專利名稱：胰高血糖素樣肽-1的類似物的制作方法
本申請是申請日為1999年12月7日、申請?zhí)枮?9814185.2、發(fā)明名稱為“胰高血糖素樣-1的類似物”的申請的分案申請。
本發(fā)明涉及胰高血糖素樣肽-1的肽類似物、其藥學(xué)上可接受的鹽、用這些類似物治療哺乳動(dòng)物的方法以及其包含所述類似物的有用的藥物組合物。
胰高血糖素樣肽-1(7-36)酰胺(GLP-1)(SEQ ID NO1)是通過胰高血糖素前體前高血糖素的組織特異性翻譯后加工在腸的L細(xì)胞中合成的(Varndell，J.M.等，《組織化學(xué)細(xì)胞化學(xué)雜志》，1985331080-6)、并在進(jìn)餐反應(yīng)中釋放到循環(huán)。GLP-1的血漿濃度從約15pmol/L空腹水平升至40pmol/L餐后峰值。已證實(shí)，對于升高血漿葡萄糖濃度，當(dāng)口服給予葡萄糖時(shí)，血漿胰島素的增加大概高于靜脈內(nèi)給藥的三倍(Kreymann，B.等，Lancet 19872，1300-4)。
這種胰島素釋放的飲食性增加，叫做腸促胰島素作用，主要是體液性的，現(xiàn)在人們認(rèn)為GLP-1是人的最有效的生理性腸促胰島素。除了促胰島素作用外，GLP-1還抑制胰高血糖素分泌、延遲胃排空(Wettergren A.等，《消化性疾病科學(xué)》199338665-73)并可提高外周葡萄糖的利用(D’Alessio，D.A.等，《臨床研究雜志》1994932293-6)。
1994年，根據(jù)觀察提出了GLP-1的治療效能，即GLP-1的皮下(s/c)單劑量可使非胰島素依賴性糖尿病(NIDDM)患者的餐后葡萄糖水平完全達(dá)到正常(Gutniak，M.K.等，《糖尿病治療》1994171039-44)。人們認(rèn)為這種作用是通過增加胰島素釋放和減少胰高血糖素分泌來進(jìn)行調(diào)節(jié)的。而且，已證實(shí)GLP-1的靜脈內(nèi)輸注可延遲NIDDM患的餐后胃排空(Williams，B.等，《臨床內(nèi)分泌代謝雜志》199681327-32)。與磺酰脲不同，GLP-1的促胰島素作用依賴于血漿葡萄糖濃度(Holz，G.G.4th，等，《自然》1993361362-5)。因此，低血漿葡萄糖濃度時(shí)的GLP-1調(diào)節(jié)的胰島素釋放的減少可防止重度低血糖。這種結(jié)合作用使GLP-1具有超出其它目前用于治療NIDDM的試劑的獨(dú)特的潛在治療優(yōu)勢。
許多研究表明，當(dāng)給健康人使用時(shí)，GLP-1可有效地影響糖血(glycemic)水平以及胰島素和胰高血糖素濃度(Orskov，C，《糖尿病學(xué)》(Diabetologia)35701-711，1992；Holst，J.J.等，“GLP-1在胰高血糖素III的糖尿病治療中的效能”，《實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)手冊》，LefevbrePJ，Ed.Berlin，Springer Verlag，1996，p.311-326)，這些作用是葡萄糖依賴性的(Kreymann，B.等，Lancet ii1300-1304，1987；Weir，G.C.等，《糖尿病》38338-342，1989)。而且，它對于糖尿病患者也是有效的(Gutniak，M.，N.《英國醫(yī)學(xué)雜志》2261316-1322，1992；Nathan，D.M.等，《糖尿病治療》15270-276，1992)，使II型糖尿病患者的血糖水平達(dá)到正常(Nauck，M.A.等，《糖尿病學(xué)》(Diagbetologia)36741-744，1993)，和改善I型糖尿病患者的糖血(glycemic)控制(Creutzfeldt，W.O.等，《糖尿病治療》19580-586，1996)，增加其用作治療劑的可能性。
但是，GLP-1在代謝上是不穩(wěn)定的，在體內(nèi)的血漿半衰期(t1/2)僅為1-2分鐘。外源性給藥的GLP-1也會(huì)快速降解(Deacon，C.F.等，《糖尿病》441126-1131，1995)。這種代謝不穩(wěn)定性限制了天然GLP-1的治療效能。因此，需要一種較天然GLP-1更有效或代謝上更穩(wěn)定的GLP-1類似物。
一方面，本發(fā)明涉及一種式(I)化合物， (R2R3)-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-A35-A36-A37-R1， (I) 其中 A7為L-His，Ura，Paa，Pta，D-His，Tyr，3-Pal，4-Pal，Hppa，Tma-His，Amp，或刪除，條件是當(dāng)A7為Ura，Paa，Pta或Hppa時(shí)，則刪除R2和R3； A8為Ala，D-Ala，Aib，Acc，N-Me-Ala，N-Me-D-Ala，Arg或N-Me-Gly； A9為Glu，N-Me-Glu，N-Me-Asp或Asp； A10為Gly，Acc，Ala，D-Ala，Phe或Aib； A11為Thr或Ser； A12為Phe，Acc，Aic，Aib，3-Pal，4-Pal，β-Nal，Cha，Trp或X1-Phe； A13為Thr或Ser； A14為Ser，Thr，Ala或Aib； A15為Asp，Ala，D-Asp或Glu； A16為Val，D-Val，Acc，Aib，Leu，Ile，Tle，Nle，Abu，Ala，D-Ala，Tba或Cha； A17為Ser，Ala，D-Ala，Aib，Acc或Thr； A18為Ser，Ala，D-Ala，Aib，Acc或Thr； A19為Tyr，D-Tyr，Cha，Phe，3-Pal，4-Pal，Acc，β-Nal，Amp或X1-Phe； A20為Leu，Ala，Acc，Aib，Nle，Ile，Cha，Tle，Val，Phe或X1-Phe； A21為Glu，Ala或Asp； A22為Gly，Acc，Ala，D-Ala，β-Ala或Aib； A23為Gln，Asp，Ala，D-Ala，Aib，Acc，Asn或Glu； A24為Ala，Aib，Val，Abu，Tle或Acc； A25為Ala，Aib，Val，Abu，Tle，Acc，Lys，Arg，hArg，Orn，N-CH((CH2)nNR10R11))(O)HN-CH((CH2)e-X3)-C(O)； A26為Lys，Ala，3-Pal，4-Pal，Arg，hArg，Orn，Amp，HN-CH((CH2)nNR10R11))-C(O)或HN-CH((CH2)e-X3)-C(O)； A27為Glu，Ala，D-Ala或Asp； A28為Phe，Ala，Pal，β-Nal，X1-Phe，Aic，Acc，Aib，Cha或Trp； A29為Ile，Acc，Aib，Leu，Nle，Cha，Tle，Val，Abu，Ala，Tba或Phe； A30為Ala，Aib，Acc或刪除； A31為Trp，Ala，β-Nal，3-Pal，4-Pal，Phe，Acc，Aib，Cha，Amp或刪除； A32為Leu，Ala，Acc，Aib，Nle，Ile，Cha，Tle，Phe，X1-Phe，Ala或刪除； A33為Val，Acc，Aib，Leu，Ile，Tle，Nle，Cha，Ala，Phe，Abu，X1-Phe，Tba，Gaba或刪除； A34為Lys，Arg，hArg，Orn，Amp，Gaba，HN-CH((CH2)n-NR10R11))-C(O)，HN-CH((CH2)e-X3)-C(O)或刪除； A35為Gly或刪除； A36為L-或D-Arg，D-或L-Lys，D-或L-hArg，D-或L-Orn，Amp，HN-CH((CH2)n-NR10R11))-C(O)，HN-CH((CH2)e-X3)-C(O)或刪除； A37為Gly或刪除； 每次出現(xiàn)的X1分別選自(C1-C6)烷基，OH和鹵素； R1為OH，NH2，(C1-C12)烷氧基，或NH-X2-CH2-Z0，其中X2為(C1-C12)烴部分，Z0為H，OH，CO2H或CONH2； X3為

或-C(O)-NHR12，其中每次出現(xiàn)的X4分別 為-C(O)-，-NHC(O)-或-CH2-，其中每次出現(xiàn)的f分別為1-29的整數(shù)； R2和R3各自分別選自H，(C1-C30)烷基，(C2-C30)鏈烯基，苯基(C1-C30)烷基，萘基(C1-C30)烷基，羥基(C1-C30)烷基，羥基(C2-C30)鏈烯基，羥苯基(C1-C30)烷基，和羥萘基(C1-C30)烷基；或R2和R3之一為C(O)X5，其中X5為(C1-C30)烷基，(C2-C30)鏈烯基，苯基(C1-C30)烷基，萘基(C1-C30)烷基，羥基(C1-C30)烷基，羥基(C2-C30)鏈烯基，羥苯基(C1-C30)烷基，羥萘基(C1-C30)烷基，


或
其中Y為H或OH，r為0-4，q為0-4； 每次出現(xiàn)的n分別是1-5的整數(shù)；和 每次出現(xiàn)的R10和R11分別是H，(C1-C30)烷基，(C1-C30)?；?，(C1-C30)烷基磺酰基，-C((NH(NH2))或

條件是當(dāng)R10為(C1-C30)酰基，(C1-C30)烷基磺?；?C((NH)(NH2))或
R11為H或(C1-C30)烷基；以及 R12為(C1-C30)烷基； 條件是 (i)至少一種式(I)化合物的氨基酸與hGLP-1(7-36，或-37)NH2(SEQ IDNOS1，2)或hGLP-1(7-36，或-37)OH(SEQ ID NOS3，4)的天然序列不同； (ii)式(I)化合物不是hGLP-1(7-36，或-37)NH2(SEQ ID NOS1，2)或hGLP-1(7-36，-37)OH(SEQ ID NOS3，4)的類似物，其中單個(gè)位置被Ala取代； (iii)式(I)化合物不是[Lys26(Nε-鏈烷醇基)]hGLP-1(7-36，或-37)-E(SEQ ID NOS5-8)，[Lys34(Nε-鏈烷醇基)]hGLP-1(7-36，或-37)-E(SEQID NOS9-12)，[Lys26，34-雙(Nε-鏈烷醇基)]hGLP-1(7-36，或-37)-E(SEQ IDNOS13-16)，[Arg26，Lys34(Nε-鏈烷醇基))hGLP-1(8-36，或-37)-E(SEQ IDNOS17-20)，或[Arg26，34，Lys36(Nε-鏈烷醇基))hGLP-1(7-36，-37)-E，其中E為-OH或-NH2(SEQ ID NOS21-24)； (iv)式(I)化合物不是Z1-hGLP-1(7-36，或-37)-OH，Z1-hGLP-1(7-36，或-37)-NH2，其中Z1選自 (a)[Arg26](SEQ ID NOS25-28)，[Arg34](SEQ ID NOS29-32)，[Arg26，34](SEQ ID NOS33-36)，[Lys36](SEQ ID NOS37-40)，[Arg26，Lys36](SEQID NOS41-44)，[Arg34，Lys36](SEQ ID NOS45-48)，[D-Lys36]，[Arg36](SEQ ID NOS3，4，1，2)，[D-Arg36]，[Arg26，34，Lys 36](SEQ ID NOS49-52)或[Arg26，36，Lys34)(SEQ ID NOS25-28)； (b)[Asp21](SEQ ID NOS53-56)； (c)[Aib8](SEQ ID NOS57-60)，[D-Ala8]和[Asp9](SEQ ID NOS61-64)中的至少一種；以及 (d)[Tyr7](SEQ ID NOS65-68)，(N-?；?His7)(SEQ ID NOS69-72)，[N-烷基-His7]，(N-?；?D-His7)(SEQ ID NOS73-76)或(N-烷基-D-His7)； (v)式(I)化合物不是(a)-(d)組所列出的取代物的任意兩種的組合；以及 (vi)式(I)化合物不是(N-Me-Ala8)hGLP-1(8-36或-37)(SEQ ID NOS77，78)，[Glu15]hGLP-1(7-36或-37)(SEQ ID NOS79，80)，[Asp21]hGLP-1(7-36或-37)(SEQ ID NOS53，54)或[Phe31]hGLP-1(7-36或-37)(SEQ ID NOS81，82)。
剛才前面所述式(I)化合物的優(yōu)選化合物為其中A11為Thr；A13為Thr；A14為Ser、Aib或Ala；A17為Ser、Ala、Aib或D-Ala；A18為Ser、Ala、Aib或D-Ala；A21為Glu或Ala；A23為Gln、Glu或Ala；A27為Glu或Ala的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
前面所述式(I)化合物的優(yōu)選化合物為其中A9為Glu，N-Me-Glu或N-Me-Asp；A12為Phe，Acc或Aic；A16為Val、D-Val、Acc、Aib、Ala、Tle或D-Ala；A19為Tyr、3-Pal、4-Pal或D-Tyr；A20為Leu，Acc、Cha、Ala或Tle；A24為Ala，Aib或Acc；A25為Ala，Aib，Acc，Lys，Arg，hArg，Orn，HN-CH((CH2)n-NHR10)-C(O)；A28為Phe或Ala；A29為Ile、Acc或Tle；A30為Ala、Aib或刪除；A31為Trp、Acc、3-Pal、4-Pal或刪除；A32為Leu、Acc、Cha、Ala或刪除；A33為Val、Acc、Ala、Gaba、Tle或刪除的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
前面所述式(I)化合物的優(yōu)選化合物為其中A8為Ala，D-Ala，Aib，A6c，A5c，N-Me-Ala，N-Me-D-Ala或N-Me-Gly；A10為Gly、Ala、D-Ala或Phe；A12為Phe，A6c或A5c；A16為Val、Ala、Tle、A6c、A5c或D-Val；A20為Leu，A6c，A5c、Cha、Ala或Tle；A22為Gly、Aib、β-Ala、L-Ala或D-ALa；A24為Ala或Aib；A29為Ile，A6c、A5c或Tle；A32為Leu，A6c，A5c、Cha、Ala或刪除；A33為Val、A6c、A5c、Ala、Gaba、Tle或刪除的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
