專(zhuān)利名稱(chēng)：肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)障礙蛋白激酶(dmpk)表達(dá)的調(diào)節(jié)的制作方法
肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)障礙蛋白激酶(DMPK)表達(dá)的調(diào)節(jié)序列表本申請(qǐng)將同電子格式的序列表一起提交。序列以2011年7月19日創(chuàng)建的標(biāo)題為B10L0134USL2SEQ.txt的文件提供，其大小約為216Mb。將序列表的電子格式中的信息通過(guò)引用整體并入本文。領(lǐng)域本文中提供了用于減少動(dòng)物中的DMPK mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)的方法、化合物和組合物。同樣地，本文中提供了用于優(yōu)先減少動(dòng)物中的CUGexp DMPK RNA，減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變的包括DMPK抑制劑的方法、化合物和組合物。此類(lèi)方法、化合物和組合物用于例如治療、預(yù)防或改善動(dòng)物中的I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良(DMl)。背景肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良I型(DMl)是成人的肌營(yíng)養(yǎng)不良癥的最常見(jiàn)形式，據(jù)估計(jì)頻率為1/7，500(Harper PS., Myotonic Dystrophy.London:ff.B.Saunders Company ；2001) 0DM1是由DMPKl的非編碼CTG重復(fù)的擴(kuò)大引起的常染色體顯性障礙。DMPKl為編碼胞質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸激酶(Brook JD等人，Cell，1992，68(4):799-808)。該激酶的生理功能和底物還未完全確定。擴(kuò)大的CTG重復(fù)位于DMPKl的3'非翻譯區(qū)(UTR)。該空談導(dǎo)致RNA顯性(RNAdominance),其中包含擴(kuò)大的CUG重復(fù)的RNA (CUGexp)誘導(dǎo)細(xì)胞功能障礙的過(guò)程(OsborneRJ 和 Thornton CA., Human Molecular Genetics., 2006, 15(2):R162_R169)。DMPK基因通常在3'非翻譯區(qū)具有個(gè)5-37CTG重復(fù)。在肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良I型中，該數(shù)目顯著擴(kuò)大，在例如50至大于3，500的范圍內(nèi)(Harper，肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良(Saunders, London, ed.3, 2001) ；Annu.Rev.Neurosc1.29:259, 2006 ；EMB0 J.19:4439，2000 ；Curr Opin Neurol.20:572,2007)。CUGexp片段與RNA結(jié)合蛋白包括盲肌樣(MBNL)蛋白(剪接因子)相互作用，并且引起突變的轉(zhuǎn)錄物保留在細(xì)胞核聚集點(diǎn)(nuclear foci)。該RNA的毒性源自RNA結(jié)合蛋白的隔離和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活。動(dòng)物模型的研究已顯示如果減少CUGexp RNA的毒性，則可逆轉(zhuǎn) DMl 的表型(Wheeler TM 等人，Science.，2009，325 (5938): 336-339 ；Mulders SA 等人，Proc Natl Acad Sci USA., 2009, 106(33):13915-13920)。在DMl中，骨骼肌是受到最嚴(yán)重影響的組織，但疾病也對(duì)心臟和平滑肌、眼睛水晶體(ocular len)和腦具有重大影響。頡、遠(yuǎn)肢(distal limb)和膈肌也優(yōu)先受到影響。手靈巧度較早受損，這引起數(shù)十年的嚴(yán)重失能。死亡年齡中位數(shù)為55歲，通常死于呼吸衰竭(de Die-Smulders CE 等人，Brain.，1998，121 (Pt8):1557-1563)。反義技術(shù)正新興為調(diào)節(jié)某些基因產(chǎn)物的表達(dá)的有效工具，并且從而可證明在許多關(guān)于DMPKl的調(diào)節(jié)的治療、診斷和研究應(yīng)用中具有獨(dú)特用途。已顯示靶向CAG重復(fù)的完全經(jīng)修飾的寡核苷酸的肌內(nèi)注射在小鼠中阻斷CUGexp-MBNLl復(fù)合物的形成，分散CUGexp轉(zhuǎn)錄物的細(xì)胞核聚集點(diǎn)，增強(qiáng)核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)(nucleocytoplasmic transport)和CUGexp轉(zhuǎn)錄物的釋放，將MBNL蛋白釋放 至核質(zhì)，標(biāo)準(zhǔn)化MBNL-依賴(lài)性外顯子的選擇性剪接，和消除表達(dá)CUGexp 的轉(zhuǎn)基因小鼠的肌強(qiáng)直(Wheeler TM 等人，Science.，2009，525(5938):336-339 ；W02008/036406)。 目前，不存在可改變DMl的過(guò)程的治療。因此疾病負(fù)擔(dān)是明顯的。因此，本文中的目的是提供用于治療DMl的化合物、組合物和方法。概述本文中提供了用于抑制DMPK表達(dá)和治療、預(yù)防、延遲或改善DMPK相關(guān)疾病和/或其癥狀的方法、化合物和組合物。在某些實(shí)施方案中，該化合物和組合物抑制突變的DMPK或 CUGexp DMPK0某些實(shí)施方案提供了減少動(dòng)物中的DMPK表達(dá)的方法，包括給動(dòng)物施用包含本文中進(jìn)一步描述的靶向DMPK的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物。某些實(shí)施方案提供了優(yōu)先減少CUGexp DMPK、減少肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變的方法，包括給動(dòng)物施用包含本文中進(jìn)一步描述的靶向CUGexp DMPK的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物。由于它們?cè)诩?xì)胞核中的更長(zhǎng)的停留時(shí)間，CUGexp DMPK轉(zhuǎn)錄物據(jù)信對(duì)于通過(guò)細(xì)胞核核糖核酸酶的反義敲低特別敏感，并且該敏感性據(jù)認(rèn)為允許相關(guān)組織(例如肌肉)中的CUGexp DMPK轉(zhuǎn)錄的有效反義抑制，盡管存在對(duì)反義寡核苷酸的組織吸收的生物分布屏障。不通過(guò)細(xì)胞核核糖核酸酶引發(fā)裂解的反義機(jī)制例如W heeler TM等人，Science.，2009，325(5938):336-339 和 W02008/036406 中描述的 CAG-重復(fù) AS0，不提供相同的治療有利方面。某些實(shí)施方案提供治療患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的動(dòng)物中的方法。在某些實(shí)施方案中，該方法包括給動(dòng)物施用治療有效量的包含本文中進(jìn)一步描述的靶向DMPK的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物。在某些實(shí)施方案中，該方法包括鑒定患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的動(dòng)物。某些實(shí)施方案提供了治療、預(yù)防、延遲或改善與DMl的發(fā)展相關(guān)的病癥和結(jié)果，其包括肌肉僵硬(muscle stiffness)、肌強(qiáng)直、遠(yuǎn)端肢體無(wú)力(disabling distalweakness)、面部肌肉和顎肌無(wú)力(weakness in face and jaw muscles)、吞咽困難、舉抬無(wú)力(上瞼下垂)、頸肌無(wú)力(weakness of neck muscles)、手臂和腿部肌肉無(wú)力(weakness in arm and leg muscles)、持久性肌肉疼痛(persistent muscle pain)、嗜睡癥(hypersomnia)、肌萎縮、咽下困難(dysphagia)、呼吸功能不全(respiratoryinsufficiency)、心律不齊(irregular heartbeat)、心肌損傷(heart muscle damage)、情感淡漠(apathy)、胰島素抗藥性(insulin resistance)和白內(nèi)障的方法。某些實(shí)施方案提供了治療、預(yù)防、延遲或改善兒童的與DMl的發(fā)展相關(guān)的病癥和結(jié)果(括發(fā)育遲滯、學(xué)習(xí)問(wèn)題、語(yǔ)言和言語(yǔ)問(wèn)題以及人格發(fā)展問(wèn)題)方法。某些實(shí)施方案提供了施用通過(guò)直接裂解病原性轉(zhuǎn)錄抵消RNA顯性的反義寡核苷酸的方法。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)ΝΜ_001081560.I所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:1) ο在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)ΝΤ_011109.15所示的從核苷酸18540696至18555106截?cái)嗟男蛄?本文中合為SEQ ID NO:2)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)ΝΤ_039413.7所示的從核苷酸16666001至16681000截?cái)嗟男蛄?本文中合為SEQ ID NO:3) 0在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)ΝΜ_032418.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:4)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)A1007148.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:5)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)AI304033.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:6)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有如GenBank登錄號(hào)BC024150.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:
7)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)BC056615.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:8)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)BC075715.1所示的序列(在本文中合為SEQ ID NO:793)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)BU519245.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:794)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)CB247909.1中所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:795)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)CX208906.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:796)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)CX732022.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:797)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)S60315.1所示的序列(本文中合為SEQ IDNO:798)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)S60316.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:799)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)NM001081562.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:800)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)NM_001100.3所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:801)。詳細(xì)描述應(yīng)理解，上述一般描述和下列詳細(xì)描述僅僅是示例性的和說(shuō)明性的并且不限制本發(fā)明，如所描述的。在本文中，除非另外聲明，否則單數(shù)的使用包括復(fù)數(shù)。在本文中，除非另外聲明，否則”或”的用途意指”和/或”。此外，術(shù)語(yǔ)”包括”以及其它形式例如”包含”和”含有”的用途不是限制性的。同樣地，除非另外聲明，否則術(shù)語(yǔ)例如“成分”或”組分”包括包含一個(gè)單位的成分和組分以及包含超過(guò)一個(gè)亞單位的成分和組分。本文中使用的部分的標(biāo)題僅為了組織目的并且不被解釋為限制描述的主題。本申請(qǐng)中引用的所有文獻(xiàn)或文獻(xiàn)的部分包括但不限于專(zhuān)利、專(zhuān)利申請(qǐng)、文章、書(shū)籍和論文通過(guò)引用以本文中描述的文獻(xiàn)的部分以及以其全文并入本文。

定義除非提供明確的定義，否則本文中描述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)以及醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)結(jié)合使用的命名法以及方法和技術(shù)是本領(lǐng)域公知的且通常使用的命名法以及方法和技術(shù)。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可用于化學(xué)合和化學(xué)分析。當(dāng)允許時(shí)，所有專(zhuān)利、申請(qǐng)、公開(kāi)的申請(qǐng)和其它出版物、可通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)例如國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI)獲得的GENBANK登錄號(hào)和相關(guān)序列信息以及在整個(gè)本公開(kāi)內(nèi)容中提及的其它數(shù)據(jù)通過(guò)引用以本文中論述的文獻(xiàn)的部分以及以其整體并入本文。除非另外指出，否則下列術(shù)語(yǔ)具有下列含義:“2' -O-甲氧基乙基”(也為Y -MOE和Y -O(CH2)2-OCH3)稱(chēng)為呋喃?；h(huán)的2'位置的O-甲氧基-乙基修飾。經(jīng)W -O-甲氧基乙基修飾的糖為經(jīng)修飾的糖?！?' -O-甲氧基乙基核苷酸”意指包含經(jīng)2' -O-甲氧基乙基修飾的糖部分的核苷酸?！?5-甲基胞嘧啶”意利用連接于位置5的的甲基經(jīng)修飾的的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶為經(jīng)修飾的核堿基。“約”意指值的±7%。例如，如果說(shuō)到“化合物影響DMPK的抑制的至少70%”，則其意指DMPK水平被抑制的程度在63%與77%之間的范圍內(nèi)。“活性藥物試劑”意指當(dāng)給個(gè)體施用時(shí)提供治療益處的藥物組合物中的物質(zhì)。例如，在某些實(shí)施方案中，靶向DMPK的反義寡核苷酸為活性藥物試劑。“活性靶區(qū)域”或“靶區(qū)域”意指一種或多種活性反義化合物被靶向的區(qū)域。“活性反義化合物”意指降低靶核酸水平或蛋白質(zhì)水平的反義化合物?！鞍殡S施用的”是指兩種試劑以其中兩者的藥理學(xué)作用在患者同時(shí)表現(xiàn)的任何方式進(jìn)行的共施用。伴隨施用劑量不需要將兩種試劑以單一藥物組合物、以相同劑量形式或通過(guò)相同施用途徑進(jìn)行施用。兩種試劑的作用本身不一定同時(shí)表現(xiàn)。作用只需重疊一段時(shí)間而不必共同延伸。“施用”意指給動(dòng)物提供試劑，且包括但不限于通過(guò)醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)人員施用和自已施用。“試劑”意指當(dāng)給動(dòng)物施用時(shí)可提供治療益處的活性物質(zhì)?！暗谝辉噭币庵副景l(fā)明的治療性化合物。例如，第一試劑可以是靶向DMPK的反義寡核苷酸?！暗诙噭币庵副景l(fā)明的第二治療性化合物(例如，靶向DMPK的第二反義寡核苷酸)和/或非DMPK治療性化合物。“改善”是指相關(guān)疾病、病癥或病狀的至少一個(gè)指征、體征或癥狀的減輕。指征的嚴(yán)重度可通過(guò)主觀或客觀測(cè)量來(lái)測(cè)定，這對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是已知的?！皠?dòng)物”是指人或非人動(dòng)物，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、狗、貓、豬和非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物(包括但不限于猴和黑猩猩)?！胺戳x活性”意指可歸因于反義化合物與其靶核酸的雜交的任何可檢測(cè)或可測(cè)量的活性。在某些實(shí)施方案中，反義活性為靶核酸或由這樣的靶核酸編碼的蛋白質(zhì)的量或表達(dá)的減少?！胺戳x化合物”意指能夠經(jīng)歷通過(guò)氫鍵合與靶核酸雜交的寡聚化合物。反義化合物的實(shí)例包括單鏈和雙鏈化合物，例如反義寡核苷酸、siRNA, shRNA, snoRNA.miRNA和附屬物(satellite)重復(fù)。“反義抑制”意指在與靶核酸化合物互補(bǔ)的反義化合物存在的情況下靶核酸水平或靶蛋白質(zhì)水平與在所述反義化合物不存在的情況下的靶核酸水平或靶蛋白質(zhì)水平相比較的降低。“反義寡核苷酸”意指具有允許與靶核酸的相應(yīng)區(qū)域或片段雜交的核堿基序列的單鏈寡核苷酸。“二環(huán)糖”意指通過(guò)兩個(gè)非成對(duì)碳環(huán)原子的橋連修飾的呋喃基環(huán)。二環(huán)糖是經(jīng)修飾的糖?！岸h(huán)核酸”或“BNA”是指其中核苷或核苷酸的呋喃糖部分包括連接呋喃糖環(huán)上的兩個(gè)碳原子從而形成二環(huán)環(huán)系統(tǒng)的橋的核苷或核苷酸?！懊睜罱Y(jié)構(gòu)”或“端帽部分”意指經(jīng)化學(xué)修飾的，其已被整合在反義化合物的任一端?！盎瘜W(xué)上不同的區(qū)域”是指以一定方式在化學(xué)上與相同反義化合物的另一個(gè)區(qū)域不同的反義化合物的區(qū)域。例如，具有2' -O-甲氧基乙基核苷酸的區(qū)域在化學(xué)上與具有不具有經(jīng)2' -O-甲氧基乙基修飾的核苷酸的區(qū)域不同。
