專利名稱：一種人參次苷h提取物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取物及其制備，特別涉及人參次苷H提取物及其制備。
背景技術：
人參在治療心腦血管疾病方面，有許多報道。人參次苷類成分，可治療冠心病和缺血性中風。人參次苷H為人參類皂苷經(jīng)水解產(chǎn)生的次級皂苷，再經(jīng)硅膠柱層析精制所得到的 有效部位-H組皂苷，其組分為人參皂苷他1、他2和他3，其中他2為該藥的主要成分，也是 該藥的主要抗癌活性成分。藥效學研究表明人參皂苷他2對肝癌、黑色素瘤B16、宮頸癌 及肉瘤S180等癌細胞的增殖有顯著的特異性的抑制作用。其作用機理為在癌細胞增殖過 程中，經(jīng)人參皂苷Μι2作用，使癌細胞停止在一定的增殖期，并促使其逆轉為正常細胞。含 有人參皂苷Mil、Mi2和他3的H組皂苷，為“人參次苷H”，體外實驗研究發(fā)現(xiàn)人參次苷H對 多種人源腫瘤細胞的增殖均有明顯的抑制作用?，F(xiàn)有技術分離人參次苷H的效果不佳，本發(fā)明人在對人參次苷H提取物進行研究 過程中，采用新的分離技術，試驗出一組新的人參次苷H提取物及其制備方法，這些人參次 苷H提取物具有療效高，純度高，吸收好，質(zhì)量穩(wěn)定，同時制備方法分離效果佳，含量高，工 藝簡單，操作方便，成本低廉，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種人參次苷H提取物，提取物中含人參皂苷Iih1含量范圍為 2% -20%，人參皂苷他2含量范圍為20% -40%;人參總次苷含量以人參皂苷他2計不少于 60%,人參皂苷Iih1和人參皂苷Mi2總和不少于40%。本發(fā)明的人參次苷H提取物，制備方法如下步驟1、含有人參皂苷類成分的藥材用水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先用 水洗脫，再用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮至干，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶于堿溶液中反應，冷卻后收集沉淀物；步驟3、沉淀物用乙醇溶解，拌入硅膠中，進行硅膠柱層析，用乙醇和乙酸乙酯混合 液進行洗脫，收集富含人參皂苷Mil和他2的流份，濃縮即得；其中，步驟1中所述大孔吸附樹脂為弱極性或非極性大孔吸附樹脂，所述乙醇范 圍為 30-95% ；步驟2中所述的堿溶液選自氫氧化鈉，氫氧化鉀，碳酸氫鈉或碳酸氫鉀形成的溶 液，步驟3所述乙醇和乙酸乙酯混合液為含有5-15%乙醇的乙酸乙酯。優(yōu)選的制備方法如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成 分的藥材經(jīng)水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，洗脫至流出液近無色，繼用85%乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，濃縮至干得總皂苷；步驟2、總皂苷溶于5倍量的水中，加入等倍量的飽和氫氧化鈉溶液，加熱回流6h， 放冷，析出沉淀，收集沉淀物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的硅膠中，進行硅膠柱層 析，用乙醇和乙酸乙酯體系進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷Mil和人 參皂苷他2的流份，濃縮至干，即得人參次苷H組合物。更優(yōu)選的制備方法如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成 分的藥材用水提取2-3次，每次1-2小時，每次加水8-12倍量，提取液通過大孔吸附樹脂 柱，先用水洗脫，洗脫至流出液近無色，繼用85 %乙醇洗脫，收集85 %乙醇洗脫液，濃縮至 干得總皂苷；步驟2、總皂苷溶于5倍量的水中，加入等倍量的飽和氫氧化鈉溶液，加熱回流他， 放冷，析出沉淀，收集沉淀物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的硅膠中，進行硅膠柱層 析，用乙醇和乙酸乙酯體系進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷Mil和人 參皂苷他2的流份，濃縮至干，即得人參次苷H組合物。本發(fā)明的人參次苷H提取物的檢測方法，步驟如下(1)人參次苷H提取物中人參總次苷含量以人參皂苷1 計不得少于60%對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)40°C減壓干燥M小時的人參皂苷Mi2對照品適 量，加甲醇制成每Iml含0. 15mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備精密稱取人參次苷H組合物10mg，用50ml正丁醇飽和的水超 聲5分鐘后轉移至分液漏斗，加入2g氯化鈉溶解后，用水飽和的正丁醇-乙酸乙酯=1 4 萃取三次，每次50ml，合并正丁醇乙酸乙酯層溶液，濃縮至干，殘渣用甲醇溶解，定量轉移至 50ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取對照品溶液及供試品溶液各1ml，分別置15ml具塞試管中，水 浴蒸干，精密加入新配制的5%香草醛冰醋酸-高氯酸=1 4混合溶液anl，搖勻，密塞， 置60°C水浴中加熱15分鐘，取出，立即放入冰水中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸10ml，搖 勻，以試劑作空白，照中國藥典2005年版一部附錄VA分光光度法，在550nm的波長處測定 吸收度，計算，即得，本品按干燥品計算，含人參總次苷以人參皂苷Iih2計，不得少于60. 0% ；(2)人參次苷H中人參皂苷Iih1和人參皂苷Mi2含量之和不得少于40% ；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑；以乙腈為流動 相A，以0. 2%磷酸溶液為流動相B，按下列梯度進行洗脫；檢測波長為203nm，理論板數(shù)按人 參皂苷Mi2峰計算應不低于7000。
權利要求
1.一種人參次苷H提取物，其特征在于，提取物中含人參皂苷Iih1含量范圍為 5% -25%，人參皂苷他2含量范圍為20% -40%;人參總次苷含量以人參皂苷他2計不少于 60%,人參皂苷Iih1和人參皂苷Mi2總和不少于40%。
2.權利要求1的人參次苷H提取物，其特征在于，制備方法如下步驟1、含有人參皂苷類成分的藥材用水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗 脫，再用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮至干，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶于堿溶液中反應，冷卻后收集沉淀物； 步驟3、沉淀物用乙醇溶解，拌入硅膠中，進行硅膠柱層析，用乙醇和乙酸乙酯混合液進 行洗脫，收集富含人參皂苷Mil和他2的流份，濃縮即得；其中，步驟1中所述大孔吸附樹脂為弱極性或非極性大孔吸附樹脂，所述乙醇范圍為 30-95% ；步驟2中所述的堿溶液選自氫氧化鈉，氫氧化鉀，碳酸氫鈉或碳酸氫鉀形成的溶液， 步驟3所述乙醇和乙酸乙酯混合液為含有5-15%乙醇的乙酸乙酯。
3.權利要求1的人參次苷H提取物，其特征在于，制備方法如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成分的 藥材經(jīng)水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，洗脫至流出液近無色，繼用85% 乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，濃縮至干得總皂苷；步驟2、總皂苷溶于5倍量的水中，加入等倍量的飽和氫氧化鈉溶液，加熱回流6h，放 冷，析出沉淀，收集沉淀物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的硅膠中，進行硅膠柱層析，用 乙醇和乙酸乙酯混合液進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷和人參皂 苷他2的流份，濃縮至干，即得人參次苷H組合物。
4.權利要求1的人參次苷H提取物，其特征在于，制備方法如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成分的 藥材用水提取2-3次，每次1-2小時，每次加水8-12倍量，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先 用水洗脫，洗脫至流出液近無色，繼用85%乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，濃縮至干得總 皂苷；步驟2、總皂苷溶于5倍量的水中，加入等倍量的飽和氫氧化鈉溶液，加熱回流6h， 放冷，析出沉淀，收集沉淀物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的硅膠中，進行硅膠柱層析，用 乙醇和乙酸乙酯混合液進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷和人參皂 苷他2的流份，濃縮至干，即得人參次苷H組合物。
