專利名稱：一種螺旋藻多糖滴眼液的制作方法
一種螺旋藻多糖滴眼液技術領域
本發(fā)明屬于滴眼液技術領域，具體涉及一種螺旋藻多糖滴眼液，即一種預防和治療細菌性角膜炎的滴眼液。
背景技術：
細菌是角膜炎的最常見病因，細菌性角膜炎是主要的致盲眼病之一，治療不當可以導致永久性視力下降，甚至失明。目前針對角膜炎的治療最有效的途徑就是局部應用抗生素。但是抗生素容易產生耐藥性，因此，尋找安全有效的具有抗菌活性的生物活性物質對于預防和治療眼細菌性角膜炎相關疾病是非常必要的，近年來開始受到各國學者的重視， 但是尚沒有相關的應用報導。發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種螺旋藻多糖滴眼液，以彌補現(xiàn)有細菌性角膜炎治療及預防藥物的缺乏。
本發(fā)明的滴眼液，為包含有效活性濃度的螺旋藻多糖的眼用緩沖液。
其中的螺旋藻多糖濃度優(yōu)選為100 μ g/ml ；
所述緩沖液為眼用滴眼液中常用溶液體系，例如人工淚液或氯化鈉滴眼液。
本發(fā)明所用到的螺旋藻多糖,是以鈍頂螺旋藻(Spirulina platensis)藻粉為原材料，提取制備而得。
本發(fā)明的螺旋藻多糖滴眼液應用于眼部角膜炎疾病的治療。
本發(fā)明首次將螺旋藻多糖制成滴眼液應用到防治眼細菌性角膜炎疾病。本發(fā)明的滴眼液制備方法簡單，便于實施，對于眼新生血管的防治效果顯著，具有廣闊的應用開發(fā)前旦-5^ O具體實施方式
螺旋藻是最古老的多 細胞原始海藻。據(jù)報導螺旋藻具有顯著的降血糖、降血壓、降血脂等功效。螺旋藻化學成分中僅占2-3%的螺旋藻多糖，具有廣泛而復雜的生物活性，在抗腫瘤及抗輻射上存在有藥用療效，是一種安全有效的生物活性物質。但目前螺旋藻僅用于保健品及食品當中，申請人長期研究發(fā)現(xiàn)螺旋藻多糖不但能夠有效的抑制細菌的生長， 還可以控制眼部新生血管的生成，從而促成了本發(fā)明。
本發(fā)明所用的螺旋藻多糖(Spriulina polysacchrides),又稱為藻多糖,從螺旋藻提取出的生理活性多糖，無毒；為無色的或淡黃色粉末。溶于水，不溶于醇和油脂。本發(fā)明所用的滴眼液可選用任一款醫(yī)藥食品領域應用的螺旋藻多糖商品化產品。
本發(fā)明將螺旋藻多糖溶于眼用緩沖液中完成產品的制備，其中眼用緩沖液可以為人工淚液，人工淚液就是模仿人體淚液的成分做出的一種替代品。它是一種眼藥水，可以起到滋潤眼睛的作用。本發(fā)明可選用任一款的人工淚液。
作為一個具體的實施，本發(fā)明所用到的螺旋藻多糖以鈍頂螺旋藻藻粉(山東富施特生物技術有限公司生產)為原材料，提取制備了螺旋藻多糖，然后用人工淚液稀釋成一種以生物活性物質為主要成分的眼用滴眼液，用于治療細菌性角膜炎。其中的螺旋藻多糖濃度可以根據(jù)病人的情況選擇，優(yōu)選為100yg/ml。
具體的制備方法如下
步驟一、螺旋藻多糖的制備以如下工藝制備本發(fā)明所需的螺旋藻多糖。
(I)取鈍頂螺旋藻干粉加95%乙醇，浸泡過夜；
(2)離心37°C烘干，按質量比I 12比例加雙蒸水；
(3)用 NaOH 調 pH 至 10. 0，80°C水浴 4 6h ；
(4)離心，將沉淀中加質量體積比為5%三氯乙酸沉淀，4°C過夜；
(5)離心，取上清液，再加質量體積比為5%三氯乙酸沉淀3h ；
(6)離心，取上清液，加5倍體積乙醇沉淀，4°C過夜；