“嵌合反義化合物”意指具有至少兩個(gè)化學(xué)上不同的區(qū)域的反義化合物。“共施用”是指兩種或更多種試劑對(duì)個(gè)體的施用。兩種或更多種試劑可存在于單一藥物組合物中，或可存在于單獨(dú)的藥物組合物。兩種或更多種試劑的每一種可通過(guò)相同或不同的施用途徑來(lái)施用。共施用包括平行或相繼施用。“互補(bǔ)性”意指第一核酸與第二核酸的核堿基之間配對(duì)的能力。“連續(xù)核堿基”意指彼此直接毗連的核堿基?！癈UGexp DMPK”意指包含擴(kuò)大的CUG重復(fù)(CUGexp)的突變的DMPK RNA。野生型DMPK基因在Y非翻譯區(qū)中具有5-37個(gè)CTG重復(fù)。在“CUGexp DMPK”(例如在肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良I型患者)中，該數(shù)目顯著擴(kuò)大，在(例如)50至超過(guò)3，500個(gè)的范圍內(nèi)(Harper，肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良(Sa unders, London, ed.3, 2001) ；Annu.Rev.Neurosc1.29:259, 2006 ；EMB0J.19:4439, 2000 ；Curr Opin Neurol.20:572,2007)?！跋♂寗币庵附M合物中缺乏藥理學(xué)活性但為制藥上必需或期望的成分。例如，注射組合物中的稀釋劑可以為液體例如鹽溶液。“DMPK”意指DMPK的任何核酸或蛋白質(zhì)。DMPK可以為突變的DMPK，包括CUGexpDMPK核酸?！癉MPK表達(dá)”意指從編碼DMPK的基因轉(zhuǎn)錄的mRNA的水平或從mRNA翻譯的蛋白質(zhì)的水平。DMPK表達(dá)可由本領(lǐng)域已知的方法(例如Northern或Western印跡法)來(lái)測(cè)定?！癉MPK核酸”意指任何編碼DMPK的核酸。例如，在某些實(shí)施方案中，DMPK核酸包括編碼DMPK的DNA序列、從編碼DMPK的DNA(包括包含內(nèi)含子和外顯子的基因組DNA)轉(zhuǎn)錄的RNA序列以及編碼DMPK的mRNA或mRNA前體序列?！癉MPK mRNA”意指編碼DMPK蛋白的 mRNA?！皠┝俊币庵竼未问┯没蛑付ǖ臅r(shí)期中提供的藥物試劑的指定量。在某些實(shí)施方案中，可以以一次、兩次或更多次推注(boluses)、片劑或注射施用劑量。例如，在其中期望皮下施用的某些實(shí)施方案中，期望的劑量需要不易被單次注射容納的體積，因此，可使用兩次或更多次注射來(lái)實(shí)現(xiàn)期望的劑量。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)在長(zhǎng)期過(guò)程中或連續(xù)地輸注藥物。劑量可表示為每小時(shí)、每天、每周或每月的藥物試劑的量?！坝行Я俊被颉爸委熡行Я俊币庵缸阋栽谛枰噭┑膫€(gè)體中實(shí)現(xiàn)期望的生理結(jié)果的活性藥物試劑的量。取決于待治療的個(gè)體的健康和身體狀況，待治療的個(gè)體的分類(lèi)群，組合物的制劑，個(gè)體醫(yī)學(xué)狀況的評(píng)估以及其它相關(guān)因素，有效量在個(gè)體間可變化?！巴耆パa(bǔ)”或“ 100%互補(bǔ)”意指第一核苷酸的核堿基序列的每一個(gè)核堿基在第二核酸的第二核堿基序列中具有互補(bǔ)核堿基。在某些實(shí)施方案中，第一核酸為反義化合物并且靶核酸為第二核酸?！翱障毒畚?gapmer) ”意指其中具有多個(gè)支持RNA酶H裂解的核苷酸的內(nèi)部區(qū)位于具有一個(gè)或多個(gè)核苷的外側(cè)區(qū)之間的嵌合反義化合物，其中包含內(nèi)部區(qū)的核苷在化學(xué)上與包含外側(cè)區(qū)的核苷不同。內(nèi)部區(qū)可稱(chēng)為“空隙區(qū)段(gap segment)”，且外側(cè)區(qū)可稱(chēng)為“翼區(qū)段”?！霸鰧挼目障?Gap-widened) ”意指具有位于具有I至6個(gè)核苷的5 ^與:V翼區(qū)段之間并且與其緊鄰的12個(gè)或更多個(gè)連續(xù)2'-脫氧核糖核苷的空隙區(qū)段的嵌合反義化合物。
“雜交”意指互補(bǔ)核酸分子的退火。在某些實(shí)施方案中，互補(bǔ)核酸分子包括反義化合物和靶核酸?！拌b定患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的動(dòng)物”意指鑒定已被診斷患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良、病癥或病狀的動(dòng)物或鑒定易于發(fā)生I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良、病癥或病狀的動(dòng)物。例如，具有家族史的個(gè)體可易于患I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良、病癥或病狀。這樣的鑒定可利用任何方法(包括評(píng)估個(gè)體的醫(yī)療史以及標(biāo)準(zhǔn)臨床測(cè)試或評(píng)估)來(lái)實(shí)現(xiàn)。“緊鄰”意指緊密相鄰的成分之間不存在間插成分?！皞€(gè)體”意指被選擇來(lái)進(jìn)行治療或醫(yī)治的人或非人動(dòng)物?！昂塑臻g連接”是指核苷間的化學(xué)鍵?！斑B接的核苷”意指通過(guò)核苷間連接鍵合或連接在一起的相鄰核苷?！板e(cuò)配”或“非互補(bǔ)核堿基”是指當(dāng)?shù)谝缓怂岬暮藟A基不能與第二或靶核酸的對(duì)應(yīng)核堿基配對(duì)時(shí)的情況?！敖?jīng)修飾的核苷間連接”是指天然存在的核苷間鍵(即磷酸二酯核苷間鍵)的替代和來(lái)自其的任何改變?！敖?jīng)修飾的核堿基”是指除腺嘌呤、胞嘧啶、鳥(niǎo)嘌呤、胸苷或尿嘧啶的任何核堿基。“未經(jīng)修飾的核堿基”意指嘌呤堿腺嘌呤(A)和鳥(niǎo)嘌呤(G)和嘧啶堿基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)?！敖?jīng)修飾的核苷酸”意指獨(dú)立地具有經(jīng)修飾的糖部分、經(jīng)修飾的核苷之間的連接或經(jīng)修飾的核堿基的核苷酸。 “經(jīng)修飾的核苷”意指獨(dú)立地具有經(jīng)修飾的糖部分或經(jīng)修飾的核堿基的核苷?！敖?jīng)修飾的寡核苷酸”意指包含至少一個(gè)經(jīng)修飾的核苷酸的寡核苷酸?！敖?jīng)修飾的糖”是指天然糖的替代或來(lái)自天然糖的改變?！盎?Motif) ”意指反義化合物的化學(xué)上不同的區(qū)域的模式。“肌強(qiáng)直”意指在隨意收縮或電刺激后肌肉的異常緩慢松弛?！凹?xì)胞核核糖核酸酶”意指在細(xì)胞核中發(fā)現(xiàn)的核糖核酸酶。細(xì)胞核核糖核酸酶包括但不限于RNA酶H (包括RNA酶Hl和RN酶H2)、雙鏈RNA酶drosha和其它雙鏈RNA酶?！疤烊淮嬖诘暮塑臻g連接”意指3'至5'的磷酸二酯鍵?！疤烊惶遣糠帧币庵冈贒NA (2' -H)或RNA (2' -0H)中發(fā)現(xiàn)的糖?！昂怂帷笔侵赣蓡误w核苷酸組成的分子。核酸包括核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸(DNA)、單鏈核酸、雙鏈核酸、小干擾核糖核酸(siRNA)和微RNA(miRNA)。核酸還可在單個(gè)分子中包含此類(lèi)成分的組合?！昂藟A基”意指能夠與另一個(gè)核酸的堿基配對(duì)的雜環(huán)部分?！昂藟A基序列”意指不依賴(lài)于任何糖、連接或核堿基修飾的連續(xù)核堿基的順序?！昂塑铡币庵高B接于糖的核堿基?！昂塑漳M物”包括用于替換寡聚化合物的一個(gè)或多個(gè)位置上的糖或糖及堿基以及不一定連接的那些結(jié)構(gòu)，例如具有嗎啉代、環(huán)己烯基、環(huán)己基、四氫吡喃基、二環(huán)或三環(huán)糖模擬物例如非呋喃糖單位的核苷模擬物?！昂塑账帷币庵妇哂泄矁r(jià)連接于核苷的糖部分的磷酸基的核苷。“核苷酸模擬物”包括用于替換寡聚化合物的一個(gè)或多個(gè)位置上的核苷和連接的那些結(jié)構(gòu)，例如肽核酸或嗎啉代(通過(guò)-N(H) -C (=0) -O-或其它非-磷酸二酯鍵連接的嗎啉代)?！肮丫刍衔铩被颉肮丫畚铩币庵改軌蚺c核酸分子的至少一個(gè)區(qū)域雜交的連接的單體亞單位的聚合物?！肮押塑账帷币庵高B接的核苷的聚合物，所述每一個(gè)核苷可彼此獨(dú)立地被修飾或未被修飾?！拔改c外施用”意指通過(guò)注射或輸注進(jìn)行的施用。胃腸外施用包括皮下施用、靜脈內(nèi)施用、肌內(nèi)施用、動(dòng)脈內(nèi)施用、腹膜內(nèi)施用或顱內(nèi)施用(例如鞘內(nèi)或腦室內(nèi)施用)。施用可以是連續(xù)的或長(zhǎng)期的，或短暫的或間斷性的?！半摹币庵竿ㄟ^(guò)酰胺鍵連接至少兩個(gè)氨基酸形成的分子。肽指多肽或蛋白質(zhì)。“藥物組合物·”意指適用于給個(gè)體施用的物質(zhì)的混合物。例如，藥物組合物可包含一種或多種活性劑和無(wú)菌水溶液?！八帉W(xué)上可接受的鹽”意指反義化合物的生理和藥學(xué)上可接受的鹽，即保持親代寡核苷酸的期望的生物活性并且不賦予其不期望的毒理效應(yīng)的鹽?！傲虼姿狨ミB接”意指核苷之間的連接，其中通過(guò)用硫原子替代非橋鍵氧原子中的一個(gè)修飾的磷酸二酯鍵。硫代磷酸酯連接是經(jīng)修飾的核苷間連接?！安糠帧币庵负怂岬拇_定數(shù)量的連續(xù)(即連接的)核堿基。在某些實(shí)施方案中，部分為靶核酸的確定數(shù)量的連續(xù)核堿基。在某些實(shí)施方案中，部分為反義化合物的確定數(shù)量的連續(xù)核堿基。 “優(yōu)先地減少CUG exp DMPK RNA”是指相對(duì)于來(lái)自正常DMPK等位基因的RNA轉(zhuǎn)錄物，來(lái)自CUGexp DMPK等位基因的RNA轉(zhuǎn)錄物的優(yōu)先減少。“預(yù)防”是指延遲或預(yù)先阻止疾病、病癥或病狀的發(fā)作或發(fā)展從數(shù)分鐘至無(wú)限期的一段時(shí)間。預(yù)防還意指降低發(fā)生疾病、病癥或病狀的風(fēng)險(xiǎn)?！扒绑w藥物”意指以無(wú)活性形式制備的治療劑，其在體內(nèi)或其細(xì)胞內(nèi)通過(guò)內(nèi)源酶或其它化學(xué)藥品或條件的作用被轉(zhuǎn)化成活性形式?！案弊饔谩币庵缚蓺w因于治療的除期望的效應(yīng)外的生理反應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，副作用包括注射部位反應(yīng)、肝功能測(cè)試異常、腎功能異常、肝毒性、腎毒性、中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常、肌病和全身乏力。例如，血清中氨基轉(zhuǎn)移酶水平升高可表示肝毒性或肝功能異常。例如，膽紅素增大可表示肝毒性或肝功能異常?！皢捂湽押塑账帷币庵覆慌c互補(bǔ)鏈雜交的寡核苷酸。“可特異性雜交的”意指這樣的反義化合物，所述反義化合物在反義寡核苷酸與靶核酸之間具有足夠程度的互補(bǔ)性以誘導(dǎo)期望的作用，同時(shí)在其中期望特異性結(jié)合的條件下，即在體內(nèi)測(cè)定和治療性治療的情況下在生理?xiàng)l件下顯示對(duì)非靶核酸具有最小的作用或無(wú)作用?！凹艚硬∽儭币庵笇?dǎo)致特定組織中改變的剪接產(chǎn)物的表達(dá)的一種或多種RNA的選擇性剪接?！捌は率┯谩币庵妇驮谄つw下面的施用。“糖替代物”與略微更廣的術(shù)語(yǔ)“核苷模擬物”交疊，但意欲表示僅替代糖單位(呋喃糖環(huán))。本文中提供的四氫呋喃環(huán)舉例說(shuō)明了其中呋喃糖基已被四氫呋喃糖環(huán)系統(tǒng)替代的糖替代物的實(shí)例。“靶向”或“被靶向的”意指將與靶核酸特異性雜交并且誘導(dǎo)期望的作用的反義化合物的設(shè)計(jì)和選擇的方法?！鞍泻怂帷?、“靶RNA”和“靶RNA轉(zhuǎn)錄物”全都指能夠被反義化合物靶向的核酸?！鞍袇^(qū)段”意指反義化合物所靶向的靶核酸的核苷酸的序列?！?'靶位點(diǎn)”是指靶區(qū)段的5'最末端核苷酸?！?'靶位點(diǎn)”是指靶區(qū)段的3'最末端核苷酸?！爸委熡行Я俊币庵附o個(gè)體提供治療益處的試劑的量?！爸委煛笔侵甘┯盟幬锝M合物以實(shí)現(xiàn)疾病的、病癥或病狀的改變或改善?！癐型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良”或“DM1”意指由DMPK的非編碼CTG重復(fù)的擴(kuò)大引起的常染色體顯性病癥。該突變導(dǎo)致RNA顯性，其中包含擴(kuò)大的CUG重復(fù)(CUGexp)的RNA的表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞功能障礙的過(guò)程。CUGexp片段與RNA結(jié)合蛋白相作用并且引起突變的轉(zhuǎn)錄保留在細(xì)胞核聚集點(diǎn)。該RNA的毒性源于RNA結(jié)合蛋白的隔離和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活。“未經(jīng)修飾的核苷酸”意指由天然存在的核堿基、糖部分和核苷間連接組成的核苷酸。在某些實(shí)施方案中，未經(jīng)修飾的 核苷酸為RNA核苷酸(即β -D-核糖核苷)或DNA核苷酸(即β -D-脫氧核糖核苷)。某些實(shí)施方案某些實(shí)施方案提供了用于抑制DMPK表達(dá)的方法、化合物和組合物。某些實(shí)施方案提供了減少動(dòng)物中的DMPK表達(dá)的方法，包括給動(dòng)物施用包含靶向DMPK的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物。某些實(shí)施方案提供了優(yōu)先減少動(dòng)物中的CUGexp DMPK RNA、減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變的方法，包括給動(dòng)物施用包含靶向DMPK的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中經(jīng)修飾的寡核苷酸優(yōu)先減少動(dòng)物中的CUGexp DMPK RNA、減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變。某些實(shí)施方案提供了施用反義寡核苷酸以通過(guò)直接裂解病原性轉(zhuǎn)錄物來(lái)抵消RNA顯性的方法。某些實(shí)施方案提供了減少Sercal的剪接病變的方法。在某些實(shí)施方案中，本文中提供的方法導(dǎo)致外顯子22包含(inclusion)。在某些實(shí)施方案中，校正剪接(correctivesplicing)在脛骨前肌、腓腸肌和四頭肌中發(fā)生。某些實(shí)施方案提供了減少了 m-肌聯(lián)蛋白的剪接病變的方法。在某些實(shí)施方案中，本文中提供的方法導(dǎo)致外顯子5包含。在某些實(shí)施方案中，校正剪接在脛骨前肌、腓腸肌和四頭肌中發(fā)生。某些實(shí)施方案提供了減少Clcnl的剪接病變的方法。在某些實(shí)施方案中，本文中提供的方法導(dǎo)致外顯子7a包含。在某些實(shí)施方案中，校正剪接在脛骨前肌、腓腸肌和四頭肌中發(fā)生。某些實(shí)施方案提供了減少Zasp的剪接病變的方法。在某些實(shí)施方案中，本文中提供的方法導(dǎo)致外顯子11包含。在某些實(shí)施方案中，校正剪接在脛骨前肌、腓腸肌和四頭肌中發(fā)生。某些實(shí)施方案提供了用于治療患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的動(dòng)物的方法，包括:a)鑒定患有I肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的所述動(dòng)物，和b)給所述動(dòng)物施用治療有效量的包含靶向DMPK的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物。在某些實(shí)施方案中，給動(dòng)物施用的化合物的治療有效量?jī)?yōu)先減少動(dòng)物中的CUGexp DMPK RNA、減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變。