專利名稱：人抗凝血酶制劑干熱處理過(guò)程中的穩(wěn)定劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及血漿蛋白制品技術(shù)領(lǐng)域，是人抗凝血酶制劑干熱處理過(guò)程中的穩(wěn)定齊 。具體涉及，在抗凝血酶制劑中加入氨基酸或其鹽類(lèi)，可在100°c，30min干熱處理過(guò)程中能有效保護(hù)制劑中主要成分抗凝血酶的活性，從而提高抗凝血酶制劑的產(chǎn)率。
背景技術(shù)：
人抗凝血酶制劑是血漿蛋白制品中的一種，主要用于先天性抗凝血酶缺乏癥和彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)患者的治療。自1974年該制劑試用于臨床以來(lái)，其適應(yīng)癥日益增多，如在肝硬化、肝功能衰竭、敗血癥、產(chǎn)后溶血性尿毒癥治療中也取得了較好的效果，但至今我國(guó)沒(méi)有成型的人抗凝血酶制劑上市。作為以血漿為原料生產(chǎn)制備的血漿蛋白制品，不能排除甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、艾滋病毒(HIV)或其他病原體傳播的可能，為了提高血漿蛋白制品的安全性，生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)有特定的去除或滅活病毒的方法。目前歐美抗凝血酶制劑制備過(guò)程通常采用60°C，10小時(shí)以上的巴氏病毒滅活法，該方法雖然對(duì)HBV、HIV等病毒有較好的滅活效果，但經(jīng)過(guò)加熱后，抗凝血酶中有大量蛋白變性，活性損失為20-35%，此外，大量的變性蛋白必須再經(jīng)過(guò)純化處理，而使生產(chǎn)成本增加，生產(chǎn)效率降低。100°C，30分鐘干熱處理對(duì)多種病毒(包括脂包膜和非脂包膜病毒)均有作用效果。干熱病毒滅活在生產(chǎn)最終步驟進(jìn)行，處理操作相對(duì)簡(jiǎn)便，可控性強(qiáng)，被越來(lái)越多的生產(chǎn)企業(yè)所采用，但制劑在高溫條件處理，活性蛋白易變性失活，為了維持活性蛋白功能，提高蛋白活性收率，在干熱處理過(guò)程中通常需添加合適的穩(wěn)定劑。穩(wěn)定劑對(duì)最終產(chǎn)品的質(zhì)量、產(chǎn)率有著決定性的影響，至今未見(jiàn)有關(guān)苯丙氨酸或賴氨酸或酪氨酸或天冬氨酸用于抗凝血酶制劑干熱處理過(guò)程穩(wěn)定劑的文獻(xiàn)及專利報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了改善現(xiàn)有技術(shù)問(wèn)題，提供一種在100°C，30min干熱處理過(guò)程中人抗凝血酶制劑的穩(wěn)定劑。本發(fā)明技術(shù)方案為
一種人抗凝血酶制劑干熱處理過(guò)程中穩(wěn)定劑，為溶質(zhì)氨基酸或其鹽用去離子水配制成的溶液，所述的氨基酸或其鹽為苯丙氨酸或其鹽中的一種、賴氨酸或其鹽中的一種、酪氨酸或其鹽中的一種、天冬氨酸或其鹽中的一種，將它們用去離子水配制成穩(wěn)定劑溶液，在冷凍干燥前加入人抗凝血酶制劑中。上述的穩(wěn)定劑，其苯丙氨酸或其鹽中的一種質(zhì)量百分濃度為1. 0-2. 0%,賴氨酸或其鹽中的一種質(zhì)量百分濃度為O. 1-0. 6%、酪氨酸或其鹽中的一種質(zhì)量百分濃度為
O.6-2. 0%、天冬氨酸或其鹽質(zhì)中的一種量百分濃度為O. 6-2. 0%，所述的賴氨酸或其鹽中的一種為賴氨酸鹽酸鹽；上述的質(zhì)量百分濃度為加入穩(wěn)定劑后，各組分在制劑中的質(zhì)量百分濃度。
本發(fā)明的有益效果為穩(wěn)定劑使人抗凝血酶制劑在100°C，30min干熱處理過(guò)程中，抗凝血酶活性損失減少，收率達(dá)83%以上，且干熱后制劑外觀、干熱后復(fù)溶時(shí)間及復(fù)溶澄清度能夠達(dá)到美國(guó)藥典第32版(United States Pharmacopeia 32，USP32)和歐洲藥典第7版(European Pharmacopoeia 7· O,ΕΡ7· O)的要求。在抗凝血酶制劑加入1. 0_2· 0%苯丙氨酸或其鹽，O. 1-0. 6%賴氨酸或其鹽，O. 6-2. 0%酪氨酸或其鹽，O. 6-2. 0%天冬氨酸或其鹽中的一種就能在干熱處理過(guò)程有效維持人抗凝血酶的活性，提高抗凝血酶的收率。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的穩(wěn)定劑在抗凝血酶制劑干熱處理過(guò)程中的作用作詳細(xì)說(shuō)明，1.抗凝血酶濃縮物的制備