5.權利要求1的人參次苷H提取物的檢測方法，其特征在于，步驟如下(1)人參次苷H組合物中人參總次苷含量以人參皂苷Mi2計不得少于60%對照品溶液 的制備精密稱取經(jīng)40°C減壓干燥M小時的人參皂苷Mi2對照品適量，加甲醇制成每Iml含 0. 15mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備精密稱取人參次苷H組合物10mg，用50ml正丁醇飽和的水超聲 5分鐘后轉移至分液漏斗，加入2g氯化鈉溶解后，用水飽和的正丁醇-乙酸乙酯=1 4 萃取三次，每次50ml，合并正丁醇乙酸乙酯層溶液，濃縮至干，殘渣用甲醇溶解，定量轉移至 50ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取對照品溶液及供試品溶液各1ml，分別置15ml具塞試管中，水浴蒸 干，精密加入新配制的5%香草醛冰醋酸-高氯酸=1 4混合溶液anl，搖勻，密塞，置60°C 水浴中加熱15分鐘，取出，立即放入冰水中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸IOml，搖勻，以試劑 作空白，照中國藥典2005年版一部附錄V A分光光度法，在550nm的波長處測定吸收度，計 算，即得，本品按干燥品計算，含人參總次苷以人參皂苷Mi2計，不得少于60. 0% ； (2)人參次苷H組合物中人參皂苷Iih1和人參皂苷Mi2含量之和不得少于40% ； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑；以乙腈為流動相 A，以0. 2%磷酸溶液為流動相B，按下列梯度進行洗脫；檢測波長為203nm，理論板數(shù)按人參 皂苷Rh2峰計算應不低于7000。時間(分)流動相A (%)流動相B (%)0 1035 5065 5010 4050 9050 1040 50901050 5590 3510 6555 603565對照品溶液的制備精密稱取40°C減壓干燥的人參皂苷1 ^! 適量，加甲醇溶解并 制成每Iml分別含0. lmg、0. 5mg的混合溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取人參次 苷H組合物25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即 得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜，測定，即得；本品按干燥品計算，含人參皂苷Mi1和人參皂苷Mi2，總和不得少于40 %。
6.含權利要求1的人參次苷H提取物的藥物組合物。
7.權利要求1的人參次苷H提取物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
8.權利要求1的人參次苷H提取物的制備方法，其特征在于，步驟如下步驟1、含有人參皂苷類成分的藥材用水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗 脫，再用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮至干，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶于堿溶液中反應，冷卻后收集沉淀物；步驟3、沉淀物用乙醇溶解，拌入硅膠中，進行硅膠柱層析，用乙醇和乙酸乙酯混合液進 行洗脫，收集富含人參皂苷Mil和他2的流份，濃縮即得；其中，步驟1中所述大孔吸附樹脂為弱極性或非極性大孔吸附樹脂，所述乙醇范圍為 30-95% ；步驟2中所述的堿溶液選自氫氧化鈉，氫氧化鉀，碳酸氫鈉或碳酸氫鉀形成的溶液，步驟3所述乙醇和乙酸乙酯混合液為含有5-15%乙醇的乙酸乙酯。
9.權利要求8的制備方法，其特征在于，步驟如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成分的 藥材用水提取2-3次，每次1-2小時，每次加水8-12倍量，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先 用水洗脫，洗脫至流出液近無色，繼用85%乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，濃縮至干得總3皂苷；步驟2、總皂苷溶于5倍量的水中，加入等倍量的飽和氫氧化鈉溶液，加熱回流6h，放 冷，析出沉淀，收集沉淀物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的硅膠中，進行硅膠柱層析，用 乙醇和乙酸乙酯混合液進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷和人參皂 苷他2的流份，濃縮至干，即得人參次苷H組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥提取物及其制備，特別涉及人參次苷H提取物及其制備。本發(fā)明的提取物中含人參皂苷Rh1含量范圍為5％-25％，人參皂苷Rh2含量范圍為20％-40％；人參總次苷含量以人參皂苷Rh2計不少于60％，人參皂苷Rh1和人參皂苷Rh2總和不少于40％。
文檔編號A61K36/258GK102058645SQ20091022846
公開日2011年5月18日 申請日期2009年11月17日 優(yōu)先權日2009年11月17日
發(fā)明者周水平, 宋兆輝, 張?zhí)m蘭, 朱永宏, 林萬里, 蔡楠, 黃芝娟 申請人:天津天士力制藥股份有限公司