專利名稱：新型嘧啶－2,4,6－三酮衍生物,它們的生產(chǎn)方法和含有這些化合物的藥劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及5，5-二取代的嘧啶-2，4，6-三酮的新衍生物。這些化合物顯示了顯著的抗腫瘤和抗轉(zhuǎn)移活性。
已經(jīng)描述了至少17種不同然而高度同源的MMP物質(zhì)的特征，包括間質(zhì)成纖維細(xì)胞膠原酶(MMP-1，HFC)，嗜中性膠原酶(MMP-8，HNC)，兩種明膠酶，基質(zhì)溶素(如HSL-1)和HPUMP(關(guān)于最近的論述，參看Birkedal-Hansen，H.，Moore，W.G.I.，Bodden，M.K.，Windsor，L.J.，Birkedal-Hansen；B.，DeCarlo，A.，Engler，J.A.，Critical Rev.Oral Biol.Med.(1993)4，197-250)。這些蛋白酶共有許多結(jié)構(gòu)和功能特征，但在它們的底物特異性上有所不同。只有HNC和HFC能夠在單鍵上分裂I、II和III型天然三股螺旋膠原，生產(chǎn)出天然鏈長的3/4和1/4片段。這降低了膠原的熔點和使它們易于進(jìn)一步受其它基質(zhì)降解酶的攻擊。
然而，該基質(zhì)的無控制過度降解是許多病理狀態(tài)的特征，例如在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性硬化癥的臨床照片中，在腫瘤轉(zhuǎn)移灶，角膜潰瘍，炎癥性疾病和侵襲的形成中以及在骨和牙齒疾病中。
能夠推斷，這些臨床照片的發(fā)病機(jī)理能夠有利地受基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑給藥的影響。同時，許多化合物從文獻(xiàn)中已經(jīng)得知(例如參看D.E.Levy，A.M.Ezrin Emerging Drugs 2，205-230(1997)，M.Whittaker，P.Brown，Curr.Opin.Drug Discovery Dev.(1998)，1(2)，157-164的綜述文章)，或者描述在專利文獻(xiàn)中，它們主要具有異羥肟酸殘基，硫醇或膦基作為鋅結(jié)合基團(tuán)(尤其參看例如Glycomed的WO-A-9209563，Hoffmann-LaRoche的EP-A-497192，British Biotechnology的WO-A-9005719，Celltech的EP-A-489577，Beecham的EP-A-320118，Searle的US-A-4595700，Agouron Pharmaceuticals的WO97/20824，Bayer Corporation的WO96/15096)。
這些化合物的一些作為基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制劑顯示了高活性，但它們的口服有效性是非常低的。還有，這些化合物經(jīng)常顯示了金屬蛋白酶的廣譜抑制，這些抑制與不希望有的副作用和毒性相關(guān)。
在EP0869947中已經(jīng)描述了歸類為基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制劑的嘧啶-2，4，6-三酮衍生物。然而，對低毒性、無副作用和具有對金屬蛋白酶的顯著抑制活性，尤其作為用于對抗腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的慢性治療的候選藥物的新化合物依然存在著高度的需求。
現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，所要求的新嘧啶-2，4，6-三酮衍生物作為基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑具有與在EP0869947中要求的化合物相比的改進(jìn)活性，還表現(xiàn)了良好的口服有效性。
