專利名稱：一種治療骨科疾病的注射用組合物的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域，具體地說是涉及一種治療骨科疾病的注射用組合物的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
骨瓜提取物注射液含有多種活性多肽和游離氨基酸，具有調(diào)節(jié)骨代謝，刺激成骨細胞增殖，促進新骨形成，調(diào)節(jié)鈣、磷代謝，增加骨鈣沉積，防止骨質(zhì)疏松等作用。多肽類骨代謝因子的作用多肽類骨代謝因子可有效促進機體內(nèi)影響骨形成和吸收的骨源性生長因子的合成，包括骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs)，β-轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)，成纖維細胞生長因子(FGF)等，從而具有多種生物活性，其主要藥理作用有:促進細胞有絲分裂、分化作用、趨化作用和溶骨活性。其中BMPs是一組酸性低分子量糖蛋白，作為一種高效骨誘導(dǎo)物質(zhì)，BMPs是間充質(zhì)細胞向骨系細胞分化的最初信號分子，能誘導(dǎo)血管周圍游動的間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化為不可逆性的骨系細胞，即軟骨細胞和成骨細胞，從而促進骨痂形成，誘導(dǎo)新骨形成，促進骨折修復(fù)；此外，BMPS還可調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)成分的改變，并通過與TGF-β和FGF相互之間的協(xié)調(diào)作用更好地誘導(dǎo)新骨形成，使骨組織更成熟。TGF-β則是一組具有多種功能的蛋白多肽，對成骨細胞及成軟骨細胞具有促進分化或降低分化的雙重調(diào)節(jié)作用，與多種因子如細胞外基質(zhì)和其他分化調(diào)節(jié)生長因子一起協(xié)同參與對細胞分化的調(diào)節(jié)；TGF-β可促進細胞外基質(zhì)合成，可以直接刺激成纖維細胞外基質(zhì)的合成，并對其新合成的基質(zhì)降解有顯著抑制作用；對于成骨細胞，TGF-β可促進其合成I型膠原、骨粘連素和骨折蛋白；同時，TGF-β對淋巴細胞和巨噬細胞的作用表明，它既能緩解炎性反應(yīng)的破壞性，又能協(xié)助巨噬細胞來源的某些細胞因子在組織修復(fù)中發(fā)揮作用。FGF是一組肝素黏合多肽，可刺激細胞的趨向移動、增殖和分化，增加合成膠原細胞的數(shù)量，促進骨膠原蛋白及非膠原蛋白的合成，增加骨鈣素的合成。甜瓜籽提取物的作用甜瓜籽提取物是從葫蘆科植物甜瓜(CucumismeloL.)的成熟干燥的種子經(jīng)特殊工藝提取而成的，能降低骨折局部毛細血管通透性，減少炎性滲出，促進局部血運障礙的恢復(fù)；同時還能降低全血黏度及細胞聚集程度，改善骨痂局部的血液循環(huán)，為骨細胞提供一個良好的血供環(huán)境，另外還能抑制前列腺素的釋放，達到止痛效果；在促進骨折早期愈合中，甜瓜籽提取物與補充的多肽類骨代謝因子具有協(xié)同作用，促進骨源性生長因子的合成。其他成分的作用骨瓜提取物注射液富含的多種游離氨基酸，為骨細胞合成BMPs、TGF-β、FGF等骨源性生物因子提供原料，促進骨源性生物因子的合成。有機鈣、磷因子可參與鈣磷代謝，維持骨容量。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明的目的是通過 以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:一種治療骨科疾病的注射用組合物，原料包括以下成分:豬四肢骨提取液和甜瓜籽提取物溶液。
