專利名稱：海狗油軟膠囊及其在制備祛除黃褐斑、青春痘、妊娠斑的保健品中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種海狗油軟膠囊及其在制備祛除黃褐斑、青春痘、妊娠斑的保健品中地應用。
背景技術：
海狗為海豹科動物豎琴海豹(Harp seal)的俗稱，棲居于北極和大西洋的北部。由于加拿大政府采取的保護措施，海狗的數(shù)量以每年5％的速度穩(wěn)定增長。為保持海狗與魚群之間的生態(tài)平衡，經聯(lián)合國和加拿大政府批準，每年可以少量地捕殺海狗。
本產品取材于新捕獵的北極海狗皮下脂肪，經過真空蒸餾等工藝，在低溫條件下除去蛋白、碳水化合物等物質，得到呈微黃色、透明液體狀的精煉海狗油。
海狗油中富含人體必需的Ω-3型多碳不飽合脂肪酸(Ω-3PUFA)，其營養(yǎng)價值要優(yōu)于其它食用油類。在海狗油中除發(fā)現(xiàn)魚油中通常含有的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)外，還有含量可觀的二十二碳五烯酸(DPA)。理想條件下提煉加工的海狗油，其中EPA、DHA和DPA的含量可達25％左右。
由于北極海狗僅棲居于加拿大沿海區(qū)域，目前國內關于海狗油保健作用的研究工作開展不多，而有關海狗油祛除黃褐斑功能的報導則更為少見。黃褐斑發(fā)病機理復雜，真正發(fā)病原因目前尚不十分清楚。多數(shù)學者認為，黃褐斑是因機體內分泌功能失調、血液流變學異常和微循環(huán)障礙、體內氧化及抗氧化功能失衡、過度日光照射等原因引起的色素代謝紊亂而表現(xiàn)于面部的一種慢性功能性疾病。
除機體內分泌功能異常外，黃褐斑形成的重要原因之一是由于機體血液流變性改變、血液粘度增加、紅細胞和血小板凝集增多，組織細胞間的微循環(huán)受阻造成局部缺血，細胞失去供血而出現(xiàn)代謝異常，從而引起黑色素增多和色斑沉著。祖國傳統(tǒng)醫(yī)學認為，黃褐斑系由氣血不和、脈絡瘀血、廢濁內留所致。部分病例治療前后的血液流變學對照觀察證實，在黃褐斑消褪的同時，血液流變學亦隨之改善。研究表明EPA和DHA具有抑制血小板凝集、改變血液粘滯性及紅細胞可塑性、增加血管通透性和擴張血管的作用。
黃褐斑形成的另一個重要原因是機體內氧化及抗氧化調節(jié)系統(tǒng)可能存在障礙，致使氧化酶系統(tǒng)的活性不能隨脂質過氧化物(LPO)增多而增強，從而導致過氧化脂質的蓄積。許多研究表明，自由基與皮膚黑色素的形成及色素沉著有關。當自由基增多時，可使脂類形成LPO引起脂質過氧化作用，而皮脂中這種不穩(wěn)定的LPO又很容易繼續(xù)轉變并分解為丙二醛(MDA)，誘發(fā)產生色素沉著性皮膚疾病。體內酶類抗氧化劑如超氧化物歧化酶等可清除自由基，抑制黃褐斑的形成。研究發(fā)現(xiàn)，黃褐斑患者血中LPO和MDA含量明顯增高，而超氧化物歧化酶的活性則顯著降低。
日光照射是黃褐斑形成的又一重要原因。過度日曬后黃褐斑幾乎均加重，而避免日曬則可使黃褐斑減輕乃至消褪。紫外線作為一種外源性刺激黑素細胞分裂因素使照射部位黑素細胞增殖，這可能是黃褐斑好發(fā)于面部的原因之一。有文獻報導，Ω-3PUFA可明顯減輕日曬反應，并能提高多形日光疹的刺激閾值。
綜上所述，海狗油中的Ω-3PUFA可通過改善血液流變性和血液微循環(huán)、提高機體抗氧化能力以及減輕皮膚日曬反應等機制抑制黃褐斑的形成并具有消褪黃褐斑的作用。功能試驗結果證實，長期服用本產品能顯著降低黃褐斑色度，減少黃褐斑的面積，且無新的黃褐斑產生。
維生素E作為一種抗氧化劑，在清除自由基過程中起著重要的作用，能夠有效地抑制脂質過氧化物的產生，防止產品中的不飽和脂肪酸氧化變質。
CN1378843A(
公開日2002年11月13日)公開了一種海狗油膠丸及其生產方法，該對比文件中提及的生產方法與本發(fā)明完全不同，實質上該對比文件描述的是海狗油的精制方法，而且該對比文件只字未提該產品在制備祛除黃褐斑的保健品中的應用。
本發(fā)明目的是提供一種海狗油軟膠囊，它由精制海狗油和維生素E組成。