前面所述式(I)化合物的優(yōu)選化合物為其中R1為OH或NH2的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
前面所述式(I)化合物的優(yōu)選化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽為其中R2為H，R3為(C1-C30)烷基、(C2-C30)鏈烯基、(C1-C30)酰基、

或
式(I)化合物的最優(yōu)選化合物為 [D-Ala8，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]-GLP-1(7-34)NH2；[D-Ala8，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2；[Ala18，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO83)；[Ala16，23 27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO84)；[Ala14，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO85)；[Ala22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO86)；[Hppa7]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO87)；[Ala15，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO88)；[Ala17，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO89)；[Ala22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO90)；[Ala15，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO91)；[Ala17，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO92)；[Ala18，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO93)；[Ala21，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO94)；[Ala22，23，26，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO95)；[Ala22，23，27，32，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO96)；[Ala22，23，26，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2 (SEQ ID NO97)；[Ala22，23，27，31，3-Pal19，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO98)；[Ala22，23，27，28，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO99)；[Ala22，23，27，29，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO100)；[Ala23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO101)；[Ala20，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQID NO102)；[Ala22，23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO103)；[Ala17，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO104)；[D-Ala10，Ala22，23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2；[D-Ala8，Ala17，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-34)-NH2；[Ala17，23，27，3-Pal19，26，31]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO105)；[D-Ala8，Ala17，3-Pal19，31]hGLP-1(7-34)-NH2；[Ala17，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ IDNO106)；[D-Ala8，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Tle29]hGLP-1(7-34)-NH2；[D-Ala8，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Tle16]hGLP-1(7-34)-NH2；[D-Ala8，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；[D-Ala22，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；[Aib8，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO107)；[D-Ala8，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-33)-NH2；[Aib8，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ IDNO108)；[Ala17，18，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO109)；[Ala17，23，27，3-Pal19，31，Tle33，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO110)；[Tle16，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO111)；[N-Me-D-Ala8，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-33)-NH2；[Aib8，Ala17，18，22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO112)；[Ala17，18，22，23，27，3-Pal19，31，Tle16，20，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO113)；[D-Ala8，Ala17，18，22，23，27，3-Pal19，31，Tle16，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；[D-Ala8，22，Ala17，18，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；[D-Ala8，18，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；[D-Ala8，17，Ala18，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；or[D-Ala8，Ala17，18，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；或其藥學(xué)上可接受的鹽。
式(I)化合物的另一最優(yōu)選的化合物為 [Aib8，A6c32]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO114)；[A6c20，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQID NO115)；[Aib8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO116)；[(Tma-His)7]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO117)；[A6c8]hGLP-1(8-36)-NH2(SEQ ID NO118)；[A6c8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO119)；[A6c16，20]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO120)；[A6c29，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO121)；[A6c20，Aib24]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO122)；[Aib24，A6c29，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO123)；[A6c16，29，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO124)；[Ura7]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ IDNO125)；[Paa7]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO126)；[Pta7]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO127)；[N-Me-Ala8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO128)；[N-Me-Ala8]hGLP-1(8-36)-NH2；(SEQ ID NO.)[N-Me-D-Ala8]hGLP-1(7-36)-NH2；[N-Me-D-Ala8]hGLP-1(8-36)-NH2；[N-Me-Gly8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO129)；[A5c8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO130)；[N-Me-Glu9]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ IDNO131)；[A5c8，A6c20，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO132)；[Aib8，A6c32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO133)；[Aib8，25]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO134)；[Aib8，24]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO135)；[Aib8，30]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ IDNO136)；[Aib8，Cha20]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO137)；[Aib8，Cha32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO138)；[Aib8，Glu23]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO139)；[Aib8，A6c20]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO140)；[Aib8，A6c20，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQID NO141)；[Aib8，22]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO142)；[Aib8，β-Ala22]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO143)；[Aib8，Lys25]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ IDNO144)；[Aib8，A6c12]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO145)；[Aib8，A6c29]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO146)；[Aib8，A6c33]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO147)；[Aib8，14]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO148)；[Aib8，18]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO149)；or[Aib8，17]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO150)；或其藥學(xué)上可接受的鹽。另一方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，它包括有效量的上述式(I)化合物、或藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