(7)以純丙酮清洗沉淀2次，真空冷凍干燥；
(8)將上述沉淀物置于_20°C保存3日以上，以確保丙酮完全揮發(fā)；
(9)加入生理鹽水充分溶解沉淀，離心，去除未能溶解的物質；
(10)使用0.22 ym濾膜過濾除菌，得到了無菌的螺旋藻多糖溶液。
步驟二、將上述的螺旋藻多糖溶液使用人工淚液稀釋到螺旋藻多糖含量100 μ g/ ml,即得到本發(fā)明的螺旋藻多糖滴眼液。本發(fā)明所用的人工淚液為不加防腐劑的人工淚液如O. 1%透明質酸鈉和羥丙基甲基纖維素。
上述人工淚液可以用氯化鈉滴眼液來替代(如替若復方氯化鈉滴眼液)。
下面對于本發(fā)明制備的滴眼液的效果進行描述
首先建立兔細菌性角膜炎動物模型模型動物選用2. 5-3kg新西蘭大白兔，兔全身麻醉，鹽酸丙美卡因滴眼液點眼，用基質注射針頭在角膜中央進行基質注射5μ I濃度為 2X104CFU/ml的菌液(即100個菌)，造成兔角膜細菌性角膜炎感染。
對上述建立的兔細菌性·角膜炎動物模型，分為3組，每組12只動物，于角膜基質注射菌液8小時后，開始點眼給藥，分別給予本發(fā)明制備的螺旋藻多糖滴眼液、左氧氟沙星和生理鹽水。滴眼方案如下先是15min/次，連續(xù)滴眼5次，然后30min/次，連續(xù)滴眼14次， 于最后一次滴眼結束后的Ih觀察兔實驗眼并按如下評分標準給分，統(tǒng)計學分析。
病變評分標準見下表
裂隙燈評分標準
權利要求
1.一種滴眼液，其特征在于，所述的滴眼液為包含有效活性濃度的螺旋藻多糖的眼用緩沖液。
2.如權利要求1所述的滴眼液，其特征在于所述的螺旋藻多糖在滴眼液中的濃度為100 μ g/mlο
3.如權利要求1或2所述的滴眼液，其特征在于，所述的螺旋藻多糖的制備包括如下步驟(1)取鈍頂螺旋藻干粉加95%乙醇，浸泡過夜；(2)離心37°C烘干，按質量比1:12比例加雙蒸水；(3 )用 NaOH 調 pH 至 10. O，80 V 水浴 4 6h ；(4)離心，將沉淀中加質量體積比為5%三氯乙酸沉淀，4°C過夜；(5)離心，取上清液，再加質量體積比為5%三氯乙酸沉淀3h；(6)離心，取上清液，加5倍體積乙醇沉淀，4°C過夜；(7)以純丙酮清洗沉淀2次，真空冷凍干燥；(8)將上述沉淀物置于_20°C保存3日以上，以確保丙酮完全揮發(fā)；(9)加入生理鹽水充分溶解沉淀，離心，去除未能溶解的物質；(10)使用O.22 μ m濾膜過濾除菌，得到了無菌的螺旋藻多糖溶液。
4.如權利要求1所述的滴眼液，其特征在于所述的眼用緩沖液為人工淚液或氯化鈉滴眼液。
5.權利要求1所述的滴眼液應用于眼部角膜炎疾病的治療。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種螺旋藻多糖滴眼液，為包含有效活性濃度的螺旋藻多糖的眼用緩沖液。本發(fā)明首次將螺旋藻多糖制成滴眼液應用到防治眼細菌性角膜炎疾病。本發(fā)明的滴眼液制備方法簡單，便于實施，對于眼角膜炎的防治效果顯著，具有廣闊的應用開發(fā)前景。
文檔編號A61K31/715GK103040735SQ20121059454
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月31日 優(yōu)先權日2012年12月31日
發(fā)明者楊玲玲, 吳祥根, 王瑤, 周慶軍 申請人:山東省眼科研究所