專利名稱：：含有促性腺素的液體制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種含有促性腺素的液體制劑、一種所述制劑的制備方法、一種包括所述制劑的藥筒和一種包括所述藥筒的給藥裝置。促性腺素形成一系列結(jié)構(gòu)相關(guān)的糖蛋白激素。典型的成員包括絨毛膜促性腺素(CG)，促濾泡激素(FSH)，促黃體素(LH)和促甲狀腺素(TSH)。FSH，LH和TSH存在于多數(shù)脊椎動(dòng)物物種中并由垂體合成和分泌。迄今為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)CG僅存在于靈長(zhǎng)類(包括人)和馬中并由胎盤(pán)組織合成。FSH和LH是對(duì)雌性中的卵泡成熟和黃體化以及雄性中的睪丸成熟和精子發(fā)生來(lái)說(shuō)必不可少的垂體激素。其中已經(jīng)使用了單獨(dú)或與含有FSH和LH的混合物的半純化人絕經(jīng)促性腺素結(jié)合給藥的純化FSH來(lái)刺激卵巢卵泡的發(fā)育，正如輔助生殖技術(shù)諸如IVF(體外受精)法所需要的。在臨床上還使用從尿中部分純化的人FSH以刺激患慢性不排卵綜合征或黃體期不足的不排卵婦女體內(nèi)的卵泡成熟。在雄性中已將結(jié)合的FSH和LH用于各種與雄性不育相關(guān)的疾病。近年來(lái)通過(guò)使用重組DNA技術(shù)已經(jīng)可以得到極純的促性腺素制劑(參見(jiàn)，例如Boime等，《生殖內(nèi)分泌學(xué)研究》10，45-50，1992“哺乳動(dòng)物細(xì)胞中重組人FSH，LH和CG的表達(dá)”)。重組促性腺素的質(zhì)量恒定，即它們具有可再現(xiàn)的生物化學(xué)和生物特性。已經(jīng)為所有的亞單位制備了基因組和cDNA克隆并且已鑒定了它們的一級(jí)結(jié)構(gòu)。此外，已將中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞用人促性腺素亞單位基因進(jìn)行了轉(zhuǎn)染且證實(shí)這些細(xì)胞能夠分泌完整的二聚體(例如，Keene等(1989)，《生物化學(xué)雜志》，264，4769-4775；VanWezenbeek等(1990)，在《從克隆到臨床》中(CrommelinD.J.A.和SchellekensH.編輯)，245-251)?，F(xiàn)已證實(shí)例如重組FSH的生物化學(xué)和生物特性與天然FSH的那些特性幾乎相同(Mannaerts等(1991)，《內(nèi)分泌學(xué)》，129，2623-2630)。此外，在控制的卵巢排卵過(guò)度后使用重組FSH可實(shí)現(xiàn)妊娠(Germond等(1992)，《柳葉刀醫(yī)學(xué)雜志》，339，1170；Devroey等(1992)，《柳葉刀醫(yī)學(xué)雜志》，339，1170-1171)。在結(jié)構(gòu)上促性腺素是由兩種不同的亞單位(即α和β)組成的雜二聚體，它們通過(guò)非共價(jià)鍵結(jié)合。在一個(gè)物種中，對(duì)促性腺素家族中的每個(gè)成員來(lái)說(shuō)，α-亞單位基本上相同；物種之間α-亞單位也是高度保守的。對(duì)每個(gè)成員即CG，F(xiàn)SH，TSH和LH來(lái)說(shuō)，β-亞單位是不同的，但在結(jié)構(gòu)上表現(xiàn)出很大的同源性。此外，物種之間β-亞單位也是高度保守的。在人中，α-亞單位由92個(gè)氨基酸殘基組成，而對(duì)于每個(gè)成員來(lái)說(shuō)，β-亞單位大小有變化hFSH中為111個(gè)殘基，hLH中為121個(gè)殘基，hTSH中為118個(gè)殘基和hCG中為145個(gè)殘基(Combarnous，Y.(1992)，《內(nèi)分泌回顧》，13，670-691；Lustbader，J.W.等(1993)，《內(nèi)分泌回顧》，14，291-311)。