還有一方面，本發(fā)明提供了一種從需要的患者的GLP-1受體中引起興奮劑作用的方法，它包括給予上述患者有效量的上述式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
另一方面，本發(fā)明提供了一種對需要的患者治療其選自以下的疾病的方法，該疾病為I型糖尿病、II型糖尿病、肥胖、胰高血糖素瘤、導(dǎo)氣管分泌性疾病、代謝性疾病、關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、再狹窄、神經(jīng)變性疾病、腎臟衰竭、充血性心衰、腎病綜合征、肝硬化、肺水腫、高血壓和飲食攝入減少的疾病，這種方法包括給予上述患者有效量的上述式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。前面所述方法的優(yōu)選是所治療的疾病為I型糖尿病或II型糖尿病。
除了N-末端氨基酸外，本公開說明書中的所有氨基酸的縮寫(如Ala)代表-NH-CH(R)-CO-的結(jié)構(gòu)，其中R為氨基酸的側(cè)鏈(如，Ala的CH3)。對于N-末端氨基酸，縮寫代表(R2R3)-N-CH(R)-CO-的結(jié)構(gòu)，其中R為氨基酸的側(cè)鏈，R2和R3如上所述，除了當(dāng)A7為Ura、Paa、Pta或Hppa時(shí)，由于認(rèn)為Ura，Paa、Pta和Hppa是des-氨基酸，這種情況下R2和R3不存在。β-Nal、Nle、Cha、Amp、3-Pal、4-Pal和Aib分別是下列α氨基酸的縮寫β-(2-萘基)丙氨酸、正亮氨酸、環(huán)己基丙氨酸、4-氨基苯基丙氨酸、β-(3-吡啶基)丙氨酸、β-(4-吡啶基)丙氨酸和α-氨基異丁酸。其它氨基酸的定義為Ura為尿刊酸；Pta為(4-吡啶基硫代)乙酸；Paa為反-3-(3-吡啶基)丙烯酸；Tma-His為N，N-四甲基脒基組氨酸；N-Me-Ala為N-甲基-丙氨酸；N-Me-Gly為N-甲基-甘氨酸；N-Me-Glu為N-甲基-谷氨酸；Tle為叔-丁基甘氨酸；Abu為α-氨基丁酸；Tba為叔-丁基丙氨酸；Orn為鳥氨酸；Aib為α-氨基異丁酸；β-Ala為β-丙氨酸；Gaba為γ-氨基丁酸；Ava為5-氨基戊酸；Aic為2-氨基-1，2-二氫化茚-2-羧酸. Acc意指選自以下的氨基酸1-氨基-1-環(huán)丙烷羧酸(A3c)；1-氨基-1-環(huán)丁烷羧酸(A4c)；1-氨基-1-環(huán)戊烷羧酸(A5c)；1-氨基-1-環(huán)己烷羧酸(A6c)；1-氨基-1-環(huán)庚烷羧酸(A7c)；1-氨基-1-環(huán)辛烷羧酸(A8c)；和1-氨基-1-環(huán)壬烷羧酸(A9c)。在上式中，羥烷基、羥苯基烷基和羥萘基烷基可含有1-4個(gè)羥基取代基。COX5代表-C＝O·X5。C＝O·X5的例子包括，但不限于，乙?；捅交；?br> Lys(Nε-鏈烷醇基)意指下列結(jié)構(gòu)
Lys(Nε-烷基磺?；?意指下列結(jié)構(gòu)
Lys(Nε-(2-(4-烷基-1-哌嗪)-乙酰基))意指下列結(jié)構(gòu)
Asp(1-(4-烷基-哌嗪))意指下列結(jié)構(gòu)
Asp(1-烷基氨基)意指下列結(jié)構(gòu)
前面結(jié)構(gòu)中的變量n為1-30。
本文所用其它縮寫的全名如下Boc為叔丁氧基羰基，HF為氟化氫，F(xiàn)m為甲?；?，Xan為呫噸基，Bzl為芐基，Tos為甲苯磺?；?，DNP為2，4-二硝基苯基，DMF為二甲基甲酰胺，DCM為二氯甲烷，HBTU為2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基六氟磷酸脲(uronium)，DIEA為二異丙基乙胺，HOAc為乙酸，TFA為三氟乙酸，2CIZ為2-氯芐氧基羰基，OcHex為O-環(huán)己基。
本發(fā)明的肽在這也可表示為另一種形式，例如[A5c8]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO130)含有位于圓括號(hào)間的天然序列的取代氨基酸(如，hGLP-1中的Ala8的A5c8)?？s寫GLP-1意指胰高血糖素樣肽-1；hGLP-1意指人的胰高血糖素樣肽-1。圓括號(hào)之間的數(shù)是指肽中的氨基酸數(shù)(例如，hGLP-1(7-36)(SEQ ID NO3)是人GLP-1的肽序列的7-36氨基酸)。hGLP-1(7-37)(SEQ ID NO4)的序列列在Mojsov，S.，《國際肽蛋白質(zhì)研究雜志》(Int.J.Peptide Protein Res，.)40，1992，pp.333-342中。hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO1)中的NH2表示肽的C-端被酰胺化。hGLP-1(7-36)(SEQ ID NO2)表示C-端為游離酸。
本發(fā)明的肽可通過標(biāo)準(zhǔn)的固相肽合成法來制備，參見例如Stewart，J.M.等，《固相合成》(Pierce化學(xué)公司，第二版，1984)。上述通式的取代基R2和R3可通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法與N-末端氨基酸的游離胺相連。例如，烷基基團(tuán)，如(C1-C30)烷基，可通過還原烷基化作用連接。羥基烷基基團(tuán)，如(C1-C30)羥基烷基，也可通過還原烷基化作用連接，其中游離羥基被叔丁基酯保護(hù)。?；鶊F(tuán)，如COE1，可通過偶聯(lián)游離酸而連接，例如，E1COOH，通過在亞甲基氯化物中將完全樹脂與3摩爾當(dāng)量游離酸和二異丙基二亞胺碳混合1小時(shí)、而與N末端氨基酸的游離胺相連。如果游離酸包含游離羥基，例如對-羥苯基丙酸，則應(yīng)該用另外3摩爾當(dāng)量HOBT進(jìn)行偶聯(lián)。
當(dāng)R1為NH-X2-CH2-CONH2時(shí)(即，Z0＝CONH2)，用與MBHA樹脂偶聯(lián)的BocHN-X2-CH2-COOH開始肽合成。如果R1為NH-X2-CH2-COOH時(shí)，(即，Z0＝COOH)，用與PAM樹脂偶聯(lián)的Boc-HN-X2-CH2-COOH開始肽合成。
以下描述了制備本發(fā)明肽的合成方法，該方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是眾所周知的。其它方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說也是已知的。
將氯離子形式的二苯甲基胺-聚苯乙烯樹脂(Advanced ChemTech，Inc.，Louisville，KY)(0.9g，0.3mmole)置于計(jì)劃要進(jìn)行下列反應(yīng)循環(huán)的高級ChemTech肽合成器200型的反應(yīng)容器中(a)二氯甲烷；(b)二氯甲烷中的33％三氟乙酸(2次，每次1分鐘和15分鐘)；(c)二氯甲烷；(d)乙醇；(e)二氯甲烷；(f)二氯甲烷中的10％二異丙基乙基胺。
用Boc被護(hù)氨基酸和二氯甲烷中的二異丙基碳二亞胺(每一次3mmol)攪拌該中和樹脂1小時(shí)，這種被護(hù)氨基酸是將要合成的肽的C末端氨基酸，然后將所得到的氨基酸樹脂進(jìn)行上述洗滌步驟(a)至(f)的循環(huán)。然后通過同樣的方法將所需肽的其它氨基酸(3mmol)連續(xù)偶聯(lián)。用下列方法將最終肽從樹脂中裂解即將其與茴香醚(5ml)、二硫蘇糖醇(100mg)和無水氟化氫(35ml)在0℃混合并攪拌45分鐘。在干氮?dú)饬飨驴焖僬舭l(fā)過量的氟化氫，沉淀出游離肽并用乙醚洗滌。然后將粗制肽溶解在最小體積的稀釋乙酸中、在VYDAC十八烷基硅烷硅膠(10mM)柱(2.5×25cm)上洗脫、在0.1％三氟乙酸水溶液中用20-60％乙腈的線性梯度洗脫1小時(shí)以上。通過薄層層析和分析高效液相層析(1％/分鐘的40-70％B，溶液B為含0.1％TFA的80％乙腈/水)檢驗(yàn)各部分，混合得到最大純度產(chǎn)品、而不是產(chǎn)率。從水中重復(fù)冷凍干燥該溶液得到白色絨狀粉末產(chǎn)品。
通過HPLC分析肽產(chǎn)品。肽產(chǎn)品的酸水解液的氨基酸分析可證實(shí)肽的組分。將激光解吸MS用于測定肽的分子量。
按如下合成被護(hù)氨基酸1-[N-叔-丁氧基羰基-氨基]-1-環(huán)己烷羧酸(Boc-A6c-OH)將19.1g(0.133mol)的1-氨基-1-環(huán)己烷羧酸(AcrosOrganics，F(xiàn)isher Scientific，Pittsburgh，PA)溶解在200ml二烷和100ml水中。在其中加入67ml的2N NaOH。將該溶液在冰水浴中冷卻。在此溶液中加入32.0g(0.147mol)二-叔-丁基-碳酸氫鹽。在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌過夜。然后在減壓下去除二烷。在剩余的水溶液中加入200ml乙酸乙酯。在冰水浴中冷卻混合物。加入4N HCl將含水層的pH調(diào)至約3。分離有機(jī)層。用乙酸乙酯(1×100ml)提取含水層?；旌蟽捎袡C(jī)層并用水(2×150ml)洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥、過濾、并在減壓下濃縮至干。在乙酸乙酯/己烷中將殘余物重結(jié)晶。得到9.2g純產(chǎn)物。產(chǎn)率29％。
按與Boc-A6c-OH類似的方法合成Boc-A5c-OH。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可根據(jù)本文教導(dǎo)所指示的方法、按類似方式制備其它被護(hù)Acc氨基酸。
在本發(fā)明含A5c、A6c和/或Aib的肽的合成中，對于這些殘余物和緊隨其后的殘余物，偶聯(lián)時(shí)間為2小時(shí)。例如[Tma-His7]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ IDNO117)的合成，在最后的偶聯(lián)反應(yīng)中將4ml的DMF中的HBTU(2mmol)和DIEA(1.0ml)與肽--樹脂的N末端游離胺反應(yīng)，偶聯(lián)時(shí)間約2小時(shí)。
上述縮寫的全名如下Boc為叔丁氧基羰基，HF為氟化氫，F(xiàn)m為甲?；?，Xan為呫噸基，Bzl為芐基，Tos為甲苯磺?；?，DNP為2，4-二硝基苯基，DMF為二甲基甲酰胺，DCM為二氯甲烷，HBTU為2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基六氟磷酸脲(uronium)，DIEA為二異丙基乙胺，HOAc為乙酸，TFA為三氟乙酸，2CIZ為2-氯芐氧基羰基，2BrZ為2-溴芐氧基羰基，OcHex為O-環(huán)己基。
上述通式的取代基R2和R3可通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法與N-末端氨基酸的游離胺相連。例如，烷基基團(tuán)，如(C1-C30)烷基，可通過還原烷基化作用連接。羥基烷基基團(tuán)，如，(C1-C30)羥基烷基，也可通過還原烷基化作用連接，其中游離羥基被叔丁基酯保護(hù)。酰基基團(tuán)，如，COX1，可通過偶聯(lián)游離酸而連接，例如，X1COOH，通過在亞甲基氯化物中將完全樹脂與3摩爾當(dāng)量游離酸和二異丙基二亞胺碳混合1小時(shí)、而與N末端氨基酸的游離胺相連。如果游離酸包含游離羥基，例如對-羥苯基丙酸，則應(yīng)該用另外3摩爾當(dāng)量HOBT進(jìn)行偶聯(lián)。
根據(jù)下列方法可測定本發(fā)明化合物作為GLP-1結(jié)合化合物的活性。
細(xì)胞培養(yǎng) 將表達(dá)GLP-1受體的RIN 5F大鼠胰島瘤細(xì)胞(ATCC-#CRL-2058，美國模式培養(yǎng)物保藏所，Manassas，VA)在含10％胎牛血清的Dulbecco改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基(DMEM)中培養(yǎng)，并在約37℃保持在5％CO2/95％空氣的濕潤大氣中。
放射性配體結(jié)合 采用Brinkman Polytron(Westbury，NY)(設(shè)為6、15秒)、通過RIN細(xì)胞在20ml冰冷的50mM Tris-HCl中的均化制備用于放射性配體研究的膜。通過離心(39,000g/10分鐘)洗滌勻漿兩次，將最終的沉淀再懸浮在含2.5mM的MgCI2、0.1mg/ml桿菌肽(Sigma Chemical，St.Louis，MO)和0.1％BSA的50mM Tris-HCl中。為了測定，用含有或不含0.05ml未標(biāo)記競爭試驗(yàn)肽的0.05nM[125I]GLP-1(7-36)(SEQ ID NO151)(-2200 Ci/mmol，NewEngland Nuclear，Boston，MA)培養(yǎng)等份部分(0.4ml)。培養(yǎng)100分鐘(25℃)后，通過經(jīng)GF/C濾紙(Brandel，Gaithersburg，MD)的快速過濾后從游離部分(free)分離出結(jié)合[125I]GLP-1(7-36)(SEQ ID NO151)，該濾紙之前在0.5％聚乙烯亞胺中浸濕。然后用5ml等份冰冷50mM Tris-HCl洗滌濾紙三次，通過γ光譜測定法(Wallac LKB，Gaithersburg，MD)計(jì)算殘留在濾紙上的結(jié)合放射性。將特異性結(jié)合定義為總[125I]GLP-1(7-36)(SEQ IDNO151)結(jié)合減去1000nM GLP1(7-36)(SEQ ID NO3)中的結(jié)合(Bachem，Torrence，CA)。
