專利名稱：一種球蟲病疫苗助懸劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及本發(fā)明屬于獸用疫苗免疫接種助懸劑，更確切地說，本發(fā)明是一種由多種成分組合而成的助懸效果長達(dá)6小時(shí)以上的球蟲病疫苗助懸劑，使球蟲病疫苗免疫接種途徑采用無須先行停水的飲水接種法成為可能。
背景技術(shù)：
雞球蟲病是危害集約化養(yǎng)雞業(yè)最嚴(yán)重的疾病之一，其對雞的危害與一些烈性傳染病相當(dāng)。迄今，雞球蟲病防制的主要手段是使用抗球蟲藥物進(jìn)行化學(xué)防治。然而，隨著抗球蟲藥物的廣泛和連續(xù)使用，耐藥性與藥物殘留兩大問題日趨嚴(yán)重，通過免疫來預(yù)防雞的球蟲病的研究已經(jīng)引起了廣泛重視。影響免疫效果的因素多樣，而科學(xué)的免疫方法是確保誘導(dǎo)堅(jiān)強(qiáng)、持久、均勻免疫力的必要保證。雞球蟲弱毒活卵囊疫苗的惟一免疫接種途徑是口服，逐只滴嘴對雞的應(yīng)激大，且免疫時(shí)費(fèi)時(shí)費(fèi)力；球蟲卵囊在干燥環(huán)境中很快死亡而不能拌入飼料中讓雞較長時(shí)間采食；飲水免疫操作簡單，對雞群應(yīng)激小，但因卵囊密度大，很快就沉入飲水器底部造成大部分疫苗不能發(fā)揮應(yīng)有的作用，故免疫時(shí)必須加入一種能使卵囊漂浮在飲水中的助懸劑。據(jù)有關(guān)報(bào)道，目前所采用的助懸劑雖能使卵囊在一定時(shí)間內(nèi)懸浮在飲水中，但維持時(shí)間很短，一般不超過2小時(shí)，為了讓雞群在2小時(shí)內(nèi)將混有疫苗的水飲完，免疫前必須先行停水，這往往導(dǎo)致雞群搶著喝水，一些強(qiáng)壯的雞只飲得過多而部分體弱者飲得過少，甚至沒有喝到，造成免疫劑量不均勻。當(dāng)疫苗卵囊經(jīng)雞群繁殖后散播大量的子代卵囊于糞便和墊料中時(shí)，雞群中漏免或免疫劑量不足的雞只就會因缺少基礎(chǔ)免疫或基礎(chǔ)免疫不足而發(fā)生重度感染，從而出現(xiàn)血便和增重受阻，甚至死亡，嚴(yán)重影響雞群的生產(chǎn)性能。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是克服已有技術(shù)的一些缺點(diǎn)，探索一種助懸效果持久的球蟲病疫苗助懸劑，達(dá)到免疫前無須先行停水而免疫接種劑量均勻的效果，以解決球蟲病疫苗的免疫接種方法問題。
本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明所述的助懸劑是由羧甲基纖維素、低聚糖和吹干粉所構(gòu)成，其組分含量(以助懸劑重量為100％計(jì))羧甲基纖維素5％～20％，吹干粉0.5％～3％，其余為低聚糖。
羧甲基纖維素，又名CMC(英文Carloxy Methyl Cellulose的縮寫)，是一種高分子陰離子型的纖維素醚。外觀為白色或微黃色粉末，無臭、無毒、易吸潮、稍有咸味，其取代度大于0.4時(shí)為水性，隨著取代度上升，水溶性的透明度相應(yīng)改善，它不溶于酸、醇、醚、氯仿、苯等有機(jī)溶劑，但溶于水而形成穩(wěn)定透明的膠體溶液。羧甲基纖維素具有增稠、懸浮、分散、乳化、粘結(jié)、保水、保護(hù)膠體等多種優(yōu)異性能，可作為乳化劑、增稠劑、分散劑、穩(wěn)定劑等，有“工業(yè)味精”之美稱。
