰胺二鹽酸鹽1/4水合物，熔點為272℃(分解)。PMR(DMSO-d6/TMS):2.00-2.19(4H,m),2.93-3.41(7H,m),3.63-3.68(2H,m),7.22-7.37(5H,m),7.50(1H,d,J=2.0Hz),7.56(1H,t,J=2.0Hz),8.25(1H,d,J=6.8Hz),8.33(1H,d,J=6.8Hz),10.86(1H,br),11.36(1H,s),12.77(1H,br)實施例3(a)將N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺(500mg)、芐基溴(370mg)和碳酸鉀(300mg)在二甲基甲酰胺(10ml)中的溶液在80℃攪拌4小時。將此反應(yīng)混和物倒入冰水中并用氯仿萃取。將用水洗滌、干燥并減壓濃縮得到的殘余物通過硅膠柱色譜進(jìn)行純化得到300mg N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-芐基-4-哌啶甲酰胺。PMR(CDCl3):1.65(9H,s),1.91(4H,m),2.04(2H,m),2.35(1H,m),2.97(2H,m),3.51(2H,s),6.44(1H,d,J=3.9Hz),7.30(5H,m),7.49(1H,br),7.57(1H,d,J=3.9Hz),7.99(1H,d,J=5.4Hz),8.41(1H,d,J=5.4Hz)(b)將甲酸(4ml)加到N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-芐基-4-哌啶甲酰胺(300mg)中并將此混和物室溫攪拌1小時。用1N氫氧化鈉水溶液中和此混和物并用氯仿萃取。將用水洗滌、干燥并然后減壓濃縮得到的結(jié)晶溶解于15％鹽酸-甲醇(1ml)中。通過將所得溶液濃縮得到的結(jié)晶在乙醇-乙酸乙酯中重結(jié)晶得到120mg N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-芐基-4-哌啶甲酰胺二鹽酸鹽一水合物，熔點為260℃(分解)。PMR(DMSO-d6/TMS):2.00-2.15(4H,m),2.92-2.98(2H,m),3.13-3.19(1H,m),3.36-3.43(2H,m),4.32(2H,s),7.55(1H,br),7.63(2H,m),8.20(1H,d,J=6.4Hz),8.31(1H,d,J=6.4Hz),10.76(1H,br),11.25(1H,br),12.69(1H,br)可用與上述實施例相同的方式制備下列化合物。
實施例4N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺二鹽酸鹽3/2水合物，熔點為277℃(分解)。
實施例5N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-1-氨基乙?；?4-哌啶甲酰胺二鹽酸鹽1/2水合物，熔點為264℃(分解)。
實施例6N-(1-甲氧基甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺一水合物，熔點為240-241℃。
實施例7N-(2,3-二氫-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺二鹽酸鹽3/2水合物，熔點為235℃(分解)。
實施例8N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-脒基-4-哌啶甲酰胺二鹽酸鹽5/4水合物，熔點為246℃(分解)。
實施例9N-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-(3-苯丙基)-4-哌啶甲酰胺二鹽酸鹽，熔點為276℃(分解)。
實施例10N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-1-(2-苯乙基)-4-哌啶甲酰胺二鹽酸鹽一水合物，熔點為259-261℃(分解)。
實施例11N-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)-1-(3-苯丙基)-4-哌啶甲酰胺二鹽酸鹽1/2水合物，熔點為240-244℃(分解)。
本發(fā)明藥物制劑的制備方法解釋如下。
制劑實施例1片劑本發(fā)明化合物 10.0mg乳糖 50.0mg玉米淀粉 20.0mg結(jié)晶纖維素 29.7mg聚乙烯吡咯烷酮K305.0mg滑石 5.0mg硬脂酸鎂 0.3mg120.0mg將本發(fā)明的化合物、乳糖、玉米淀粉和結(jié)晶纖維素混合，用聚乙烯吡咯烷酮K30糊溶液揉和并通過20目篩制粒。在50℃干燥2小時后，將此顆粒通過24目篩，并加入滑石和硬脂酸鎂。用φ7mm沖壓機(jī)制備每片重120mg的片劑。