本發(fā)明肽可以是藥學(xué)上可接受的鹽的形式。這些鹽例如包括，但不限于，與有機(jī)酸(例如，醋酸、乳酸、馬來酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、琥珀酸、苯甲酸、甲磺酸、甲苯磺酸、或撲酸)形成的鹽，與無機(jī)酸(例如，鹽酸、硫酸、或磷酸)形成的鹽，和與聚合酸(例如，鞣酸、羧甲基纖維素、聚乳酸、聚乙二醇酸、或聚乳酸一聚乙二醇酸的共聚物)形成的鹽。制備本發(fā)明肽的鹽的典型方法在本領(lǐng)域是公知的，它可通過標(biāo)準(zhǔn)的鹽交換法來完成。因此，可以將本發(fā)明肽的TFA鹽(采用制備HPLC、用含緩沖溶液的TFA洗脫對肽進(jìn)行純化而得到的TFA鹽)轉(zhuǎn)化成另一種鹽，例如通過將肽溶解在少量0.25N醋酸水溶液中得到的醋酸鹽。將所得到的溶液用于半制備柱(Zorbax，300 SB，C-8)。用下列溶液洗脫該柱(1)0.1 N醋酸銨水溶液洗脫0.5小時(shí)，(2)0.25N醋酸水溶液洗脫0.5小時(shí)，和(3)4ml/分鐘流速的線性梯度(20％-100％溶液B，30分鐘以上)(溶液A為0.25N醋酸水溶液；溶液B為80∶20的乙腈/水中的0.25N醋酸)。收集含肽的部分并冷凍至干。
如本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的，GLP-1的已知有效的用途是不同的且范圍很廣(參見，Todd，J.F.，等，《臨床科學(xué)》，1998，95，pp.325-329；和Todd，J.F.等，《歐洲臨床研究雜志》，1997，27，pp.533-536)。因此，為引起興奮劑作用而給予本發(fā)明化合物可以產(chǎn)生同樣效果，并可用作GLP-1。可以將GLP-1的這些不同用途總結(jié)如下，治療I型糖尿病、II型糖尿病、肥胖、胰高血糖素瘤、導(dǎo)氣管分泌性疾病、代謝性疾病、關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、再狹窄、神經(jīng)變性疾病。引起患者的拮抗劑作用的本發(fā)明的GLP-1類似物可用于治療下列疾病低血糖以及與胃切除術(shù)和小腸切除術(shù)有關(guān)的吸收障礙綜合征。
因此，本發(fā)明包括其范圍內(nèi)的藥物組合物，該組合物包括一種活性成分、至少一種式(I)化合物以及一種藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
本發(fā)明組合物中的活性成分的劑量可以不同；但是，活性成分的量必須能獲得適當(dāng)?shù)膭┬?。所選擇的劑量根據(jù)所需治療效果、給藥途徑和治療周期而改變。一般來說，本發(fā)明活性成分的有效量為1×10-7-200mg/kg/天，優(yōu)選1×10-4-100mg/kg/天，可以單劑量給藥或分成多劑量給藥。
本發(fā)明化合物可以經(jīng)口服、非腸道的(如，肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、或皮下注射、或植入)、鼻的、陰道的、直腸的、舌下的、或局部的給藥途徑進(jìn)行給藥，并可與藥學(xué)上可接受的載體進(jìn)行配制以提供適合于每一種給藥途徑的劑型。
口服的固體劑型包括膠囊、片劑、丸劑、粉劑和顆粒劑。在這些固體劑型中，將活性化合物與至少一種藥學(xué)上可接受的惰性載體混合，該載體例如蔗糖、乳糖、或淀粉。這些劑型作為正常使用也可包括除惰性稀釋劑外的其它物質(zhì)，例如，潤滑劑，如硬脂酸鎂。在膠囊、片劑和丸劑中，這些劑型也可包括緩沖劑。片劑和丸劑可另外用腸衣制備。
口服的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的、含本領(lǐng)域通常使用的惰性稀釋劑如水的乳劑、溶液、懸浮液、糖漿劑、酏劑。除了這些惰性稀釋劑外，組合物也可包括輔助劑，例如潤濕劑、乳化劑、懸浮劑、甜味劑、調(diào)味劑和香味劑。
本發(fā)明用于非腸道給藥的制劑包括無菌水溶液或非水溶液、懸浮液或乳劑。非水溶劑或賦形劑例如丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄欖油和玉米油、明膠、可注射的有機(jī)酯例如油酸乙酯。這些劑型也可包含諸如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑之類的輔助劑?？梢酝ㄟ^以下方法進(jìn)行滅菌，例如經(jīng)細(xì)菌存留過濾器過濾，在組合物中加入滅菌劑，照射組合物，或加熱組合物。也可將它們制成無菌固體組合物的形式，使用前立即將其溶解在無菌水、或一些其它可注射的無菌介質(zhì)中。
直腸或陰道給藥的組合物優(yōu)選栓劑，除了活性物質(zhì)外，它可包含賦形劑，例如可可脂或栓劑蠟。
也可用本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)賦形劑制備鼻或舌下給藥的組合物。
另外，本發(fā)明化合物可以以持續(xù)釋放組合物的形式給藥，例如在下列專利和專利申請中所述，美國專利No.5,672,659公開了含生物活性劑和聚酯的持續(xù)釋放組合物，美國專利No.5,595,760公開了含膠凝形式的生物活性劑的持續(xù)釋放組合物，1997年9月9日提交的美國專利申請No.08/929,363公開了含生物活性劑和殼聚糖的聚合持續(xù)釋放組合物，1996年11月1日提交的美國專利申請08/740,778公開了含生物活性劑和環(huán)糊精的持續(xù)釋放組合物，1998年1月29日提交的美國專利申請09/015,394公開了含生物活性劑的可吸收持續(xù)釋放組合物，1998年7月23日提交的美國專利申請No.09/121,653公開了一種在水包油過程中制備含諸如肽的治療劑的微顆粒的方法，1998年8月10日提交的美國專利申請No.09/131,472公開了含諸如肽和磷酸化聚合物的治療劑的復(fù)合體，1998年11月2日提交的美國專利申請No.09/184,413公開了含諸如肽和具有非可聚的內(nèi)酯的聚合物的治療劑的復(fù)合體。前面所述專利和申請的教導(dǎo)在此引作參考。
除非另有說明，本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語的含義與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同。還有，本文的所有出版物、專利申請、專利和其它參考資料在此引作參考。
下列實(shí)施例描述了制備本發(fā)明肽的合成方法，這些方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是眾所周知的。其它方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說也是公知的。這些實(shí)施例是為了舉例說明、而不是以任何方式限定本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1 [D-Ala8，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]-GLP-1(7-34)NH2 將氯離子形式的二苯甲基胺-聚苯乙烯樹脂(Advanced ChemTechInc.，Louisville，KY)置于計(jì)劃要進(jìn)行下列反應(yīng)循環(huán)的高級ChemTech肽合成器200型的反應(yīng)容器中(a)二氯甲烷；(b)二氯甲烷中的33％三氟乙酸(2次，每次1分鐘和15分鐘)；(c)二氯甲烷；(d)乙醇；(e)二氯甲烷；(f)二氯甲烷中的10％二異丙基乙基胺。
用Boc-Gaba和二氯甲烷中的二異丙基碳二亞胺(每一次3mmol)攪拌該中和樹脂1小時(shí)，然后將所得到的氨基酸樹脂進(jìn)行上述洗滌步驟(a)至(f)的循環(huán)。然后通過同樣的方法將下列氨基酸(3mmol)連續(xù)偶聯(lián)Boc-Val，Boc-Leu，Boc-3-Pal，Boc-Ala，Boc-Ile，Boc-Phe，Boc-Ala，Boc-Lys(2-Cl-Z)，Boc-Ala，Glu(Bzl)，Boc-Leu，Boc-3-Pal，Boc-Ser(Bzl)，Boc-Ala，Boc-Val，Boc-Asp(Bzl)，Boc-Ser(Bzl)，Boc-Thr(Bzl)，Boc-Phe，Boc-Thr(Bzl)，Boc-Gly，Boc-Glu(Bzl)，Boc-D-Ala，Boc-His(Bom)。
將具有完全肽序列的樹脂與茴香醚(5ml)、二硫蘇糖醇(100mg)和無水氟化氫(35ml)在0℃混合并攪拌45分鐘。在干氮?dú)饬飨驴焖僬舭l(fā)過量的氟化氫，沉淀出游離肽并用乙醚洗滌。然后將粗制肽溶解在最小體積的稀釋乙酸中、在VYDAG十八烷基硅烷硅膠(10mM)柱(2.5×25cm)上洗脫、并在0.1％三氟乙酸水溶液中用20-60％乙腈的線性梯度洗脫1小時(shí)以上。通過薄層層析和分析高效液相層析(1％/分鐘的40-70％B，r.t.14.1分鐘)檢驗(yàn)各部分，混合得到最大純度產(chǎn)品、而不是產(chǎn)率。從水中重復(fù)冷凍干燥該溶液得到白色絨狀粉末產(chǎn)品(49.9mg)。
通過HPLC和薄層色譜法證明該產(chǎn)品為均勻的。酸水解液的氨基酸分析可證實(shí)肽的組分。激光解吸MS得到分子量為2880(計(jì)算M+H2873)。
實(shí)施例2 肽低級烷基酰胺的合成 用實(shí)施例1所述的Boc氨基酸方案將肽組合在O-芐基-聚苯乙烯樹脂(通常叫做Merrifield樹脂)，除外用Fm(芴基甲基酯)基團(tuán)保護(hù)Asp和Glu氨基酸羧基側(cè)鏈。將完全肽--樹脂懸浮在適當(dāng)?shù)图壨榛?例如乙胺、丙胺、苯乙胺、1，2-乙二氨等)的稀釋DMF溶液中、并于約60℃攪拌(約18小時(shí))，接著過濾、在減壓下去除溶劑并用乙醚研制裂解的肽油得到固體的被護(hù)烷基胺肽。然后就其進(jìn)行HF裂解以去除另外的側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)、并按實(shí)施例1所述進(jìn)行HPLC純化。
實(shí)施例3-5 大體上根據(jù)實(shí)施例1所述的方法、使用適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)氨基酸可合成實(shí)施例3-5的化合物，得到所述的肽 實(shí)施例3[Aib8，D-Ala17，Ala18，22，23，27，3-Pal19，31，Tle16，Gaba34]-GLP-1(7-34)NH2 實(shí)施例4[Aib8，D-Ala17，Ala22，23，27，3-Pal19，31，Tle16]-GLP-1(7-33)NH2 實(shí)施例5[Aib8，D-Ala17，Ala22，23，27，3-Pal19，31，Tle16，20]-GLP-1(7-33)NH2。
實(shí)施例6-51 大體上根據(jù)實(shí)施例1所述的方法、但使用適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)氨基酸可制備實(shí)施例6-51的化合物，得到所述的肽。通過激光解吸MS得到MS(NA意指無法得到)。
實(shí)施例6[D-Ala8，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2；MS＝2971.0； 計(jì)算值MW＝2974.4； 實(shí)施例7[Ala18，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO83)； MS＝2954.4；計(jì)算值MW＝2958.4； 實(shí)施例8[Ala16，23，27，3-Pal19，31]hGLP-l(7-35)-NH2(SEQ ID NO84)； MS＝2943.0；計(jì)算值MW＝2946.3； 實(shí)施例9[Ala14，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO85)； MS＝2956.0；計(jì)算值MW＝2958.4； 實(shí)施例10[Ala22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO86)； MS＝2981.0；計(jì)算值MW＝2988.4； 實(shí)施例11[Hppa7]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO87)；MS＝NA 實(shí)施例12[Ala15，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO88)； MS＝2928.0；計(jì)算值MW＝2930.4； 實(shí)施例13[Ala17，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO89)； MS＝2955.0；計(jì)算值MW＝2958.4； 實(shí)施例14[Ala22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO90)； MS＝2896.0；計(jì)算值MW＝2888.3； 