本發(fā)明另一個目的是提供海狗油軟膠囊在制備祛除黃褐斑、青春痘、妊娠斑的保健品中的應用。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供的一種海狗油軟膠囊，其特征在于含有以重量計的精制海狗油99.5％，維生素E0.5％。將精制海狗油和維生素E的混合液與加熱熔化的食用明膠置于膠囊成型機中制成軟膠囊，然后經干燥，用75％食用酒精洗粒消毒即得產品。
本發(fā)明還提供了含上述組份和配比的海狗油軟膠囊的在制備祛除黃褐斑、青春痘、妊娠斑的保健品中的應用。
本發(fā)明的海狗油軟膠囊，其主要原料為精制海狗油，它是由加拿大進口的，呈淺黃色油狀物，具有海狗油固有香味，無異味，無肉眼可見外來雜質，理化指標應符合表1的規(guī)定。
表1 精制海狗油的理化指標
制備本發(fā)明海狗油軟膠囊使用的維生素E原料應符合GB14756的規(guī)定，所用的明膠應符合GB6783的規(guī)定。
本發(fā)明的海狗油軟膠囊色澤為微黃色，內容物為淺黃色至黃色油狀物，膠囊表面光澤，具有海狗油固有香味，無異味，無肉眼可見外來雜質。
本發(fā)明海狗油軟膠囊的理化指標如表2所示，微生物指標如表3所示，功效成份如表4所示。
表2 海狗油軟膠囊的理化指標
表3 海狗油軟膠囊的微生物指標
表4 海狗油軟膠囊的功效成份
表4中二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)的檢驗按GB/T17376、GB/T17377的規(guī)定進行。
本發(fā)明海狗油軟膠囊的毒理學安全性測試如下
試驗動物昆明種小白鼠，由中國醫(yī)科大學實驗動物部提供，批準證號遼實動質字[2000]015號。
Wistar大白鼠，由中國醫(yī)科大學醫(yī)學實驗動物部提供，批準證號遼實動質字[2000]015號。
1、小鼠急性毒性試驗選用健康昆明種小白鼠40只，雌雄各20只，進行試驗。小鼠體重為18.1-22.0g。每個性別小鼠隨機分成四個劑量組，分別為21.50、10.00、4.64、2.15g/Kg.bw，各劑量組以植物油配制。小鼠灌胃后連續(xù)觀察14天。記錄中毒表現(xiàn)及死亡情況，試驗結果如表5所示。
表5 小鼠急性毒性試驗結果
劑量組 雄性 雌性
(g/kg.bw)實驗動物數(shù)死亡動物數(shù)實驗動物數(shù)死亡動物數(shù)
21.5050 5 0
10.0050 5 0
4.64 50 5 0
2.15 50 5 0
廠家推薦成人(體重以60kg計)日攝入定型產品最大量0.033g/kg.bw，最高劑量組給予受試物21.50g/kg.bw，換算相當于成人日攝入定型產品量的652倍。實驗觀察14天各劑量組未見中毒癥狀，死亡數(shù)為零。受試物對兩種性別小鼠的急性毒性LD50均大于15.00g/kg.bw，根據(jù)毒性分級，屬無毒級。LD50大于廠家推薦成人日攝入量10倍，可進入下一階段毒理學實驗。
2、遺傳毒性試驗
①Ames試驗采用經鑒定符合要求的鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四個試驗菌株進行試驗。采用多氯聯(lián)苯(PCB)誘導的大鼠肝勻漿作為體外代謝活化系統(tǒng)。試驗設0.313、0.625、1.250、2.500、5.000mg/皿5個劑量，各劑量組以二甲基亞砜(DMSO)稀釋，同時設空白對照、溶劑對照、陰性對照(蒸餾水)、和陽性對照(非活化系統(tǒng)TA97、TA98、TA102為敵克松50.0μg/皿，TA100為疊氮鈉1.5μg/皿?；罨到y(tǒng)采用二氨基芴10.0μg/皿)。在頂層瓊脂中加入0.1mL試驗菌株增菌液、0.1mL受試物溶液，代謝活化時加入0.5mL S9混合液，混勻后倒入底層培養(yǎng)基平板上。在37℃培養(yǎng)48小時，計數(shù)每皿回變菌落數(shù)。如果受試物的回變菌落數(shù)是自發(fā)回變菌落數(shù)2倍以上，并具有劑量--反應關系者則定為陽性。每個劑量做三個平行。整套試驗在相同條件下重復做兩次并分別統(tǒng)計，試驗結果如表6、7所示。