豬后脛骨(注釋:豬后脛骨相當(dāng)于人的小腿骨中的內(nèi)側(cè)的骨)與豬的前肢骨的多肽含量有所不同，豬四肢骨含有的多肽類成分的紫外吸收峰在240-250nm左右，而豬后脛骨提取液含有的多肽類成分的紫外吸收峰在258nm左右，而甜瓜籽提取物溶液的多肽類成分的紫外吸收峰也在258nm左右。因此，本發(fā)明對治療骨科疾病的注射用組合物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求中的多肽的紫外吸收峰確定為258nm，且在兩種溶液合并成藥的前后，均對258nm進行監(jiān)控，加強藥物制備的過程監(jiān)控，保證了藥品的安全和有效性，提高了藥品指控的目的性和準(zhǔn)確性。尤其值得關(guān)注的是，本發(fā)明原料中優(yōu)選采用豬后脛骨，其提取液含有的多肽類成分的紫外吸收峰在258nm左右，普通豬四肢骨含有的多肽類成分的紫外吸收峰在240-250nm左右。實驗證明，采用豬后脛骨作為藥品原料，能夠更好地發(fā)揮治療效果。且通過制備過程中，分別對甜瓜籽提取物溶液和豬后脛骨提取液的多肽類成分在紫外258nm進行監(jiān)控，前置藥品標(biāo)準(zhǔn)監(jiān)控環(huán)節(jié)，提高了藥品標(biāo)準(zhǔn)，更加有效地保證了藥品的有效性和安全性。治療骨科疾病的注射用組合物是復(fù)方制劑，其組份為新鮮或冷凍的豬四肢骨和甜瓜的成熟干燥種子，經(jīng)分別提取制成的滅菌水溶液。主要含有多肽類骨代謝因子、甜瓜籽提取物、多種游離氨基酸以及有機鈣、無機鈣、無機鹽及微量元素。本發(fā)明的治療骨病的治療骨科疾病的注射用組合物，原料包括以下成分:豬四肢骨的提取液10-100重量份，甜瓜籽的提取液10-30重量份。本發(fā)明的治療骨科疾病的注射用組合物，其中，原料含有如下輔料:緩沖液，選自:磷酸鹽緩沖液或甘氨酸-HCl緩沖溶液 1-10重量份pH調(diào)節(jié)劑，選自:碳酸氫鈉，碳酸鈉或醋酸鈉1-4重量份穩(wěn)定劑、選自:乙二胺四乙酸二鈉，甘露糖醇，乳糖 0.05-5重量份。本發(fā)明治療骨科疾病的注射用組合物，按照如下方法制備:(1)豬骨提取液的制備:檢疫合格的豬的四肢骨，剪去殘肉，斷開去脂，粉碎，按照骨渣1: 2量純化水，1200C熱壓2小時，過濾，沉渣同法再次提取2次，合并濾液，2-80C，冷藏24小時，離心15分鐘，脫脂，上清液，用超濾器超濾，濃縮原體積1/4，調(diào)節(jié)PH5.9-6.3，超濾，收集濾液，得到豬骨提取液，備用；(2)甜瓜籽提取物溶液的制備:漂洗2-3次，漂洗凈的甜瓜籽1: 2量純化水，120°C熱壓2小時，過濾，沉渣同法再次提取2次，合并濾液，2-8度，冷藏24小時，離心15分鐘，脫脂，上清液，用超濾器超濾，濃縮原體積1/4，調(diào)節(jié)PH5.9-6.3，超濾，收集濾液，得到甜瓜籽提取物溶液；(3)將豬骨提取液、甜瓜籽提取物溶液混合，121°C滅菌30分鐘，灌裝，檢驗，包裝，得到成品。本發(fā)明的治療骨科疾病的注射用組合物，還可以按照如下方法制備:(1)豬骨提取液的制備:采集檢疫合格的豬的四肢骨，保持新鮮或于_20°C條件下冷凍保存。取四肢骨，用剪刀剪去殘肉，斷開去脂，無菌水沖洗，控去水分，置粉碎機中粉碎。骨渣置加熱鍋中，按1:1量加無菌水，121°C熱壓60分鐘，2 3層紗布過濾，沉渣同法再次提取2次，合并三次濾液。低溫靜置，脫脂。向溶液中加入乙醇使醇濃度達到80%，調(diào)節(jié)pH值為4.5 5.0，低溫靜置24小時，過濾，藥液再次加乙醇沉淀2次，加熱回收乙醇，調(diào)節(jié)pH值至6.5 7.1。藥液濃縮，用超濾器超濾，膜相對分子量優(yōu)選為1X104。121°C滅菌30分鐘。(2)甜瓜籽提取物溶液取干燥成熟甜瓜種子，置粉碎機中粉碎。