實(shí)施例15[Ala15，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO91)； MS＝2852.0；計(jì)算值MW＝2844.3； 實(shí)施例16[Ala17，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO92)； MS＝2880.0；計(jì)算值MW＝2872.3； 實(shí)施例17[Ala18，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO93)； MS＝2870.0；計(jì)算值MW＝2872.3； 實(shí)施例18[Ala21，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO94)； MS＝NA 實(shí)施例19[Ala22，23，26，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO95)； MS＝2832.0；計(jì)算值MW＝2831.2； 實(shí)施例20[Ala22，23，27，32，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO96)； MS＝2855.0；計(jì)算值MW＝2846.2； 實(shí)施例21[Ala22，23，26，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO97)； MS＝2729.0；計(jì)算值MW＝2732.0； 實(shí)施例22[Ala22，23，27，31，3-Pal19，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO98)； MS＝2711.6；計(jì)算值MW＝2712.0； 實(shí)施例23[Ala22，23，27，28，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO99)； MS＝2712.0；計(jì)算值MW＝2713.0； 實(shí)施例24[Ala22，23，27，29，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO100)； MS＝2746.9；計(jì)算值MW＝2747.1； 實(shí)施例25[Ala23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO101)； MS＝2777.0；計(jì)算值MW＝2775.1； 實(shí)施例26[Ala20，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO102)； MS＝2742.0；計(jì)算值MW＝2747.1； 實(shí)施例27[Ala22，23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO103)； MS＝2786.7；計(jì)算值MW＝2789.1； 實(shí)施例28[Ala17，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO104)； MS＝2771.0；計(jì)算值MW＝2773.1； 實(shí)施例29[D-Ala10，Ala22，23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2； MS＝2802.0；計(jì)算值MW＝2803.2； 實(shí)施例30[D-Ala8，Ala17，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-34)-NH2；MS＝2905.0；計(jì) 算值MW＝2901.3； 實(shí)施例31[Ala17，22，27，3-Pal19，26，31]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO105)； MS＝2920.0；計(jì)算值MW＝2921.3； 實(shí)施例32[D-Ala8，Ala17，3-Pal19，31]hGLP-1(7-34)-NH2；MS＝2908.0(Na+鹽)； 計(jì)算值MW＝2885.3； 實(shí)施例33[Ala17，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO106)； MS＝2907.0；計(jì)算值MW＝2901.3； 實(shí)施例34[D-Ala8，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Tle29]hGLP-1(7-34)-NH2；MS＝2906.0； 計(jì)算值MW＝2901.3； 實(shí)施例35[D-Ala8，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Tle16]hGLP-1(7-34)-NH2；MS＝2914.0； 計(jì)算值MW＝2915.4； 實(shí)施例36[D-Ala8，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2； MS＝2856.8；計(jì)算值MW＝2858.2； 實(shí)施例37[D-Ala22，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2； MS＝2871.0；計(jì)算值MW＝2872.3； 實(shí)施例38[D-Ala8，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ IDNO107)；MS＝2875.0；計(jì)算值MW＝2872.3； 實(shí)施例39[D-Ala8，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-33)-NH2；MS＝2786.0；計(jì)算值MW＝2787.2； 實(shí)施例40[Ala8，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO108)； MS＝2800.0；計(jì)算值MW＝2801.2； 實(shí)施例41[Ala17，18，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO109)； MS＝2842.5；計(jì)算值MW＝2842.2； 實(shí)施例42[Ala17，23，27，3-Pal19，31，Tle33，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ IDNO110)；MS＝2871.0；計(jì)算值MW＝2872.3； 實(shí)施例43[Tle16，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ IDNO111)；MS＝2870.0；計(jì)算值MW＝2872.3； 實(shí)施例44[N-Me-D-Ala8，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-33)-NH2； MS＝2795.0；計(jì)算值MW＝2801.2； 實(shí)施例 45[Aib8，Ala17，18，22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO112)； MS＝2784.2；計(jì)算值MW＝2785.2； 實(shí)施例46[Ala17，18，22，23，27，3-Pal19，31，Tle16，20，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ IDNO113)； MS＝2871.9；計(jì)算值MW＝2870.3； 實(shí)施例47[D-Ala8，Ala17，18，22，23，27，3-Pal19，31，Tle16，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2； MS＝2870.0；計(jì)算值MW＝2870.3； 實(shí)施例48[D-Ala8，22，Ala17，18，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2； MS＝2856.3；計(jì)算值MW＝2856.3； 實(shí)施例49[D-Ala8，18，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；MS＝NA； 實(shí)施例50[D-Ala8，17，Ala18，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；MS＝NA； 實(shí)施例51[D-Ala8，Ala17，18，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2； MS＝2861.6；計(jì)算值MW＝2856.3。
實(shí)施例52 [Aib8，A6c32]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO114) 在應(yīng)用生物系統(tǒng)(Foster City，CA)430A型肽合成器中合成標(biāo)題肽，將該合成器改進(jìn)以進(jìn)行加速的Boc-化學(xué)固相合成。參見Schnolzer，等，《國際肽蛋白質(zhì)研究雜志》40180(1992)。使用含0.91mmol/g取代物的4-甲基二苯甲胺(MBHA)樹脂(Peninsula，Belmont，CA)。使用具有下列保護(hù)側(cè)鏈的Boc氨基酸(Bachem，CA，Torrance，CA；Nova Biochem.，LaJolla，CA)Boc-Ala-OH，Boc-Arg(Tos)-OH，Boc-Asp(OcHex)-OH，Boc-Tyr(2BrZ)-OH，Boc-His(DNP)-OH，Boc-Val-OH，Boc-Leu-OH，Boc-Gly-OH，Boc-Gln-OH，Boc-Ile-OH，Boc-Lys(2CIZ)-OH，Boc-Thr(Bzl)-OH，Boc-A6c-OH，Ser(Bzl)-OH，Boc-Phe-OH，Boc-Aib-OH，Boc-Glu(OcHex)-OH和Boc-Trp(Fm)-OH。在0.20mmol規(guī)模內(nèi)進(jìn)行合成。用100％TFA處理2×1分鐘以去除Boc基團(tuán)。在4ml DMF中用HBTU(2.0mmol)和DIEA(1.0ml)使Boc氨基酸(2.5mmol)預(yù)激活，并在沒有前面所述的肽--樹脂TFA鹽的中和作用的情況下進(jìn)行偶聯(lián)。除了Boc-Aib-OH殘基和Boc-A6c-OH殘基、以及下列殘基Boc-Trp(Fm)-OH和Boc-His(DNP)-OH的偶聯(lián)時(shí)間為約2小時(shí)外，偶聯(lián)時(shí)間均為約5分鐘。
在肽鏈組合結(jié)束時(shí)，用DMF中的20％氫硫基乙醇/10％DIEA溶液處理樹脂2×30分鐘，以去除His側(cè)鏈上的DNP基團(tuán)。然后通過用100％TFA處理2×2分鐘去除N-末端Boc基團(tuán)。用DMF(1×1分鐘)中的10％DIEA中和肽--樹脂后，通過用15％乙醇胺/15％水/70％DMF溶液處理以去除側(cè)鏈上的甲?；鶊F(tuán)。用DMF和DCM洗滌部分脫保護(hù)肽--樹脂，并在減壓下干燥。在0℃、通過在含1ml茴香醚和二硫蘇糖醇(24mg)的10ml的HF中攪拌肽--樹脂75分鐘、以進(jìn)行最終裂解。通過氮流去除HF。用乙醚(6×10ml)洗滌殘余物、并用4N HOAc(6×10ml)提取。
在反相高效液相層析(HPLC)上用反相VYDACC18柱(Nest Group，Southborough，MA)純化水提物中的肽混合物。用線性梯度(20％-50％溶液B，105分鐘以上)以10ml/分鐘的流速(溶液A＝含0.1％TFA的水；溶液B＝含0.1％TFA的乙腈)洗脫該柱。收集各部分并在分析HPLC上檢測。混合含純產(chǎn)物的那些部分并冷凍至干。得到92mg白色固體。根據(jù)分析HPLC分析純度＞99％。電噴射質(zhì)譜學(xué)分析得到分子量為3324.2(計(jì)算分子量為3323.7)。
可以按實(shí)施例52所述的合成[Aib8，A6c32]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ IDNO114)的同樣方法合成本發(fā)明的其它化合物，但根據(jù)所需的肽使用適當(dāng)?shù)谋蛔o(hù)氨基酸。
可按如下合成[(Naα-HEPES-His)7]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ IDNO152){HEPES為(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪-乙烷磺酸)}組合MBHA樹脂(0.20mmol)上的肽長鏈后，用100％TFA處理肽--樹脂(2×2分鐘)并用DMF和DCM洗滌。然后用DMF中的10％DIEA中和該樹脂2分鐘。用DMF和DCM洗滌后，用DMF中的0.23mmol的2-氯-乙烷磺酰氯和0.7mmol的DIEA處理1小時(shí)。用DMF和DCM洗滌樹脂、并用1.2mmol的2-羥乙基哌嗪處理約2小時(shí)。在最終肽從樹脂的HF裂解之前，用DMF和DCM洗滌樹脂、并用不同試劑((1)DMF中的20％氫硫基乙醇/10％DIEA和(2)15％乙醇胺/15％水/70％DMF)處理以去除上述His側(cè)鏈上的DNP基團(tuán)和Trp側(cè)鏈上的甲酰基基團(tuán)。