hCG的β-亞單位比其它的β-亞單位大得多，這是因?yàn)樗诒疚闹蟹Q作羧基末端蛋白(CTP)的C-末端含有約34個(gè)其它的氨基酸。較純的促性腺素制劑是可從市售得到的。例如，含有天然來(lái)源的人絕經(jīng)促性腺素(hMG)(具有的FSH和LH活性比例約為1∶1)和天然來(lái)源的人絨毛膜促性腺素(hCG)的組合物是可以得到的，例如作為下列商品名的凍干制劑Humegon和Pregnyl，來(lái)自N.V.Organon，Oss，荷蘭。例如，凍干重組人FSH(recFSH)制劑可以從來(lái)自同一公司的商品名Puregon得到。重組FSH同樣用于排卵誘導(dǎo)和受控制的卵巢刺激過(guò)度。含水制劑中蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性在制藥工業(yè)中是一個(gè)一般性的難題。同樣，促性腺素水溶液的穩(wěn)定性不足以使儲(chǔ)存期過(guò)長(zhǎng)。對(duì)于在較稀溶液中含有極純促性腺素(使用重組DNA法制備)的制劑來(lái)說(shuō)這是更確切的。因此，正如冷凍干燥后所獲得的，通常將這些制劑以干燥的形式來(lái)儲(chǔ)存。含有促性腺素的穩(wěn)定的凍干藥物制劑在歐洲專利448,146(AkzoN.V.)中公開(kāi)。這些制劑含有有機(jī)羧酸(特別是檸檬酸)和任選的非還原性糖(諸如蔗糖)。另一種包括作為穩(wěn)定劑的蔗糖的含有促性腺素的固體藥物組合物在國(guó)際專利申請(qǐng)WO93/11788(AppliedResearchSystemsARSHoldingN.V.)中公開(kāi)。盡管這些凍干制劑是穩(wěn)定的足以確保足夠的儲(chǔ)存期限，但是它們有給藥前必須再溶解的缺點(diǎn)。因此，患者在使用前必須在溶劑中再溶解干燥的糖蛋白，這是一個(gè)缺陷且對(duì)患者來(lái)說(shuō)不方便。此外，必須同時(shí)提供溶劑和促性腺素的凍干制劑。對(duì)于需要定時(shí)注射促性腺素的患者來(lái)說(shuō)(例如接受日劑量的recFSH用于排卵誘導(dǎo)的患者)，促性腺素制劑易于處理、配藥和注射是重要的。凍干的促性腺素制劑的再溶解要求謹(jǐn)慎和仔細(xì)且如果可能應(yīng)該避免。如果這些糖蛋白能夠產(chǎn)生并作為穩(wěn)定的溶液給予患者(患者可直接注射藥劑而不用再溶解)，那么將有助于應(yīng)用促性腺素。此外，凍干工藝是昂貴和耗時(shí)的工藝步驟，如果當(dāng)制備促性腺素制劑時(shí)可以避免這一步驟，那將是有益的。因此，需要有一種有足夠穩(wěn)定性以確保合理儲(chǔ)存期限的備用注射劑。在WO93/22335(CORTherapeuticsInc.)中公開(kāi)了儲(chǔ)存穩(wěn)定的基本上是純多肽的液體組合物，通過(guò)將多肽溶于pH為5.0至5.5的檸檬酸鹽緩沖液來(lái)制備它們。在WO96/29095(AppliedResearchSystemsARSHoldingN.V.)中公開(kāi)了pH為7的磷酸鹽緩沖液的水溶液中含有用非還原性糖(優(yōu)選甘露糖醇)穩(wěn)定的促性腺素重組-hCG的液體制劑。從歐洲專利448,146(AkzoN.V.)中已知包括促性腺素和多羧酸鹽的溶液。其中描述這些溶液(含有例如檸檬酸)用于制備穩(wěn)定的凍干的促性腺素制劑。在這類溶液自身的長(zhǎng)期儲(chǔ)存(室溫下數(shù)月)方面，促性腺素不夠穩(wěn)定。本發(fā)明涉及一種含有促性腺素的液體制劑，該制劑包括一種促性腺素和穩(wěn)定量的一種多羧酸或其鹽以及穩(wěn)定量的一種硫醚化合物。與其中缺乏硫醚化合物的制劑相比，本發(fā)明含有促性腺素的制劑在延長(zhǎng)的儲(chǔ)存期間具有改善的穩(wěn)定性。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“多羧酸”指的是一種具有兩個(gè)或多個(gè)羧酸部分的有機(jī)酸。