制劑實施例2膠囊本發(fā)明化合物10.0mg乳糖70.0mg玉米淀粉35.0mg聚乙烯吡咯烷酮K30 2.0mg滑石2.7mg硬脂酸鎂0.3mg120.0mg將本發(fā)明的化合物、乳糖、玉米淀粉混合，用聚乙烯吡咯烷酮K30糊溶液揉和并通過20目篩制粒。在50℃干燥2小時后，將此顆粒通過24目篩，并加入滑石和硬脂酸鎂。將此混和物裝入硬膠囊(4號)得到重120mg的膠囊。
本發(fā)明藥物制劑的藥學(xué)作用通過實驗實施例解釋如下。
實驗實施例1:Rho激酶抑制作用(對牛胸主動脈Rho激酶的抑制)通過如下方法部分純化由牛胸主動脈制備Rho激酶。用9倍量的50mM Tris-羥甲基氨基甲烷(Tris)(pH=7.4)、1mM二硫蘇糖醇、1mMEGTA、1mM EDTA、100μM對脒基苯甲基磺酰氟、5μM E-64、5μM亮抑蛋白酶肽和5μM抑胃酶肽將動脈切碎并均漿化。將均漿離心(10000×g,30分鐘)得到上清液。在羥磷灰石上吸收此上清液。用0.2M磷酸緩沖液(pH=6.8)洗滌此柱。用0.4M磷酸緩沖液(pH=6.8)洗脫Rho激酶標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)物。將Rho激酶測試如下。
含50mM Tris、1mM EDTA、5mM氯化鎂、50μg/ml組蛋白、10μMGTPγS、100μg/ml Rho、2μM[32P]ATP、上述制備的Rho激酶(3μl)和被測化合物的反應(yīng)混和物在30℃反應(yīng)15分鐘。加入25％三氟甲酸(TCA)溶液(1ml)停止反應(yīng)并將此混和物在4℃放置30分鐘。然后，通過膜過濾器(HAWP型，Millipore)將此混和物過濾，并在液體閃爍計數(shù)器上檢測過濾器的放射活性。用下式計算被測化合物的抑制作用，該式基于與無被測化合物樣品(對照組)的放射活性的比較。結(jié)果見表1。
抑制率(％)=[(對照組的每分鐘計數(shù)-存在被測化合物組的每分鐘計數(shù))/對照組的每分鐘計數(shù)]×100表1
實驗實施例2:Rho激酶抑制作用(對人血小板Rho激酶(p160ROCK)的抑制)用Ishizaki等的方法(Ishizaki等，The EMBO J.,15(8),1885-1893,1996)分離人血小板p160ROCK。
激酶測試包括如下步驟。含50mM Hepes-NaOH(pH=7.4)、10mM氯化鎂、5mM MnCl2、2mM二硫蘇糖醇、0.02％Brij35、1μM[γ-32p]ATP、330μg/ml組蛋白、Ishizaki等的方法分離的p160ROCK(2μl)和被測化合物的反應(yīng)混和物在30℃孵育20分鐘。將此溶液與1/3量的4×Laemmli樣品緩沖液混和，煮沸5分鐘并加到SDS-PAGE上。將此膠用考馬斯亮藍(lán)染色并干燥。將組蛋白帶切除并測定放射活性。以與實驗實施例1相似的方法評價被測化合物，并計算50％抑制時需要的每個被測化合物濃度，即IC50(μM)。結(jié)果見表2。
表2
實驗實施例3:Rho激酶抑制作用(對p160ROCK和ROGKⅡ的抑制)用下列方法得到p160ROCK(IshizakiT等，The EMBO J.,15(8),1885-1893,1996)和ROCKⅡ(Nakagawa O等，F(xiàn)EBS Lett.392 189-193,1996)的標(biāo)準(zhǔn)酶產(chǎn)物。將COS細(xì)胞植于3.5cm碟上并培養(yǎng)過夜。用脂質(zhì)轉(zhuǎn)染胺試劑，將p160ROCK和ROCKⅡ的表達(dá)載體(pCAG-myc-p160ROCK和pCAG-myc-ROCKⅡ見Ishizaki T等，The EMBO J,,15(8),1885-1893,1996和Nakagawa O等，F(xiàn)EBS Lett.392 189-193,1996)轉(zhuǎn)染。孵育20小時后，用冰冷的PBS將此細(xì)胞洗滌一次，并用裂解緩沖液(20mM Tris-HCl(pH=7.5)、1mM EDTA、1mM EGTA、5mM氯化鎂、5mM NaF、10mMβ-甘油磷酸酯、5mM焦磷酸鈉、0.2mM苯甲基磺酰氟、2mM二硫蘇糖醇、0.2mM釩酸鈉、0.05％Triton X-100、0.1μM花萼海綿誘癌素)在冰上將此細(xì)胞裂解20分鐘。將此裂解物以10000×g離心10分鐘并回收上清液。向此上清液中加入9E10抗-myc-抗體(見Ishizaki T等，The EMBO J.,15(8),1885-1893,1996)并將此混和物搖動2小時。然后，加入G蛋白瓊脂糖凝膠并將此混和物再搖動2小時。以1000×g將此混懸液離心5分鐘并用裂解緩沖液將所得到的顆粒洗滌3次，用激酶緩沖液(50mM Hepes-NaOH(pH=7.4)、10mM氯化鎂、5mM MnCl2、2mM二硫蘇糖醇、0.02％Brij35)洗滌一次。將此顆粒懸浮于激酶緩沖液中得到標(biāo)準(zhǔn)酶產(chǎn)物。按照實驗實施例2所示方法進(jìn)行激酶實驗，其中用此實驗實施例獲得的標(biāo)準(zhǔn)酶產(chǎn)物代替人血小板Rho激酶(p160ROCK)。并計算50％抑制時需要的每個被測化合物濃度，即IC50(μM)。結(jié)果見表3。