表6 Ames試驗結果(第一次)
劑量 TA97 TA98 TA100 TA102
(mg/皿) -S9+S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9
5.000 139.3±36.7135.7±28.741.0±4.441.0±7.0 122.3±7.5 144.7±20.6293.3±29.1 277.3±26.1
2.500 122.0±32.2122.7±13.236.3±4.940.0±6.6 173.0±25.6142.0±13.2274.0±28.6 271.0±18.3
1.250 130.7±20.7114.3±17.644.7±2.539.0±6.6 162.0±25.0143.3±43.0258.7±9.5273.3±22.1
0.625 145.0±6.9 119.3±25.542.7±6.042.7±6.7 162.3±20.8129.7±15.0297.7±24.4 291.3±8.7
0.313 152.7±13.0125.0±18.745.3±2.338.7±7.6 137.3±18.1131.0±27.2290.7±22.9 292.3±21.9
空白對照127.7±28.4117.3±28.746.0±3.637.3±6.7 144.3±48.0153.0±44.5301.7±10.5 279.7±17.0
溶劑對照141.7±28.9140.0±27.247.0±3.635.7±1.5 170.0±34.8141.3±32.1285.7±26.1 279.7±30.0
陰性對照122.7±15.8148.0±30.338.0±7.236.7±7.6 159.7±32.3169.0±20.0255.3±7.1287.0±40.1
陽性對照2037.7±78.9 1162.7±162.1 909.0±60.8 2482.7±204.1 1763.3±40.3 2479.3±215.1 895.0±3.0267.3±13.5
表7 Ames試驗結果(第二次)
劑量 TA97 TA98 TA100TA102
(mg/皿) -S9+S9-S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9
5.000 138.0±19.7 136.7±17.6 39.3±4.937.7±8.1 128.0±10.1131.0±45.9282.3±26.6 270.0±28.9
2.500 154.7±17.6 147.9±15.5 41.7±6.737.3±3.8 152.3±41.9147.7±36.3258.0±25.2 258.0±17.4
1.250 152.7±25.0 150.9±39.2 43.3±5.037.3±4.5 150.7±28.3129.3±19.7293.3±6.5 292.3±23.9
0.625 121.7±18.8 144.0±6.5 38.3±2.140.7±4.7 159.3±27.6139.7±42.2282.3±27.3 283.3±35.4
0.313 136.3±8.7 145.8±12.7 36.0±5.338.0±7.0 161.3±31.6152.0±23.6278.3±28.7 284.3±27.8
空白對照 150.0±26.5 154.5±40.4 38.3±7.035.3±4.5 139.0±46.0165.0±18.5274.3±37.9 288.7±18.7
溶劑對照 114.3±27.7 134.2±27.1 44.7±5.941.0±7.0 128.3±1.2 107.7±3.2 267.7±22.0 272.3±25.8
陰性對照 133.7±37.2 141.3±40.5 38.3±2.344.0±4.4 153.7±20.8162.0±13.7281.3±16.5 272.0±24.1
陽性對照 2088.3±92.51414.3±168.3 913.3±29.2 2492.3±423.4 2071.3±122.8 2803.3±406.4 822.0±21.9 277.3±6.4