Cohn氏法血液制品組分IV沉淀糊，檸檬酸鈉和NaCl抽提液15°C條件抽提60min，抽提液6000rmp條件離心40min，取上清液，再經(jīng)O. 80 μ m和O. 45 μ m膜過(guò)濾，獲得濾液；濾液經(jīng)有機(jī)溶劑/去污劑(S/D)處理后，經(jīng)親和層析，獲得洗脫液，洗脫液經(jīng)超濾濃縮處理，即得到抗凝血酶濃縮物(彡6. 0IU/mg)。2.加入穩(wěn)定劑，冷凍干燥
25-40°C水溫條件，用去離子水，按質(zhì)量百分比，配制濃度為2-16%的苯丙氨酸，賴氨酸鹽酸鹽、酪氨酸、天冬氨酸溶液，測(cè)定并用0. lmol/L-lmol/L的HCl或NaOH溶液調(diào)pH至
6.0-7. 5 ;根據(jù)所需穩(wěn)定劑終濃度和抗凝血酶濃縮物的量添加穩(wěn)定劑，例如抗凝血酶制劑所需苯丙氨酸穩(wěn)定劑終質(zhì)量百分濃度為1. 2%，配制苯丙氨酸母溶液質(zhì)量百分濃度為8%，抗凝血酶制劑質(zhì)量為300g，則稱取52. 9412g質(zhì)量百分濃度為8%的苯丙氨酸溶液與300g抗凝血酶制劑混合均勻；再例如抗凝血酶制劑所需天冬氨酸穩(wěn)定劑終質(zhì)量百分濃度為0. 8%，配制天冬氨酸溶液質(zhì)量百分濃度為6%，抗凝血酶制劑質(zhì)量為400g，則稱取61. 5385g質(zhì)量百分濃度為8%的天冬氨酸溶液與400g抗凝血酶制劑混合均勻。穩(wěn)定劑添加后除菌、分裝，-40°C至30°C條件冷凍 干燥，真空條件壓鋁塑蓋。3.干熱處理
制劑入干熱病毒滅活柜后增壓升溫，待溫度升至100°C時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，30min干熱處理。4.干熱處理后制劑成形外觀觀察
干熱處理后抗凝血酶制劑成形外觀結(jié)果見(jiàn)表I。表I不同穩(wěn)定劑抗凝血酶制劑成形外觀
權(quán)利要求
1.人抗凝血酶制劑干熱處理過(guò)程中的穩(wěn)定劑，其特征為溶質(zhì)氨基酸或其鹽用去離子配制成的溶液，所述的氨基酸或其鹽為苯丙氨酸或其鹽、賴氨酸或其鹽、酪氨酸或其鹽、天冬氨酸或其鹽，將上述物質(zhì)中的一種作溶質(zhì)用去離子水配制成穩(wěn)定劑溶液，在冷凍干燥前加入人抗凝血酶制劑中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗凝血酶制劑干熱處理過(guò)程中的穩(wěn)定劑，其特征是上述的穩(wěn)定劑，由苯丙氨酸或其鹽中的一種配制的質(zhì)量百分濃度為1. 0-2. 0%，由賴氨酸或其鹽中的一種配制的質(zhì)量百分濃度為O. 1-0. 6%，由酪氨酸或其鹽中的一種配制的質(zhì)量百分濃度為O. 6-2. 0%、由天冬氨酸或其鹽質(zhì)中的一種配制的質(zhì)量百分濃度為O. 6-2. 0% ;所述的賴氨酸鹽為賴氨酸鹽酸鹽；上述的質(zhì)量百分濃度均為加入穩(wěn)定劑后，各溶質(zhì)組分分別在制劑中的濃度。
全文摘要
本發(fā)明涉及人血漿蛋白制品技術(shù)領(lǐng)域，是一種人抗凝血酶制劑干熱處理過(guò)程中的穩(wěn)定劑,本發(fā)明的穩(wěn)定劑是指苯丙氨酸或其鹽中的一種、賴氨酸或其鹽中的一種、酪氨酸或其鹽中的一種、天冬氨酸或其鹽中的一種用去離子水配制成的穩(wěn)定劑溶液；實(shí)驗(yàn)證明，在人抗凝血酶制劑100℃，30min干熱處理過(guò)程，含有質(zhì)量百分濃度為1.0-2.0%苯丙氨酸或其鹽中的一種，0.1-0.6%賴氨酸或其鹽酸鹽，0.6-2.0%酪氨酸或其鹽，0.6-2.0%天冬氨酸或其鹽中的一種就能有效保護(hù)抗凝血酶的活性，并且干熱處理后有較好的制劑外觀及復(fù)溶澄清度。因此，本發(fā)明可作為人抗凝血酶制劑干熱處理過(guò)程中的穩(wěn)定劑。
文檔編號(hào)A61P7/02GK103041380SQ20121058253
公開(kāi)日2013年4月17日 申請(qǐng)日期2012年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月28日
發(fā)明者曹海軍, 葉生亮, 胡吉軍, 袁靖, 李長(zhǎng)清, 陳云華, 劉欣晏, 楊剛 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所, 貴州泰邦生物制品有限公司