表3
實驗實施例4舒張作用用戊巴比妥鈉麻醉雄性兔(體重1.9-3.0kg)并將其放血至死，此后分離出胸主動脈。制備約2mm寬的主動脈環(huán)樣本并懸于Magnus浴(40ml)中，加入2g Krebs-Henseleit溶液(37℃，氯化鈉117mM、氯化鉀4.7mM、氯化鈣2.5mM、硫酸鎂1.2mM、碳酸氫鈉24.8mM、磷酸二氫鉀1.2mM、葡萄糖11.0mM)。并將混和氣體(95％氧氣+5％二氧化碳)不斷通入Magnus浴中。用異構(gòu)轉(zhuǎn)導(dǎo)器(TB-611T,Nippon Koden)測定制備樣本的張力。用去氧腎上腺素(10-6M)引起制備樣本的收縮，收縮穩(wěn)定后，逐漸加入被測化合物，觀察到了舒張作用。此被測化合物的舒張作用以對去氧腎上腺素引起的收縮為100％計算50％舒張時需要的被測化合物濃度，即IC50(μM)。結(jié)果見表4。
實驗實施例5乙酰膽堿對從豚鼠中分離的氣管樣本的收縮作用通過腹膜內(nèi)注射戊巴比妥鈉(100mg/kg)將雄性Hartley豚鼠(體重260-390g)麻醉并放血至死，此后分離出氣管。打開氣管的前軟骨并將此帶切出3mm寬的條得到樣本。將此樣本懸于Magnus浴(40ml)中，加入1g Krebs-Henseleit溶液(37℃，氯化鈉117mM、氯化鉀4.7mM、氯化鈣2.5mM、硫酸鎂1.2mM、碳酸氫鈉24.8mM、磷酸二氫鉀1.2mM、葡萄糖11.0mM)。并將混和氣體(95％氧氣+5％二氧化碳)不斷通入Magnus浴中。用異構(gòu)轉(zhuǎn)導(dǎo)器(TB-611T,Nippon Koden)測定制備樣本的張力并記錄于記錄器(Ti-102,Tokai Irika)上。用乙酰膽堿(10-6M)引起此條的收縮，收縮穩(wěn)定后，逐漸加入被測化合物，觀察到了舒張作用。此被測化合物的舒張作用以對罌粟堿(10-4M)引起的最大反應(yīng)為100％計算50％舒張時需要的被測化合物濃度，即IC50(μM)。結(jié)果見表4。
表4
實驗實施例6外周血流的增加作用鏈脲霉素(STZ,65mg/kg)給雄性SD鼠(體重200-300g)靜脈注射制備糖尿病鼠。一個月后，用戊巴比妥鈉將STZ誘導(dǎo)的糖尿病鼠麻醉并用激光血液流動計(ALF21R,Advance)檢測后腿皮膚中的血流。通過頸動脈插管靜脈使用被測化合物，并觀察后腿皮膚血流的增加作用。被測化合物對血流的增加作用通過較給藥前血流增加的百分率表示。結(jié)果如表5。
表5
實驗實施例7:VLA(極遲抗原)整聯(lián)蛋白活化的抑制作為VLA整聯(lián)蛋白活化的指數(shù)，檢測佛波醇酯誘導(dǎo)的CEM細(xì)胞(人T細(xì)胞型建立細(xì)胞)對纖連蛋白的粘著，纖連蛋白是VLA整聯(lián)蛋白的配體。通過下列方法確定被測化合物對誘導(dǎo)粘著的抑制作用。
用含0.5％胎牛血清白蛋白(BSA)、10mmHEPES、2mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸鈉、60μg/ml硫酸卡那霉素和1.5mg/ml碳酸氫鈉的RPMI1640培養(yǎng)基(下文中將此培養(yǎng)基稱為培養(yǎng)溶液)洗滌CEM細(xì)胞并懸浮于此培養(yǎng)基中用于下面的實驗。向包被有人纖連蛋白的96孔板的每個孔中加入CEM細(xì)胞(5×104)并將此被測化合物溶解于該培養(yǎng)溶液中(最終濃度1-100μM)至100μl，并將此板在37℃放置1小時。然后，加入PMA(12-O-十四烷酰佛波醇-13乙酸酯，TPA；最終濃度為10ng/ml)和被測化合物至200μl，并將此板在37℃放置30分鐘。在37℃用培養(yǎng)溶液(200μl)將每個孔洗滌兩次，并檢測粘著在板上細(xì)胞的LDH(乳酸脫氫酶)活性。根據(jù)上述方法獲得的結(jié)果，被測化合物對誘導(dǎo)粘著作用的抑制作用通過下式計算。結(jié)果見表6。
粘著誘導(dǎo)的抑制率(％)=(a-b)/(a-c)×100a=加入PMA時的粘著細(xì)胞數(shù)b=加入被測化合物和PMA時的粘著細(xì)胞數(shù)c=不刺激時的粘著細(xì)胞數(shù)表6
實驗實施例8骨吸收的抑制(體外)用小鼠股骨按照下列方法測定骨吸收的體外抑制。