某些實(shí)施方案提供了實(shí)現(xiàn)CUGexp DMPK RNA的優(yōu)先減少的方法，包括給懷疑患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良或具有CUGexp DMPK RNA的受試者施用與所述CUGexp DMPK RNA的非重復(fù)區(qū)域互補(bǔ)的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸。當(dāng)與所述CUGexp DMPK RNA結(jié)合時(shí)，經(jīng)修飾的反義寡核苷酸實(shí)現(xiàn)CUGexp DMPK RNA的優(yōu)先減少。某些實(shí)施方案提供了實(shí)現(xiàn)CUGexp DMPK RNA的優(yōu)先減少的方法，包括選擇患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良或具有CUGexp DMPK RNA的受試者以及給所述受試者施用與所述CUGexp DMPK RNA的非重復(fù)區(qū)域互補(bǔ)的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸。當(dāng)結(jié)合CUGexp DMPK RNA時(shí)，經(jīng)修飾的反義寡核苷酸激活核糖核酸或細(xì)胞核核糖核酸酶，從而實(shí)現(xiàn)CUGexp DMPK RNA在細(xì)胞核中的優(yōu)先減少。某些實(shí)施方案提供了實(shí)現(xiàn)CUGexp DMPK RNA的優(yōu)先減少的方法，包括選擇患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良或具有突變的或CUGexp DMPK RNA的受試者以及給所述受試者全身性施用與所述CUGexp DMPK RNA的非重復(fù)區(qū)域互補(bǔ)的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸。當(dāng)結(jié)合突變的或CUGexp DMPK RNA時(shí)，經(jīng)修飾的反義寡核苷酸實(shí)現(xiàn)突變的或CUGexp DMPK RNA的優(yōu)先減少。某些實(shí)施方案提供了減少有此需要的受試者的肌強(qiáng)直的方法。方法包括給受試者施用與DMPK RNA的非重復(fù)區(qū)域互補(bǔ)的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸，其中當(dāng)結(jié)合DMPK RNA時(shí)，經(jīng)修飾的反義寡核苷酸激活核糖核酸酶或細(xì)胞核糖核酸酶，從而減少肌強(qiáng)直。在某些實(shí)施方案中，受試者患有或懷疑患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良或具有突變的DMPK RNA或CUGexpDMPK RNA。在某些實(shí)施方案中，DMPK RNA被保留在細(xì)胞核中。某些實(shí)施方案提供了減少有此需要的受試者的剪接病變的方法。方法包括給受試者施用與DMPK RNA的非重復(fù)區(qū)域互補(bǔ)的經(jīng)修飾的`反義寡核苷酸，其中當(dāng)結(jié)合DMPK RNA時(shí)，經(jīng)修飾的反義寡核苷酸激活核糖核酸酶或細(xì)胞核糖核酸酶，從而減少剪接病變。在某些實(shí)施方案中，受試者患有或懷疑患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良或具有保留在細(xì)胞核中的CUGexpDMPK RNA。在某些實(shí)施方案中，DMPK RNA被保留在細(xì)胞核中。在某些實(shí)施方案中，剪接病變?yōu)镸BNL依賴(lài)性剪接病變。在某些實(shí)施方案中，該方法的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸是嵌合的。在某些實(shí)施方案中，該方法的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸為空隙聚物。在本文中提供的方法的某些實(shí)施方案中，施用是皮下施用。在某些實(shí)施方案中，施用是靜脈內(nèi)施用。在某些實(shí)施方案中，方法的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸靶向DMPK RNA的非重復(fù)區(qū)域內(nèi)的非編碼序列。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸靶向突變的DMPK RNA的編碼區(qū)、內(nèi)含子、5' UTR 或 3' UTR0在本文中提供的方法的某些實(shí)施方案中，細(xì)胞核核糖核酸酶為RNA酶Hl。在該方法的某些實(shí)施方案中，減少肌肉組織的DMPK RNA。在某些實(shí)施方案中，突變的 DMPK RNA CUGexp DMPK RNA 優(yōu)先被減少。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)NM_001081560.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:1) ο在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)NT_011109.15所示的從核苷酸18540696至18555106截?cái)嗟男蛄?本文中合為SEQ ID NO:2)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)NT039413.7所示的從核苷酸16666001至16681000截?cái)嗟男蛄?本文中合為SEQ ID NO:3) 0在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)NM032418.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:4)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)A1007148.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:5)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)AI304033.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:6)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)BC024150.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:7)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)BC056615.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:8)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)BC075715.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:793)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)BU519245.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:794)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)CB247909.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:795)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)CX208906.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:796)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)CX732022.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:797)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)S60315.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:798)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)S60316.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:799)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)NM_001081562.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:800)。在某些實(shí)施方案中，DMPK具有GenBank登錄號(hào)ΝΜ_001100.3所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:801)。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 12_156、160-770和774-792的任一個(gè)中引用的核堿基序列的至少8個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸具有包含SEQ ID NO:12-156、160-770和774-792的任一個(gè)中引用的核堿基序列的至少9、至少10或至少11個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 12-156、160-770和774-792的任一個(gè)中引用 的核堿基序列的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸具有包含SEQ ID NO:12-156、160-770和774-792的任一個(gè)中引用的核堿基序列的至少13個(gè)、至少14個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 12-156、160-770和774-792的任一個(gè)中引用的核堿基序列的至少15個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸具有包含SEQ ID NO:12-156、160-770和774-792的任一個(gè)中引用的核堿基序列的至少16個(gè)或至少17個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 12_156、160-770和774-792的任一個(gè)中引用的核堿基序列的至少18個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸具有包含SEQ ID NO:12-156、160-770和774-792的任一個(gè)中引用的核堿基序列的至少19個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。在某些實(shí)施方案中，本文中提供的經(jīng)修飾的寡核苷酸被靶向SEQ ID N0:1的下列區(qū)域的任一個(gè):1178-1206、2159-2182、2174-2196、2426-2447、2450-2518、2679-2704 和2697-2725。
在某些實(shí)施方案中，本文中提供的經(jīng)修飾的寡核苷酸被靶向SEQ ID NOl的下列區(qū)域的任一個(gè):178-223、232-253、279-299、366-399、519-541、923-975、1073-1105、I171-1196、1215-1246、1263-1324、1706-1734、1743-1763、1932-1979、1981-2003、2077-2108 和 2152-2173。在某些實(shí)施方案中，本文中提供的經(jīng)修飾的寡核苷酸被靶向SEQ ID N02的下列區(qū)域的任一個(gè):1251-1303、1305-1326、1352-1372、3762-3795、4170-4192、5800-5852、6124-6149、6168-6199、6216-6277、11979-12007、12016-12036、12993-13042、13044-13066,13140-13171和 3215-13236。在某些實(shí)施方案中，動(dòng)物為人。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物或組合物被指定為第一試劑并且本發(fā)明的方法還包括第二試劑。在某些實(shí)施方案中，共施用第一試劑和第二試劑；在某些實(shí)施方案中，相繼地或伴隨地共施用第一試劑和第二試劑。在某些實(shí)施方案中，施用包括胃腸外施用。

在某些實(shí)施方案中，化合物為單鏈經(jīng)修飾的寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO:1-8和793-801的任一個(gè)具有至少95%的互補(bǔ)性，如在所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體上所測(cè)量的。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO:1-8和793-801的任一個(gè)具有100%的互補(bǔ)性，如在所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體上測(cè)量的。在某些實(shí)施方案中，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少一個(gè)核苷間連接為經(jīng)修飾的核苷間連接。在某些實(shí)施方案中，每一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯核苷間連接。在某些實(shí)施方案中，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。在某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)經(jīng)修飾的糖為二環(huán)糖。在某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)經(jīng)修飾的糖包含2' -O-甲氧基乙基或4' _(CH2)n-0-2'橋，其中η為I或2。在某些實(shí)施方案中，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的核堿基。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的核堿基為5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸包含:a)由連接的脫氧核苷組成的空隙區(qū)段；b)由連接的核苷組成的5'翼區(qū)段；和c)由連接的核苷組成的3'翼區(qū)段?？障秴^(qū)段位于5'翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間并且每一個(gè)翼區(qū)段的每一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸包含:a)由連接的脫氧核苷組成的空隙區(qū)段；b)由5個(gè)連接的核苷組成的5'翼區(qū)段；和c)由5個(gè)連接的核苷組成的3'翼區(qū)段。空隙區(qū)段位于5'翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間，每一個(gè)翼區(qū)段的每一個(gè)核苷包含2' -O-甲氧基乙基糖，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的每一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯連接，并且所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的每一個(gè)胞嘧啶為5'-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接的核苷組成。某些實(shí)施方案提供了優(yōu)先減少動(dòng)物中的CUGexp DMPK RNA、減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變的方法，包括給動(dòng)物施用包含具有由10個(gè)連接的脫氧核苷組成的空隙區(qū)段、由5個(gè)連接的核苷組成的5'翼區(qū)段和由5個(gè)連接的核苷組成的3'翼區(qū)段的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物?？障秴^(qū)段位于5'翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間，每一個(gè)翼區(qū)段的每一個(gè)核堿基包含2’ -O-甲氧基乙基糖，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的每一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯連接，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸中的每一個(gè)胞嘧啶為5'-甲基胞嘧啶。某些實(shí)施方案提供了本文中描述的任何化合物在藥劑的制造中的用途，所述藥劑用于本文中描述的任何治療法。例如，某些實(shí)施方案提供了本文中描述的化合物用于制造用于治療、改善或或預(yù)防I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的藥劑的用途。某些實(shí)施方案提供了本文中描述的化合物用于制造用于抑制DMPK的表達(dá)以及治療、預(yù)防、延遲或改善DMPK相關(guān)疾病和/或其癥狀的藥劑的用途。某些實(shí)施方案提供了本文中描述的化合物用于制造用于減少動(dòng)物中的DMPK表達(dá)的藥劑的用途。某些實(shí)施方案提供了本文中描述的化合物用于制造用于優(yōu)先減少動(dòng)物中的CUGexp DMPK、減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變的藥劑的用途。