典型的多羧酸是檸檬酸，異檸檬酸，酒石酸，天冬氨酸，谷氨酸或這些酸的混合物?？梢允褂萌魏嗡幬锷峡山邮艿柠}，尤其是堿金屬或堿土金屬諸如鈉、鉀和鈣的鹽。優(yōu)選的鹽是鈉鹽。術(shù)語(yǔ)“硫醚化合物”指的是包括具有通式R1-S-R2-的烷基硫代烷基官能團(tuán)的化合物，其中R1是低級(jí)烷基且R2是低級(jí)亞烷基。術(shù)語(yǔ)“低級(jí)烷基”指的是具有1-6個(gè)碳原子的支鏈或非支鏈的烷基，諸如己基、戊基、丁基、叔丁基、丙基、異丙基、乙基或甲基。優(yōu)選的低級(jí)烷基是甲基。術(shù)語(yǔ)“低級(jí)亞烷基”指的是具有1-6個(gè)碳原子的亞烷基，諸如1，6-己二基、1，5-戊二基、1，4-丁二基、1，3-丙二基、亞丙基、1，2-乙二基、亞乙基或亞甲基。優(yōu)選的情況是，硫醚化合物具有相當(dāng)于α-氨基酸側(cè)鏈的烷基硫代烷基官能團(tuán)，諸如氨基酸中的甲硫氨酸，高和正甲硫氨酸，如D-或L-對(duì)映體，或如外消旋混合物。優(yōu)選的硫醚化合物是氨基酸甲硫氨酸(R1是甲基；R2是1，2-乙二基)。本發(fā)明含有促性腺素的液體制劑包括在溶液中與特定穩(wěn)定劑混合的促性腺素。該制劑含有足量的多羧酸或其鹽和足量的硫醚化合物以使溶液中的促性腺素在所需溫度下穩(wěn)定所需的時(shí)間。作為本發(fā)明制劑中定義的所使用的促性腺素或促性腺素衍生物是如上所述的蛋白質(zhì)，例如帶有或不帶有其它蛋白成分的促濾泡激素(FSH)，促甲狀腺素(TSH)，人絨毛膜促性腺素(hCG)，促黃體素(LH)，或其衍生物，或其類似物，及其混合物?？梢詮奶烊粊?lái)源例如從人尿中分離促性腺素，或可以(生物)合成方式制備促性腺素，參見(jiàn)使用重組DNA技術(shù)。例如，可以如Keene等(1989)在“中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞中的生物活性人促濾泡素的表達(dá)”，《生物化學(xué)雜志》，264，4769-4775中所述，或如Reddy等在國(guó)際專利申請(qǐng)WO86/04589(AppliedResearchSystemsARSHoldingN.V.)中所述的方法來(lái)制備重組促性腺素。本文使用的促性腺素例如促濾泡激素(FSH)包括該化合物的類似物和其重組的、天然的、去糖基化的、非糖基化的、修飾糖基化的和其它的形式。作為一個(gè)實(shí)例，在所定義的促性腺素中包括促性腺素的修飾形式，其中該蛋白質(zhì)的羧基末端用羧基末端肽(CTP)延長(zhǎng)，該羧基末端肽的序列來(lái)源于人絨毛膜促性腺素的β-亞單位(CTP序列代表hCGβ-亞單位的112-118至145的氨基酸殘基，或其變體)，如歐洲專利0,461,200(華盛頓大學(xué))中所述。這類修飾形式的實(shí)例是重組FSH-CTP和重組LH-CTP。最優(yōu)選的促性腺素是用重組DNA技術(shù)生產(chǎn)的FSH(recFSH)，其單獨(dú)存在或與LH或hCG混合。從天然來(lái)源中純化的FSH一般僅是部分純化的。(蛋白質(zhì))雜質(zhì)似乎或多或少對(duì)它起穩(wěn)定作用。然而，對(duì)于recFSH，則不存在雜質(zhì)，由此FSH(以蛋白質(zhì)計(jì)以較低濃度存在)對(duì)快速降解更敏感。本文所用的“使穩(wěn)定”是一個(gè)相對(duì)術(shù)語(yǔ)。用穩(wěn)定劑或化合物使含有促性腺素的液體制劑穩(wěn)定指的是用穩(wěn)定劑防止或抑制促性腺素活性降低的能力。例如，與不帶穩(wěn)定劑的制劑相比，如果由于加入了穩(wěn)定化合物(“穩(wěn)定劑”)而在確定的溫度下需要更長(zhǎng)時(shí)間(例如2周而不是1周)降解，由此喪失其體內(nèi)和/或體外的一些活性，那么認(rèn)為制劑被“穩(wěn)定化”?？梢杂蒙婕疤囟ù傩韵偎氐墓椒▉?lái)測(cè)定促性腺素活性。一種可能的活性測(cè)定可以通過(guò)測(cè)定隨時(shí)間形成的(非活性的)寡聚體或α-和β-亞單位的修飾的(例如氧化的)單體的量來(lái)進(jìn)行。