將3-6周齡雄性ICR的股骨無菌移出，用含10％熱滅活的胎牛血清、青霉素G鈣(100單位/ml)、硫酸卡那霉素(60μg)和0.15％碳酸氫鈉的F12培養(yǎng)基(下文中稱為培養(yǎng)溶液)洗滌骨髓腔。洗滌骨髓腔并除去附在骨上的軟組織后，培養(yǎng)此骨。將被測化合物一次溶解于二甲基亞砜(DMSO)中得到10mg/ml溶液，用培養(yǎng)溶液將其稀釋1000倍得到10μl/ml溶液。并將此被測化合物分別加到表7的濃度中，并用此培養(yǎng)溶液(1.2ml)，在5％二氧化碳和95％空氣中將此鼠股骨于24孔板中培養(yǎng)6天。培養(yǎng)完成后，回收此培養(yǎng)上清液，并用鄰甲酚酞通過螯合方法定量測定培養(yǎng)上清液中懸浮的鈣離子的量。以不加被測化合物的股骨作為對照用下式計算被測化合物的骨吸收抑制作用。
骨吸收抑制率(％)=(不加被測化合物時游離鈣的量-加入被測化合物時游離鈣的量)/(不加被測化合物時游離鈣的量-培養(yǎng)基中鈣的量)×100此實驗每組進(jìn)行4例。作為對照，單獨使用與加入被測化合物時相同量的DMSO。結(jié)果見表7。
實驗實施例9鼠同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的抑制將BALB/c小鼠的脾細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞而用絲裂霉素C處理的C57BL/6小鼠的脾細(xì)胞作為刺激細(xì)胞，通過將二者混合培養(yǎng)(等比例)進(jìn)行小鼠同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(下文中稱為小鼠同種異體MLR)。
通過下面的方法制備反應(yīng)細(xì)胞。由5-6周齡BALB/c小鼠中取出脾并用RPMI1640培養(yǎng)基(含硫酸卡那霉素(60μg/ml)、青霉素G鉀(100單位/ml)、N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸鹽(10mM)、0.1％碳酸氫鈉和L-谷氨酰胺(2mM))處理，該培養(yǎng)基中還加有熱滅活的5％胎牛血清(FBS)，得到脾細(xì)胞的單細(xì)胞懸液。溶血處理后，用含10-4M 2-巰基乙醇和10％FBS的RPMI1640培養(yǎng)基將此懸液調(diào)整至107細(xì)胞/ml，并用作反應(yīng)細(xì)胞懸液。
將上述方法制備的反應(yīng)細(xì)胞懸液(50μl)、刺激細(xì)胞懸液(50μl)和用含10％FBS的RPMI1640培養(yǎng)基制備的被測化合物樣品(100μl)加入96孔板中并在5％二氧化碳和95％空氣中在37℃培養(yǎng)4天。
用溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓(MTT)進(jìn)行顯色實驗以測定淋巴細(xì)胞變形反應(yīng)。
培養(yǎng)完成后，除去每孔中的上清液(100μl)，并向每孔中加入5mg/ml MTT溶液(20μl)，然后在37℃培養(yǎng)4小時。然后，加入含10％十二烷基硫酸鈉的0.01N鹽酸溶液(100μl)并將此混合物在37℃培養(yǎng)過夜。將所得紫色甲結(jié)晶溶解并用微量板吸收計檢測550nm的吸收值，將此值作為小鼠同種異體MLR淋巴細(xì)胞變形反應(yīng)的指數(shù)。用下式通過計算抑制率評價下式同種異體MLR的抑制。結(jié)果見表7。
抑制率(％)={1-[(加入被測化合物時的MLR吸收值-反應(yīng)細(xì)胞的吸收值)/(不加被測化合物時的MLR吸收值-反應(yīng)細(xì)胞的吸收值)]}×100
表7
實驗實施例10對SK-Mel-28黑素瘤細(xì)胞生長的抑制將人SK-Mel-28黑素瘤(104細(xì)胞)和被測化合物懸浮于含100μl10％FBS的RPMI1640培養(yǎng)基中，并在5％二氧化碳中在37℃在96孔板中孵育72小時。孵育后，向每個孔中加入10μl MTT(5mg/ml)并將此細(xì)胞在37℃在5％二氧化碳中孵育4小時。然后，向每個孔中加入10％十二烷基硫酸鈉和0.01N鹽酸溶液10μl。將此板放置過夜后，用微量板讀數(shù)計測定570nm的吸收值并用下式計算抑制百分率(％細(xì)胞毒性)。結(jié)果見表8。
用溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓(MTT)通過顯色實驗確定對人培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性(Carmichael等，Cancer Res.,47,936-942,1987；Mosman,J.Immunol.Methods,65,55-63,1983)。
將此被測化合物溶解于二甲基亞砜中并在使用前用RPMI1640培養(yǎng)基稀釋。二甲基亞砜的最終濃度不高于0.25％。