某些實(shí)施方案提供了本文中描述的化合物用于制造用于治療患有I肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的動(dòng)物的藥劑的用途。某些實(shí)施方案提供了本文中描述的化合物用于制造藥劑的用途，所述藥劑用于治療、預(yù)防、延遲或改善與DMl的發(fā)展相關(guān)的病癥和結(jié)果包括肌肉僵硬、肌強(qiáng)直、遠(yuǎn)端肢體無(wú)力、面部肌肉和顎肌無(wú)力、吞咽困難、舉抬無(wú)力(上瞼下垂)、頸肌無(wú)力、手臂和腿部肌肉無(wú)力、持久性肌肉疼痛、嗜睡癥、肌萎縮、咽下困難、呼吸功能不全、心律不齊、心肌損傷、情感淡漠、胰島素抗藥性和白內(nèi)障。某些實(shí)施方案提供了本文中描述的化合物用于制造用于通過(guò)直接裂解病原性轉(zhuǎn)錄物來(lái)抵消RNA顯性的藥劑的用途。某些實(shí)施方案提供了用于治療、預(yù)防或改善本文中描述的I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的試劑盒，其中試劑包括:a)本文中描述的化合物；和任選地b)本文中描述的另外的試劑或療法。該試劑盒還可包括使用試劑盒治療、預(yù)防或改善I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的說(shuō)明書(shū)或標(biāo)簽。某些實(shí)施方案提供了用于本文中描述的任何治療法的本文中描述的任何化合物或組合物。例如，某些實(shí)施方案提供了本文中描述的用于抑制DMPK的表達(dá)以及治療、預(yù)防、延遲或改善DMPK相關(guān)疾病和/或其癥狀的化合物或組合物。某些實(shí)施方案提供了本文中描述的用于減少動(dòng)物中的DMPK表達(dá)的化合物或組合物。某些實(shí)施方案提供了本文中描述的用于優(yōu)先減少動(dòng)物中的CUGexp DMPK、減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變的化合物或組合物。某些實(shí)施方案提供了本文中描述的用于治療患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的動(dòng)物中的化合物或組合物。某些實(shí)施方案提供了本文中描述的用于治療、預(yù)防、延遲或改善與DMl的發(fā)展相關(guān)的癥狀和結(jié)果的化合物或組合物，所述癥狀或結(jié)果包括肌肉僵硬、肌強(qiáng)直、遠(yuǎn)端肢體無(wú)力、面部肌肉和顎肌無(wú)力、吞咽困難、舉抬無(wú)力(上瞼下垂)、頸肌無(wú)力、手臂和腿部肌肉無(wú)力、持久性肌肉疼痛、嗜睡癥、肌萎縮、咽下困難、呼吸功能不全、心律不齊、心肌損傷、情感淡漠、胰島素抗藥性和白內(nèi)障。。某些實(shí)施方案提供了本文中描述的用于通過(guò)指導(dǎo)病原性轉(zhuǎn)錄物的裂解來(lái)抵消RNA顯性的化合物或組合物。某些實(shí)施方案提供了由12至30個(gè)連接的核苷組成的經(jīng)修飾的寡核苷酸，其具有包含SEQ ID NO: 12-156、160-770和774-792的核堿基序列的任一個(gè)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。還提供了可用于本文中描述的方法的其它化合物。例如，某些實(shí)施方案提供了包含由10至80、12至50、12至30、15至30、18至24、19至22或20個(gè)連接的核苷 組成的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸具有包含 SEQ ID NO:41、44、76、109、153、320、321、322、325、329、335 和 657 的核堿基序列的任一個(gè)的至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。
某些實(shí)施方案提供了包含由10至80、12至50、12至30、15至30、18至24、19至22或20個(gè)連接的核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸具有包含SEQID NO:15、73、77、79、83、85、130、602、648、655、674和 680 的核堿基序列的任一個(gè)的至少 8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。某些實(shí)施方案包含由10至80、12至50、12至30、15至30、18至24、19至22或20個(gè)連接的核苷組成的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸具有包含與等長(zhǎng)度的 SEQ ID NO:1 的 664-683、773-792、926-945、927-946、928-947、931-950、935-954、941-960、2089-2108、2163-2182、2490-2509、2499-2518、2676-2695、2685-2704、2676-2695、2688-2707、2697-2716、2764-2783 和 2770-2789 的核堿基的部分互補(bǔ)的至少 8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19或更多個(gè)連續(xù)核堿基的部分的核堿基序列，其中核堿基序列與SEQ ID NO:1互補(bǔ)。某些實(shí)施方案提供了包含由10至80、12至50、12至30、15至30、18至24、19至22或20個(gè)連接的核苷組成的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸具有包含與等長(zhǎng)度的 SEQ ID NO:2 的 812-831、3629-3648、4447-4466、4613-4632、5803-5822、
5804-5823,5805-5824,5808-5827,5818-5837,6794-6813,12463-12482,13152-13171 和13553-13572的核堿基的部分互補(bǔ)的至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19或更多個(gè)連續(xù)核堿基的部分的核堿基序列，其中核喊基序列與SEQ ID NO:2互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸為單鏈寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO:1_8和793-801的任一個(gè)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%的互補(bǔ)性。在某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷間連接為經(jīng)修飾的核苷間連接。在某些實(shí)施方案中，每一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯核苷間連接。在某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。在某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)經(jīng)修飾的糖為二環(huán)糖。在某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)經(jīng)修飾的糖包含W -O-甲氧基乙基。在某些實(shí)施方案中，至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的核苷。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的核堿基為5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸包含:由連接的脫氧核苷組成的空隙區(qū)段；由連接的核苷組成的5'翼區(qū)段；和由連接的核苷組成的3'翼區(qū)段；其中空隙區(qū)段位于5'翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間，并且其中每一個(gè)翼區(qū)段的每一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。在某些實(shí)施方案中， 經(jīng)修飾的寡核苷酸包含:由10個(gè)連接的脫氧核苷組成的空隙區(qū)段；由5個(gè)連接的核苷組成的5'翼區(qū)段；
和由5個(gè)連接的核苷組成的3'翼區(qū)段；其中空隙區(qū)段位于5'翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間，其中每一個(gè)翼區(qū)段的每一個(gè)核苷包含2，-O-甲氧基乙基糖；并且其中每一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯連接。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸由14個(gè)連接的核苷組成。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸由16個(gè)連接的核苷組成。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接的核苷組成。反義化合物寡聚化合物包括但不限于寡核苷酸、寡核苷、寡核苷酸類(lèi)似物、寡核苷酸模擬物、反義化合物、反義寡核苷酸和siRNA。寡聚化合物對(duì)于靶核酸可以是“反義的”，意指能夠通過(guò)氫鍵合與靶核酸進(jìn)行雜交。在某些實(shí)施方案中，反義化合物具有核堿基序列，當(dāng)以5'至3'方向書(shū)寫(xiě)時(shí)，所述序列包含其靶向的靶核酸的靶區(qū)段的反向互補(bǔ)序列。在某些此類(lèi)實(shí)施方案中，反義寡核苷酸具有核堿基序列，當(dāng)以5'至3'方向書(shū)寫(xiě)時(shí)，所述序列包含其靶向的靶核酸的靶區(qū)段的反向互補(bǔ)序列。在某些實(shí)施方案中，本文中描述的靶向DMPK的反義化合物在長(zhǎng)度上為10至30個(gè)核苷酸。換句話說(shuō)，反義化合物在一些實(shí)施方案中為10至30個(gè)連接的核堿基。在其它實(shí)施方案中，反義化合物包含由8至80、10至80、12至30、12至50、15至30、18至24、19至22或20個(gè)連接的核堿基組成的經(jīng)修飾的寡核苷酸。在某些此類(lèi)實(shí)施方案中，反義化合物包含由在長(zhǎng)度上為 8 、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80個(gè)或由任何兩個(gè)上述值確定的范圍內(nèi)的連接的核堿基組成的經(jīng)修飾的寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中，具有這些長(zhǎng)度的任一個(gè)的反義化合物包含本文中描述的示例性反義化合物的任一個(gè)的核堿基序列的至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19個(gè)連續(xù)核堿基(例如SEQ ID NO: 12-156、160-770和774-792的任一個(gè)中引用的核堿基序列的至少8個(gè)連續(xù)核堿基。在某些實(shí)施方案中，反義化合物包含更短或截?cái)嗟慕?jīng)修飾的寡核苷酸。該更短或截?cái)嗟慕?jīng)修飾的寡核苷酸可從5'末端(5'截?cái)?，或可選擇地從3'末端(3'截?cái)?缺失單個(gè)核苷。該縮短的或截?cái)嗟墓押塑账峥蓮?'末端缺失兩個(gè)核苷，或可選擇地可從3'末端缺失兩個(gè)亞單位?；蛘?，缺失的核苷可分散在整個(gè)經(jīng)修飾的寡核苷酸中，例如在從Y末端缺失一個(gè)核苷并且從3,末端缺失一個(gè)核苷的反義化合物中。當(dāng)單個(gè)額外核苷存在于延長(zhǎng)的寡核苷酸中時(shí)，該額外核苷可位于寡核苷酸的5'或3'末端。當(dāng)兩個(gè)或更 多個(gè)額外核苷存在時(shí)，添加的核苷可彼此相鄰，例如在具有添加至寡核苷酸的5'末端(5,添加)或可選擇地添加至3'末端(3'添加)的兩個(gè)核苷的寡核苷酸中?；蛘?，添加的核苷可分散在整個(gè)反義化合物中，例如在具有添加至Y末端的一個(gè)核苷和添加至3'末端的一個(gè)亞單位的寡核苷酸中。可能增加或減少反義化合物(例如反義寡核苷酸)的長(zhǎng)度和/或引入錯(cuò)配堿基而不消除活性。例如，在 Woolf 等人(Proc.Natl.Acad.Sc1.USA89:7305-7309，1992)中，在卵母細(xì)胞注射模型中測(cè)試一系長(zhǎng)度為13-25個(gè)核堿基的反義寡核苷酸的誘導(dǎo)靶RNA的裂解的能力。在反義寡核苷酸的末端附近具有8或11個(gè)錯(cuò)配的長(zhǎng)度為25個(gè)核堿基的反義寡核苷酸能夠指導(dǎo)靶mRNA的特異性裂解，雖然程度不如不包含錯(cuò)配的反義寡核苷酸。類(lèi)似地，使用13個(gè)核堿基的反義寡核苷酸(包括I或3個(gè)錯(cuò)配的反義寡核苷酸)實(shí)現(xiàn)靶特異性裂解。Gautschi 等人(J.Natl.Cancer Inst.93:463-471, 2001 年 3 月)顯不了與bcl-2mRNA具有100%的互補(bǔ)性并且與bcl_xL mRNA具有3個(gè)錯(cuò)配的寡核苷酸在體外和體內(nèi)減少bcl-2和bcl-xL的表達(dá)的能力。此外，該寡核苷酸顯示高效的體內(nèi)抗腫瘤活性。Maher 和 Dolnick (Nuc.Acid.Res.16:3341-3358，1988)在兔網(wǎng)織紅細(xì)胞測(cè)定測(cè)試了一系列串聯(lián)的14個(gè)核堿基的反義寡核苷酸，以及分別由兩個(gè)或三個(gè)串聯(lián)的反義寡核苷酸的序列組成的28和42個(gè)核堿基的反義寡核苷酸的阻止人DHFR的翻譯的能力。3種14個(gè)核堿基的反義寡核苷酸的每一種單獨(dú)地能夠抑制翻譯，雖然在比28或42個(gè)核堿基的反義寡核苷酸更適中的水平上。反義化合物基序在某些實(shí)施方案中，靶向DMPK核酸的反義化合物具有以賦予反義化合物性質(zhì)(例如增強(qiáng)的抑制活性、增加的 對(duì)靶核酸的結(jié)合親合力或?qū)τ审w內(nèi)核酸酶產(chǎn)生的降解的抗性)的模式或基序排列的經(jīng)化學(xué)修飾的亞單位。嵌合反義化合物通常包含經(jīng)修飾以賦予增強(qiáng)的對(duì)核酸酶降解的抗性、增加的細(xì)胞吸收、增強(qiáng)的對(duì)靶核酸的結(jié)合親合力和/或增強(qiáng)的抑制活性的至少一個(gè)區(qū)域。嵌合反義化合物的第二區(qū)域可任選地用作細(xì)胞內(nèi)切核酸酶RNA酶H的底物，該酶裂解RNA = DNA雙鏈體的RNA鏈。具有空隙聚物基序的反義化合物被認(rèn)為是嵌合反義化合物。在空隙聚物中，具有多個(gè)支持RNA酶H裂解的核苷酸的內(nèi)部區(qū)位于具有多個(gè)在化學(xué)上與內(nèi)部區(qū)的核苷不同的核苷酸的外側(cè)區(qū)之間。在具有空隙聚物基序的反義寡核苷酸的情況下，空隙區(qū)段通常用作內(nèi)切核酸酶裂解的底物，同時(shí)翼區(qū)段包含經(jīng)修飾的核苷。在某些實(shí)施方案中，空隙聚物的區(qū)域通過(guò)包含每一個(gè)不同區(qū)域的糖部分的類(lèi)型來(lái)區(qū)別。用于區(qū)別空隙聚物的區(qū)域的糖部分的類(lèi)型可在一些實(shí)施方案中包括β-D-核糖核苷、β-D-脫氧核糖核苷、2'-修飾的核苷(例如除其它以外，2'-修飾的核苷可包括2' -MOE和2' -O-CH3)和雙環(huán)糖修飾的核苷(此類(lèi)雙環(huán)糖修飾的核苷可包含具有4' -(CE2) -0-2'橋的修飾的核苷，其中η=1或n=2)。優(yōu)選,每一個(gè)不同的區(qū)域包含一致的糖部分。翼-空隙-翼基序(wing-gap-wing motif)經(jīng)常被描述為“X-Y-Z”，其中“X”代表5'翼區(qū)域的長(zhǎng)度，“Y”代表空隙區(qū)域的長(zhǎng)度，而“Z”代表3'翼區(qū)域的長(zhǎng)度。如本文中所使用的，描述為“X-Y-Z”的空隙聚物具有如此的構(gòu)型以使空隙區(qū)段緊鄰5'翼區(qū)段和3'翼區(qū)段的每一個(gè)。因此，在5'翼區(qū)段和空隙區(qū)段、或空隙區(qū)段與3'翼區(qū)段之間不存在間插核苷酸。本文中描述的的反義化合物的任一種可具有空隙聚物基序。在一些實(shí)施方案中，X和Z是相同的，在其它實(shí)施方案中，它們是不同的。在優(yōu)選實(shí)施方案中，Y 為 8 至 15 個(gè)核苷酸。X、Y 或 Z 可為 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30或更多個(gè)核苷酸的任一個(gè)。因此，空隙聚物包括但不限于例如5-10-5、4-8-4、4-12-3、4-12-4、3-14-3、2-13-5、2-16-2、1-18-1、3-10-3、2-10-2、1-10-1、2-8-2、6-8-6、5-8-5、1-8-1 或 2-6-2。在某些實(shí)施方案中，為“翼聚物(wingmer) ”基序的反義化合物具有翼-空隙或空隙-翼構(gòu)型，即如上文中對(duì)于空隙聚物構(gòu)型所描述的X-Y或Y-Z構(gòu)型。因此，翼聚物構(gòu)型包括但不限于例如 5-10、8-4、4-12、12-4、3-14、16-2、18-1、10-3、2-10、1-10、8-2、2-13 或5-13。在某些實(shí)施方案中，靶向DMPK核酸的反義化合物具有5-10-5空隙聚物基序列。在某些實(shí)施方案中，靶向DMPK核酸的反義化合物具有增寬的空隙(gap-widened)的基序。在某些實(shí)施方案中，這些空隙聚物或翼聚物基序的任一種的反義化合物包含本文中描述的示例性反義化合物的任一種的核堿基序列的至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19個(gè)連續(xù)核堿基(例如，SEQID NO:12-156,160-770和774-792的任一個(gè)中引用的核堿基序列的至少8個(gè)連續(xù)核堿基。靶核酸、靶區(qū)域和核苷酸序列編碼DMPK的核苷酸序列包括但不限于下列序列，如GenBank登錄號(hào)NM_001081560.1 所示的序列(本文中合為 SEQ ID NO:1)、GenBank 登錄號(hào) NT_011109.15所示的從核苷酸18540696至18555106截?cái)嗟男蛄?本文中合為SEQ ID NO:2)、GenBank登錄號(hào)NT_039413.7所示的從核苷酸16666001至16681000截?cái)嗟男蛄?本文中合為SEQID NO:3) ,GenBank 登錄號(hào) ΝΜ_032418.I 所示的序列(本文中合為 SEQ ID NO:4) ,GenBank登錄號(hào)ΑΙ007148.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:5)、GenBank登錄號(hào)ΑΙ304033.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:6)、GenBank登錄號(hào)BC024150.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:7)、GenBank登錄號(hào)BC056615.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:
8)、GenBank登錄號(hào)BC075715.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:793)、GenBank登錄號(hào)BU519245.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:794)、GenBank登錄號(hào)CB247909.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:795)、GenBank登錄號(hào)CX208906.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO: 796)、GenBank登錄號(hào)CX732022.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:797)、GenBank登錄號(hào)S60315.1所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:798)、GenBank登錄號(hào)S60316.1 所示的序列(本文中合為 SEQ ID NO:799)、GenBank 登錄號(hào) NM_001081562.1 所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:800)和GenBank登錄號(hào)ΝΜ_001100.3所示的序列(本文中合為SEQ ID NO:801)。應(yīng)理解本文中包含的實(shí)例中的每一個(gè)SEQ ID NO所示的序列不依賴(lài)于對(duì)糖部分、核苷間連接或核堿基的任何修飾。這樣，由SEQ ID NO定義的反義化合物可獨(dú)立地包含一個(gè)或多個(gè)對(duì)糖部分、核苷間連接或核堿基的修飾。由Isis號(hào)(Isis No)描述的反義化合物表示核堿基序列和基序的組合。在某些實(shí)施方案中，靶區(qū)域?yàn)榘泻怂岬慕Y(jié)構(gòu)上確定的區(qū)域。例如，靶區(qū)域可包括3' UTR、5' UTR、外顯子、內(nèi)含子、外顯子/內(nèi)含子接合處、編碼區(qū)、翻譯起始區(qū)、翻譯終止區(qū)或其它確定的核酸區(qū)。DMPK的結(jié)構(gòu)上確定的區(qū)域可通過(guò)登錄號(hào)從序列數(shù)據(jù)庫(kù)(例如NCBI)獲得并且這樣的信息通過(guò)引用并入本文。在某些實(shí)施方案中，靶區(qū)域可包括從靶區(qū)域內(nèi)的一個(gè)靶區(qū)段的5'靶位點(diǎn)至靶區(qū)域內(nèi)的另一個(gè)靶區(qū)段的3'靶位點(diǎn)的序列。靶向包括反義化合物與其雜交(以便期望的作用發(fā)生)的至少一個(gè)靶區(qū)段的確定。在某些實(shí)施方案中，該期望的作用為mRNA靶核酸水平的降低。在某些實(shí)施方案中，該期望的作用為由靶核酸編碼的蛋白質(zhì)水平的降低或與靶核酸相關(guān)的表型改變。靶區(qū)域可包含一個(gè)或多個(gè)靶區(qū)段。靶區(qū)域內(nèi)的多個(gè)靶區(qū)段可重疊的?；蛘?，它們可以是非重疊的。在某些實(shí)施方案中，靶區(qū)域內(nèi)的靶區(qū)段被不超過(guò)約300個(gè)核苷酸分隔。在某些實(shí)施方案中，靶區(qū)域內(nèi)的靶區(qū)段被靶核酸上為、約為、不超過(guò)、不超過(guò)約250、200、150、
100、90、80、70、60、50、40、30、20或10個(gè)核苷酸分隔，或在由任何兩個(gè)上述值確定的范圍內(nèi)
的許多核苷酸分隔。在某些實(shí)施方案中，靶區(qū)域內(nèi)的靶區(qū)段被靶核酸上不超過(guò)、或不超過(guò)約5個(gè)核苷酸分隔。在某些實(shí)施方案中，靶區(qū)段為連續(xù)的?？紤]由具有為本文中所列的5'靶位點(diǎn)或3,靶位點(diǎn)中的任一個(gè)的起始核酸的范圍確定的靶區(qū)域。適當(dāng)?shù)陌袇^(qū)段可見(jiàn)于5' UTR、編碼區(qū)、3' UTR、內(nèi)含子、外顯子或內(nèi)含子/外顯子接合處內(nèi)。包含起始密碼子或終止密碼子的靶區(qū)段也是適當(dāng)?shù)陌袇^(qū)段。適當(dāng)?shù)陌袇^(qū)段可特別地不包括某些結(jié)構(gòu)上確定的區(qū)域(例如起始密碼子或終止密碼子)。適當(dāng)?shù)陌袇^(qū)段的確定可包括靶核酸的序列與整個(gè)基因組上的其它序列的比較。例如，BLAST算法可用于鑒定在不同核酸間具有相似性的區(qū)域。該比較可防止選擇可以以非特異性方式與除了選擇的靶核酸外的核酸(即，非靶或脫靶序列)雜交的反義化合物序列。在活性靶區(qū)域內(nèi)可存在反義化合物的活性的變化(例如，如通過(guò)靶核酸水平的百分比降低確定的)。在某些實(shí)施方案中，DMPK mRNA水平的降低表示DMPK蛋白表達(dá)的抑制。DMPK蛋白質(zhì)水平的降低也表示靶mRNA表達(dá)的抑制。此外，表型改變(例如減少肌強(qiáng)直或減少剪接病變)可表示DMPK mRNA和/或蛋白質(zhì)表達(dá)的抑制。雜交在一些實(shí)施方案中，雜交在本文中公開(kāi)的反義化合物與DMPK核酸之間發(fā)生。雜交的最常見(jiàn)機(jī)制包括核酸分子的互補(bǔ)核堿基之間的氫鍵合(例如，沃爾森-克里克、Hoogsteen 或反向 Hoogsteen 氧鍵合)。雜交可在 不同條件下發(fā)生。嚴(yán)格條件為序列依賴(lài)性的并且由待雜交的核酸的性質(zhì)和組成確定。確定序列是否可與靶核酸特異性雜交的方法在本領(lǐng)域是公知的(Sambrooke和Russell, Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第 3 版，2001)。在某些實(shí)施方案中，本文中提供的反義化合物可與DMPK核酸特異性雜交?；パa(bǔ)性當(dāng)反義化合物的充足數(shù)量的核堿基可與靶核酸的相應(yīng)核堿基氫鍵合，以便期望的作用發(fā)生(例如，靶核酸(例如DMPK核酸)的反義抑制)時(shí)，反義化合物和靶核酸是彼此互補(bǔ)的。反義化合物可在DMPK核酸的一個(gè)或多個(gè)區(qū)段上雜交，以便間插或相鄰區(qū)段不參與雜交事件(例如，環(huán)結(jié)構(gòu)、錯(cuò)配或發(fā)夾結(jié)構(gòu))。在某些實(shí)施方案中，本文中提供的反義化合物或其指定的部分與DMPK核酸、其靶區(qū)域、靶區(qū)段或其指定的部分具有或具有至少70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的互補(bǔ)性。在某些實(shí)施方案中，反義化合物與DMPK核酸、其靶區(qū)域、靶區(qū)段或指定的部分具有至少70%、至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的互補(bǔ)性，并且包含本文中描述的示例性反義化合物的任一個(gè)的核堿基序列的至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19個(gè)連續(xù)核堿基(例如，SEQ ID NO: 12-156、160-770和774-792的任一個(gè)中引用的核堿基序列的至少8個(gè)連續(xù)核堿基)。反義化合物與靶核酸的百分比互補(bǔ)性可使用常規(guī)方法來(lái)測(cè)定，并且在反義化合物的整體上進(jìn)行測(cè)量。例如，其中反義化合物中的20個(gè)核堿基的18個(gè)與靶區(qū)域互補(bǔ)并且從而可與其特異性雜交的反義化合物可代表90%的互補(bǔ)性。在該實(shí)例中，可將其余的非互補(bǔ)核堿基集簇或分散在互補(bǔ)核堿基中，并且彼此之間或與互補(bǔ)核堿基之間不必連續(xù)。這樣，在長(zhǎng)度上為18個(gè)核堿基的具有4(四)個(gè)非互補(bǔ)核堿基(所述非互補(bǔ)核堿基的側(cè)翼連接有兩個(gè)與靶核酸完全互補(bǔ)的區(qū)域)的反義化合物可與靶核酸具有77.8%的總體互補(bǔ)性，從而落在本發(fā)明的范圍內(nèi)。反義化合物與靶核酸的區(qū)域的百分比互補(bǔ)性可使用本領(lǐng)域已知的BLAST程序(基本局部比對(duì)搜索工具)和PowerBLAST程序(Altschul等人，J.Mol.Biol.，1990，215，403 410 ；Zhang 和 Madden, Genome Res.，1997，7，649656)來(lái)常規(guī)地測(cè)定。百分比同源性、序列同一性或或互補(bǔ)性可利用(例如)Gap程序(Wisconsin SequenceAnalysis Package, Version 8for Unix,Genetics Computer Group, University ResearchPark, Madison ffis.),使用缺省設(shè)置來(lái)測(cè)定,所述程序使用Smith和Waterman的算法(Adv.Appl.Math., 1981, 2, 482-489)。在某些實(shí)施方案中，本文中提供的反義化合物或其指定的部分與靶核酸或其指定的部分完全互補(bǔ)(即，100%互補(bǔ))。例如，反義化合物可與DMPK核酸、其靶區(qū)域或靶區(qū)段或靶序列完全互補(bǔ)。如本文中所用，“完全互補(bǔ)”意指反義化合物的每一個(gè)核堿基能夠與靶核酸的相應(yīng)核堿基精確堿基配對(duì)。例如，20個(gè)核堿基的反義化合物與400個(gè)核堿基長(zhǎng)的靶序列完全互補(bǔ)，只要存在與反義化合物完全互補(bǔ)的靶核酸的相應(yīng)的20個(gè)核堿基部分。完全互補(bǔ)還可用于第一和/或第二核酸的指定的部分。例如，30個(gè)核堿基的反義化合物的20個(gè)核堿基的部分可與400個(gè)核堿基長(zhǎng)的靶序列“完全互補(bǔ)”。30個(gè)核堿基的寡核苷酸的20個(gè)核堿基的部分與靶序列完全互補(bǔ)，如果靶序列具有其中每一個(gè)核堿基與反義化合物的20個(gè)核堿基的部分互補(bǔ)的話。同時(shí)，全部30個(gè)核堿基的反義化合物可與靶序列互補(bǔ)，這取決于反義化合物的其余10個(gè)核堿基也與靶 序列互補(bǔ)。非互補(bǔ)核堿基的位置可位于反義化合物的Y末端或Y末端?；蛘撸腔パa(bǔ)核堿基或核堿基可位于反義化合物的內(nèi)部位置。當(dāng)兩個(gè)或更多個(gè)非互補(bǔ)核堿基存在時(shí)，它們可以是連續(xù)的(即，連接的)或非連續(xù)的。在一個(gè)實(shí)施方案中，非互補(bǔ)核堿基位于空隙聚物反義寡核苷酸的翼區(qū)段中。在某些實(shí)施方案中，在長(zhǎng)度上為或達(dá)到10、12、13、14、15、16、17、18、19或20個(gè)核堿基的反義化合物相對(duì)于靶核酸(例如DMPK核酸或其指定的部分)包含不超過(guò)4個(gè)、不超過(guò)3個(gè)、不超過(guò)2個(gè)或不超過(guò)I個(gè)非互補(bǔ)核堿基。在某些實(shí)施方案中，在長(zhǎng)度上為或達(dá)至10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個(gè)核堿基的反義化合物相對(duì)于靶核酸(例如DMPK核酸或其指定的部分)包含不超過(guò)6個(gè)，不超過(guò)5個(gè)，不超過(guò)4個(gè)，不超過(guò)3個(gè)，不超過(guò)2個(gè)或不超過(guò)I
個(gè)非互補(bǔ)核堿基。本文中提供的反義化合物還包括與靶核酸的部分互補(bǔ)的反義化合物。如本文中所用，“部分”是指靶核酸的區(qū)域或區(qū)段內(nèi)確定數(shù)目的連續(xù)(即連接的)核堿基?！安糠帧边€可指反義化合物的確定數(shù)目的連續(xù)核堿基。在某些實(shí)施方案中，反義化合物與靶區(qū)段的至少8個(gè)核堿基的部分互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中，反義化合物與靶區(qū)段的至少10個(gè)核堿基的部分互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中，反義化合物與靶區(qū)段的至少15個(gè)核堿基的部分互補(bǔ)。還考慮與靶區(qū)段的至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20或更多個(gè)核堿基的部分或在由這些值的任何兩個(gè)確定的范圍內(nèi)的部分互補(bǔ)的反義化合物。同一性本文中提供的反義化合物還可具有與特定核苷酸序列SEQ ID NO或由特定Isis編號(hào)表示的化合物或其部分具有確定的百分比同一性。如本文中所用，如果其具有相同核堿基配對(duì)能力，則反義化合物與本文中公開(kāi)的序列具有同一性。例如，包含替代公開(kāi)的DNA序列中的胸苷的尿嘧啶的RNA可被認(rèn)為與DNA序列具有同一性，因?yàn)槟蜞奏ず托剀斩寂c腺嘌啶配對(duì)。還考慮本文中公開(kāi)的反義化合物的縮短的和延長(zhǎng)的形式以及相對(duì)于本文中提供的反義化合物具有非同一堿基的的化合物。非同一堿基可彼此相鄰或分散在整個(gè)反義化合物中。根據(jù)相對(duì)于與其比較的序列具有同一堿基配對(duì)的堿基的數(shù)目計(jì)算反義化合物的百分比同一性。在某些實(shí)施方案中，反義化合物或其部分與本文中公開(kāi)的一個(gè)或多個(gè)示例性反義化合物或SEQ ID NO或其部分具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的同一性。修飾核苷是堿基-糖的組合。核苷的核堿基(也稱(chēng)為堿基)部分通常為雜環(huán)堿基部分。核苷酸為還包括共價(jià)地連接于核苷的糖部分的磷酸基團(tuán)的核苷。對(duì)于包括戊呋喃糖基糖、磷酸基團(tuán)的那些核苷可連接于糖的2'、3'或5'羥基部分。寡核苷酸通過(guò)相鄰核苷的彼此共價(jià)連接(以形成線性多聚寡核苷酸)形成。在寡核苷酸結(jié)構(gòu)內(nèi)，磷酸基團(tuán)通常稱(chēng)為形成寡核苷酸的核苷間連接。對(duì)反義化合物的修飾包括對(duì)核苷間連接、糖部分或核堿基的轉(zhuǎn)換或改變。經(jīng)修飾的反義化合物通常因期望的性質(zhì)(例如增強(qiáng)的細(xì)胞吸收、增強(qiáng)的對(duì)核酸靶的親合力、增強(qiáng)在核酸酶存在的情況下的穩(wěn)定 性或增強(qiáng)的抑制活性)而優(yōu)于天然形式。經(jīng)化學(xué)修飾的核苷還可用于增強(qiáng)縮短的或截?cái)嗟姆戳x寡核苷酸對(duì)于其靶核酸的結(jié)合親合力。因此，通?？衫镁哂羞@樣經(jīng)化學(xué)修飾的的核苷的更短的反義化合物來(lái)獲得可比較的結(jié)果。經(jīng)修飾的核苷間連接RNA和DNA的天然存在的核苷間連接為3'至5'磷酸二酯連接。因期望的性質(zhì)(例如增強(qiáng)的細(xì)胞吸收、增強(qiáng)的對(duì)靶核酸的親合力以及增強(qiáng)的在核酸酶存在的情況下的穩(wěn)定性)的原因，通常優(yōu)先于具有天然存在的核苷間連接的反義化合物選擇具有一個(gè)或多個(gè)經(jīng)修飾的(即非天然存在的)核苷間連接的反義化合物。具有經(jīng)修飾的核苷間連接的寡核苷酸包括保留磷原子的核苷間連接以及不具有磷原子的核苷間連接。代表性含磷核苷間連接包括但不限于磷酸二酯、磷酸三酯、甲基膦酸酯、氨基磷酸酯和硫代磷酸酯。制備含磷和非含磷連接的方法是公知的。在某些實(shí)施方案中，靶向DMPK核酸的反義化合物包含一個(gè)或多個(gè)經(jīng)修飾的核苷間連接。在某些實(shí)施方案中，經(jīng)修飾的核苷間連接為硫代磷酸酯連接。在某些實(shí)施方案中，反義化合物的每一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯核苷間連接。經(jīng)修飾的糖部分