粉碎物置加熱鍋中，按1:1量加無菌水，121°C熱壓30分鐘，2 3層紗布過濾，沉渣同法再次提取2次，合并三次濾液。向濾液中加入乙醇使醇濃度達到80%，調(diào)節(jié)pH值為4.5 5.0，低溫靜置24小時，過濾，藥液再次加乙醇沉淀2次，加熱回收乙醇，調(diào)節(jié)pH值至6.5 7.1。藥液濃縮，用超濾器超濾，膜 相對分子量優(yōu)選為1X104。121°C滅菌30分鐘。質(zhì)控要求:按甜瓜籽提取物溶液質(zhì)控要求進行檢查，應(yīng)符合規(guī)定。治療骨科疾病的注射用組合物生產(chǎn)工藝:將檢測合格的骨提取物溶液和甜瓜籽提取物溶液混合，加注射用水稀釋，優(yōu)選至80%處方量，調(diào)節(jié)pH值，pH優(yōu)選為6.0 6.5，補充注射用水至全量，測定半成品含量，灌裝于安瓿中，優(yōu)選為2、5、10ml，熔封，121°C滅菌30分鐘。燈檢。取樣全檢。合格品包裝。治療骨科疾病的注射用組合物優(yōu)選生產(chǎn)工藝:將豬骨提取液、甜瓜籽提取物溶液混合，加入本發(fā)明的輔料，加注射用水稀釋，優(yōu)選至80 %處方量，調(diào)節(jié)pH值，pH優(yōu)選為
6.0 6.5，補充注射用水至全量，測定半成品含量，灌裝于安瓿中，優(yōu)選為2、5、10ml，熔封，121°C滅菌30分鐘。燈檢。取樣全檢。合格品包裝。新生豬四肢骨的原料標(biāo)準(zhǔn):所選用原料是優(yōu)選健康新生豬(出生12個月內(nèi))四肢骨，應(yīng)根據(jù)下列原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)選取和處理。原料來源于豬科、豬屬、豬種的新生豬。健康新生豬由動脈放血處死后立即取出四肢骨，整個過程于I小時內(nèi)完成。健康新生豬四肢骨，處著附肉，呈鮮紅色，骨質(zhì)潔白，無腐臭，骨端軟，骨質(zhì)豐滿，骨端較大，骨長適度(20 40cm)。四肢骨用潔凈塑料袋包裝，_18°C冷凍保存，備用。使用期限為一年。檢查:布魯氏桿菌虎紅平板凝集試驗在陰、陽性血清對照成立的條件下，受檢血清不得出現(xiàn)陽性反應(yīng)。輪狀病毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)在陰、陽性血清對照成立的條件下，受檢血清不得出現(xiàn)陽性反應(yīng)。口蹄疫液相阻斷-酶聯(lián)免疫吸附試驗對照組成立的條件下受檢血清不得出現(xiàn)陽性反應(yīng)。流行性乙型腦炎血凝抑制試驗對照組成立的條件下受檢血清不得有流行性乙型腦炎污染。偽狂犬病膠乳凝集試驗對照組成立的條件下受檢血清不得出現(xiàn)陽性反應(yīng)。豬瘟過氧化物酶聯(lián)中和試驗受檢血清不得出現(xiàn)陽性反應(yīng)。所選用原料優(yōu)選采用健康新生豬(出生12個月內(nèi))，優(yōu)選豬后脛骨，優(yōu)選健康新生豬的后脛骨。后脛骨經(jīng)過提取所得豬骨提取液，其紫外特征吸收峰為258nm。
甜瓜籽的原料標(biāo)準(zhǔn):本品為葫蘆科植物甜瓜CucumismeloL.的干燥成熟種子。性狀:本品呈扁平長卵形，長5 7mm，寬2 4mm。表面黃色或淺棕紅色，平滑，微有光澤，一端稍尖，另端鈍圓。種皮較硬而脆，內(nèi)有膜質(zhì)胚乳及子葉2片。氣微，味淡。鑒別:(I)取本品粉末5g，加水50ml，加熱30分鐘，濾過，取濾液2ml，加雙縮脲試劑(取硫酸銅0.75g和酒石酸鉀鈉3.0g，加水250ml使溶解，在攪拌下加入10%氫氧化鈉溶液150ml,加水至500ml) 4ml,室溫放置15分鐘,溶液應(yīng)顯藍紫色至紫紅色。忙藏:置干燥處，防蛀。本發(fā)明所得的甜瓜籽提取物溶液，其紫外特征吸收峰為258nm。