低聚糖又稱寡糖，是指2～10個(gè)單糖以糖苷鍵連接的化合物的總稱，主要包括低聚乳糖、低聚半乳糖、低聚果糖、低聚異麥芽糖、帕拉金糖、低聚龍膽糖、大豆低聚糖、棉籽糖、野芝麻四糖等，最先是作為人的保健品進(jìn)入市場。據(jù)報(bào)道，在飼料中添加適量的低聚糖，能改善家禽腸道內(nèi)的微生態(tài)環(huán)境，提高家禽的免疫力，促進(jìn)生長，具有類似于益生素的作用。球蟲病疫苗免疫后其免疫反應(yīng)往往會對雞腸道造成輕微的損傷作用，短期內(nèi)影響雞體的增重，在球蟲病疫苗助懸劑中添加一定量的低聚糖，對克服該問題將有一定的幫助。另一方面，低聚糖是一種糖類物質(zhì)，可作為分散助劑，增加分散媒介的粘度，并被吸附于混懸微粒的表面增加其親水性，有利于減小微粒的沉降速度和聚結(jié)，增加混懸劑的穩(wěn)定性。
吹干粉是一種干燥劑，防止羧甲基纖維素和低聚糖在保存期間吸潮變質(zhì)。
本發(fā)明通過將上述三種物質(zhì)按一定比例組合而成的助懸劑，能使球蟲卵囊均勻地懸浮在飲水中并可維持6小時(shí)以上而不沉降。一方面，球蟲病疫苗接種前無須先行停水，既省事又減少應(yīng)激，避免出現(xiàn)雞群搶水現(xiàn)象；另一方面，延長飲水時(shí)間，雞只飲水量相對均勻。這最終確保球蟲病疫苗接種的均勻性，為球蟲病疫苗的推廣應(yīng)用提供了簡便可行的方案。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的助懸劑由15％羧甲基纖維素、83％低聚糖和2％吹干粉經(jīng)混合構(gòu)成(以助懸劑重量為100％計(jì))。
下面用實(shí)例進(jìn)一步說明本發(fā)明的效果例1 卵囊沉降靜態(tài)測定試驗(yàn)1材料與方法1.1球蟲卵囊混合液含柔嫩艾美耳球蟲(Eimeria tenella)、毒害艾美耳球蟲(E.necatrix)、巨型艾美耳球蟲(E.maxima)和堆型艾美耳球蟲(E.acervulina)4個(gè)種，以1∶1∶1∶1比例混勻，用2.5％重鉻酸鉀溶液配成100萬個(gè)卵囊/ml的球蟲病疫苗液。
1.2試驗(yàn)分組與處理一組將球蟲卵囊混合液充分搖勻，吸取2ml加入到1000ml飲水中，從不同方向(順時(shí)針、逆時(shí)針、上下)反復(fù)攪拌均勻；稱取本發(fā)明助懸粉7g，緩緩加入上述球蟲卵囊液中，邊加邊從不同方向(順時(shí)針、逆時(shí)針、上下)反復(fù)攪拌，直至助懸劑完全溶解，球蟲卵囊液呈糊狀。
二組按使用說明稱取某公司出售的球蟲病疫苗助懸劑20g，緩緩加入到1000ml飲水中，從不同方向(順時(shí)針、逆時(shí)針、上下)反復(fù)攪拌均勻，直至助懸劑完全溶解；將球蟲卵囊混合液充分搖勻，吸取2ml加入到上述溶液中，從不同方向(順時(shí)針、逆時(shí)針、上下)反復(fù)攪拌均勻。
三組(空白對照組)將球蟲卵囊混合液充分搖勻，吸取2ml加入到1000ml飲水中，從不同方向(順時(shí)針、逆時(shí)針、上下)反復(fù)攪拌均勻。
分別于0h、1h、2h、4h、6h、10h用移液槍吸取每組上層液體15μl，置于血球計(jì)數(shù)板中進(jìn)行卵囊計(jì)數(shù)，每組每次從6個(gè)取樣點(diǎn)吸液計(jì)數(shù)，取其平均值。
2結(jié)果本發(fā)明助懸粉能使球蟲卵囊均勻地懸浮在飲水中并可維持6h以上而不沉降；而某公司出售的球蟲病疫苗助懸劑到2h時(shí)卵囊已下降了67.1％。具體數(shù)據(jù)見表1
表1 球蟲病疫苗助懸劑實(shí)驗(yàn)室靜態(tài)測定試驗(yàn)結(jié)果