本發(fā)明的反義化合物可任選地包含一個(gè)或多個(gè)其中糖基團(tuán)已被修飾的核苷。此類(lèi)糖修飾的核苷可賦予反義化合物增強(qiáng)的核酸酶穩(wěn)定性、增強(qiáng)的結(jié)合親合力或一些其它有益的生物性質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，核苷包含經(jīng)化學(xué)修飾的呋喃核糖環(huán)部分。經(jīng)化學(xué)修飾的呋喃核糖環(huán)的實(shí)例包括但不限于取代基團(tuán)的添加(包括5'和2'取代基、形成二環(huán)核酸(BNA)的非成對(duì)環(huán)原子的橋連、S、N(R)或C(R1) (R2) (R，R1和R2各自獨(dú)立地為H、C1-C12烷基或保護(hù)基團(tuán))對(duì)核糖基環(huán)的氧原子的替代及其組合。經(jīng)化學(xué)修飾的糖的實(shí)例包括2, _F_5'-甲基取代的核苷(關(guān)于其它公開(kāi)的5'，2'-雙取代核苷，參見(jiàn)于8/21/08公開(kāi)的PCT國(guó)際申請(qǐng)W02008/101157)或S對(duì)核糖基環(huán)的氧原子的取代以及2'-位置上的其它取代(參見(jiàn)2005年I月16日公開(kāi)的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)US2005-0130923公開(kāi))或可選擇地BNA的Y -取代(參見(jiàn)11/22/07公開(kāi)的PCT國(guó)際申請(qǐng)W02007/134181，其中LNA被例如5'-甲基或5'-乙烯基取代)。具有經(jīng)修飾的糖部分的核苷實(shí)例包括但不限于包含5'-乙烯基、5'-甲基(R 或 S)、4 ' -S、2 ' -F、2 ' -OCH3>2 ' -0CH2CH3>2 ' -OCH2CH2F 和 2 ' -O(CH2)2OCH3取代基的核昔。2'位置上的取代基還可選自稀丙基、氣基、置氣基、硫代、O-稀丙基、O-C1-C10 烷基、OCF3> OCH2F, O(CH2)2SCH3^ O(CH2)2-O-N(Rm) (Rn)、O-CH2-C (=0) -N(Rm) (Rn)和O-CH2-C (=0) -N (R1) - (CH2) 2-N (Rm) (Rn)、其中每一個(gè)R1、Rm和Rn獨(dú)立地為H或取代的或未取代的C1-Cltl烷基。二環(huán)核酸(BNA)的實(shí)例 包括但不限于包含4'與2,核糖基環(huán)原子之間的橋的核苷。在某些實(shí)施方案中，本文中提供的反義化合物包括一個(gè)或多個(gè)BNA核苷，其中橋包含下式中的一個(gè):4' - (CH2) -0-2 ' (LNA) ; 4 ' - (CH2) -S-2 ' ; 4 ' - (CH2) 2_0_2 ' (ENA)；4 ' -CH(CH3) -0-2 '和 4 ' -CH(CH2OCH3) -0-2 '(及其類(lèi)似物，參見(jiàn) 2008 年 7 月 15日頒布的美國(guó)專(zhuān)利7，399，845) ；4 ' -C (CH3) (CH3) -0-2 '(及其類(lèi)似物，參見(jiàn)公開(kāi)為W0/2009/006478 的 PCT/US2008/068922，2009年 I 月 8 日公開(kāi))；4' -CH2-N(OCH3)~2'(及其類(lèi)似物，參見(jiàn)公開(kāi)為W0/2008/150729的PCT/US2008/064591，2008年12月11日公開(kāi))；4' -CH2-O-N(CH3) -2 ;(參見(jiàn)公開(kāi)的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)US2004-0171570，2004年9月2公開(kāi))；4' -CH2-N (R)-0-2'，其中R為H、C1-C12烷基或保護(hù)基團(tuán)(參見(jiàn)2008年9月23 日頒布的美國(guó)專(zhuān)利 7，427，672) ；4 ' -CH2-C (H) (CH3) -2'(參見(jiàn) Chattopadhyaya 等人，J.0rg.Chem.，2009，74，118-134);和 4' -CH2-C (=CH2)-2'(及其類(lèi)似物，參見(jiàn)公開(kāi)為W02008/154401 的 PCT/US2008/066154, 2008 年 12 月 8 日公開(kāi))。其它二環(huán)核苷已在公開(kāi)的文獻(xiàn)中進(jìn)行了報(bào)導(dǎo)(參見(jiàn)例如，Srivastava等人，J.Am.Chem.Soc, 2007，129 (26) 8362-8379 ;Frieden 等人，NucleicAcids Research, 2003, 21, 6365-6372 ；Elayadi 等人，Curr.0pinion Invens.Drugs, 2001, 2, 558-561 ；Braasch 等人，Chem.Biol., 2001, 8, 1-7 ；0rum 等人，Curr.0pinion Mol.Ther., 2001, 3, 239-243 ；ffahlestedt 等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.，2000，97，5633-5638 ；Singh 等人，Chem.Commun.，1998，4，455-456 ；Koshkin 等人，Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630 ；Kumar 等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，1998，8，2219-2222 ；Singh 等人，J.0rg.Chem.，1998，63，10035-10039 ;美國(guó)專(zhuān)利號(hào):7, 399，845 ；7, 053，207 -J, 034，133 ；6, 794，499 ；6, 770，748 ；6, 670，461 ；6, 525，191 ；6，268，490 ;美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào):US2008-0039618 ；US2007-0287831 ；US2004-0171570 ；美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)系列號(hào):12/129, 154 ;61/099，844 ;61/097，787 ;61/086，231 ;61/056，564 ；61/026，998 ;61/026，995 ;60/989，574 ;國(guó)際申請(qǐng) W02007/134181 ；W02005/021570 ；W02004/106356 ；W094/14226 JPPCT 國(guó)際申請(qǐng)?zhí)?PCT/US2008/068922 ；PCT/US2008/066154和PCT/US2008/064591)。前述二環(huán)核苷的每一種可經(jīng)制備具有一個(gè)或多個(gè)立體化學(xué)糖構(gòu)型，包括例如a-L-呋喃核糖和β-D-呋喃核糖(參見(jiàn)1999年3月25日公開(kāi)為W099/14226的 PCT 國(guó)際申請(qǐng) PCT/DK98/00393)。在某些實(shí)施方案中，二環(huán)核苷包含戊呋喃糖基糖部分的4'與2'碳原子之間的橋，包括但不限于包含I個(gè)或I至4個(gè)連接的基團(tuán)的橋，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自-[C(Ra)(Rb) ] n-、_C (Ra) =C (Rb) -、-C (Ra) =N-、-C (=NRa) -、-C (=0) -、-C (=S) -、_0_、-Si (Ra) 2_、-S (=0)x-和-N(Ra)-;其中:x為0、1或2 ;n為1、2、3或4;每一個(gè)Ra和Rb獨(dú)立地為H、保護(hù)基團(tuán)、羥基、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C2tl芳基、取代的C5-C2tl芳基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、雜芳基、取代的雜芳基、C5-C7脂環(huán)基、取代的C5-C7脂環(huán)基、鹵素、OJ1、NJ1J2, SJ1、N3、COOJ1、?；?C(=0)-H)、取代的?；?、CN、磺?；?SbO)2-J1)或增效砜(SbO)-J1);并且每一個(gè)J1和J2獨(dú)立地為H、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、取代的C5-C2tl芳基、?；?C (=0) -H)、取代的?；?、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、C1-C12氨基烷基、取代的C1-C12氨基烷基或保護(hù)基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，二環(huán)糖部分的橋?yàn)?[C(Ra) (Rb)Jn-, -[C(Ra) (Rb)]n-0-、-C (RaRb)-N (R)-O-或-C (RaRb)-O-N (R) _。在某些實(shí)施方案中，橋?yàn)?4' _CH2_2 '、4' — (CH2) 2_2'、4' - (CH2) 3_2'、4' _CH2_0_2'、4' - (CH2) 2_0_2'、4' _CH2_0_N (R) —2'和4' -CH2-N(R)-0-2- ，其中每一個(gè)R獨(dú)立地為H、保護(hù)基團(tuán)或C1-C12烷基。在某些實(shí)施方案中，二環(huán)核苷還通過(guò)異構(gòu)構(gòu)型來(lái)確定。例如，包含4f -(CH2)-0-2,橋的核苷可以α-L構(gòu)型或以β-D構(gòu)型存在。先前，α-L-亞甲基氧(4' -CH2H' )BNA已被并入顯示反義活性的反義寡核苷酸中(Frieden等人，NucleicAcids Research, 2003, 21, 6365-6372)。在某些實(shí)施方案中，二環(huán)核苷包括具有4'至2'橋的那些二環(huán)核苷，其中此類(lèi)橋包括但不限于 a _L-4 ' - (CH2) -0-2 '、β ~D~4 ' -CH2-0-2 ' >4 ' - (CH2) 2_0~2 '、4 ' -CH2-O-N(R)-2 '、4 ' -CH2-N(R)-0-2 '、4 ' -CH(CH3)-0-2 '、4 ' -CH2-S_2 '、4' -CH2-N(R) 、4' -CH2-CH(CH3) 和 4' -(CH2) 3-2/，其中 R 為 H、保護(hù)基團(tuán)或 C1-C12燒基。在某些實(shí)施方案中，二環(huán)核苷具有式:
0Qb-^Qc
1
Tb其中:Bx為雜環(huán)堿基部分；
-Qa-Qb-Qc-為-CH2-N (Rc) -CH2-, -C (=0) -N (Rc) -CH2-, -CH2-O-N (Rc) -、-CH2-N (Rc) -0-或-N(R。) -O-CH2。Rc為C1-C12烷基或氨基保護(hù)基團(tuán)；和1；和1；各自獨(dú)立地為H、羥基保護(hù)基團(tuán)、綴合物基團(tuán)、反應(yīng)性磷基團(tuán)、磷部分或至載體介質(zhì)的共價(jià)附著。在某些實(shí)施方案中，二環(huán)核苷具有式:
權(quán)利要求
1.一種實(shí)現(xiàn)CUGexp DMPK RNA的優(yōu)先減少的方法，其包括: a.選擇患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良或具有CUGexpDMPK RNA的受試者； b.給所述受試者施用與所述CUGexpDMPK RNA的非重復(fù)區(qū)域互補(bǔ)的經(jīng)化學(xué)修飾的反義寡核苷酸， 其中當(dāng)與所述CUGexp DMPK RNA結(jié)合時(shí),所述經(jīng)化學(xué)修飾的反義寡核苷酸激活核糖核酸酶，從而實(shí)現(xiàn)所述CUGexp DMPK RNA的優(yōu)先減少。
2.一種實(shí)現(xiàn)CUGexp DMPK RNA的優(yōu)先減少的方法，其包括: a.選擇患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良或具有CUGexpDMPK RNA的受試者；和 b.給所述受試者全身性施用與所述CUGexpDMPK RNA的非重復(fù)區(qū)域互補(bǔ)的經(jīng)化學(xué)修飾的反義寡核苷酸， 其中當(dāng)與所述CUGexp DMPK RNA結(jié)合時(shí),所述經(jīng)化學(xué)修飾的反義寡核苷酸實(shí)現(xiàn)所述CUGexp DMPK RNA的優(yōu)先減少。
3.一種實(shí)現(xiàn)CUGexp DMPK RNA的優(yōu)先減少的方法，其包括:給懷疑患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良或具有CUGexp DMPK RNA的受試者施用與所述CUGexp DMPK RNA的非重復(fù)區(qū)域互補(bǔ)的經(jīng)化學(xué)修飾的反義寡核苷酸， 其中當(dāng)與所述CUGexp DMPK RNA結(jié)合時(shí),所述經(jīng)化學(xué)修飾的反義寡核苷酸實(shí)現(xiàn)所述CUGexp DMPK RNA的優(yōu)先減少。
4.一種減少懷疑患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)`養(yǎng)不良或具有保留在細(xì)胞核中的CUGexp DMPKRNA的受試者的肌強(qiáng)直的方法，其包括: 給所述受試者施用與所述DMPK RNA的非重復(fù)區(qū)域互補(bǔ)的經(jīng)化學(xué)修飾的反義寡核苷酸，其中當(dāng)結(jié)合所述DMPK RNA時(shí)，所述經(jīng)化學(xué)修飾的反義寡核苷酸激活核糖核酸酶，從而減少肌強(qiáng)直。
5.一種減少懷疑患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良或具有保留在細(xì)胞核中的CUGexp DMPKRNA的受試者的剪接病變的方法，其包括: 給所述受試者施用與突變的DMPK RNA的非重復(fù)區(qū)域互補(bǔ)的經(jīng)化學(xué)修飾的反義寡核苷酸， 其中當(dāng)結(jié)合所述突變的DMPK RNA時(shí)，所述經(jīng)化學(xué)修飾的反義寡核苷酸激活核糖核酸酶，從而減少剪接病變。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述剪接病變?yōu)镸BNL依賴(lài)性剪接病變。
7.根據(jù)任何前述權(quán)利要求所述的方法，其中所述寡核苷酸是嵌合的。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述寡核苷酸為空隙聚物
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)中所述的方法，其中所述施用為皮下施用。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)中所述的方法，其中所述施用是靜脈內(nèi)施用。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述空隙聚物寡核苷酸靶向所述突變的DMPKRNA的所述非重復(fù)區(qū)域內(nèi)的非編碼序列。
12.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述空隙聚物寡核苷酸靶向所述突變的DMPKRNA的編碼區(qū)、內(nèi)含子、5' UTR或:V UTR0
13.根據(jù)任何前述權(quán)利要求所述的方法，其中所述核糖核酸酶為RNA酶H1。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述優(yōu)先減少存在于肌肉組織中。
15.—種減少動(dòng)物中的DMPK表達(dá)的方法，其包括給所述動(dòng)物施用化合物，所述化合物包含靶向DMPK的在長(zhǎng)度上具有10至30個(gè)連接的核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸，其中DMPK的表達(dá)在所述動(dòng)物中的減少。
16.一種優(yōu)先減少動(dòng)物中的CUGexp DMPK RNA、減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變的方法，其包括給所述動(dòng)物施用化合物，所述化合物包含靶向DMPK的在長(zhǎng)度上具有10至30個(gè)連接的核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸減少動(dòng)物中的DMPK表達(dá)，從而優(yōu)先減少動(dòng)物中的CUGexp DMPK RNA、減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變。
17.一種用于治療患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的動(dòng)物的方法，其包括: a.鑒定患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的所述動(dòng)物， b.給所述動(dòng)物施用治療有效量的化合物，所述化合物包含靶向DMPK的在長(zhǎng)度上具有10至30個(gè)連接的核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸， 其中所述患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的動(dòng)物被治療。
18.—種減少DMP K表達(dá)的方法，其包括給動(dòng)物施用包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由10至30個(gè)連接的核苷組成并且具有與SEQ ID NO:1_8或793-801具有至少90%的互補(bǔ)性的核堿基序列，如在所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整個(gè)長(zhǎng)度上測(cè)量的，其中DMPK的表達(dá)減少。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中減少DMPK表達(dá)優(yōu)先減少動(dòng)物中的CUGexpDMPKRNA,減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變。
20.一種優(yōu)先減少動(dòng)物中的CUGexp DMPK RNA，減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變的方法，其包括給所述動(dòng)物施用包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述化合物減少三十四肽重復(fù)結(jié)構(gòu)域39B的表達(dá)，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由10至30個(gè)連接的核苷組成，其具有與SEQ ID NO:1-8或793-801具有至少90%的互補(bǔ)性的核堿基序列，如在所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整個(gè)長(zhǎng)度上測(cè)量的，并且其中所述CUGexp DMPK RNA的減少優(yōu)先減少動(dòng)物中的CUGexp DMPK RNA、減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變。