由表6、7可見，各劑量組回變菌落數(shù)均未超過陰性對照組回變菌落數(shù)的二倍，亦無劑量--反應關系。說明該受試物對鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四菌株，加與不加S9，均未呈現(xiàn)遺傳毒性。
②小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗采用間隔24小時兩次經口灌胃法進行試驗，灌胃量0.2mL/10g體重。用體重25.6-30.0g小白鼠，按體重隨機分組，每組10只，雌雄各半。以40mg/kg.bw劑量的環(huán)磷酰胺(CP)為陽性對照，熟豆油為陰性對照，受試物劑量為0.94、1.88、3.75、7.50g/kg.bw，用熟豆油配至所需濃度。末次給藥后6小時，頸椎脫臼處死動物，取股骨骨髓用小牛血清稀釋涂片，甲醇固定，Giemsa染色。在光學顯微鏡下，每只動物計數(shù)1000個嗜多染紅細胞(PCE)，微核發(fā)生率以含微核的PCE千分率計，試驗結果如表8所示。
表8 小鼠骨髓PCE微核試驗結果
劑量組 動物數(shù)檢查PCE數(shù) 含微核PCE微核數(shù)
性別
(g/kg.bw)(只) (個)數(shù)(個) (‰)
7.505 5×1000 5 1.0
雄 3.755 5×1000 8 1.6
1.885 5×1000 7 1.4
0.945 5×1000 8 1.6
性 陰性組 5 5×1000 9 1.8
陽性組 5 5×1000 124 24.8
7.505 5×1000 7 1.4
雌 3.755 5×1000 5 1.0
1.885 5×1000 6 1.2
0.945 5×1000 7 1.4
陰性組 5 5×1000 6 1.2
性 陽性組 5 5×1000 111 22.2
經卡方檢驗，各劑量組微核率與陰性對照組比較差異無顯著性(P＞0.05)，陽性對照組與陰性對照組比較有高度顯著性差異(P＜0.01)。該受試物小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗為陰性。
③小鼠精子畸形試驗用體重26.5-30.0g的性成熟雄性小鼠，按體重隨機分組。受試物劑量為1.88、3.75、7.50g/kg.bw，用熟豆油配至所需濃度。以40mg/kg.bw環(huán)磷酰胺(CP)為陽性對照組，蒸餾水為陰性對照組，熟豆油為溶劑對照。以上各試驗組每日灌胃一次，連續(xù)5天，灌胃量0.2mL/10g體重，末次灌胃后第30天處死動物，取附睪制片，伊紅染色，每組計數(shù)5只動物，每只動物計數(shù)1000個結構完整的精子，計算畸變精子發(fā)生率，試驗結果如表9所示。
表9 小鼠精子畸形試驗結果
劑量組 動物數(shù) 觀察精 精子畸形類型 畸形精畸形率
(g/kgbw) (只)子數(shù)(個) 無定形 無鉤 胖頭 香蕉形 雙頭 雙尾 尾折疊 其它 子數(shù)(個) (‰)
7.50 5 5×1000522017 29 0 0 2 0 120 24.0
3.75 5 5×1000363329 24 0 0 0 0 122 24.4
1.88 5 5×1000622515 23 0 0 0 0 125 25.0
陰性對照組5 5×1000543121 18 0 0 1 0 125 25.0
溶劑對照組5 5×1000452925 15 0 0 2 0 116 23.2
陽性對照組5 5×1000163 132 1231120 0 36 0 566 113.2
經Wilconson秩和檢驗，各劑量組精子畸形率與陰性對照組比較差異無顯著性(P＞0.05)，陽性對照組與陰性對照組比較有高度顯著性差異(P＜0.01)。小鼠精子畸形試驗為陰性。
3、30天喂養(yǎng)試驗
試驗動物選用體重55.2-69.9g Wistar大白鼠。
