專利名稱：牛膝多肽及生產(chǎn)方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從中藥牛膝中提取的多肽(蛋白)及提取方法和用途。
背景技術(shù)：
隨著現(xiàn)代社會(huì)的發(fā)展，交通事故、戰(zhàn)爭、自然災(zāi)害、人口老齡化等 因素，使得神經(jīng)損傷及神經(jīng)系統(tǒng)退行性變疾病的發(fā)生率呈上升趨勢(shì)，尋 找促進(jìn)損傷神經(jīng)修復(fù)、預(yù)防和治療神經(jīng)系統(tǒng)退行性變的有效藥物，是當(dāng) 今醫(yī)藥研究中引人關(guān)注的課題。中藥是祖國醫(yī)藥學(xué)的偉大寶庫，具有療效確切、毒副作用小的優(yōu)點(diǎn)， 不僅受到國內(nèi)醫(yī)藥界也受到世界同行的重視，它確有著開發(fā)利用的廣泛 前景。中藥治療神經(jīng)損傷、神經(jīng)退行性疾病已積有許多經(jīng)驗(yàn)，并有較多 的臨床報(bào)道，近年也相繼從天然植物中提取出具有神經(jīng)營養(yǎng)作用的有效 成分。但迄今在臨床上可有效促進(jìn)神經(jīng)再生、防治神經(jīng)退行性變的中藥 新藥卻并不多見，尚不能滿足臨床患者的需要。牛膝為莧科植物，藥用其干燥根。牛膝含皂甙、多糖、糖肽、甾醇、 甾酮、生物堿、香豆素等。牛膝具有補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，逐瘀通經(jīng)，弓l血 下行之功效，可用腰膝酸痛、筋骨無力、經(jīng)閉癥瘕、肝陽眩暈等。我們 先前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)牛膝中的甾酮、多糖具有促進(jìn)神經(jīng)生長的作用。我們最近 又發(fā)現(xiàn)牛膝的蛋白提取物可有效促進(jìn)神經(jīng)生長、防止神經(jīng)退行性變。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從牛膝中提取的牛膝多肽及生產(chǎn)方法 和用途。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種牛膝多肽，其特征是采用下列方法制得A:多肽的提取牛膝水溶液于4"加硫酸銨至50%， 15000rpm離 心半小時(shí)，離心后的上清液繼續(xù)于4。C加硫酸銨至80。/。， 15000rpm離 心半小時(shí)，將沉淀移至截留最小分子量為1000的透析袋中，純水透析， 透析后冷凍干燥；B:多肽的分離利用二乙基氨基乙基制備柱及四元線形梯度洗脫 將上述蛋白進(jìn)行分離，得到牛膝多肽；其中四元線性梯度洗脫所用的洗 脫液依次為(1) O.lMTris/HCl, pH6.0; (2) 0.1M Tris/Base, pH10.0;(3) 1MNaCl,pH7.0; (4) H20，pH7.0;將上述多肽進(jìn)行分離，得到牛 膝多肽。一種牛膝多肽的生產(chǎn)方法，其特征是包括下列步驟-A:多肽的提取牛膝水溶液于4"加硫酸銨至50%， 15000rpm離 心半小時(shí)，離心后的上清液繼續(xù)于4。C加硫酸銨至80。/。， 15000rpm離 心半小時(shí)，將沉淀移至截留最小分子量為1000的透析袋中，純水透析， 透析后冷凍干燥；B:多肽的分離利用二乙基氨基乙基制備柱及四元線形梯度洗脫 將上述蛋白進(jìn)行分離，得到牛膝多肽；其中四元線性梯度洗脫所用的洗 脫液依次為(1) O.lMTris/HCl, pH6.0; (2) 0.1M Tris/Base， pH10.0;(3) lMNaCl， pH7.0; (4) H20， pH7.0;將上述多肽進(jìn)行分離，得到牛 膝多肽。一種牛膝多肽在制備治療周圍神經(jīng)損傷和腦血管意外、缺血性腦損 傷、腦創(chuàng)傷、視神經(jīng)損傷、脊髓損傷、中樞神經(jīng)損傷及抗衰老、防治神 經(jīng)退行性變疾病的藥物和保健品中的應(yīng)用。所述牛膝多肽包括牛膝蛋白。本發(fā)明涉及的提取物牛膝多肽(蛋白)經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明具有促進(jìn)神經(jīng)生 長、防止神經(jīng)元凋亡、促進(jìn)損傷神經(jīng)再生作用，其藥材來源單一，制備 方法先進(jìn)，工藝合理，制劑成分明確，安全性高，藥理作用顯著，可用 于制備抗衰老、防治神經(jīng)退行性變疾病及治療周圍神經(jīng)損傷和腦血管意 外(出血性中風(fēng))、缺血性腦損傷(缺血性中風(fēng))、腦創(chuàng)傷、視神經(jīng)損傷、 脊髓損傷等中樞神經(jīng)損傷性疾病的藥物和保健品。下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