抑制率(％)=[1-加入被測化合物時的吸收值/不加被測化合物時的吸收值]×100
表8<
實驗實施例11血管生成的抑制用血管內(nèi)皮細(xì)胞中管腔形成的抑制作為指數(shù)評價血管生成的抑制。具體地說，將正常人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞(KURABO INDUSTRIES LTD.)懸浮于E-GMUV培養(yǎng)基中，其濃度為5.5×104細(xì)胞/ml，并將其中400μl加入基質(zhì)凝膠(matrigel)板(EHS肉瘤來源的重組基膜，Collaborative Biomedical Products)。然后，加入被測化合物(1mM溶液，4μl)并將此細(xì)胞在5％二氧化碳中在37℃孵育18小時。孵育完成后，在顯微鏡下計數(shù)每個預(yù)定區(qū)域中管腔數(shù)。因為管腔形成抑制時管腔數(shù)增加，故與對照組的管腔數(shù)比較評價被測化合物。結(jié)果見表9。
表9<
實驗實施例12血管平滑肌細(xì)胞生長的抑制按照Ross的移植方法(Ross,R.and Glomset,J.A.,N.Engl.J.Med.,295,369-420,1976)進(jìn)行鼠動脈分離和平滑肌細(xì)胞(SMC)的培養(yǎng)。用割頸總動脈的方法將雄性Wistar鼠(10周齡)處死并取出胸主動脈。除去外膜周圍的脂肪組織并剝下外膜，將此動脈切碎并在5％二氧化碳中在37℃培養(yǎng)于含10％胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)基中。幾天后，用胰蛋白酶處理分離長出的細(xì)胞，用磷酸緩沖鹽水(PBS)清洗并在80平方厘米燒瓶中用含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基孵育。將傳代培養(yǎng)物2的細(xì)胞懸浮于含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基，其濃度為5×104細(xì)胞/ml，并向96孔膠原包被板的每孔中加入該懸浮液100μl，將其在37℃在5％二氧化碳中孵育1天。用二甲基亞砜(DMSO)適當(dāng)稀釋被測化合物并將其加入96孔板中。培養(yǎng)基中DMSO的濃度調(diào)節(jié)為1％。48小時后，加入10μl MTT溶液(5mg/ml)，4小時后，加入10％十二烷基硫酸鈉-0.01N鹽酸(50μl)。通過免疫讀數(shù)器檢測第二天在570nm的吸收值。用下式計算抑制百分?jǐn)?shù)來表示被測化合物的SMC生長抑制作用。結(jié)果見表10。
抑制率(％)=[1-加入被測化合物時的吸收值/不加被測化合物時的吸收值]×100表10
實驗實施例13急性毒性分別給ddY小鼠腹膜內(nèi)注射化合物109·2HCl和化合物143·2HCl，并對小鼠監(jiān)控5天。結(jié)果，腹膜內(nèi)注射30mg/kg不引起死亡。
上述制劑實施例和藥學(xué)實驗表明式(Ⅰ)和式(Ⅱ)化合物具有強Rho激酶抑制作用。這些Rho激酶抑制劑具有血管舒張作用、氣管擴(kuò)張作用、外周血流增加作用、細(xì)胞粘著誘導(dǎo)抑制作用、腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移抑制作用、骨吸收抑制作用、小鼠同種異體MLR抑制活性、腫瘤細(xì)胞生長抑制作用及其它多種作用。因此，它們可用作藥物制劑，特別是高血壓的治療劑、心絞痛的治療劑、腦血管痙孿的抑制劑、哮喘的治療劑、外周循環(huán)紊亂的治療劑、早產(chǎn)的預(yù)防劑、動脈硬化的治療劑、抗癌藥、抗炎劑、免疫抑制劑、自身免疫性疾病的治療劑、抗AIDS藥、避孕藥、消化道感染的預(yù)防劑、骨質(zhì)疏松的治療劑、視網(wǎng)膜病的治療劑及改進(jìn)腦功能藥。
此外，因為本發(fā)明的Rho激酶抑制劑具有強Rho激酶抑制活性，故它們也可用作與Rho和Rho激酶有關(guān)的研究試劑及與其有關(guān)疾病的診斷試劑。
此申請基于日本專利申請No.212409/1996，將其內(nèi)容引為參考。
權(quán)利要求
1．含Rho激酶抑制劑的藥物制劑。
2．一種高血壓的治療劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
3．一種心絞痛的治療劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
4．一種腦血管痙孿的抑制劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