除了用2-溴乙酸酐代替2-氯-1-乙烷磺酰氯外，可大體上按上述制備[(Naα-HEPES-His)7]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO152)的方法制備[(Naα-HEPA-His)7]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO153)([(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙?；?-His)7]hGLP-1(7-36)NH2。
實(shí)施例53-90和104 使用適當(dāng)?shù)谋蛔o(hù)氨基酸、大體上按實(shí)施例52所述的方法制備實(shí)施例53-90和104的化合物。
實(shí)施例53[A6c20，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO115)；MS＝3322.3；計(jì)算值MW＝3321.7； 實(shí)施例54[Aib8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO116)；MS＝3311.7；計(jì)算值MW＝3311.7； 實(shí)施例55[(Tma-His)7]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO117)；MS＝3395.9；計(jì)算值MW＝3396.9； 實(shí)施例56[A6c8]hGLP-1(8-36)-NH2(SEQ ID NO118)；MS＝3214.5；計(jì)算值MW＝3214.7； 實(shí)施例57[A6c8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO119)；MS＝3351.5；計(jì)算值MW＝3351.8； 實(shí)施例58[A6c16，20]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO120)；MS＝3335.9；計(jì)算值MW＝3335.8； 實(shí)施例59[A6c29，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO121)；MS＝3321.7；計(jì)算值MW＝3321.7； 實(shí)施例60[A6c20，Aib24]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO122)；MS＝3323.6；計(jì)算值MW＝3323.7； 實(shí)施例61[Aib24，A6c29，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO123)；MS＝3335.7；計(jì)算值MW＝3335.8； 實(shí)施例62[A6c16，29，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO124)；MS＝3347.7；計(jì)算值MW＝3347.8； 實(shí)施例63[Ura7]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO125)；MS＝3279.5；計(jì)算值MW＝3280.7； 實(shí)施例64[Paa7]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO126)；MS＝3290.9；計(jì)算值MW＝3291.8； 實(shí)施例65[Pta7]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO127)；MS＝3311.2；計(jì)算值MW＝3311.8； 實(shí)施例66[N-Me-Ala8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO128)；MS＝3311.4；計(jì)算值MW＝3311.7； 實(shí)施例67[N-Me-D-Ala8]hGLP-1(7-36)-NH2；MS＝3311.6；計(jì)算值MW＝3311.7； 實(shí)施例68[N-Me-D-Ala8]hGLP-1(8-36)-NH2；MS＝3174.0；計(jì)算值MW＝3174.6； 實(shí)施例69[N-Me-Gly8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO129)；MS＝3297.3；計(jì)算值MW＝3297.7； 實(shí)施例70[A5c8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO130)；MS＝3337.3；計(jì)算值MW＝3337.8； 實(shí)施例71[N-Me-Glu9]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO131)；MS＝3311.4；計(jì)算值MW＝3311.7； 實(shí)施例72[A5c8，A6c20，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO132)；MS＝3361.4；計(jì)算值MW＝3361.8； 實(shí)施例73[Aib8，A6c32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO133)；MS＝3323.2；計(jì)算值MW＝3323.7； 實(shí)施例74[Aib8，25]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO134)；MS＝3325.8；計(jì)算值MW＝3325.7； 實(shí)施例75[Aib8，24]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO135)；MS＝3325.8；計(jì)算值MW＝3325.7； 實(shí)施例76[Aib8，30]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO136)；MS＝3326.1；計(jì)算值MW＝3325.7； 實(shí)施例77[Aib8，Cha20]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO137)；MS＝3351.8；計(jì)算值MW＝3351.8； 實(shí)施例78[Aib8，Cha32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO138)；MS＝3352.0；計(jì)算值MW＝3351.8； 實(shí)施例79[Aib8，Glu23]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO139)；MS＝3311.7；計(jì)算值MW＝3312.7； 實(shí)施例80[Aib8，A6c20]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO140)；MS＝3323.6；計(jì)算值MW＝3323.7； 實(shí)施例81[Aib8，A6c20，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO141)；MS＝3335.3；計(jì)算值MW＝3335.7； 實(shí)施例82[Aib8，22]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO142)；MS＝3339.8；計(jì)算值MW＝3339.8； 實(shí)施例83[Aib8，β-Ala22]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO143)；MS＝3325.6；計(jì)算值MW＝3325.8； 實(shí)施例84[Aib8，Lys25]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO144)；MS＝3369.0；計(jì)算值MW＝3368.8； 實(shí)施例85[Aib8，A6c12]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO145)；MS＝3289.8；計(jì)算值MW＝3289.7； 實(shí)施例86[Aib8，A6c29]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO146)；MS＝3323.9；計(jì)算值MW＝3323.7； 實(shí)施例87[Aib8，A6c33]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO147)；MS＝3338.0；計(jì)算值MW＝3337.8； 實(shí)施例88[Aib8，14]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO148)；MS＝3309.8；計(jì)算值MW＝3309.7； 實(shí)施例89[Aib8，18]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO149)；MS＝3309.7；計(jì)算值MW＝3309.7； 實(shí)施例90[Aib8，17]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO150)；MS＝3309.4；計(jì)算值MW＝3309.7； 實(shí)施例104[Aib8，D-Arg26]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO149)；MS＝3310.7；計(jì)算值MW＝3311.73。
實(shí)施例91 [Aib8，A5c33]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO154) 使用適當(dāng)?shù)谋蛔o(hù)氨基酸、大體上按實(shí)施例52所述的方法制備標(biāo)題化合物。
實(shí)施例92 [Aib8，A6c32，Lys36(Nε-十四烷?；?]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO155) 除了使用了用于Lys36(Nε-十四烷?；?殘基的Fmoc-Lys(Boc)-OH外，所用的Boc氨基酸與[Aib8，A6c32]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO114)(實(shí)施例52)合成中的相同。在搖動(dòng)器中手工將第一氨基酸殘基與樹脂偶聯(lián)。將2.5mmol的Fmoc-Lys(Boc)-OH溶解在DMF中的4ml的0.5N HBTU中。在溶液中加入1ml的DIEA。搖動(dòng)混合物約2分鐘。然后在溶液中加入0.2mmol MBHA樹脂(取代物＝0.91mmol/g)。搖動(dòng)該混合物約1小時(shí)。用DMF洗滌該樹脂、并用100％TFA處理2×2分鐘以去除Boc保護(hù)基團(tuán)。用DMF洗滌樹脂。用4mlDMF中的HBTU(2.0mmol)和DIEA(1.0ml)使豆蔻酸(2.5mmol)預(yù)激活2分鐘、并與Fmoc-Lys-樹脂偶聯(lián)。偶聯(lián)時(shí)間約1小時(shí)。用DMF洗滌樹脂、并用DMF中的25％哌啶處理2×20分鐘、以去除Fmoc保護(hù)基團(tuán)。用DMF洗滌樹脂、并轉(zhuǎn)移至肽合成器的反應(yīng)容器中。肽合成和純化的余下步驟與[Aib8，A6c32]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO114)的合成相同。
含Lys(Nε-鏈烷醇基)殘基的本發(fā)明其它化合物的合成可以按照類似[Aib8，A6c32，Lys36(Nε-十四烷?；鵠hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO155)的合成方法進(jìn)行。Fmoc-Lys(Boc)-OH氨基酸用于肽的Lys(Nε-鏈烷醇基)殘基，而Boc-Lys(2CIZ)-OH氨基酸用于Lys殘基。如果Lys(Nε-(鏈烷醇基)殘基不在C末端，首先在肽合成器中應(yīng)將正好在Lys(Nε-鏈烷醇基)殘基之前的肽片段組合在樹脂上。
實(shí)施例93-98 使用適當(dāng)?shù)陌被?、大體上按照實(shí)施例92所述的方法制備實(shí)施例93-98化合物。
實(shí)施例93[Aib8，A6c32，Lys36(Nε-十四烷?；?]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ IDNO155)； 實(shí)施例94[Aib8，Arg26，34，A6c32，Lys36(Nε-十四烷?；?]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQID NO156)； 實(shí)施例95[Aib8，Arg26，A6c32，Lys34(Nε-十四烷?；?]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQID NO157)； 實(shí)施例96[Aib8，Lys26(Nε-十四烷酰基)，A6c32，Arg34]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQID NO158)； 實(shí)施例97[Aib8，Lys36(Nε-辛酰基)]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO159)； 實(shí)施例98[Aib8，A6c20，32，Lys36(Nε-辛酰基)]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ IDNO160)。