其中R1表示苯基，苯氧基，苯基硫基，苯亞硫?；?，苯磺?；交被虮交谆鶜埢?，其中苯基結(jié)構(gòu)部分能夠被一個或多個鹵素原子，羥基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷基，氰基，或硝基取代，優(yōu)選的取代是在對和/或間位上有一個到兩個取代基。
R2表示任選取代的芳基或雜芳基。
本發(fā)明還包括了結(jié)構(gòu)式I的化合物的藥學(xué)可接受的鹽或藥物前體以及這些化合物用于生產(chǎn)藥劑的用途。
在R2的例子中列舉的芳基包括苯環(huán)。雜芳基理解成由5-7個成環(huán)原子組成的環(huán)狀不飽和或飽和環(huán)體系，這些環(huán)原子能夠選自一個或多個碳，氮，氧或硫原子。優(yōu)選的是缺電子雜芳基殘基如含氮6元環(huán)，如吡啶，嘧啶，吡嗪或1，3，5-三嗪或其N-氧化物。最優(yōu)選的是雜芳基殘基嘧啶基或吡嗪基。芳基或雜芳基環(huán)可以被一個或多個取代基取代，所述取代基選自鹵素，羥基，烷氧基，氨基，二烷基氨基，氰基，低級烷基，低級烯基，低級炔基，低級?；图壨榛蚧?，低級烷基磺酰基，低級烷基氨基羰基，氨基羰基，SO2NR3R4，硝基，低級烷氧基羰基，羧基，其中R3和R4能夠是相同或不同的，表示氫；直鏈或支化的C1-C6烷基，其能夠被OH，N(CH3)2取代一次或幾次，或者能夠插入氧，或者表示COR5，其中R5是能夠被NH2取代的烷基。優(yōu)選的是在對和/或間位上被1-2個上面列舉的取代基所取代。
在殘基R2本身或它與其它殘基相結(jié)合中的低級烷基表示C1-C6烷基，優(yōu)選的是甲基，乙基，丙基，異丙基或叔丁基。
低級烯基表示C2-C6烯基，優(yōu)選烯丙基或戊二烯基。低級炔基表示C2-C6炔基，優(yōu)選炔丙基。
在殘基R2中的低級?；绕浔硎?C(O)-C1-C6-烷基或-C(O)H，優(yōu)選的是乙?；?。
在R2中的烷基殘基能夠任選被雜原子(O，S，NH)插入一次或幾次。
鹵素理解為氟、氯、溴、碘，優(yōu)選氯或溴。
如果通式I的化合物含有一個或幾個非對稱碳原子，通式I的旋光性化合物也是本發(fā)明的主題物質(zhì)。
通式I的化合物能夠通過眾所周知的方法來合成，優(yōu)選在于使通式II的化合物 其中R1具有以上含義和T表示離去基團(tuán)如Hal或OSO2R3。Hal表示氯、溴或碘，和R3表示芳基或甲基殘基，與通式III的化合物反應(yīng) 其中R2具有上述含義，以及任選轉(zhuǎn)化成藥物可接受的鹽。
通式II的化合物能夠通過與已知文獻(xiàn)程序類似的方式來合成。因此，例如，在5-位上溴化的嘧啶-2，4，6-三酮能夠通過使適宜的溴代丙二酸二烷基酯與脲反應(yīng)來合成(例如Acta Chim.Acad.Sci.Hung.107(2)，139(1981))。通式II的相應(yīng)溴化或氯化化合物能夠通過使在5-位上被R1-苯基取代的嘧啶-2，4，6-三酮與溴(類似于J.Prakt.Chemie136，329(1933)或J.Chem.Soc.1931，1870)或磺酰氯(J.Chem.Soc.1938，1622)或N-溴-丁二酰亞胺或類似溴化劑反應(yīng)來獲得。這些操作程序也描述在EP0869947中。
通式III的胺可以商購或在文獻(xiàn)中是通常已知的或與實驗部分中所述方法相似的方法來制備。
能夠根據(jù)已知方法，通過使丙二酸酯與脲反應(yīng)來制備其中T表示氫的通式II的嘧啶-2，4，6-三酮(例如參看J.Med.Chem.10，1078(1967)或Helvetica Chim.Acta 34，459(1959)，Pharmacie 38(1)，65(1983)或EP0869947)。反應(yīng)通常在醇，如甲醇、乙醇或丁醇中在適合的醇鈉的存在下在40℃和100℃之間的溫度下進(jìn)行。
制備嘧啶-2，4，6-三酮所需的丙二酸酯可以從文獻(xiàn)中得知或能夠根據(jù)從文獻(xiàn)中得知的方法來制備。在以下合成路線中描述了用于制備其中R1具有上述含義的丙二酸的適宜方法 2、H2SO4(b)酯化(c)碳酸二甲酯，NaH能夠在Houben-Weyl Vol E5/2，J.Org.Chem.46，2999(1981)和Arch.Pharm.323，579(1990)中找到這些反應(yīng)的實例。