通過(guò)HPSEC(高效大小排阻層析)可以測(cè)定樣品中寡聚體的形成。測(cè)定例如recFSH的殘余活性的其它方法包括如Schuurs等的美國(guó)專利再公告號(hào)32,696中所述的酶免疫活性測(cè)定(EIA)；從BioMérieuxofMarcyI’Etoile69260Charbonnières-les-Bains，F(xiàn)rance得到的商品名為FSHEIA的一種用于FSC的試劑盒；和如Mannaerts等在“促性腺素的體外生物測(cè)定的應(yīng)用”，《生殖神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)》，pp.49-58(ElsevierSciencePublishersBV，阿姆斯特丹，荷蘭，1987)中所述的FSH，F(xiàn)SH-CTP和LH的體外生物測(cè)定。在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，含有促性腺素的液體制劑包括作為穩(wěn)定劑的足量的檸檬酸鹽，優(yōu)選檸檬酸鈉和足量的硫醚化合物甲硫氨酸(外消旋DL混合物)。當(dāng)檸檬酸鈉和甲硫氨酸是按照本發(fā)明的液體制劑中所選擇的穩(wěn)定劑時(shí)，檸檬酸鈉的合適濃度是25-100mM且甲硫氨酸的合適濃度是1-10mM。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，將諸如蔗糖或海藻糖這樣的非還原二糖摻入已包括作為穩(wěn)定劑的多羧酸或其鹽和硫醚化合物的制劑可進(jìn)一步提高促性腺素在液體制劑中的穩(wěn)定性。按照本發(fā)明，蔗糖是制劑中優(yōu)選的二糖。約25-300mM的蔗糖濃度是合適的量。特別優(yōu)選的是這樣的含有促性腺素的液體制劑，該制劑包括重組FSH或其衍生物，作為穩(wěn)定劑的檸檬酸鈉和甲硫氨酸以及一定量的蔗糖。當(dāng)RECFSH-CTP的recFSH是液體制劑中待穩(wěn)定的促性腺素時(shí)，蔗糖的優(yōu)選量是50mg/ml。本發(fā)明的制劑優(yōu)選還包括一種或多種非離子表面活性劑。這些表面活性劑起抗吸附劑的作用并可防止由于蛋白質(zhì)對(duì)保存制劑的容器壁的吸附而造成的促性腺素?fù)p失。當(dāng)制劑包括低濃度的重組促性腺素時(shí)，特別需要向本發(fā)明的制劑中加入抗吸附劑。優(yōu)選的非離子表面活性劑是聚山梨醇酯20，NF(購(gòu)自AtlasChemicalCompany的吐溫20)，聚山梨醇酯80，NF(購(gòu)自AtlasChemicalCompany的吐溫80)，Brij35(購(gòu)自ICIPharmaceuticals)，和PluronicF123(購(gòu)自BASF)，特別優(yōu)選的是聚山梨醇酯20，NF(吐溫20)。將聚山梨醇酯更好地理解成符合USP/NFXXII規(guī)范的聚山梨醇酯的含義，USP/NFXXII于1990年1月1日由官方公布在“國(guó)家藥典(NationalFormulary)”，第1763和1967頁(yè)(《美國(guó)藥典條款(USPharmacopeialConvention)》，第22版，1989)。一種抗吸附劑或多種抗吸附劑的含有量應(yīng)使得蛋白質(zhì)在容器壁，或器皿壁或加工過(guò)程中所用的玻璃器皿上的吸附量減少。舉例來(lái)說(shuō)，用于最終制劑中足以形成約0.1-0.2mg/ml濃度的聚山梨醇酯20的量是優(yōu)選的。本發(fā)明的液體制劑具有的pH為6-8，且優(yōu)選6.5-7.2。最優(yōu)選的是溶液具有約7.0的pH。發(fā)現(xiàn)在這些pH范圍內(nèi)本發(fā)明的液體制劑是最穩(wěn)定的。本發(fā)明的穩(wěn)定制劑可以這樣制備在水溶液中將選擇的促性腺素與使蛋白質(zhì)穩(wěn)定的足量多羧酸或其鹽穩(wěn)定劑和足量硫醚化合物穩(wěn)定劑混合，此后，任選地將一定量的非還原性二糖和/或非離子表面活性劑溶于該混合物。