試驗方法將大鼠隨機分為對照組及三個受試物組，廠家推薦成人(體重以60kg計)每日攝入定型產品最大量為2.000g/60kg.bw(按內容物計算)。最高劑量組為B組以成人日最大攝入量的100倍計，即3.333g/kg.bw，以下中、低劑量組以1/5遞減，即C組0.667g/kg.bw，相當于成人最大攝入量的20倍，D組0.133g/kg.bw，相當于成人最大攝入量的4倍，每組10只大鼠。將B、C、D三個試驗組受試物均勻摻入基礎飼料中，含量依此為3.333％、0.667％、0.133％。對照組(A組)喂飼正常基礎飼料。大鼠飼料攝入量按體重10％計算，單籠喂養(yǎng)，自由飲食，記錄大鼠進食量、體重，連續(xù)觀察30天。
臨床觀察動物的一般表現(xiàn)、行為、中毒癥狀、及死亡情況，每周稱一次體重、攝入量，計算食物總利用率。
測血常規(guī)及生化指標于試驗第31天尾靜脈取血，采用日本CA-300血球自動計數(shù)儀，測定血紅蛋白(HGB)、紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)。股動脈取血，采用北京中生生物工程高技術公司提供的試劑盒、荷蘭VITALAB-MICRO生化分析儀測定谷丙轉氨酶(GPT)、谷草轉氨酶(GOT)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、血糖(GLU)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、膽固醇(CHO)、甘油三脂(TG)。
病理解剖大體觀察、臟器系數(shù)、病理組織檢查(肝、腎、脾、胃及十二指腸)
試驗結果如表10、11、12、13、14所示。
1、對大鼠體重的影響如表10所示
表10 30天喂養(yǎng)試驗大鼠體重測定結果
劑動物
始重 第1周體重 第2周體重 第3周體重 第4周體重
量數(shù)
(g) (g)(g)(g) (g)
組(只)
A 1064.6±4.0 95.3±6.8128.9±10.7174.7±16.8 209.6±22.9
B 1062.4±5.3 91.7±7.4135.6±8.8 182.6±13.4 220.4±14.3
雄
C 1065.4±4.7 94.2±5.9124.2±10.4170.0±18.2 207.3±19.5
D 1063.0±5.1 97.0±8.2133.7±11.2175.2±11.5 209.9±11.4
A 1060.7±4.1 86.6±7.2127.0±13.0160.4±16.9 186.4±17.1
B 1062.9±4.1 87.4±6.6128.7±11.4160.1±14.9 186.5±15.8
雌
C 1065.9±4.3 91.7±6.6129.8±12.4166.0±15.5 194.2±17.4
D 1061.2±4.6 86.1±7.4126.6±9.7 155.8±12.6 181.5±13.8
由表10可見，各組動物生長活動正常。各劑量組動物體重與對照組比較，差異無顯著性(P＞0.05)。
2、對大鼠總食物利用率的影響如表11所示
表11 30天喂養(yǎng)試驗總食物利用率測定結果
劑量動物數(shù)體重增重 進食量 食物利用率
性別
組 (只) (g) (g) (％)
A10145.0±22.3517.2±58.028.0
B10158.0±15.1547.0±46.028.9
雄
C10141.9±16.7514.1±54.427.6
D10146.9±12.1534.2±39.127.6
A10125.7±17.7479.0±50.126.2
B10123.6±16.0484.2±46.025.5
雌
C10128.3±16.3504.9±45.625.4
D10120.3±13.0475.6±33.925.2
由表11可見，受試物摻入飼料中喂飼大鼠30天，動物未出現(xiàn)拒食現(xiàn)象，各劑量組動物食物利用率與對照組比較差異無顯著性(P＞0.05)。
3、血液學檢查結果如表12所示
表12 30天喂養(yǎng)試驗血液學檢查結果
動物數(shù)血紅蛋白 紅細胞計數(shù) 白細胞計數(shù)
性別 劑量組
(只) (g/dL) (×1012/L) (×109/L)
雄 A 10 15±3 10.37±1.29 9.7±2.0
B 10 14±2 10.59±1.42 9.7±1.5