將甜瓜籽提取物溶液和豬骨提取液合并而成的本發(fā)明的治療骨科疾病的注射用組合物，其多肽的紫外吸收峰優(yōu)選為258nm。上述的治療骨科疾病的注射用組合物，可以制成注射液、大輸液和粉針。治療骨科疾病的注射用組合物的制藥用途:在制備治療骨科疾病的藥物中的應(yīng)用。在制備治療增生性骨關(guān)節(jié)、·骨關(guān)節(jié)炎疾病風(fēng)濕、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、促進骨折的早期愈合、治療創(chuàng)傷、恢復(fù)、調(diào)節(jié)骨代謝，刺激成骨細胞增殖，促進新骨形成，以及調(diào)節(jié)鈣、磷代謝，增加骨鈣沉積，防治骨質(zhì)疏松、抗炎、鎮(zhèn)痛，股骨頭缺血性壞死的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的豬骨提取液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本品由新鮮或冷凍的豬四肢骨骼提取制備，每Iml中含多肽類物質(zhì)以牛血清白蛋白計，不得低于15.0mg0性狀本品為黃色的澄明液體。鑒別取本品0.5ml，加雙縮脲試劑(取硫酸銅0.75g和酒石酸鉀鈉3.0g,加水250ml使溶解，在攪拌下加入10%氫氧化鈉溶液150ml，加水至500ml) 4ml，室溫放置15分鐘，溶液顯紫紅色。檢查pH值應(yīng)為6.5 7.1(中國藥典2005年版二部附錄VI H)。蛋白質(zhì)取本品1ml，加磺基水楊酸溶液(3 — 10) 3ml，不得發(fā)生渾濁。高分子量物質(zhì)取本品適量，加水制成每Iml中含多肽Img的溶液，作為供試品溶液；另取細胞色素C注射液適量，加水制成每Iml中含5mg的溶液，作為對照溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2005年版二部附錄V D)測定。采用凝膠色譜柱(如TSKgelG2000SW，PROTEN PAK60);以磷酸氫二鉀13.93g、磷酸二氫鉀5.32g，加異丙醇50ml，加水至1000ml，用磷酸調(diào)節(jié)PH值至7.0為流動相；流速為每分鐘0.8ml，檢測波長為280nm。對照溶液和供試品溶液各20 μ 1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中，各峰的保留時間均應(yīng)大于對照溶液主峰的保留時間。異常毒性取本品，加氯化鈉注射液制成每Iml中含多肽5mg的溶液，依法檢查(中國藥典2005年版二部附錄XIC)，按靜脈注射給藥，應(yīng)符合規(guī)定。熱原取本品，依法檢查(中國藥典2005年版二部附錄XI D)，劑量按家兔體重每Ikg注射0.3ml,應(yīng)符合規(guī)定。過敏試驗取本品，加氯化鈉注射液制成每Iml中含多肽5mg的溶液，取體重250 350g的健康合格豚鼠6只，連續(xù)3次隔日腹腔注射0.5ml, 14天后，再自靜脈注射2ml，注射后15分鐘內(nèi)，均不得出現(xiàn)過敏反應(yīng)。如有豎毛、呼吸困難、干嘔、咳嗽三聲等現(xiàn)象中出現(xiàn)兩種或兩種以上者，或有啰音、搐抽、虛脫或死亡現(xiàn)象之一者，應(yīng)判為陽性。降壓物質(zhì)取本品，加0.9%氯化鈉注射液制成每Iml中含多肽5mg的溶液,依法檢查(中國藥典2005年版二部附錄XI G)，應(yīng)符合規(guī)定。無菌取本品，依法檢查(中國藥典2005年版二部附錄XI H)，應(yīng)符合規(guī)定。含量測定精密量取本品1ml，置IOOml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，照福林酚測定法(見附件一)測定。