例2 雞球蟲病弱毒疫苗不同免疫接種方法的效果比較試驗(yàn)1材料與方法1.1試驗(yàn)雛雞3000只1日齡石歧雜商品雞苗，購自高明墟崗雞場，采用地面墊料平養(yǎng)，自由采食。
1.2雞球蟲病弱毒活卵囊四價(jià)疫苗(正典球苗--COVAC)由本單位研制，含柔嫩艾美耳球蟲(Eimeria tenella)、毒害艾美耳球蟲(E.necatrix)、巨型艾美耳球蟲(E.maxima)和堆型艾美耳球蟲(E.acervulina)4個(gè)種，免疫劑量為1200個(gè)卵囊/雞。
1.3飼料由廣東省廣弘九江飼料有限公司提供，為全價(jià)料，不添加任何抗球蟲藥物。
1.4試驗(yàn)設(shè)計(jì)將上述3000只試驗(yàn)雛雞隨機(jī)分成3組，每組1000只。第1組為停水飲水免疫組，第2組為不停水飲水免疫組，第3組為滴嘴免疫組，每組于4日齡時(shí)進(jìn)行免疫接種。具體處理如下第1組免疫前先停水2h，再進(jìn)行飲水免疫接種球蟲病疫苗。先按每只雞制水后2小時(shí)內(nèi)需要飲用的水量約5ml稱量本組所需的水量即5kg水，按使用說明加入某公司出售的球蟲病疫苗助懸劑1包，從不同方向(順時(shí)針、逆時(shí)針、上下)反復(fù)攪拌均勻，再加入1000羽份正典球苗(用前充分搖勻)，從不同方向(順時(shí)針、逆時(shí)針、上下)反復(fù)攪拌均勻。將上述疫苗液均一地分配到10個(gè)飲水器中，均勻地放置入雞舍內(nèi)讓雞只自由飲用，直至全部飲完再換飲清水。
第2組免疫前不須停水，直接進(jìn)行飲水免疫接種球蟲病疫苗。先按每只雞平時(shí)4～6小時(shí)內(nèi)需要飲用的水量約6ml稱量本組所需的水量即6kg水，再加入1000羽份正典球苗(用前充分搖勻)，從不同方向(順時(shí)針、逆時(shí)針、上下)反復(fù)攪拌均勻，然后慢慢倒入50g本發(fā)明助懸粉，邊倒邊從不同方向(順時(shí)針、逆時(shí)針、上下)反復(fù)攪拌，直至助懸粉完全溶解，疫苗液呈糊狀。將上述疫苗液均一地分配到10個(gè)飲水器中，均勻地放置入雞舍內(nèi)讓雞只自由飲用，直至全部飲完再換飲清水。
第3組逐只雞滴嘴免疫正典球苗，按1瓶80ml(1000羽份/瓶)計(jì)算每羽滴2滴(0.04ml/滴)。
1.5觀察指標(biāo)1.5.1臨床觀察整個(gè)試驗(yàn)期間，每天做好詳細(xì)記錄，包括雞群的健康狀況，發(fā)病、死亡的雞數(shù)，診斷結(jié)果，藥耗費(fèi)用，用料量等。
1.5.2糞便檢查分別于10、20、30、40日齡時(shí)從每組雞舍地面的多個(gè)部位采集新鮮糞便樣品各20份，進(jìn)行克糞便球蟲卵囊計(jì)數(shù)(OPG)，以監(jiān)測卵囊排出情況。
1.5.3體重比較每隔2周各組隨機(jī)抽取30～60只雞逐只稱量體重，采用SPSS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
1.5.4成活率及料肉比的統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)結(jié)束后，統(tǒng)計(jì)各組雞的成活率和料肉比。
2結(jié)果2.1試驗(yàn)全期各組臨床表現(xiàn)免疫后第13～14天，3組雞只均出現(xiàn)不同程度的血便，尤以第1組最嚴(yán)重，每平方米面積約有10～15堆，死雞9只；而第2組和第3組癥狀較輕，每平方米面積僅有1～3堆血便。立即應(yīng)用球速克進(jìn)行治療，到免疫后第15天時(shí)情況已基本好轉(zhuǎn)，球蟲病得到控制，以后再未發(fā)現(xiàn)有臨床球蟲病。