21.一種用于治療患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的動(dòng)物的方法，其包括: c.鑒定患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的所述動(dòng)物， d.給所述動(dòng)物施用治療有效量的包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由10至30個(gè)連接的核苷組成，并且具有與SEQ ID NO:1_8或793-801具有至少90%的互補(bǔ)性的核堿基序列，如在所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整個(gè)長(zhǎng)度上測(cè)量的，其中所述患有I型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良的動(dòng)物被治療。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中給所述動(dòng)物施用的治療有效量的化合物優(yōu)先減少動(dòng)物中的CUGexp DMPK RNA,減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變。
23.根據(jù)權(quán)利要求15-22任一項(xiàng)中所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸具有包含SEQ ID NO:12-156,160-770和774-792的任一個(gè)中引用的序列的至少8連續(xù)核堿基的核堿基序列。
24.根據(jù)權(quán)利要求15-23任一項(xiàng)中所述的方法，其中所述動(dòng)物為人。
25.根據(jù)權(quán)利要求15-24任一項(xiàng)中所述的方法，其中所述化合物為第一試劑以及還包括施用第二試劑。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中共施用所述第一試劑和所述第二試劑。
27.根據(jù)權(quán)利要求15-24任一項(xiàng)中所述的方法，其中施用包括胃腸外施用。
28.根據(jù)權(quán)利要求15-27任一項(xiàng)中所述的方法，其中所述化合物由單鏈經(jīng)修飾的寡核苷酸組成。
29.根據(jù)權(quán)利要求15-28任一項(xiàng)中所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO:1-8或793-801的任一個(gè)具有至少95%的互補(bǔ)性，如在所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整個(gè)長(zhǎng)度上測(cè)量的。
30.根據(jù)權(quán)利要求15-28任一項(xiàng)中所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO:1-8或793-801的任一個(gè)具有100%的互補(bǔ)性，如在所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整個(gè)長(zhǎng)度上測(cè)量的。
31.根據(jù)權(quán)利要求15-30任一項(xiàng)中所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少一個(gè)核苷間連接為經(jīng)修飾的核苷間連接。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中每一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯核苷間連接。
33.根據(jù)權(quán)利要 求15-32任一項(xiàng)中所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中至少一個(gè)經(jīng)修飾的糖為二環(huán)糖。
35.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中至少一個(gè)經(jīng)修飾的糖包含2’-0_甲氧基乙基或4' _(CH2)n-0-2'橋，其中 η 為 I 或 2。
36.根據(jù)權(quán)利要求15-35任一項(xiàng)中所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的核堿基。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的核堿基為5-甲基胞嘧啶。
38.根據(jù)權(quán)利要求15-37任一項(xiàng)中所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸包含: a.由連接的脫氧核苷組成的空隙區(qū)段； b.由連接的核苷組成的5'翼區(qū)段； c.由連接的核苷組成的3'翼區(qū)段； 其中所述空隙區(qū)段位于5'翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間并且其中每一個(gè)翼區(qū)段的每一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。
39.根據(jù)權(quán)利要求15-38任一項(xiàng)中所述的方法，其中經(jīng)化學(xué)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接的核苷組成并且包含: a.由10個(gè)連接的脫氧核苷組成的空隙區(qū)段； b.由5個(gè)連接的核苷組成的5'翼區(qū)段； c.由5個(gè)連接的核苷組成的3'翼區(qū)段； 其中所述空隙區(qū)段位于5'翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間，其中每一個(gè)翼區(qū)段的每一個(gè)核苷包含2, -O-甲氧基乙基糖，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的每一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯連接，并且其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的每一個(gè)胞嘧啶為5'-甲基胞嘧啶。
40.根據(jù)權(quán)利要求15-39任一項(xiàng)中所述的方法，其中經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接的核苷組成。
41.一種化合物，其包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由10至30個(gè)連接的核苷組成并且具有包含SEQ ID NO:12-156,160-770和774-792中引用的序列的至少8個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。
42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸為單鏈寡核苷酸。
43.根據(jù)權(quán)利要求41或權(quán)利要求42所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO:1-8或793-801具有100%的互補(bǔ)性。
44.根據(jù)權(quán)利要求41-43中任一項(xiàng)所述的化合物，其中至少一個(gè)核苷間連接為經(jīng)修飾的核苷間連接。
45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的化合物，其中每一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯核苷間連接。
46.根據(jù)權(quán)利要求41-45中任一項(xiàng)所述的化合物，其中至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的化合物，其中至少一個(gè)經(jīng)修飾的糖為二環(huán)糖。
48.根據(jù)權(quán)利要求46所述的化合物，其中至少一個(gè)經(jīng)修飾的糖包含2’-0_甲氧基乙基。
49.根據(jù)權(quán)利要求41-48中任一項(xiàng)所述的化合物，其中至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的核喊基。
50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的核堿基為5-甲基胞嘧啶。
51.根據(jù)權(quán)利要求41-50中任一項(xiàng)所述的化合物，其中經(jīng)修飾的寡核苷酸包含: 由連接的脫氧核苷組成的空 隙區(qū)段； 由連接的核苷組成的5'翼區(qū)段； 由連接的核苷組成的3'翼區(qū)段； 其中所述空隙區(qū)段位于5'翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間并且其中每一個(gè)翼區(qū)段的每一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。
52.根據(jù)權(quán)利要求41-51中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接的核苷組成并且包含: 由10個(gè)連接的脫氧核苷組成的空隙區(qū)段； 由5個(gè)連接的核苷組成的5'翼區(qū)段； 由5個(gè)連接的核苷組成的3'翼區(qū)段； 其中所述空隙區(qū)段位于5'翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間，其中每一個(gè)翼區(qū)段的每一個(gè)核苷包含2，-O-甲氧基乙基糖；并且其中每一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯連接。
53.根據(jù)權(quán)利要求41-52中任一項(xiàng)所述的化合物，其中經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接的核苷組成。
54.一種組合物，其包含經(jīng)修飾的寡核苷酸或其鹽和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由10至30個(gè)連接的核苷組成并且具有包含選自SEQ ID NO: 12-156、160-770和774-792的任一個(gè)中引用的序列的核堿基序列的至少8連續(xù)核堿基的核堿基序列。
55.根據(jù)權(quán)利要求54所述的組合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸為單鏈寡核苷酸。
56.根據(jù)權(quán)利要求54或權(quán)利要求55所述的組合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接的核苷組成。
57.—種經(jīng)修飾的反義寡核苷酸，其由12至30個(gè)連接的核苷組成并且具有包含選自SEQ ID NO:12-156、160-770和774-792中引用的核堿基序列的核堿基序列的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。
58.根據(jù)權(quán)利要求57所述的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸，其由單鏈經(jīng)修飾的寡核苷酸組成。
59.根據(jù)權(quán)利要求57或權(quán)利要求58所述的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與1-8或793-801具有100%的互補(bǔ)性。
60.根據(jù)權(quán)利要求57-59中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷間連接為經(jīng)修飾的核苷間連接。
61.根據(jù)權(quán)利要求60所述的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸，其中每一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯核苷間連接。
62.根據(jù)權(quán)利要求57-61中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。
63.根據(jù)權(quán)利要求62所述的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸，其中所述至少一個(gè)經(jīng)修飾的糖為二環(huán)糖。
64.根據(jù)權(quán)利要求62所述的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸，其中至少一個(gè)經(jīng)修飾的糖包含2’ -O-甲氧基乙基。
65.根據(jù)權(quán)利要求57-64中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸,其中至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的核堿基。
66.根據(jù)權(quán)利要求65所述的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸，其中所述經(jīng)修飾的核堿基為5-甲基胞嘧啶。
67.根據(jù)權(quán)利要求57-66中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸包含: 由連接的脫氧核苷組成的空隙區(qū)段； 由連接的核苷組成的5'翼區(qū)段； 由連接的核苷組成的3'翼區(qū)段； 其中所述空隙區(qū)段位于5'翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間并且68每一個(gè)翼區(qū)段的每一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。
68.根據(jù)權(quán)利要求57-67中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸包含: 由10個(gè)連接的脫氧核苷組成的空隙區(qū)段； 由5個(gè)連接的核苷組成的5'翼區(qū)段； 由5個(gè)連接的核苷組成的3'翼區(qū)段； 其中所述空隙區(qū)段位于5'翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間，其中每一個(gè)翼區(qū)段的每一個(gè)核苷包含2' -O-甲氧基乙基糖；其中每一個(gè)胞嘧啶為5'-甲基胞嘧啶；并且其中每一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯連接。
69.根據(jù)權(quán)利要求57-68中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的反義寡核苷酸，其中經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接的核苷組成。
70.一種化合物，其包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含與等長(zhǎng)度的SEQ ID ΝΟ:1的核堿基1178-1206、2159-2182、2174-2196、2426-2447、2450-2518、2679-2704 或 2697-2725 的部分互補(bǔ)的至少 12 個(gè)連續(xù)核堿基的部分的核堿基序列，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO:1互補(bǔ)。
71.一種化合物，其包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含與等長(zhǎng)度的核堿基178-223、232-253、279-299、366-399、519-541、923-975、1073-1105、I171-1196、1215-1246、1263-1324、1706-1734、1743-1763、1932-1979、1981-2003、2077-2108或2152-2173的部分互補(bǔ)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的部分的核堿基序列，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO:1互補(bǔ)。
72.—種化合物，其包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含與等長(zhǎng)度的核堿基1251-1303、1305-1326、1352-1372、3762-3795、4170-4192、5800-5852、6124-6149、6168-6199、6216-6277、I1979-12007、12016-12036、12993-13042、13044-13066、13140-13171 或 13215-13236 的部分互補(bǔ)的至少 12 個(gè)連續(xù)核堿基的部分的核堿基序列，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO:2互補(bǔ)。
73.一種通過(guò)施用靶向DMPK的反義寡核苷酸從而導(dǎo)致Sercal外顯子22包含來(lái)減少有此需要的動(dòng)物中的Sercal的剪接病變的方法，所述反義寡核苷酸在長(zhǎng)度上具有10至30個(gè)連接的核苷。
74.—種通過(guò)施用祀向DMPK的反義寡核苷酸從而導(dǎo)致m-Titin外顯子5包含來(lái)減少有此需要的動(dòng)物中的m-Titin的剪接病變的方法，所述反義寡核苷酸在長(zhǎng)度上具有10至30個(gè)連接的核苷。
75.一種通過(guò)施用靶向DMPK的反義寡核苷酸從而導(dǎo)致Clcnl外顯子7a包含來(lái)減少有此需要的動(dòng)物中的Clcnl的剪接病變的方法，所述反義寡核苷酸在長(zhǎng)度上具有10至30個(gè)連接的核苷。
76.一種通過(guò)施用靶向DMPK的反義寡核苷酸從而導(dǎo)致Zasp外顯子11包含來(lái)減少有此需要的動(dòng)物中的的剪接病變的方法，所述反義寡核苷酸在長(zhǎng)度上具有10至30個(gè)連接的核苷。