貯藏_20 O冷凍本發(fā)明的甜瓜籽提取液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本品由葫蘆科植物甜瓜Cucumis melo L.的干燥成熟種子提取制備，每Iml中含多肽類物質(zhì)以牛血清白蛋白計，不得低于15.0mg0性狀本品為黃色的澄明液體。鑒別(I)取本品0.5ml，加雙縮脲試劑(取硫酸銅0.75g和酒石酸鉀鈉3.0g，加水250ml使溶解，在攪拌下加入10%氫氧化鈉溶液150ml，加水至500ml) 4ml，室溫放置15分鐘，溶液
顯紫紅色。(2)取本品0.3ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，照分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄IV)測定，在258nm的波長處有最大吸收。
`
檢查pH值應(yīng)為6.5 7.1(中國藥典2005年版二部附錄VI H)。蛋白質(zhì)取本品1ml，加磺基水楊酸溶液(3 — 10) 3ml，不得發(fā)生渾濁。高分子量物質(zhì)取本品適量，加水制成每Iml中含多肽Img的溶液，作為供試品溶液；另取細胞色素C注射液適量，加水制成每Iml中含5mg的溶液，作為對照溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2005年版二部附錄V D)測定。采用凝膠色譜柱(如TSKgelG2000SW，PROTEN PAK60);以磷酸氫二鉀13.93g、磷酸二氫鉀5.32g，加異丙醇50ml，加水至1000ml，用磷酸調(diào)節(jié)PH值至7.0為流動相；流速為每分鐘0.8ml，檢測波長為280nm。對照溶液和供試品溶液各20 μ I，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中，各峰的保留時間均應(yīng)大于對照溶液主峰的保留時間。異常毒性取本品，加氯化鈉注射液制成每Iml中含多肽5mg的溶液，依法檢查(中國藥典2005年版二部附錄XIC)，按靜脈注射給藥，應(yīng)符合規(guī)定。熱原取本品，依法檢查(中國藥典2005年版二部附錄XI D)，劑量按家兔體重每Ikg注射0.3ml,應(yīng)符合規(guī)定。過敏試驗取本品，加氯化鈉注射液制成每Iml中含多肽5mg的溶液，取體重250 350g的健康合格豚鼠6只，連續(xù)3次隔日腹腔注射0.5ml, 14天后，再自靜脈注射2ml，注射后15分鐘內(nèi)，均不得出現(xiàn)過敏反應(yīng)。如有豎毛、呼吸困難、干嘔、咳嗽三聲等現(xiàn)象中出現(xiàn)兩種或兩種以上者，或有啰音、搐抽、虛脫或死亡現(xiàn)象之一者，應(yīng)判為陽性。降壓物質(zhì)取本品，加0.9%氯化鈉注射液制成每Iml中含多肽5mg的溶液，依法檢查(中國藥典2005年版二部附錄XI G)，應(yīng)符合規(guī)定。無菌取本品，依法檢查(中國藥典2005年版二部附錄XIH)，應(yīng)符合規(guī)定。含量測定精密量取本品1ml，置IOOml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，照福林酚測定法測定。貯藏-20°C冷凍保存。本發(fā)明治療骨科疾病的注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本品為新鮮或冷凍的豬四肢骨骼和葫蘆科植物甜瓜CucumismeloL.的干燥成熟種子，經(jīng)單獨提取后制成的滅菌水溶液。每Iml中含多肽類物質(zhì)以牛血清白蛋白計，不得低于5.0mg。性狀本品為微黃色至淡黃色的澄明液體。鑒別:(I)取本品2ml，加雙縮脲試劑(取硫酸銅0.75g和酒石酸鉀鈉3.0g,加水250ml使溶解，在攪拌下加入10 %氫氧化鈉溶液150ml，加水至500ml) 4ml，室溫放置15分鐘，溶液