然后將所得溶液的pH值調(diào)整至6.5-7.2，并將該溶液進(jìn)行(無(wú)菌)過(guò)濾。本文使用的“水溶液”是一種含有水，優(yōu)選用于非腸道給藥的合適質(zhì)量的水(注射用水，USP)的溶液，所述水是主要溶劑，但不必是唯一溶劑。可以含有少量的藥物上允許的與水混溶的溶劑如乙醇作為一種助溶劑。在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供了一種制備液體促性腺素制劑的方法，該方法包括在水溶液中至少將一種促性腺素與一定量的檸檬酸鈉混合至檸檬酸鈉的濃度為25-100mM，并與一定量的甲硫氨酸混合至甲硫氨酸的濃度為1-10mM；在所述的混合物中任選地溶解一定量的蔗糖至蔗糖的濃度為25-300mM并在所述的混合物中任選溶解一種非離子表面活性劑，優(yōu)選聚山梨醇酯20；以及將所得溶液的pH值調(diào)整至6.5-7.2，隨后將該溶液進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾。用于制備非腸道制劑的一般方法，特別是涉及對(duì)無(wú)菌制劑要采取的措施的方法是本領(lǐng)域公知的，例如Gennaro等在Remington’sPharmaceuticalSciences(第18版，Mack出版公司，1990，參見(jiàn)第8部分“藥物制劑及其制備”以及特別是有關(guān)“非腸道制劑”的章節(jié)第1545-1569頁(yè))中所述。所用的任何促性腺素最好按足以形成用于非腸道(例如，皮下，肌內(nèi)或靜脈內(nèi))給藥的起治療作用的蛋白質(zhì)濃度的量存在于制劑中。促性腺素的有用劑量對(duì)于醫(yī)藥專業(yè)人員來(lái)說(shuō)是公知的，一個(gè)劑量中包括的量一般取決于疾病的情況和所治療的特定患者。例如對(duì)于FSH來(lái)說(shuō)，有用的劑量范圍是從約25至1500國(guó)際單位(IU)，特別是50-225。認(rèn)為約75IU是治療量。舉例來(lái)說(shuō)，已經(jīng)將與10,000國(guó)際單位一樣高的量和與15國(guó)際單位一樣低的量的HCG進(jìn)行了給藥。已經(jīng)使用了范圍在20至225國(guó)際單位LH的注射劑。對(duì)給定劑量來(lái)說(shuō)，本發(fā)明液體制劑中促性腺素的濃度取決于促性腺素的溶解性和治療量。本發(fā)明優(yōu)選的液體制劑是包括作為促性腺素的重組蛋白質(zhì)recFSH或其recFSH-CTP衍生物的制劑。recFSH的合適濃度可以在約20-2000IU/ml之間變化，大致相當(dāng)于2-200μg/ml的濃度(用于具有特定FSH活性的10,000IU/mg蛋白質(zhì)的制劑)。優(yōu)選范圍是500-1500IU/ml。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，將FSH和LH或FSH和HCG的組合物共同溶解，從而形成一種具有治療量的兩種所選促性腺素的制劑。本發(fā)明含有促性腺素的液體制劑可以在不同溫度下以液態(tài)儲(chǔ)存很長(zhǎng)期限，而能夠保留促性腺素的生物活性和物理穩(wěn)定性。優(yōu)選的儲(chǔ)存溫度是低于30℃且高于凝固點(diǎn)。優(yōu)選的儲(chǔ)存溫度范圍是約2℃-8℃。如果需要，本發(fā)明含有促性腺素的液態(tài)制劑可以是凍干的。在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，提供了包括本發(fā)明的無(wú)菌液體制劑的藥筒。本文使用的“藥筒”指的是密閉的容器，諸如安瓿，小瓶，瓶或袋。藥筒可以含有一定量的液體促性腺素制劑，其含量相當(dāng)于促性腺素的一個(gè)或多個(gè)治療劑量。在本發(fā)明的又一個(gè)方面中，提供了一種用于給藥的裝置，該裝置包括含有本發(fā)明的無(wú)菌液體制劑的藥筒。