具體實(shí)施例方式一種中藥牛膝(蛋白)提取物，采用下列方法獲得將單味藥材懷 牛膝飲片，用水溶液提取3次，合并提取液得牛膝水溶液液。再采用下 列方法從牛膝水溶液獲得牛膝(蛋白)提取物(1)多肽(蛋白)的提取牛膝水溶液液于4匸加硫酸銨至50%， 15000rpm離心半小時(shí)，離心 后的上清液繼續(xù)于4"加硫酸銨至80%， 15000rpm離心半小時(shí)，將沉 淀移至截留最小分子量為1000的透析袋中，純水透析，透析后冷凍干 燥。(2)多肽(蛋白)的分離利用二乙基氨基乙基(DEAE)制備柱 及四元線形梯度洗脫；將上述多肽(蛋白)進(jìn)行分離，得到牛膝多肽(蛋白)。其中四元線性梯度洗脫所用的洗脫液依次為(1) 0.1MTris/HCl, pH6.0; (2) 0.1MTris/Base,pH10.0; (3) l畫aCl,pH7.0; (4) H20,pH7.0;將上述多肽(蛋白)進(jìn)行分離，得到牛膝多肽(蛋白)。上述得到的牛膝多肽(蛋白)提取物在制備抗衰老、防治神經(jīng)退行 性變疾病及治療周圍神經(jīng)損傷和腦血管意外(出血性中風(fēng))、缺血性腦 損傷(缺血性中風(fēng))、腦創(chuàng)傷、視神經(jīng)損傷、脊髓損傷等中樞神經(jīng)損傷 性疾病的藥物和保健品中的應(yīng)用。
權(quán)利要求
1. 一種牛膝多肽，其特征是采用下列方法制得A多肽的提取牛膝水溶液于4℃加硫酸銨至50％，15000rpm離心半小時(shí)，離心后的上清液繼續(xù)于4℃加硫酸銨至80％，15000rpm離心半小時(shí)，將沉淀移至截留最小分子量為1000的透析袋中，純水透析，透析后冷凍干燥；B多肽的分離利用二乙基氨基乙基制備柱及四元線形梯度洗脫將上述蛋白進(jìn)行分離，得到牛膝多肽；其中四元線性梯度洗脫所用的洗脫液依次為(1)0.1MTris/HCl，pH6.0；(2)0.1M Tris/Base，pH10.0；(3)1MNaCl，pH7.0；(4)H2O，pH7.0；將上述多肽進(jìn)行分離，得到牛膝多肽。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛膝多肽的生產(chǎn)方法，其特征是包括 下列步驟A:多肽的提取牛膝水溶液于4"加硫酸銨至50%， 15000rpm離 心半小時(shí)，離心后的上清液繼續(xù)于4。C加硫酸銨至80。/。， 15000rpm離 心半小時(shí)，將沉淀移至截留最小分子量為1000的透析袋中，純水透析， 透析后冷凍干燥；B:多肽的分離利用二乙基氨基乙基制備柱及四元線形梯度洗脫 將上述蛋白進(jìn)行分離，得到牛膝多肽；其中四元線性梯度洗脫所用的洗 脫液依次為(1) O.lMTris/HCl, pH6.0; (2) 0.1M Tris/Base, pH10.0;(3) lMNaCl, pH7.0; (4) H20, pH7.0;將上述多肽進(jìn)行分離，得到牛 膝多肽。
3、 一種牛膝多肽在制備治療周圍神經(jīng)損傷和腦血管意外、缺血性 腦損傷、腦創(chuàng)傷、視神經(jīng)損傷、脊髓損傷、中樞神經(jīng)損傷及抗衰老、防 治神經(jīng)退行性變疾病的藥物和保健品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種牛膝多肽及生產(chǎn)方法和用途，采用多肽的提取、多肽的分離等步驟制得。牛膝多肽在制備治療周圍神經(jīng)損傷和腦血管意外、缺血性腦損傷、腦創(chuàng)傷、視神經(jīng)損傷、脊髓損傷、中樞神經(jīng)損傷及抗衰老、防治神經(jīng)退行性變疾病的藥物和保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及的提取物牛膝多肽(蛋白)經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明具有促進(jìn)神經(jīng)生長、防止神經(jīng)元凋亡、促進(jìn)損傷神經(jīng)再生作用，其藥材來源單一，制備方法先進(jìn)，工藝合理，制劑成分明確，安全性高，藥理作用顯著。
文檔編號(hào)A61P25/28GK101270147SQ20081002377
公開日2008年9月24日 申請(qǐng)日期2008年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月18日
發(fā)明者斐 丁, 楊宇民, 瓊 程, 穎 袁, 顧曉松 申請(qǐng)人:南通大學(xué)