顯紫紅色。(2)取本品1ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，照分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄IVA)測定，在258nm的波長處有最大吸收。檢查pH值應(yīng)為5.5 7.0(中國藥典2005年版二部附錄VIH)。蛋白質(zhì)取本品1ml，加磺基水楊酸溶液(3 — 10) 3ml，不得發(fā)生渾濁。異常毒性取本品，依法檢查(中國藥典2005年版二部附錄XIC)，按靜脈注射給藥，應(yīng)符合規(guī)定。熱原取本品，依法檢查(中國藥典2005年版二部附錄XID)，劑量按家兔體重每Ikg注射Iml,應(yīng)符合規(guī)定。過敏試驗取體重250 350g的健康合格豚鼠6只，連續(xù)3次隔日腹腔注射本品
0.5ml，14天后，再自靜脈注射本品2ml，注射后15分鐘內(nèi)，均不得出現(xiàn)過敏反應(yīng)。如有豎毛、呼吸困難、干嘔、咳嗽三聲等現(xiàn)象中出現(xiàn)兩種或兩種以上者，或有啰音、搐抽、虛脫或死亡現(xiàn)象之一者，應(yīng)判為陽性。降壓物質(zhì)取本品，依法檢查(中國藥典2005年版二部附錄XIG)，應(yīng)符合規(guī)定。其他應(yīng)符合注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定(中國藥典2005年版二部附錄I B)。含量測定精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，照福林酚測定法(見附件一)測定。類別消炎鎮(zhèn)痛藥。規(guī)格(I)5ml:25mg (2) IOml:50mg貯藏密閉，25 °C以下保存。有效期18個月本發(fā)明制備的治療骨科疾病的注射用組合物與原骨瓜提取物注射液相比，有以下優(yōu)勢:藥材的利用率高，成本少，活性成分高、療效確切、安全性好。本發(fā)明治療骨科疾病的注射用組合物，采用超濾技術(shù)，多肽含量達到50-100mg，鹿瓜多肽注射液中多肽含量是16-24mg，每日用量中骨瓜中多肽含量是鹿瓜多肽的3-5倍，而多肽含量的多少與臨床療效是正相關(guān)的，本發(fā)明治療骨科疾病的注射用組合物的療效要明顯優(yōu)于鹿瓜多肽。穩(wěn)定性高，本品經(jīng)過24個月的穩(wěn)定性試驗研究，結(jié)果表明本品穩(wěn)定性良好。質(zhì)量可控，豬后脛骨(注釋:豬后脛骨相當(dāng)于人的小腿骨中的內(nèi)側(cè)的骨)與豬的其它四肢骨的多肽含量有所不同 ，豬四肢骨含有的多肽類成分的紫外吸收峰在240-250nm左右，而豬后脛骨含有的多肽類成分的紫外吸收峰在258nm左右，因此，本發(fā)明對治療骨科疾病的注射用組合物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求中的多肽的紫外吸收峰確定為258nm，增強了藥品的安全性，提高了藥品指控的目的性和準(zhǔn)確性。
具體實施例方式以下實施例進一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。實施例1(I)豬骨提取液的制備:檢疫合格的豬的四肢骨，剪去殘肉，斷開去脂，粉碎，按照骨渣1: 2量純化水，120°C熱壓2小時，過濾，沉渣同法再次提取2次，合并濾液，5攝氏度，冷藏24小時，離心15分鐘，脫脂，上清液，用超濾器超濾，濃縮原體積1/4，調(diào)節(jié)PH6.0,超濾，收集濾液，得到豬骨提取液，備用；紫外吸收峰為240-250nm。