專利名稱：一種多葉棘豆黃酮提取物及其在制備抗氧化藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多葉棘豆黃酮提取物及其在制備抗氧化藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
多葉棘豆為豆科植物多葉棘豆(Oxytropis myriophylla)的干燥全草,又名狐尾藻棘豆，主產(chǎn)于內(nèi)蒙古、河北、東北等省區(qū)，是蒙醫(yī)臨床常用藥之一。多葉棘豆中含有多種黃酮類成分，如白楊素、黃芩素、刺槐苷、木犀草素、芹菜素、槲皮素、山柰酚、紫云英苷、楊梅樹皮苷、鼠李素、芒柄花素等，其總黃酮對超氧陰離子、羥自由基、脂質(zhì)過氧化物具有抑制或消除作用，多葉棘豆清熱、愈傷生肌、合脈止血、消腫抗炎等功效與之密切相關(guān)。由于目前人工合成的抗氧化劑具有致畸、致癌等毒性，因此越來越多的國家開始限制或禁止使用某些合成抗氧化劑，轉(zhuǎn)而從植物中尋求天然抗氧化成分。申請人研究發(fā)現(xiàn)，多葉棘豆黃酮提取物具有良好的抗氧化作用。但目前，未見對多葉棘豆黃酮類成分及其制備工藝的研究報道。因此，申請人開展了本發(fā)明研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種多葉棘豆黃酮提取物，本發(fā)明的另一個目的在于提供其制備方法，本發(fā)明的第三個目的在于提供其質(zhì)量檢測方法，本發(fā)明的第四個目的在于提供其在制備抗氧化藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的:本發(fā)明多葉棘豆黃酮提取物的制備方法包括如下步驟:步驟1:取多葉棘豆藥材，用體積比為30 90%的乙醇回流提取I 3次，每次提取I 2.5小時；步驟2:大孔吸附樹脂純化。按質(zhì)量百分比計，該多葉棘豆黃酮提取物中總黃酮含量為30 90% ;優(yōu)選為按質(zhì)量百分比計該多葉棘豆黃酮提取物中總黃酮含量為50 80%。將以上所得提取物，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑、口服液、注射劑。上述步驟I中，取多葉棘豆藥材，用體積比為30 90 %的乙醇回流提取I 3次，每次提取I 2.5小時，合并提取液，得多葉棘豆乙醇提取液；其中，優(yōu)選的方法為采用10倍量體積比為70%的乙醇提取2次，每次1.5h ；上述步驟2中，取步驟I所得乙醇提 取液，減壓回收溶劑至無醇味，殘留物加5 20倍量水超聲分散，離心，取上清液，以多葉棘豆藥材計，上樣液濃度為0.05 0.20g/mL,通過大孔吸附樹脂柱，最大上樣量為20 35BV，大孔樹脂柱徑高比為1: 7 11，吸附流速為2 5BV/h，待吸附結(jié)束后，用體積比為O 20%的乙醇洗脫4 IOBV進(jìn)行除雜，棄去，再用體積比為30 80%的乙醇洗脫4 10BV，洗脫流速為2 5BV/h，收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得多葉棘豆黃酮提取物。
上述步驟2中優(yōu)選的方法為，取步驟I所得乙醇提取液，減壓回收溶劑至無醇味，殘留物加8 15倍量水超聲分散，離心，取上清液，以多葉棘豆藥材計，上樣液濃度為0.05 0.15g/mL，通過大孔吸附樹脂柱，最大上樣量為24 31BV，大孔樹脂柱徑高比為I: 7 11，吸附流速為2 5BV/h，待吸附結(jié)束后，用體積比為O 20%的乙醇洗脫4 IOBV進(jìn)行除雜，棄去，再用體積比為50 80%的乙醇洗脫4 10BV，洗脫流速為2 5BV/h，收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得多葉棘豆黃酮提取物；進(jìn)一步優(yōu)選的方法為減壓回收溶劑至無醇味，殘留物加10倍量水超聲分散，離心，取上清液，以生藥量計，即得濃度為0.10g/mL的上樣液，上樣于大孔樹脂柱，最大上樣量為28BV，大孔樹脂柱徑高比為1: 9，吸附流速為3BV/h，待吸附結(jié)束后，用體積比為15%的乙醇洗脫6BV進(jìn)行除雜，棄去，再用體積比為60 %的乙醇洗脫6BV，洗脫流速為4BV/h，收集體積比為60 %的乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得多葉棘豆黃酮提取物。上述步驟2中大孔吸附樹脂為AB-8，D4006，HPD-600，HPD-826，X-5，型大孔吸附樹脂。上述制備方法中，進(jìn)一步優(yōu)選的方法為多葉棘豆藥材采用10倍量體積比為70%的乙醇提取2次，每次1.5h，提取液減壓回收溶劑至無醇味，殘留物加10倍量水超聲分散，離心，取上清液，回收溶劑至無醇味，以生藥量計，即得濃度為0.10g/mL的上樣液，上樣于HPD-600型大孔樹脂柱，最大上樣量為28BV，大孔樹脂柱徑高比為1: 9，吸附流速為3BV/h，待吸附結(jié)束后，用體積比為15%的乙醇洗脫6BV進(jìn)行除雜，棄去，再用體積比為60%的乙醇洗脫6BV，洗脫流速為4BV/h，收集體積比為60%的乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得多葉棘豆黃酮提取物。本發(fā)明多葉棘豆黃酮提取物為多葉棘豆經(jīng)乙醇提取再通過大孔吸附樹脂純化得至IJ，經(jīng)抗氧化活性實驗表明，具有良好的抗氧化作用。實驗例I多葉棘豆黃酮提取物抗氧化實驗