實(shí)施例99 [Aib8，Arg26，34，A6c32，Lys36(Nε-十四烷?；?]hGLP-1(7-36)-OH(SEQ ID NO161) 所用的Boc氨基酸與[Aib8，A6c32，Lys36(Nε-十四烷?；?]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO162)(實(shí)施例92)合成中的相同。用DMF(4ml)中的HBTU(2.0mmol)和DIEA(2.5ml)使Fmoc-Lys(Boc)-OH(2.5mmol)預(yù)激活約2分鐘。在搖動(dòng)器上手工將這種氨基酸與235mg的PAM樹脂(Chem-Impex，Wood Dale，IL；取代物＝0.85mmol/g)偶聯(lián)。偶聯(lián)時(shí)間約8小時(shí)。肽合成和純化的余下步驟與實(shí)施例52所述的相同。
含Lys(Nε-(鏈烷醇基)殘基的hGLP-1(7-36)-OH(SEQ ID NO3)和hGLP-1(7-37)-OH(SEQ ID NO4)的合成按照類似[Aib8，Arg26，34，A6c32，Lys36(Nε-十四烷?；鵠hGLP-1(7-36)OH(SEQ ID NO161)的合成方法進(jìn)行。Fmoc-Lys(Boc)-OH氨基酸用于肽的Lys(Nε-鏈烷醇基)殘基，而Boc-Lys(2CIZ)-OH氨基酸用于Lys殘基。
實(shí)施例100-103 使用適當(dāng)?shù)陌被?、大體上按照實(shí)施例99所述的方法制備實(shí)施例100-103化合物。
實(shí)施例100[Aib8，Arg26，A6c32，Lys34(Nε-十四烷?；?]hGLP-1(7-36)-OH(SEQID NO162)； 實(shí)施例101[Aib8，Lys26(Nε-十四烷?；?，A6c32，Arg34]hGLP-1(7-36)-OH(SEQID NO163)； 實(shí)施例102[Aib8，Arg26，34，A6c32，Lys36(Nε-十四烷酰基)]hGLP-1(7-37)-OH(SEQ ID NO164)； 實(shí)施例103[Aib8，Arg26，A6c32，Lys34(Nε-十四烷?；?]hGLP-1(7-37)-OH(SEQID NO165)。
權(quán)利要求
1.一種式(I)化合物，
(R2R3)-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-A35-A36-A37-R1，
(I)
其中
A7為L-His，Ura，Paa，Pta，D-His，Tyr，3-Pal，4-Pal，Hppa，Tma-His，Amp，或刪除，條件是當(dāng)A7為Ura，Paa，Pta或Hppa時(shí)，則刪除R2和R3；
A8為Ala，D-Ala，Aib，Acc，N-Me-Ala，N-Me-D-Ala，Arg或N-Me-Gly；
A9為Glu，N-Me-Glu，N-Me-Asp或Asp；
A10為Gly，Acc，Ala，D-Ala，Phe或Aib；
A11為Thr或Ser；
A12為Phe，Acc，Aic，Aib，3-Pal，4-Pal，β-Nal，Cha，Trp或X1-Phe；
A13為Thr或Ser；
A14為Ser，Thr，Ala或Aib；
A15為Asp，Ala，D-Asp或Glu；
A16為Val，D-Val，Acc，Aib，Leu，Ile，Tle，Nle，Abu，Ala，D-Ala，Tba或Cha；
A17為Ser，Ala，D-Ala，Aib，Acc或Thr；
A18為Ser，Ala，D-Ala，Aib，Acc或Thr；
A19為Tyr，D-Tyr，Cha，Phe，3-Pal，4-Pal，Acc，β-Nal，Amp或X1-Phe；
A20為Leu，Ala，Acc，Aib，Nle，Ile，Cha，Tle，Val，Phe或X1-Phe；
A21為Glu，Ala或Asp；
A22為Gly，Acc，Ala，D-Ala，β-Ala或Aib；
A23為Gln，Asp，Ala，D-Ala，Aib，Acc，Asn或Glu；
A24為Ala，Aib，Val，Abu，Tle或Acc；
A25為Ala，Aib，Val，Abu，Tle，Acc，Lys，Arg，hArg，Orn，HN-CH((CH2)n-NR10R11))C(O)或HN-CH((CH2)e-X3)-C(O)；
A26為Lys，Ala，3-Pal，4-Pal，Arg，hArg，Orn，Amp，HN-CH((CH2)n-NR10R11))-C(O)或HN-CH((CH2)e-X3)-C(O)；
A27為Glu，Ala，D-Ala或Asp；
A28為Phe，Ala，Pal，β-Nal，X1-Phe，Aic，Acc，Aib，Cha或Trp；
A29為Ile，Acc，Aib，Leu，Nle，Cha，Tle，Val，Abu，Ala，Tba或Phe；
A30為Ala，Aib，Acc或刪除；
A31為Trp，Ala，β-Nal，3-Pal，4-Pal，Phe，Acc，Aib，Cha，Amp或刪除；
A32為Leu，Ala，Acc，Aib，Nle，Ile，Cha，Tle，Phe，X1-Phe，Ala或刪除；
A33為Val，Acc，Aib，Leu，Ile，Tle，Nle，Cha，Ala，Phe，Abu，X1-Phe，Tba，Gaba或刪除；
A34為Lys，Arg，hArg，Orn，Amp，Gaba，HN-CH((CH2)n-NR10R11))-C(O)，HN-CH((CH2)e-X3)-C(O)或刪除；
A35為Gly或刪除；
A36為L-或D-Arg，D-或L-Lys，D-或L-hArg，D-或L-Orn，Amp，HN-CH((CH2)n-NR10R11))-C(O)，HN-CH((CH2)e-X3)-C(O)或刪除；
A37為Gly或刪除；
每次出現(xiàn)的X1分別選自(C1-C6)烷基，OH和鹵素；
R1為OH，NH2，(C1-C12)烷氧基，或NH-X2-CH2-Z0，其中X2為(C1-C12)烴部分，Z0為H，OH，CO2H或CONH2；
或-C(O)-NHR12，其中每次出現(xiàn)的X4分別為-C(O)-，-NHC(O)-或-CH2-，其中每次出現(xiàn)的f分別為1-29的整數(shù)；
R2和R3各自分別選自H，(C1-C30)烷基，(C2-C30)鏈烯基，苯基(C1-C30)烷基，萘基(C1-C30)烷基，羥基(C1-C30)烷基，羥基(C2-C30)鏈烯基，羥苯基(C1-C30)烷基，和羥萘基(C1-C30)烷基；或R2和R3之-為C(O)X5，其中X5為(C1-C30)烷基，(C2-C30)鏈烯基，苯基(C1-C30)烷基，萘基(C1-C30)烷基，羥基(C1-C30)烷基，羥基(C2-C30)鏈烯基，羥苯基(C1-C30)烷基，羥萘基(C1-C30)烷基，
或
其中Y為H或OH，r為0-4，q為0-4；
每次出現(xiàn)的e分別是1-4的整數(shù)；
每次出現(xiàn)的n分別是1-5的整數(shù)；和
每次出現(xiàn)的R10和R11分別是H，(C1-C30)烷基，(C1-C30)?；?，(C1-C30)烷基磺酰基，-C((NH(NH2))或
條件是當(dāng)R10為(C1-C30)?；?C1-C30)烷基磺?；?C((NH)(NH2))或
R11為H或(C1-C30)烷基；以及
R12為(C1-C30)烷基；
條件是
(i)至少一種式(I)化合物的氨基酸與hGLP-1(7-36，或-37)NH2(SEQ IDNOS1，2)或hGLP-1(7-36，或-37)OH(SEQ ID NOS3，4)的天然序列不同；
(ii)式(I)化合物不是hGLP-1(7-36，或-37)NH2(SEQ ID NOS1，2)或hGLP-1(7-36，-37)OH(SEQ ID NOS3，4)的類似物，其中單個(gè)位置被Ala取代；
(iii)式(I)化合物不是[Lys26(Nε-鏈烷醇基)]hGLP-1(7-36，或-37)-E(SEQ ID NOS5-8)，[Lys34(Nε-鏈烷醇基)]hGLP-1(7-36，或-37)-E(SEQID NOS9-12)，[Lys26，34-雙(Nε-鏈烷醇基)]hGLP-1(7-36，或-37)-E(SEQ IDNOS13-16)，[Arg26，Lys34(Nε-鏈烷醇基))hGLP-1(8-36，或-37)-E(SEQ IDNOS17-20)，或[Arg26，34，Lys36(Nε-鏈烷醇基))hGLP-1(7-36，-37)-E，其中E為-OH或-NH2(SEQ ID NOS21-24)；
(iv)式(I)化合物不是Z1-hGLP-1(7-36，或-37)-OH，Z1-hGLP-1(7-36，或-37)-NH2，其中Z1選自
(a)[Arg26](SEQ ID NOS25-28)，[Arg34](SEQ ID NOS29-32)，[Arg26，34](SEQ ID NOS33-36)，[Lys36](SEQ ID NOS37-40)，[Arg26，Lys36](SEQID NOS41-44)，[Arg34，Lys36](SEQ ID NOS45-46)，[D-Lys36]，[Arg36](SEQ ID NOS37-40)，[D-Arg36]，[Arg26，34，Lys36](SEQ ID NOS49-52)或[Arg26，36，Lys34)(SEQ ID NOS25-28)；
(b)[Asp21](SEQ ID NOS53-56)；
(c)[Aib8](SEQ ID NOS57-60)，[D-Ala8]和[Asp9](SEQ ID NOS61-64)中的至少一種；以及
(d)[Tyr7](SEQ ID NOS65-68)，(N-?；?His7)(SEQ ID NOS69-72)。[N-烷基-His7](SEQ ID NOS73-76)，(N-?；?D-His7)或(N-烷基-D-His7)；
(v)式(I)化合物不是(a)-(d)組所列出的取代物的任意兩種的組合；以及
(vi)式(I)化合物不是(N-Me-Ala8)hGLP-1(8-36或-37)(SEQ ID NOS77，78)，[Glu15]hGLP-1(7-36或-37)(SEQ ID NOS79，80)，[Asp21]hGLP-1(7-36或-37)(SEQ ID NOS53，54)或[Phe31]hGLP-1(7-36或-37)(SEQ ID NOS81，82)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中A11為Thr；A13為Thr；A14為Ser、Aib或Ala；A17為Ser、Ala、Aib或D-Ala；A18為Ser、Ala、Aib或D-Ala；A21為Glu或Ala；A23為Gln、Glu或Ala；A27為Glu或Ala。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中A9為Glu，N-Me-Glu或N-Me-Asp；A12為Phe，Acc或Aic；A16為Val、D-Val、Acc、Aib、Ala、Tle或D-Ala；A19為Tyr、3-Pal、4-Pal或D-Tyr；A20為Leu，Acc、Cha、Ala或Tle；A24為Ala，Aib或Acc；A25為Ala，Aib，Acc，Lys，Arg，hArg，Orn，HN-CH((CH2)n-NHR10)-C(O)；A28為Phe或Ala；A29為Ile、Acc或Tle；A30為Ala、Aib或刪除；A31為Trp、Ala、3-Pal、4-Pal或刪除；A32為Leu、Acc、Cha、Ala或刪除；A33為Val、Acc、Gaba、Tle或刪除。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中A8為Ala，D-Ala，Aib，A6c，A5c，N-Me-Ala，N-Me-D-Ala或N-Me-Gly；A10為Gly、Ala、D-Ala或Phe；A12為Phe，A6c或A5c；A16為Val、Ala、Tle、A6c、A5c或D-Val；A20為Leu，A6c，A5c、Cha、Ala或Tle；A22為Gly、Aib、β-Ala、L-Ala或D-ALa；A24為Ala或Aib；A29為Ile，A6c、A5c或Tle；A32為Leu，A6c，A5c、Cha、Ala或刪除；A33為Val、A6c、A5c、Ala、Gaba、Tle或刪除。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1為OH或NH2。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R2為H，R3為(C1-C30)烷基，(C2-C30)鏈烯基，(C1-C30)?；?，
或
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述的化合物為
[D-Ala8，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]-GLP-1(7-34)NH2；
[D-Ala8，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2；
[Ala18，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO83)；
[Ala16，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO84)；
[Ala14，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO85)；
[Ala22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO86)；
[Hppa7]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO87)；
[Ala15，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO88)；
[Ala17，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-35)-NH2(SEQ ID NO89)；
[Ala22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO90)；