通式I的化合物能夠含有一個或幾個手性中心和然后能夠以外消旋或以旋光形式存在。外消旋體能夠根據(jù)已知方法分離成對映體。優(yōu)選的是，能夠通過結(jié)晶分離的非對映體鹽通過與旋光性酸如D-或L-酒石酸，扁桃酸，蘋果酸，乳酸或樟腦磺酸或與旋光性胺如D-或L-α-苯基乙基胺，麻黃素，奎尼丁或辛可尼丁反應(yīng)來從外消旋混合物形成。堿金屬鹽，堿土金屬鹽像Ca或Mg鹽，銨鹽，乙酸鹽或鹽酸鹽主要用作藥學(xué)可接受的鹽，它們按通常方式，例如通過用無機(jī)或有機(jī)堿或無機(jī)酸，例如氫氧化鈉，氫氧化鉀，氨水，C1-C4烷基胺，例如三乙胺或鹽酸滴定這些化合物來獲得。這些鹽通常通過從水/丙酮中再沉淀來純化。
根據(jù)本發(fā)明的式I的新化合物和它們的鹽能夠以液體或固體的形式經(jīng)腸道或非腸道給藥。在這一點上，可以考慮所有通常的給藥形式，例如片劑，膠囊，包膜片劑，糖漿劑，溶液，懸浮液等等。在注射液中常用的含有添加劑如穩(wěn)定劑，增溶劑和緩沖劑的水優(yōu)選用作注射介質(zhì)。
這些添加劑例如是酒石酸鹽和檸檬酸鹽緩沖劑，乙醇，配位劑(如乙二胺四乙酸和它的非毒性鹽)，調(diào)節(jié)粘度的高分子聚合物(如液體聚環(huán)氧乙烷)。用于注射溶液的液體載體物質(zhì)必須是無菌的和優(yōu)選被分配到安瓿瓶中。固體載體物質(zhì)例如是淀粉，乳糖，甘露醇，甲基纖維素，滑石，高分散硅酸，高分子脂肪酸(如硬脂酸)，明膠，瓊脂，磷酸鈣，硬脂酸鎂，動物和植物脂肪，固體高分子聚合物(如聚乙二醇)；用于口服給藥的適合制劑能夠任選含有香味劑和甜味劑。
劑量取決于各種因素，如給藥方式，物種，年齡和/或個體健康狀況。日給藥劑量是大約10-1000mg/人，優(yōu)選100-500mg/人，能夠單次給藥或者分幾次給藥。
本發(fā)明化合物的藥物前體是在體內(nèi)能夠轉(zhuǎn)化成藥理活性化合物的這樣一種。最普通的藥物前體是羧酸酯。
B)2-(4-(4-氯-苯氧基)-苯基)-嗎啉-4-基-乙硫酮(ethanthione)12.4g的通過以上工序獲得的產(chǎn)物與硫(4g)和嗎啉(8.8ml)混合。將混合物加熱到150℃，保持2小時，在冰浴中冷卻和用乙醇(20ml)處理30分鐘。收集沉淀結(jié)晶和從乙醇中再結(jié)晶出來，獲得了13g的標(biāo)題化合物。m.p.104-105℃。
C)(4-(4-氯-苯氧基)-苯基)-乙酸將10.4g的在步驟B中制備的化合物與50％硫酸(200ml)一起加熱到130℃，并維持8小時。在冷卻到室溫后，反應(yīng)混合物用水(300ml)稀釋和用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用水洗滌和隨后用2N碳酸鈉溶液萃取。水相用稀鹽酸酸化，加入乙酸乙酯，分離、干燥和蒸發(fā)有機(jī)相，獲得了5.1g的褐色殘余物。m.p.98-100℃。
D)(4-(4-氯-苯氧基)-苯基)-乙酸甲酯將5.1g的來自步驟C的產(chǎn)物溶解在甲醇(50ml)中。將溶液冷卻到-10℃，用亞硫酰氯(3ml)處理，隨后在回流下加熱1小時。蒸發(fā)反應(yīng)混合物和將殘余物溶解在醚中。醚相用水洗滌，干燥和蒸發(fā)，獲得了5.1g的紅褐色油。
E)2-(4-(4-氯-苯氧基)-苯基)-丙二酸二甲酯氫化鈉(350mg)在碳酸二甲酯(10ml)中的懸浮液在室溫下用在步驟D中獲得的產(chǎn)物處理。將混合物加熱到90℃并維持1小時，冷卻和倒入冰水中，再用二氯甲烷萃取。干燥和蒸發(fā)萃取物，獲得了5.7g的油狀標(biāo)題化合物。
F)5-(4-(4-氯-苯氧基)-苯基)-嘧啶，2，4，6-三酮將鈉(800mg)溶解在乙醇(80ml)中。向該溶液添加脲(1.65g)和以上獲得的化合物在乙醇中的溶液(5.5g)。在回流下加熱混合物3小時，冷卻到室溫，用冰水(100ml)處理和用稀鹽酸酸化。收集沉淀物，用水洗滌和干燥，獲得了5g的標(biāo)題化合物。M.p.257-258℃。
G)5-溴-5-(4-(4-氯-苯氧基)-苯基)-嘧啶，2，4，6-三酮在室溫下將在步驟F中獲得的化合物(6.3g)，N-溴-丁二酰亞胺(4.1g)和過氧化二苯甲酰(100mg)在四氯化碳(120ml)中的懸浮液攪拌3小時。蒸發(fā)混合物，殘余物用乙酸乙酯萃取。干燥和蒸發(fā)有機(jī)相，獲得了7.5g的呈粘稠油的標(biāo)題化合物。