C 10 13±4 10.02±1.31 9.2±1.7
D10 14±49.88±0.959.4±2.0
A10 14±49.67±1.349.1±1.5
B10 15±39.92±1.479.8±1.5
雌
C10 14±49.39±1.458.9±2.1
D10 13±39.49±1.269.9±1.5
由表12可見，各劑量組的血紅蛋白(HGB)、紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)與對照組比較差異無顯著性(P＞0.05)。
4、30天喂養(yǎng)試驗生化檢驗結果如表13所示
表13 30天喂養(yǎng)試驗生化檢驗結果
劑 動物
性GPT BUN GOT CR GLU TP AIB CHOTG
量數(shù)
別 (U/L) (mmol/L) (U/L)(μmol/L)(mmol/L) (g/dL) (g/L) (mmol/L) (mmol/L)
組 (只)
A1086±15 6.336±0.704 180±45 110.0±6.3 9.80±1.06 10.4±0.7 44.9±4.1 2.89±0.64 1.19±0.34
B1077±26 6.756±0.885 223±136 115.2±7.2 9.31±0.86 10.9±0.5 44.0±2.1 2.69±0.57 1.19±0.39
雄
C1090±23 6.439±0.869 185±43 108.7±12.1 9.65±1.17 10.4±0.5 44.4±2.4 2.47±0.58 1.36±0.45
A1073±14 6.565±0.690 202±39 101.4±8.3 9.39±1.34 10.4±0.7 44.4±3.8 2.91±0.58 1.45±0.53
B1071±21 6.436±0.666 221±134 107.8±12.5 9.12±1.17 10.9±0.7 45.1±2.8 2.91±0.45 1.22±0.54
雌
C1085±19 6.740±0.596 196±35 102.7±13.2 10.12±1.09 10.5±0.7 46.2±3.7 2.75±0.47 1.38±0.50
D1077±20 6.069±0.485 176±30 106.6±12.7 9.09±0.51 10.1±0.5 46.1±3.1 2.88±0.79 1.48±0.54
由表13可見，各劑量組的谷丙轉氨酶(GPT)、谷草轉氨酶(GOT)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、血糖(GLU)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、膽固醇(CHO)、甘油三脂(TG)與對照組比較差異無顯著性(P＞0.05)。
5、受試物對大鼠臟體比的影響
表14 30天喂養(yǎng)試驗大鼠臟體比的測定結果
性別 劑量組 動物數(shù)(只) 肝/體(％) 脾/體(％) 腎/體(％)
A10 3.74 0.24 0.78
B10 3.47 0.25 0.75
雄
C10 3.71 0.25 0.73
D10 3.76 0.25 0.78
A10 3.69 0.25 0.78
B10 3.72 0.26 0.78
雌
C10 3.75 0.24 0.76
D10 3.65 0.22 0.75
由表14可見，各劑量組與對照組比較差異無顯著性(P＞0.05)。
6、病理組織學檢查
各組動物大體觀察未發(fā)現(xiàn)異常，解剖時亦未發(fā)現(xiàn)膀胱、肝總管結石，鏡下觀察動物的肝、脾、腎、胃、十二指腸均未見有意義的病理改變。
試驗結果表明該受試物摻入飼料中喂飼大鼠30天，對各劑量組動物體重增長、食物利用率、血常規(guī)、血生化指標、臟器系數(shù)等各項指標均未見不良影響。病理組織學觀察，肝、脾、腎、胃、十二指腸均未見有意義的病理改變。
本發(fā)明海狗油軟膠囊具有祛除黃褐斑的作用，具體測試如下
1、詳細詢問病史，主要觀察黃褐斑面積、顏色深淺、有無新的黃褐斑出現(xiàn)，色度測定采用實用色譜卡中的棕色卡Bn(C+M+Y)(中國科學院地理研究所研制，測繪出版社出版)。用標尺測量量受試者試食前后同一黃褐斑的長徑和寬徑，計算面積(mm2)。