5．一種哮喘的治療劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
6．一種外周循環(huán)紊亂的治療劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
7．一種動脈硬化的治療劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
8．一種抗癌藥，其中含有Rho激酶抑制劑。
9．一種抗炎劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
10．一種免疫抑制劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
11．一種自身免疫疾病的治療劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
12．一種抗AIDS藥，其中含有Rho激酶抑制劑。
13．一種骨質(zhì)疏松治療劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
14．一種視網(wǎng)膜病治療劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
15．一種腦功能改善藥物，其中含有Rho激酶抑制劑。
16．一種早產(chǎn)預(yù)防劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
17．一種避孕藥，其中含有Rho激酶抑制劑。
18．一種消化道感染預(yù)防劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
19．一種藥物組合物，其中含有治療有效量的Rho激酶抑制劑和藥用添加劑。
20．一種試劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
21．一種診斷試劑，其中含有Rho激酶抑制劑。
22．一種Rho激酶抑制劑，其中含有式(Ⅰ)酰胺化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽，
(Ⅰ)其中Ra是下式基團(tuán)
(a)
(b)或
(c)在式(a)和(b)中，R是氫原子、烷基或環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、苯基或芳烷基，其環(huán)上可選擇性帶有取代基，或R是下式的基團(tuán)，
(d)其中R6是氫原子、烷基或式-NR8NR9，其中R8和R9可相同或不同并各表示氫原子、烷基、芳烷基或苯基，R7是氫原子、烷基、芳烷基、苯基、硝基或氰基，或R6和R7一起形成雜環(huán)基團(tuán)，在其環(huán)上選擇性含有氧原子、硫原子或選擇性取代的氮原子；R1是氫原子、烷基或環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、苯基或芳烷基，其環(huán)上可選擇性帶有取代基，或R和R1與相鄰的氮原子一起形成雜環(huán)基團(tuán)，在其環(huán)上選擇性含有氧原子、硫原子或選擇性取代的氮原子；R2是氫原子或烷基；R3和R4可相同或不同并各表示氫原子、烷基、芳烷基、鹵原子、硝基、氨基、烷基氨基、酰氨基、羥基、烷氧基、芳烷氧基、氰基、?；?、巰基、烷基硫基、芳烷基硫基、羧基、烷氧羰基、氨基甲酰基、烷基氨基甲酰基或疊氮基，且A是下式基團(tuán)
(e)其中R10和R11相同或不同并各表示氫原子、烷基、鹵代烷基、芳烷基、羥基烷基、羧基或烷氧羰基，或R10和R11結(jié)合在一起表示環(huán)烷基，而l、m和n各表示0或1-3的整數(shù)，在式(c)中，L是氫原子、烷基、氨基烷基、單或二烷基氨基烷基、四氫呋喃基、氨基甲?；榛⒈蕉啺被榛?、脒基或下式基團(tuán)
(f)
(g)
(h)或
(i)其中B是氫原子、烷基、烷氧基、芳烷基、芳烷氧基、氨基烷基、羥基烷基、烷酰氧基烷基、烷氧羰基烷基、α-氨基芐基、呋喃基、吡啶基、苯基、苯氨基、苯乙烯基或咪唑并吡啶基，Q1是氫原子、鹵原子、羥基、芳烷氧基或噻吩甲基，W是亞烷基，Q2是氫原子、鹵原子、羥基或芳烷氧基，X是亞烷基，Q3是氫原子、鹵原子、羥基、烷氧基、硝基、氨基、2,3-二氫呋喃基或5-甲基-3-氧-2,3,4,5-四氫噠嗪-6-基；而Y是單鍵、亞烷基或亞烯基，并且在式(c)中，虛線是單鍵或雙鍵，且R5是氫原子、羥基、烷氧基、烷氧羰基氧基、烷酰氧基或芳烷氧羰基氧基；Rb是氫原子、烷基、芳烷基、氨基烷基或單或二烷基氨基烷基；且Rc是選擇性取代的含氮雜環(huán)。
23．Rho激酶引起的高血壓的治療劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