(2)甜瓜籽提取物溶 液的制備:漂洗2-3次，按照洗凈的甜瓜籽1: 2量純化水，120°C熱壓2小時，過濾，沉渣同法再次提取2次，合并濾液，5攝氏度，冷藏24小時，離心15分鐘，脫脂，上清液，用超濾器超濾，濃縮原體積1/4，調(diào)節(jié)PH6.0，超濾，收集濾液，得到甜瓜籽提取物溶液；紫外特征吸收峰為 258nm。(3)將50重量份豬骨提取液、10重量份甜瓜籽提取物溶液混合，加20重量份注射用水稀釋，加入碳酸氫鈉適量，調(diào)節(jié)PH值為6.2，121°C滅菌30分鐘，灌裝，檢驗，包裝，得到成品。實施例2在實施例1的基礎(chǔ)上:將50重量份豬骨提取液、10重量份甜瓜籽提取物溶液混合，加20重量份注射用水稀釋，加入5重量份磷酸鹽緩沖液，加入碳酸氫鈉I重量份，加入乙二胺四乙酸二鈉0.1重量份，121 °C滅菌30分鐘，灌裝，檢驗，包裝，得到成品。實施例3在實施例1的基礎(chǔ)上:將50重量份豬骨提取液、10重量份甜瓜籽提取物溶液混合，加20重量份注射用水稀釋，加入5重量份甘氨酸-HCl緩沖溶液，加入醋酸鈉2重量份，加入甘露糖醇0.2重量份,121°C滅菌30分鐘,灌裝,檢驗,包裝,得到成品。實施例4(I)豬骨提取液的制備:采集檢疫合格的豬后脛骨(豬后脛骨相當(dāng)于人的小腿骨中的內(nèi)側(cè)的骨)，保持新鮮或于-20°C條件下冷凍保存，取豬后脛骨，用剪刀剪去殘肉，斷開去脂，無菌水沖洗，控去水分，置粉碎機中粉碎，骨渣置加熱鍋中，按1:1量加無菌水，121°C熱壓60分鐘，3層紗布過濾，沉渣同法再次提取2次，合并三次濾液，低溫靜置，脫脂，向溶液中加入乙醇使醇濃度達到80%，調(diào)節(jié)pH值為4.8，低溫靜置24小時，過濾，藥液再次加乙醇沉淀2次，加熱回收乙醇，調(diào)節(jié)PH值至6.8，藥液濃縮，用超濾器超濾，膜相對分子量為I X IO4,121°C滅菌30分鐘。質(zhì)控要求:按說明書所述“本發(fā)明的豬骨提取液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)”質(zhì)控要求進行檢查，應(yīng)符合規(guī)定，紫外特征吸收峰為258nm。(2)甜瓜籽提取物溶液取干燥成熟甜瓜種子，置粉碎機中粉碎，粉碎物置加熱鍋中，按1:1量加無菌水，121°C熱壓30分鐘，2 3層紗布過濾，沉渣同法再次提取2次，合并三次濾液，向濾液中加入乙醇使醇濃度達到80%，調(diào)節(jié)pH值為4.8，低溫靜置24小時，過濾，藥液再次加乙醇沉淀2次，加熱回收乙醇，調(diào)節(jié)pH值至6.8，藥液濃縮，用超濾器超濾，膜相對分子量為I X IO4,121°C滅菌30分鐘，質(zhì)控要求:按說明書所述“本發(fā)明的甜瓜籽提取液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)”質(zhì)控要求進行檢查，應(yīng)符合規(guī)定，紫外特征吸收峰為258nm。(3)合并:將50重量份豬骨提取液、20重量份甜瓜籽提取物溶液混合，加20重量份注射用水稀釋，加入碳酸氫鈉適量，調(diào)節(jié)PH值為6.2，121°C滅菌30分鐘，灌裝，檢驗，包裝，得到成
品O質(zhì)控要求:按說明書所述“治療骨科疾病的注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)”質(zhì)控要求進行檢查，應(yīng)符合規(guī)定，紫外特征吸收峰為258nm。實施例5在實施例4的基礎(chǔ)上:將50重量份豬骨提取液、20重量份甜瓜籽提取物溶液混合，加20重量份注射用水稀釋，加入5重量份磷酸鹽緩沖液，加入碳酸氫鈉I重量份，加入甘露糖醇0.1重量份，121°C滅菌30分鐘,灌裝,檢驗,包裝,得到成品。