77.—種化合物，其包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含SEQ ID NO:12-156、160-770和774-792的核堿基序列的任一個(gè)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。
78.—種化合物，其包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含 SEQ ID NO:41、44、76、109、153、320、321、322、325、329、335 和 657 的核堿基序列的任一個(gè)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。
79.—種化合物，其包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含 SEQ ID NO:15、73、77、79、83、85、130、602、648、655、674和 680 的核堿基序列的任一個(gè)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。
80.一種化合物，其包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含與等長(zhǎng)度的SEQ ID NO:1的核堿基664-683、773-792、926-945、927-946、928-947、931-950、935-954、941-960、2089-2108、2163-2182、2490-2509、2499-2518、2676-2695、2685-2704、2676-2695、2688-2707、2697-2716、2764-2783 和2770-2789的部分互補(bǔ)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的部分的核堿基序列，其中所述核堿基序列與 SEQ ID NO:1 互補(bǔ)。
81.—種化合物，其包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含與等長(zhǎng)度的SEQ ID NO:2的核堿基812-831、3629-3648、4447-4466、4613-4632、5803-5822、5804-5823、5805-5824、5808-5827、5818-5837、6794-6813、12463-12482、13152-13171和13553-13572的部分互補(bǔ)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的部分的核堿基序列，其中所述核堿基序列與SEQ ID NO:2互補(bǔ)。
82.根據(jù)權(quán)利要求77-81中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸為單鏈寡核苷酸。
83.根據(jù)權(quán)利要求77-82中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO:1-8或793-801具有100%的互補(bǔ)性。
84.根據(jù)權(quán)利要求77-83中任一項(xiàng)所述的化合物，其中至少一個(gè)核苷間連接為經(jīng)修飾的核苷間連接。
85.根據(jù)權(quán)利要求84所述的化合物，其中每一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯核苷間連接。
86.根據(jù)權(quán)利要求77-85中任一項(xiàng)所述的化合物，其中至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。
87.根據(jù)權(quán)利要求86所述的化合物，其中至少一個(gè)經(jīng)修飾的糖為二環(huán)糖。
88.根據(jù)權(quán)利要求86所述的化合物，其中至少一個(gè)經(jīng)修飾的糖包含2’-0_甲氧基乙基。
89.根據(jù)權(quán)利要求77-88中任一項(xiàng)所述的化合物，其中至少一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的核喊基。
90.根據(jù)權(quán)利要 求89所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的的核堿基為5-甲基胞嘧啶。
91.根據(jù)權(quán)利要求77-90中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸包含: 由連接的脫氧核苷組成的空隙區(qū)段； 由連接的核苷組成的5'翼區(qū)段； 由連接的核苷組成的3'翼區(qū)段； 其中所述空隙區(qū)段位于5'翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間并且其中每一個(gè)翼區(qū)段的每一個(gè)核苷包含經(jīng)修飾的糖。
92.根據(jù)權(quán)利要求77-91中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸包含: 由10個(gè)連接的脫氧核苷組成的空隙區(qū)段； 由5個(gè)連接的核苷組成的5'翼區(qū)段； 由5個(gè)連接的核苷組成的3'翼區(qū)段； 其中所述空隙區(qū)段位于5'翼區(qū)段與3'翼區(qū)段之間，其中每一個(gè)翼區(qū)段的每一個(gè)核苷包含2' -O-甲氧基乙基糖；并且其中每一個(gè)核苷間連接為硫代磷酸酯連接。
93.根據(jù)權(quán)利要求77-92中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由14個(gè)連接的核苷組成。
94.根據(jù)權(quán)利要求77-93中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由16個(gè)連接的核苷組成。
95.根據(jù)權(quán)利要求77-94中任一項(xiàng)所述的化合物，其中經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個(gè)連接的核苷組成。
96.一種藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求41-53、57-72和77-95中任一項(xiàng)所述的化合物。
97.一種治療動(dòng)物中的DMl的方法，其包括給有此需要的動(dòng)物施用根據(jù)權(quán)利要求41-53,57-72和77-95中任一項(xiàng)所述的化合物或根據(jù)權(quán)利要求54-56和96中任一項(xiàng)所述的組合物。
98.一種治療動(dòng)物中的DMl的方法，其包括給有此需要的動(dòng)物施用化合物，所述化合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含SEQ ID NO: 12-156、160-770和774-792的核堿基序列的任一個(gè)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。
99.一種治療動(dòng)物中的DMl的方法，其包括給有此需要的動(dòng)物施用化合物，所述化合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含SEQ ID NO:41、44、76、109、153、320、321、322、325、329、335 和 657 的核堿基序列的任一個(gè)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。
100.—種治療動(dòng)物中的DMl的方法，其包括給有此需要的動(dòng)物施用化合物，所述化合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含SEQ ID NO:15、73、77、79、83、85、130、602、648、655、674 和 680 的核堿基序列的任一個(gè)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。
101.一種治療動(dòng)物中的DMl的方法， 其包括給有此需要的動(dòng)物施用化合物，所述化合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含與等長(zhǎng)度的 SEQ ID NO:1 的核堿基 664-683、773-792、926-945、927-946、928-947、931-950、935-954、941-960、2089-2108、2163-2182、2490-2509、2499-2518、2676-2695、2685-2704、2676-2695、2688-2707、2697-2716、2764-2783 和 2770-2789 的部分互補(bǔ)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的部分的核堿基序列，其中所述核堿基序列與SEQ ID NO:1互補(bǔ)。
102.一種治療動(dòng)物中的DMl的方法，其包括給有此需要的動(dòng)物施用化合物，所述化合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含與等長(zhǎng)度的 SEQ ID NO:2 的核堿基 812-831、3629-3648、4447-4466、4613-4632、5803-5822、5804-5823、5805-5824、5808-5827、5818-5837、6794-6813、12463-12482、13152-13171和13553-13572的部分互補(bǔ)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的部分的核堿基序列，其中所述核堿基序列與SEQ ID NO:2互補(bǔ)。
103.根據(jù)權(quán)利要求98-102中任一項(xiàng)所述的方法，其中經(jīng)修飾的寡核苷酸降低DMPKmRNA水平。
104.根據(jù)權(quán)利要求98-103中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸減少DMPK蛋白表達(dá)。
105.根據(jù)權(quán)利要求98-104中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸減少CUGexp DMPK。
106.根據(jù)權(quán)利要求105所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸優(yōu)先減少CUGexpDMPK。
107.根據(jù)權(quán)利要求106所述的方法，其中CUGexp的優(yōu)選減少存在于肌肉組織中。
108.一種減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直的方法，其包括給有此需要的動(dòng)物施用根據(jù)權(quán)利要求41-53,57-72和77-95中任一項(xiàng)所述的化合物或根據(jù)權(quán)利要求54-56和96中任一項(xiàng)所述的組合物。
109.一種減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直的方法，其包括給有此需要的動(dòng)物施用包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含SEQ IDNO: 12-156、160-770和774-792的核堿基序列的任一個(gè)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。
110.一種減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直的方法，其包括給有此需要的動(dòng)物施用包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含SEQ IDNO:41、44、76、109、153、320、321、322、325、329、335和 657 的核堿基序列的任一個(gè)的至少 12個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。
111.一種減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直的方法，其包括給有此需要的動(dòng)物施用包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含SEQ IDNO:15、73、77、79、83、85、130、602、648、655、674 和 680 的核堿基序列的任一個(gè)的至少 12 個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。
112.—種減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直的方法，其包括給有此需要的動(dòng)物施用包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含與等長(zhǎng)度的 SEQ ID NO:1 的核堿基 664-683、773-792、926-945、927-946、928-947、931-950、935-954、941-960、2089-2108、2163-2182、2490-2509、2499-2518、2676-2695、2685-2704、2676-2695、2688-2707、2697-2716、2764-2783 和 2770-2789 的部分互補(bǔ)的至少 12 個(gè)連續(xù)核堿基的部分的核堿基序列，其中所述核堿基序列與SEQ ID ΝΟ:1互補(bǔ)。
113.—種減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直的方法，其包括給有此需要的動(dòng)物施用包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含與等長(zhǎng)度的 SEQ ID NO:2 的核堿基 812-831、3629-3648、4447-4466、4613-4632、5803-5822、5804-5823,5805-5824,5808-5827,5818-5837,6794-6813,12463-12482,13152-13171 和13553-13572的部分互補(bǔ)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的部分的核堿基序列，其中所述核堿基序列與SEQ ID NO:2互補(bǔ)。
114.一種減少動(dòng)物中的MBLN依賴(lài)性剪接病變的方法，其包括給有此需要的動(dòng)物施用根據(jù)權(quán)利要求41-53、57-72和77-95中任一項(xiàng)所述的化合物或根據(jù)權(quán)利要求54-56和96中任一項(xiàng)所述的組合物。
115.一種減少動(dòng)物中的MBLN依賴(lài)性剪接病變的方法，其包括給有此需要的動(dòng)物施用包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由12至30個(gè)連接的核苷組成，具有包含SEQ ID NO: 12-156、160-770和774-792的核堿基序列的任一個(gè)的至少12個(gè)連續(xù)核堿基的核堿基序列。
116.根據(jù)權(quán)利要求115所述的方法,其中Sercal、m_Titin、Clcnl和Zasp中的任一個(gè)的剪接被校正。
117.根據(jù)權(quán)利要求98-116中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述施用是全身性施用。
118.根據(jù)權(quán)利要求98-117中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述施用是胃腸外施用。
119.根據(jù)權(quán)利要求118所述的方法，其中所述全身性施用為皮下施用、靜脈內(nèi)施用、腦室內(nèi)施用和鞘內(nèi)施用的任一種。
120.根據(jù)權(quán)利要求98-19中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述施用不是肌內(nèi)施用。
121.根據(jù)權(quán)利要求 98-120中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述動(dòng)物為人。
122.根據(jù)權(quán)利要求41-53、57-72和77-95中任一項(xiàng)所述的化合物，其用于治療動(dòng)物中的 DMl。
123.根據(jù)權(quán)利要求41-53、57-72和77-95中任一項(xiàng)所述的化合物，其用于減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直。
124.根據(jù)權(quán)利要求41-53、57-72和77-95中任一項(xiàng)所述的化合物，其用于減少動(dòng)物中的MBLN依賴(lài)性剪接病變。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于減少動(dòng)物中的DMPK mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)的方法、化合物和組合物。本發(fā)明中還提供了用于優(yōu)先減少動(dòng)物中的CUGexp DMPK RNA、減少動(dòng)物中的肌強(qiáng)直或減少動(dòng)物中的剪接病變的方法、化合物和組合物。此類(lèi)方法、化合物和組合物對(duì)于治療、預(yù)防、延遲或改善1型肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良或其癥狀是有用的。
文檔編號(hào)A61K48/00GK103167883SQ201180035573
公開(kāi)日2013年6月19日 申請(qǐng)日期2011年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月19日
發(fā)明者F·C·貝內(nèi)特, 蘇珊·M·弗賴(lài)爾, R·A·馬克雷德, 桑杰·K·潘迪, 查爾斯·A·桑頓, 瑟曼·惠勒, S·H·程, 安德魯·雷吉爾, 布魯斯·M·文特沃斯 申請(qǐng)人:F·C·貝內(nèi)特, 蘇珊·M·弗賴(lài)爾, R·A·馬克雷德, 桑杰·K·潘迪, 查爾斯·A·桑頓, 瑟曼·惠勒, S·H·程, 安德魯·雷吉爾, 布魯斯·M·文特沃斯