優(yōu)選的給藥裝置是一種筆型的注射器，它包括可輕易調(diào)整待注射制劑的量的用具。這類筆型注射器本身是公知的，諸如眾所周知的B-D筆(BectonDickinsonandCompany的商標(biāo))，它是一種胰島素-注射系統(tǒng)。如上所暗示，通過(guò)本發(fā)明制得的液體促性腺素制劑解決了一個(gè)難題，這就是與本領(lǐng)域技術(shù)水平恰恰相反，提供了可直接注射的制劑，即患者不必在使用前再溶解干燥的產(chǎn)品。在這方面，本發(fā)明還涉及促性腺素在制備治療不育癥的可直接注射的液體藥劑中的應(yīng)用。由于這類制劑既不是現(xiàn)存的也不是從現(xiàn)有的復(fù)雜的注射劑顯而易見(jiàn)的，所述的用途是不能根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)預(yù)計(jì)的并且在患者的治療中具有明顯的優(yōu)點(diǎn)?？梢詫⒅苯幼⑸溆靡后w藥劑保存在一種容器中，諸如小瓶或安瓿，即可以將藥劑從這類容器中直接吸出并吸入注射裝置。藥劑還可以包含在這類藥筒中，象這樣的藥筒可放入一種適用于容納這類藥筒的注射裝置中，這類注射裝置的一個(gè)實(shí)例是涉及上述的筆型注射器。應(yīng)注意的是本發(fā)明的另外一個(gè)優(yōu)點(diǎn)，即該液體藥劑可以是用于多種用途的藥筒形式。使用帶有合適刻度指數(shù)的注射器，患者可以方便地注射每次所需的量。上述B-D筆型注射器(一般用于胰島素)具有可調(diào)整所注射的量的簡(jiǎn)易系統(tǒng)，并可以較容易地配有適用于含有促性腺素的液體藥劑的刻度指數(shù)。就上述而言，本發(fā)明還涉及通過(guò)促性腺素的給藥而治療不育癥的方法，其中通過(guò)從給藥裝置中(諸如一種筆型注射器)直接注射液體促性腺素來(lái)進(jìn)行給藥，所述的注射裝置裝載著包括穩(wěn)定的促性腺素液體制劑的藥筒。本發(fā)明參照下列實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步解釋。實(shí)施例1.含有重組FSH的制劑制備含有重組FSH的液體制劑，該制劑具有表I所述并由A-J表示的組合物。分別在8℃、30℃和40℃下將0.5ml等份的每種組合物儲(chǔ)存在密閉的2ml小瓶中達(dá)2個(gè)月。表IrecFSH制劑，組合物A-J</tables>#除非另有說(shuō)明以mg計(jì)B-E；G-J＝本發(fā)明；A和F＝參照然后通過(guò)測(cè)定細(xì)胞的刺激程度來(lái)確定儲(chǔ)存的recFSH樣品的體外生物活性，所述的細(xì)胞中人FSH受體被表達(dá)。以FSH受體處結(jié)合FSH時(shí)釋放的環(huán)AMP的量來(lái)確定活性。在表II中，將FSH樣品(在指定的溫度下儲(chǔ)存指定的時(shí)間)的生物活性表示為零時(shí)刻類似樣品活性的百分比。表II中的數(shù)據(jù)表明不含硫醚化合物甲硫氨酸的recFSH制劑的穩(wěn)定性低于帶有甲硫氨酸的recFSH制劑，尤其是在室溫以上的溫度下和長(zhǎng)時(shí)間的儲(chǔ)存以后。表II過(guò)一段時(shí)間后FSH組合物A-J的體外生物活性的殘留值**將生物活性表示為零時(shí)刻活性的百分比實(shí)施例2.含有重組FSH-CTP的制劑制備含有重組FSH-CTP的液體制劑，該制劑具有表III所述并由A-J表示的組合物。分別在8℃、20℃、30℃和40℃下將0.5ml等份的每種組合物儲(chǔ)存在密閉的2ml小瓶中2個(gè)月。表IIIrecFSH-CTP制劑，組合物A-J</tables>#除非另有說(shuō)明以mg計(jì)B-E；G-J＝本發(fā)明；A和F＝參照將如實(shí)施例1中所述測(cè)定的體外生物活性列在表IV中。表IV中的數(shù)據(jù)表明不含硫醚化合物甲硫氨酸的recFSH-CTP制劑的穩(wěn)定性低于含有甲硫氨酸的recFSH-CTP制劑，尤其是在室溫或室溫以上儲(chǔ)存以后。