質(zhì)控要求:同實施例4實施例6在實施例4的基礎(chǔ)上:將50重量份豬骨提取液、20重量份甜瓜籽提取物溶液混合，加20重量份注射用水稀釋，加入5重量份甘氨酸-HCl緩沖溶液，加入醋酸鈉2重量份，加入乳糖0.5重量份,121°C滅菌30分鐘,灌裝,檢驗,包裝,得到成品。質(zhì)控要求:同實施例4實施例7:本發(fā)明治療骨科疾病的注射用組合物的臨床驗證本發(fā)明制劑治療骨性關(guān)節(jié)炎的效果方法:70例骨性關(guān)節(jié)炎患者(符合骨性關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn))隨機分為7組。本發(fā)明第I組，本發(fā)明治療骨科疾病的注射用組合物I本發(fā)明第2組，本發(fā)明治療骨科疾病的注射用組合物2本發(fā)明第3組，本發(fā)明治療骨科疾病的注射用組合物3本發(fā)明第4組，本發(fā)明治療骨科疾病的注射用組合物4本發(fā)明第5組，本發(fā)明治療骨科疾病的注射用組合物5本發(fā)明第6組，本發(fā)明治療骨科疾病的注射用組合物6本發(fā)明第1-6組，每例患者用治療骨科疾病的注射用組合物連續(xù)7天治療，每天12mg靜脈滴注。對照組，用鈣片和維生素D治療，療程7天，療效評價標(biāo)準(zhǔn):疼痛觀察指標(biāo)用視覺比量表(VAS)表示。
壓痛、腫脹、功能障礙觀察，每天評價I次。具體計分方法按內(nèi)容計分。顯效:腫脹及壓痛明顯減輕，關(guān)節(jié)活動改善明顯，治療后總計分下降> 2/3 ；有效:腫脹及壓痛減輕，關(guān)節(jié)活動有明顯，治療后總計分下降> 1/3 ；無效:癥狀無改善，治療后總計分下降< 1/3。統(tǒng)計學(xué)處理計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用方差分析，等級資料用Ridit檢驗，所有資料用SPSS6.0處理。壓痛、腫脹、功能障礙計分標(biāo)準(zhǔn):
權(quán)利要求
1.一種治療骨科疾病的注射用組合物質(zhì)量控制方法，其特征在于含有以下成分:其特征在于，各成分的重量配比為:豬四肢骨的提取液10-100重量份，甜瓜籽的提取液10-30重量份，其多肽的紫外吸收峰為258nm。
2.一種治療骨科疾病的注射用組合物質(zhì)量控制方法，其特征在于含有以下成分:其特征在于，各成分的重量配比為:豬四肢骨的提取液10-100重量份，甜瓜籽的提取液10-30重量份，其中所述豬骨提取液和甜瓜籽提取物溶液的多肽的紫外吸收峰均為258nm。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域，具體地說是涉及一種治療骨科疾病的注射用組合物的質(zhì)量控制方法。其原料為豬四肢骨和甜瓜籽經(jīng)分別提取制成的。其主要含有多肽類骨代謝因子、甜瓜籽提取物、多種游離氨基酸以及無機鹽及微量元素，含多種骨代謝的活性肽類，具有治療多種骨科疾病的作用。尤其值得關(guān)注的是，本發(fā)明原料中優(yōu)選采用豬后脛骨，其提取液含有的多肽類成分的紫外吸收峰在258nm左右，普通豬四肢骨含有的多肽類成分的紫外吸收峰在240-250nm左右。且通過制備過程中，分別對甜瓜籽提取物溶液和豬后脛骨提取液的在紫外258nm進行監(jiān)控，前置藥品標(biāo)準(zhǔn)監(jiān)控環(huán)節(jié)，提高了藥品標(biāo)準(zhǔn)，更加有效地保證了藥品的有效性和安全性。
文檔編號A61K36/42GK103070906SQ201310023580
公開日2013年5月1日 申請日期2011年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月8日
發(fā)明者趙聯(lián)華 申請人:趙聯(lián)華