2.2各組死亡、成活情況試驗(yàn)期間，各組均有雞只死亡，經(jīng)剖檢鑒定，第1組因球蟲死亡率為0.9％；而第2組和第3組均為非球蟲病致死。具體情況見表2。
表2 各組死亡情況統(tǒng)計(jì)

2.3各組糞便中球蟲卵囊排出情況各組糞便中球蟲卵囊排出情況見表3。
表3 各組雞的球蟲檢出率及克糞便卵囊計(jì)數(shù)(OPG)

注采用SPSS軟件的S-N-K法(即q檢驗(yàn)法)，*表示第2組與第1組、第3組相比差異顯著(P＜0.05)。
從表3可見，3組均于10d時(shí)卵囊數(shù)最高，以后迅速下降，30d降到最低點(diǎn)，到40d時(shí)略有回升。這種變化趨勢尤以第2組(不停水飲水免疫組)最明顯，10d其OPG值達(dá)31745±1025，顯著高于第1組和第3組(P＜0.05)，20d時(shí)迅速降為1460±541，至30d時(shí)其OPG值更低，只有90±49。
2.4各組各個(gè)生長階段的平均體重從表4可見，于14d時(shí)以第1組(停水飲水免疫組)的平均體重較低，于28d、42d時(shí)則以第3組(滴嘴免疫組)均重較低，其余各日齡各組均重差異不顯著。
表4 各組各個(gè)生長階段的平均體重

注采用SPSS軟件的S-N-K法(即q檢驗(yàn)法)，上標(biāo)相同的組間或同組不同日齡間差異不顯著(P＞0.05)，上標(biāo)不同的組間或同組不同日齡間差異顯著(P＜0.05)。
2.5試驗(yàn)全期的飼料報(bào)酬從表5可見，3組在試驗(yàn)全期其料肉比無明顯差異。
表5 試驗(yàn)全期各組飼料轉(zhuǎn)化率

3結(jié)論從上述各項(xiàng)指標(biāo)來看，第2組不停水免疫的接種方法的免疫結(jié)果較為理想，并且采取不停水飲水免疫，使雞只免受因停水、捉雞的應(yīng)激。
權(quán)利要求
1.一種球蟲病疫苗助懸劑，其特征在于，該助懸劑是由羧甲基纖維素、低聚糖和吹干粉所構(gòu)成，其組分含量(以助懸劑重量為100％計(jì))羧甲基纖維素5％～20％，吹干粉0.5％～3％，其余為低聚糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的球蟲病疫苗助懸劑，其特征在于，所述低聚糖為低聚乳糖、低聚半乳糖、低聚果糖、低聚異麥芽糖、帕拉金糖、低聚龍膽糖、大豆低聚糖、棉籽糖、野芝麻四糖一種或幾種的組合。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種球蟲病疫苗助懸劑，其特征在于，該助懸劑是由羧甲基纖維素、低聚糖和吹干粉所構(gòu)成，其組分含量(以助懸劑重量為100％計(jì))羧甲基纖維素5％～20％，吹干粉0.5％～3％，其余為低聚糖。上述助懸劑具有能使球蟲卵囊均勻地懸浮在飲水中并可維持6小時(shí)以上而不沉降。一方面，球蟲病疫苗接種前無須先行停水，既省事又減少應(yīng)激，避免出現(xiàn)搶水現(xiàn)象；另一方面，延長飲水時(shí)間，雞只飲水量相對均勻；最終確保球蟲病疫苗接種的均勻性，為球蟲病疫苗的推廣應(yīng)用提供了簡便可行的方案。
文檔編號A61K9/10GK1724073SQ20051003600
公開日2006年1月25日 申請日期2005年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月22日
發(fā)明者譚志堅(jiān), 翁亞彪 申請人:佛山市正典生物技術(shù)有限公司