I儀器與試劑RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；SHB-1II循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)；KQ-500DE型數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DS電熱三用水浴鍋(北京醫(yī)療設(shè)備廠)；Sart0ri0us BT25S型1/100000電子分析天平(北京賽多利斯儀器有限公司)；DNM-9602G型酶標(biāo)儀(北京艾普在線科技有限公司)，DH-250型電熱恒溫培養(yǎng)箱(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)，電子天平(德國Sartorius公司)。DPPH試劑(2，2-二苯基苦味酰基苯肼基自由基)，維生素C(Sigma-Aldrich公司)，過硫酸鉀(北京市紅星化工廠)。其它化學(xué)試劑均為分析純。樣品有多葉棘豆黃酮提取物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10，分別為按照實施例1、2、3、
4、5、6、7、8、9、10方法制備所得。2方法與結(jié)果2.1樣品液配制稱取樣品，用乙醇依次稀釋成質(zhì)量濃度為2.0、1.0、0.5、0.25、0.125,0.0625,
0.03125,0.015625mg/ml 的溶液。陽性對照品(維生素C)溶液質(zhì)量濃度與上述樣品溶液質(zhì)量濃度相同。2.2DPPH自由基清除方法
將100 μ L不同質(zhì)量濃度的供試樣品溶液和100 μ L DPPH乙醇溶液共置于96空板小孔內(nèi)，空白對照孔為100 μ L乙醇和100 μ L DPPH乙醇溶液，重復(fù)3次，37°C遮光放置反應(yīng)30min，測其在515nm波長處吸光度。以維生素C做陽性對照，按公式計算樣品對DPPH自由
基的清除率。清除率(%) = [1-(A1-Aj)/Ac] X 100%Ac為加入DPPH試劑后空白對照吸光度，Ai為加入DPPH試劑后樣品液吸光度，Aj為未加入DPPH試劑時樣品液吸光度。2.3 結(jié)果各樣品清除DPPH自由基結(jié)果見表I。由結(jié)果可知，多葉棘豆黃酮提取物具有較明顯的抗氧化作用。表I各樣品清除DPPH自由基結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種具有抗氧化作用的多葉棘豆黃酮提取物的制備方法，其特征在于，該制備方法包括如下步驟: 步驟1:取多葉棘豆藥材，用體積比為30 90%的乙醇回流提取I 3次，每次提取I 2.5小時，合并提取液，得多葉棘豆乙醇提取液； 步驟2:大孔吸附樹脂純化。
2.如權(quán)利要求1所述的多葉棘豆黃酮提取物的制備方法，其特征在于，取步驟I所得乙醇提取液，減壓回收溶劑至無醇味，殘留物加5 20倍量水超聲分散，離心，取上清液，以多葉棘豆藥材計，上樣液濃度為0.05 0.20g/mL，通過大孔吸附樹脂柱，最大上樣量為20 35BV，大孔樹脂柱徑高比為1: 7 11，吸附流速為2 5BV/h，待吸附結(jié)束后，用體積比為O 20%的乙醇洗脫4 IOBV進(jìn)行除雜，棄去，再用體積比為30 80%的乙醇洗脫4 10BV，洗脫流速為2 5BV/h，收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得多葉棘豆黃酮提取物。
3.如權(quán)利要求1所述的多葉棘豆黃酮提取物的制備方法，其特征在于，步驟2中所用大孔吸附樹脂為AB-8，D4006, HPD-600，HPD-826，X-5大孔吸附樹脂。
4.如權(quán)利要求1或2任一項所述制備方法制備得到的多葉棘豆黃酮提取物。
5.如權(quán)利要求4所述的多葉棘豆黃酮提取物，其特征在于，按質(zhì)量百分比計該多葉棘豆黃酮提取物中總黃酮含量為30 90%。
6.如權(quán)利要求4所述的多葉棘豆黃酮提取物，其特征在于，制備方法包括如下步驟:步驟1，取多葉棘豆藥材 ，用體積比為30 90%的乙醇回流提取I 3次，每次提取I 2.5小時，合并提取液，即得多葉棘豆乙醇提取液；步驟2，取步驟I所得乙醇提取液，減壓回收溶劑至無醇味，殘留物加8 15倍量水超聲分散，離心，取上清液，以多葉棘豆藥材計，上樣液濃度為0.05 0.15g/mL,通過大孔吸附樹脂柱，最大上樣量為24 31BV，大孔樹脂柱徑高比為1: 7 11，吸附流速為2 5BV/h，待吸附結(jié)束后，體積比為O 20%的乙醇洗脫4 IOBV進(jìn)行除雜，棄去，再用體積比為50 80 %的乙醇洗脫4 10BV，洗脫流速為2 5BV/h,收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得多葉棘豆黃酮提取物。
7.如權(quán)利要求1所述制備方法制備得到的多葉棘豆黃酮提取物，其特征在于，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、丸劑、口服液體制劑、注射劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑。
8.如權(quán)利要求1所述制備方法制備得到的多葉棘豆黃酮提取物在制備抗氧化藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種多葉棘豆黃酮提取物及其制備方法以及其在制備抗氧化藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明多葉棘豆黃酮提取物通過乙醇提取，再通過大孔吸附樹脂分離純化得到多葉棘豆黃酮提取物；該多葉棘豆黃酮提取物具有良好的抗氧化作用，可以制備成任何常用劑型。
文檔編號A61K36/48GK103099840SQ20131002620
公開日2013年5月15日 申請日期2013年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月24日
發(fā)明者劉斌, 折改梅, 孫芳芳, 姜艷艷, 鐘昆芮 申請人:劉斌