24．Rho激酶引起的心絞痛的治療劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
25．Rho激酶引起的腦血管痙孿的抑制劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
26．Rho激酶引起的哮喘的治療劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
27．Rho激酶引起的外周循環(huán)紊亂的治療劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
28．一種動脈硬化的治療劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
29．一種抗癌藥，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
30．一種抗炎劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
31．一種免疫抑制劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
32．一種自身免疫疾病治療劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
33．一種抗AIDS藥，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
34．一種骨質(zhì)疏松治療劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
35．一種視網(wǎng)膜病治療劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
36．一種腦功能改善藥，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
37．一種早產(chǎn)預(yù)防劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
38．一種避孕藥，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
39．一種消化道感染預(yù)防劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
40．一種具有Rho激酶抑制活性的試劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
41．一種Rho激酶引起的疾病的診斷試劑，其中含有式(Ⅰ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
42．一種Rho激酶抑制劑，其中含有式(Ⅱ)的取代異喹啉磺酰胺衍生物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽，
(Ⅱ)其中R12是氫原子、氯或羥基，而當(dāng)R12是氫原子時，Alk是含2至6個碳原子的亞烷基，它選擇性帶有含1至10個碳原子的烷基，芳基或芳烷基取代基；R13是氫原子；R14是氫原子，或含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，芳基或芳烷基；R15是氫原子，含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，芳基或芳烷基，苯甲?；?，肉桂基、肉桂酰基、呋喃甲?；蛳率交鶊F(tuán)，
(j)其中R16是含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或下式基團(tuán)，
(k)其中R17和R18為氫原子或直接連接形成含2至4個碳原子的亞烷基；或者R13和R14直接連接形成含4個或小于4個碳原子的亞烷基，該基團(tuán)可選擇性被含1至10個碳原子的烷基、苯基或芐基取代，或R14和R15直接或通過氧原子結(jié)合并與相鄰的氮原子一起形成雜環(huán)，并且當(dāng)R12是氯原子或羥基時，Alk是含2至6個碳原子的亞烷基，它與碳原子連接的氫原子位置上選擇性地取代有含1至6個碳原子的烷基，R13和R14各為氫原子、含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或直接互相連接為亞乙基或1,3-亞丙基，其中與碳原子連接的氫原子位置是選擇性地取代有含1至6個碳原子的烷基；或者R15是氫原子、含1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或脒基。
43．Rho激酶引起的高血壓的治療劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