2、進行安全性觀察
①血液及尿常規(guī)檢查血紅蛋白、紅細胞計數(shù)、白細胞計數(shù)、尿常規(guī)。
②血生化指標測定總膽固醇、甘油三脂、谷丙轉氨酶、總膽色素、尿素氮、肌酐、血糖。
③胸透、心電圖、腹部B超。
3、功效判定
試食前后記錄面部黃褐斑情況，在黃褐斑的面積及顏色深淺等方面有顯著性差異，且不增加新的黃褐斑，即可判定受試物有祛黃褐斑的作用。
4、試驗結果
35例黃褐斑受試者面部均有大小不等、形狀各異的點面狀黃褐斑，受試者均為女性，年齡在28-50歲之間，受試者試食“海狗油軟膠囊”每日2次，每次2粒，連續(xù)服用30天后，在飲食、睡眠、大小便、精神狀態(tài)等方面無明顯改變。
①黃褐斑面積的變化
表15 海狗油軟膠囊對黃褐斑面積(mm2)的影響
例數(shù) 試食前試食后 P值
35 2333.43±859.912200.86±826.11＜0.01
由表15可見，服用海狗油軟膠囊30天后，可明顯減小黃褐斑的面積(P＜0.01)。
②黃褐斑色度的變化
表16 海狗油軟膠囊對黃褐斑色度的影響
例數(shù) 試食前 試食后 P值
35 1.66±0.29 1.29±0.28 ＜0.01
由表16可見，服用海狗油軟膠囊30天后，可明顯降低黃褐斑的色度(P＜0.01)。
③癥狀改善情況
表17 主要癥狀改善情況
主要癥狀例數(shù)有效無效 有效率(％)
失眠41 325.00
疲勞感 30 30.00
煩躁22 0100.00
胸脅脹痛22 0100.00
便秘41 325.00
④安全性指標檢測
表18 安全性指標檢測結果
觀察項目 例數(shù) 服用前 服用后
總膽固醇(mg/dl) 35 175.97±19.35 177.89±19.73
甘油三脂(mg/dl) 35 117.23±42.51 116.04±39.08
谷丙轉氨酶(U/L) 35 17.56±6.08 17.74±5.35
總膽紅素(mg/dl) 35 0.54±0.160.54±0.14
肌酐(mg/dl) 35 0.62±0.140.64±0.13
尿素氮(mg/dl) 35 14.50±4.09 15.50±4.67
血糖(mg/dl) 35 91.06±11.53 90.74±10.43
血紅蛋白(g/dl) 35 13.28±0.64 13.35±0.73
紅細胞(×1012/l) 35 4.20±0.304.21±0.31
白細胞(×109/l)35 5.91±1.146.06±1.14
表18顯示所有受試者服用海狗油軟膠囊30天后，血常規(guī)、尿常規(guī)、血生化指標均在正常范圍內。
⑤胸透、心電圖、腹部B超均屬正常。
結論
35例經體檢合格的黃褐斑自愿受試者，按要求服用海狗油軟膠囊，每日2次，每次2粒，連續(xù)30天。結果表明海狗油軟膠囊能顯著降低黃褐斑色度(P＜0.01)，減少黃褐斑的面積(P＜0.01)，并且未觀察到新的黃褐斑產生。受試者試食后血常規(guī)和血生化指標均無明顯改變，而且無過敏及不良反應。
本發(fā)明海狗油軟膠囊穩(wěn)定性檢測結果如表19所示
表19 海狗油軟膠囊穩(wěn)定性檢測結果
批號20010520 20010601 20010610
第0個月穩(wěn)定性試驗
菌落總數(shù)，cfu/g ＜10 ＜10 ＜10
大腸菌群，MPN/100g ＜30 ＜30 ＜30
致病菌 未檢出未檢出未檢出
霉菌計數(shù)，cfu/g ＜10 ＜10 ＜10
酵母菌計數(shù)，cfu/g ＜10 ＜10 ＜10
二十碳五烯酸，％6.47 6.75 6.32
二十二碳六烯酸，％ 7.49 7.66 7.15
二十二碳五烯酸，％ 3.62 3.43 3.37
酸價1.25 1.24 1.22
過氧化值，meq/kg15.62 15.57 15.31
維生素E，mg/100g398 392 402
鉛，mg/kg ＜0.12＜0.12＜0.12
砷，mg/kg ＜0.1 ＜0.1 ＜0.1
汞，mg/kg ＜0.003 ＜0.003 ＜0.003