表IV過(guò)一段時(shí)間后recFSH-CTP組合物A-J的體外生物活性的殘留值*</tables>*將生物活性表示為零時(shí)刻活性的百分比權(quán)利要求1.一種含有促性腺素的液體制劑，其特征在于該制劑包括一種促性腺素和穩(wěn)定量的一種多羧酸或其鹽以及穩(wěn)定量的一種硫醚化合物。2.根據(jù)權(quán)利要求1的含有促性腺素的液體制劑，其特征在于硫醚化合物是氨基酸甲硫氨酸。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的含有促性腺素的液體制劑，其特征在于多羧酸是檸檬酸或其鈉鹽。4.根據(jù)權(quán)利要求3的含有促性腺素的液體制劑，其特征在于檸檬酸鈉的濃度是25-100mM且甲硫氨酸的濃度是1-10mM。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)的含有促性腺素的液體制劑，其特征在于該制劑還包括一種非還原性糖。6.根據(jù)權(quán)利要求5的含有促性腺素的液體制劑，其特征在于非還原性糖是濃度為25-300mM的蔗糖。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任何一項(xiàng)的含有促性腺素的液體制劑，其特征在于該制劑還包括一種非離子表面活性劑。8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任何一項(xiàng)的含有促性腺素的液體制劑，其特征在于該制劑的pH在6.5和7.2之間，且優(yōu)選7。9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任何一項(xiàng)的含有促性腺素的液體制劑，其特征在于促性腺素選自促黃體素(LH)，人絨毛膜促性腺素(hCG)，促濾泡激素(FSH)，或其衍生物，和其混合物。10.根據(jù)權(quán)利要求9的含有促性腺素的液體制劑，其特征在于促性腺素是重組人FSH(recFSH)或重組FSH-CTP。11.一種用于制備液體促性腺素制劑的方法，包括在水溶液中將至少一種促性腺素與穩(wěn)定量的一種多羧酸或其鹽和穩(wěn)定量的一種硫醚化合物混合；在所述的混合物中任選地溶解一定量的非還原性二糖并在所述的混合物中任選地溶解一種非離子表面活性劑；并將所得溶液的pH值調(diào)整至6.5和7.2之間。12.一種用于制備液體促性腺素制劑的方法，包括在水溶液中將至少一種促性腺素與一定量的檸檬酸鈉混合至檸檬酸鈉的濃度為25-100mM，并與一定量的甲硫氨酸混合至甲硫氨酸的濃度為1-10mM；在所述的混合物中任選地溶解一定量的蔗糖至蔗糖的濃度為25-300mM并在所述的混合物中任選地溶解一種非離子表面活性劑；和將所得溶液的pH值調(diào)整至6.5和7.2之間。13.一種藥筒，包括一種權(quán)利要求1-10中任何一項(xiàng)的含有促性腺素的無(wú)菌液體制劑。14.一種用于給藥的裝置，包括權(quán)利要求13所述的藥筒。15.促性腺素在制備治療不育癥的可直接注射的液體藥劑中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及一種含有促性腺素的液體制劑,其特征在于該制劑包括一種促性腺素和穩(wěn)定量的一種多羧酸或其鹽和穩(wěn)定量的一種硫醚化合物。在水溶液中把特定的蛋白質(zhì)(例如,LH,TSH,FSH,或HCG)與特定的穩(wěn)定劑混合。該制劑含有足以使蛋白質(zhì)穩(wěn)定的量的多羧酸或其鹽(優(yōu)選檸檬酸鈉)和足以使蛋白質(zhì)穩(wěn)定的量的硫醚化合物(優(yōu)選甲硫氨酸)。該制劑最好還包括一種非還原性二糖如蔗糖和一種非離子表面活性劑。文檔編號(hào)A61K47/20GK1191139SQ98104149公開(kāi)日1998年8月26日申請(qǐng)日期1998年1月13日優(yōu)先權(quán)日1997年1月15日發(fā)明者A·T·P·絲克拉巴尼亞,P·J·M·馮·旦·奧特拉申請(qǐng)人:阿克佐諾貝爾公司