44．Rho激酶引起的心絞痛的治療劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
45．Rho激酶引起的腦血管痙孿的抑制劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
46．Rho激酶引起的哮喘的治療劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
47．外周循環(huán)紊亂的治療劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
48．動脈硬化的治療劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
49．一種抗癌藥，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
50．Rho激酶引起的一種抗炎劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
51．一種免疫抑制劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
52．一種自身免疫疾病治療劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
53．一種抗AIDS藥，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
54．一種骨質(zhì)疏松治療劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
55．一種視網(wǎng)膜病治療劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
56．一種腦功能紊亂改善藥，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
57．一種早產(chǎn)預(yù)防劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
58．一種避孕藥，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
59．一種消化道感染預(yù)防劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
60．一種具有Rho激酶抑制活性的試劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
61．一種Rho激酶引起的疾病的診斷試劑，其中含有式(Ⅱ)的化合物、其異構(gòu)體和/或藥用酸加成鹽。
62．式(Ⅲ)的化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽，
(Ⅲ)其中Rc’是選擇性取代的含氮雜環(huán)，它是除吡啶之外的Rc，而其它符號定義如上。
63．權(quán)利要求1至18中任意一項所述的藥物制劑，其中含有式(Ⅲ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽作為Rho激酶抑制劑。
64．權(quán)利要求19所述的藥物組合物，其中含有式(Ⅲ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽作為Rho激酶抑制劑。
65．權(quán)利要求20所述的試劑，其中含有式(Ⅲ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽作為Rho激酶抑制劑。
66．權(quán)利要求21所述的診斷試劑，其中含有式(Ⅲ)化合物、其異構(gòu)體和/或其藥用酸加成鹽作為Rho激酶抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了作為新藥物制劑的Rho激酶抑制劑,具體地講,這些藥物制劑是高血壓治療劑、心絞痛的治療劑、腦血管痙孿抑制劑、哮喘的治療劑、末梢循環(huán)紊亂的治療劑、早產(chǎn)的預(yù)防劑、動脈硬化的治療劑、抗癌藥、抗炎藥、免疫抑制劑、自身免疫性疾病的治療劑、抗AIDS藥、避孕藥、消化道感染的預(yù)防劑、骨質(zhì)疏松的治療劑、視網(wǎng)膜病的治療劑及腦功能改善藥物。此外,提供了作為試劑和診斷試劑的Rho激酶抑制劑。
文檔編號A61K45/00GK1233188SQ97198738
公開日1999年10月27日 申請日期1997年8月8日 優(yōu)先權(quán)日1996年8月12日
發(fā)明者上畑雅義, 小野孝, 佐藤裕行, 山上圭司, 川原利雄 申請人:吉富制藥株式會社