水分及揮發(fā)物，％1.11 1.16 1.09
第1個月穩(wěn)定性試驗保存條件相對濕度75％溫度37℃
菌落總數(shù)，cfu/g ＜10 ＜10 ＜10
大腸菌群，MPN/100g ＜30 ＜30 ＜30
致病菌 未檢出未檢出未檢出
霉菌計數(shù)cfu/g ＜10 ＜10 ＜10
酵母菌計數(shù)，cfu/g ＜10 ＜10 ＜10
二十碳五烯酸，％6.48 6.85 6.44
二十二碳六烯酸，％ 7.52 7.73 7.26
二十二碳五烯酸，％ 3.68 3.57 3.49
酸價1.23 1.21 1.24
過氧化值，meq/kg15.67 15.53 15.38
維生素E，mg/100g420 390 397
鉛，mg/kg ＜0.12＜0.12＜0.12
砷，mg/kg ＜0.1 ＜0.1 ＜0.1
汞，mg/kg ＜0.003 ＜0.003 ＜0.003
水分及揮發(fā)物，％1.13 1.16 1.10
第2個月穩(wěn)定性試驗 保存條件相對濕度75％ 溫度37℃
菌落總數(shù)，cfu/g 103010
大腸菌群，MPN/100g ＜30 ＜30 ＜30
致病菌未檢出未檢出未檢出
霉菌計數(shù)，cfu/g ＜10 ＜10 ＜10
酵母菌計數(shù)，cfu/g ＜10 ＜10 ＜10
二十碳五烯酸，％ 6.52 6.43 6.66
二十二碳六烯酸，％7.49 7.27 7.48
二十二碳五烯酸，％3.52 3.72 3.75
酸價 1.26 1.24 1.25
過氧化值，meq/kg 15.68 15.43 15.40
維生素E，mg/100g 389 389 398
鉛，mg/kg ＜0.12＜0.12＜0.12
砷，mg/kg ＜0.1 ＜0.1 ＜0.1
汞，mg/kg ＜0.003 ＜0.003 ＜0.003
水分及揮發(fā)物，％ 1.16 1.19 1.11
第3個月穩(wěn)定性試驗 保存條件相對濕度75％ 溫度37℃
菌落總數(shù)，cfu/g20 5020
大腸菌群，MPN/100g ＜30 ＜30 ＜30
致病菌 未檢出 未檢出未檢出
霉菌計數(shù)，cfu/g＜10 ＜10 ＜10
酵母菌計數(shù)，cfu/g ＜10 ＜10 ＜10
二十碳五烯酸，％ 6.74 6.80 6.79
二十二碳六烯酸，％ 7.81 7.64 7.39
二十二碳五烯酸，％ 3.64 3.47 3.65
酸價 1.27 1.26 1.25
過氧化值，meq/kg 15.7415.52 15.48
維生素E，mg/100g 395 396 396
鉛，mg/kg ＜0.12 ＜0.12＜0.12
砷，mg/kg ＜0.1＜0.1 ＜0.1
汞，mg/kg ＜0.003 ＜0.003 ＜0.003
水分及揮發(fā)物，％ 1.16 1.22 1.1具體實施例方式
下面實施例是為了進一步說明本發(fā)明.
實施例1
取加拿大進口精制海狗油99.5kg、維生素E0.5kg，制成每粒0.5g的膠囊200000粒，其中每100g含有效成分為二十二碳六烯酸(DHA)7.15g、二十碳五烯酸(EPA)6.32g、二十二碳五烯酸(DPA)3.37g，對有黃褐斑者口服每日2次，每次2粒，服用30天，具有明顯祛除黃褐斑、青春痘、妊娠斑功效。
權利要求
1、一種海狗油軟膠囊，其特征在于含有以重量計的精制海狗油99.5％，維生素E0.5％。
2、權利要求1所述的海狗油軟膠囊在制備祛除黃褐斑、青春痘、妊娠斑的保健品中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及海狗油軟膠囊及其在制備祛除黃褐斑、青春痘、妊娠斑保健品中的應用，本發(fā)明的海狗油軟膠囊由精制海狗油和維生素E按一定配比組成，該海狗油軟膠囊可用于制備祛除黃褐斑、青春痘、妊娠斑的保健品，具有美容的功效。
文檔編號A61K35/12GK1518990SQ0310075
公開日2004年8月11日 申請日期2003年1月21日 優(yōu)先權日2003年1月21日
發(fā)明者何謂鑒, 劉威, 劉俊祥, 劉隕 申請人:劉威, 劉俊祥, 何謂鑒, 劉隕, 劉 威