[Ala15，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO91)；
[Ala17，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO92)；
[Ala18，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO93)；
[Ala21，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO94)；
[Ala22，23，26，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO95)；
[Ala22，23，27，32，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO96)；
[Ala22，23，26，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO97)；
[Ala22，23，27，31，3-Pal19，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO98)；
[Ala22，23，27，28，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO99)；
[Ala22，23，27，29，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO100)；
[Ala23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO101)；
[Ala20，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO102)；
[Ala22，23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO103)；
[Ala17，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO104)；
[D-Ala10，Ala22，23，27，3-Pal19，31，Gaba33]hGLP-1(7-33)-NH2；
[D-Ala8，Ala17，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-34)-NH2；
[Ala17，23，27，3-Pal19，26，31]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO105)；
[D-Ala8，Ala17，3-Pal19，31]hGLP-1(7-34)-NH2；
[Ala17，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO106)；
[D-Ala8，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Tle29]hGLP-1(7-34)-NH2；
[D-Ala8，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Tle16]hGLP-1(7-34)-NH2；
[D-Ala8，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；
[D-Ala22，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；
[Aib8，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO107)；
[D-Ala8，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-33)-NH2；
[Aib8，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO108)；
[Ala17，18，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO109)；
[Ala17，23，27，3-Pal19，31，Tle33，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO110)；
[Tle16，Ala17，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO111)；
[N-Me-D-Ala8，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-33)-NH2；
[Aib8，Ala17，18，22，23，27，3-Pal19，31]hGLP-1(7-33)-NH2(SEQ ID NO112)；
[Ala17，18，22，23，27，3-Pal19，31，Tle16，20，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2(SEQ ID NO113)；
[D-Ala8，Ala17，18，22，23，27，3-Pal19，31，Tle16，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；
[D-Ala8，22，Ala17，18，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；
[D-Ala8，18，Ala17，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；
[D-Ala8，17，Ala18，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；或
[D-Ala8，Ala17，18，22，23，27，3-Pal19，31，Gaba34]hGLP-1(7-34)-NH2；
或其藥學(xué)上可接受的鹽。
8.，根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述的化合物為
[Aib8，A6c32]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO114)；
[A6c20，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO115)；
[Aib8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO116)；
[(Tma-His)7]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO117)；
[A6c8]hGLP-1(8-36)-NH2(SEQ ID NO118)；
[A6c8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO119)；
[A6c16，20]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO120)；
[A6c29，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO121)；
[A6c20，Aib24]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO122)；
[Aib24，A6c29，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO123)；
[A6c16，29，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO124)；
[Ura7]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO125)；
[Paa7]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO126)；
[Pta7]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO127)；
[N-Me-Ala8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO128)；
[N-Me-Ala8]hGLP-1(8-36)-NH2(SEQ ID NO)；
[N-Me-D-Ala8]hGLP-1(7-36)-NH2；
[N-Me-D-Ala8]hGLP-1(8-36)-NH2；
[N-Me-Gly8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO129)；
[A5c8]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO130)；
[N-Me-Glu9]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO131)；
[A5c8，A6c20，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO132)；
[Aib8，A6c32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO133)；
[Aib8，25]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO134)；
[Aib8，24]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO135)；
[Aib8，30]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO136)；
[Aib8，Cha20]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO137)；
[Aib8，Cha32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO138)；
[Aib8，Glu23]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO139)；
[Aib8，A6c20]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO140)；
[Aib8，A6c20，32]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO141)；
[Aib8，22]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO142)；
[Aib8，β-Ala22]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO143)；
[Aib8，Lys25]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO144)；
[Aib8，A6c12]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO145)；
[Aib8，A6c29]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO146)；
[Aib8，A6c33]hGLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO147)；
[Aib8，14]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO148)；
[Aib8，18]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO149)；
[Aib8，17]hGLP-1(7-36)NH2(SEQ ID NO150)；或
[Aib8，D-Arg；26]hGLP-1(7-36)NH2；
或其藥學(xué)上可接受的鹽。
9.一種藥物組合物，它包括有效量的權(quán)利要求1所述的化合物、或藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
10.權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制備一種從需要的患者的GLP-1受體中引起興奮劑作用的藥劑的用途。
11.權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制備下列疾病的藥劑用途，其中所述疾病為I型糖尿病、II型糖尿病、肥胖、胰高血糖素瘤、導(dǎo)氣管分泌性疾病、代謝性疾病、關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、再狹窄、神經(jīng)變性疾病、腎臟衰竭、充血性心衰、腎病綜合征、肝硬化、肺水腫和高血壓。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其中所述的疾病為I型糖尿病或II型糖尿病。
全文摘要
本發(fā)明涉及胰高血糖素樣肽-1的肽類似物、其藥學(xué)上可接受的鹽、用這些類似物治療哺乳動(dòng)物的方法以及其包含所述類似物的有用的藥物組合物。
文檔編號(hào)A61P3/08GK101108878SQ200710141049
公開日2008年1月23日 申請日期1999年12月7日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月7日
發(fā)明者董正欣, 大衛(wèi)·H·科伊 申請人:研究及應(yīng)用科學(xué)協(xié)會(huì)股份有限公司, 圖蘭教育基金管理委員會(huì)