H)5-(4-(4-氯-苯氧基)-苯基)-5-(4-嘧啶-2-基-哌嗪)-嘧啶-2，4，6-三酮來自步驟G的化合物(410mg)在甲醇(5ml)中的溶液用N-(嘧啶-2-基)-哌嗪(330mg)處理?；旌衔飻嚢?4小時。在蒸發(fā)反應(yīng)混合物后獲得的殘余物用二氯甲烷/甲醇5％作為洗脫劑進(jìn)行硅膠色譜法提純。合并相關(guān)級分，獲得了410mg的呈無定形固體的標(biāo)題化合物，通過質(zhì)譜法確認(rèn)m/e492。
實施例25-[4-(4-氯-苯氧基)-苯基]-5-(2，3，5，6-四氫-[1，2’]雙吡嗪基-4-基)-嘧啶-2，4，6-三酮與實施例1步驟H類似，使用330mg 1-(吡嗪-2-基)-哌嗪代替N-(嘧啶-2-基)-哌嗪來制備標(biāo)題化合物，獲得了460mg的呈無定形產(chǎn)物的標(biāo)題化合物。經(jīng)質(zhì)譜法確定m/e492。
實施例3使用實施例1的操作程序，用相應(yīng)的酚代替4-氯酚制備以下化合物。最終產(chǎn)物通過質(zhì)譜法得到確認(rèn)。
實施例44-(4-5-[4-(4-氯-苯氧基)-苯基]-2，4，6-三氧代-六氫-嘧啶-5-基-哌嗪-1-基)-N-(2-羥基乙基)-苯磺酰胺A)N-(2-羥乙基)-4-哌嗪-1-基-苯磺酰胺將4-氟-苯磺酰氯溶解在二氯甲烷(20ml)中，用乙醇胺(1.2ml)在二氯甲烷(10ml)中的溶液進(jìn)行處理。攪拌該混合物1小時和用水(50ml)萃取2次。水相用氯化鈉飽和和用乙酸乙酯萃取2次。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)相，再蒸發(fā)。將1.4g的所得4-氟-N-羥乙基-苯磺酰胺溶解在水(15ml)中，并用哌嗪(2.6g)處理?；旌衔锘亓?小時和在室溫下保持24小時。收集沉淀物，用小量水洗滌和干燥，獲得了1.6g的標(biāo)題化合物，通過質(zhì)譜法得到確認(rèn)APCI[M+H]＝286。
B)4-(4-5-[4-(4-氯-苯氧基)-苯基]-2，4，6-三氧代-六氫-嘧啶-5-基-哌嗪-1-基)-N-(2-羥基乙基)-苯磺酰胺來自實施例1步驟G的化合物(230mg)在甲醇(5ml)中的溶液用N-(2-羥基-乙基)-4-哌嗪-1-基-苯磺酰胺(330mg)(參看以上)處理。將混合物攪拌24小時。在蒸發(fā)反應(yīng)混合物后獲得的殘余物用二氯甲烷/甲醇(15％)作為洗脫劑來進(jìn)行硅膠色譜法提純。合并相關(guān)級分，獲得了186mg的呈無定形固體的標(biāo)題化合物，通過質(zhì)譜法得到確認(rèn)APCI[M+1]＝614。
實施例5使用實施例1的操作程序，根據(jù)需要用相應(yīng)的酚替換4-氯酚來制備以下化合物。哌嗪衍生物根據(jù)實施例4步驟A和用適合的胺替換乙醇胺來制備。最終產(chǎn)物用質(zhì)譜法確定。
實施例6N-(2-氧代-[1，3]二氧戊環(huán)-4-基甲基)-4-4-[2，4，6-三氧代-5-(4-苯氧基-苯基)-六氫-嘧啶-5-基]-哌嗪-1-基-苯磺酰胺將實施例5，no.11的產(chǎn)物(120mg)溶解在二氯甲烷(5ml)和四氫呋喃(5ml)的混合物中。溶液用N，N’-羰基-二咪唑(65mg)處理和在室溫下攪拌4小時。蒸發(fā)溶劑和殘余物使用二氯甲烷/甲醇(9∶1)作為洗脫溶劑進(jìn)行硅膠色譜法提純。蒸發(fā)含有各級分的產(chǎn)物，獲得了60mg的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜APCI[M+H]＝636，[M-H]＝634。
實施例7N-(4-氨基-丁?；?-4-4-[2，4，6-三氧代-5-(4-苯氧基-苯基)-六氫-嘧啶-5-基]-哌嗪-1-基-苯磺酰胺A)4-(4-芐基-哌嗪-1-基)-苯磺酰胺將4-氟苯磺酰氯(25g)溶解在二氯甲烷(250ml)中并在0℃用氨水溶液(25％，50ml)處理。在冷卻的同時攪拌混合物2小時，并在室溫下攪拌一整夜。將反應(yīng)混合物酸化并蒸發(fā)有機(jī)溶劑。殘余物用乙酸乙酯萃取，獲得了20g 4-氟苯磺酰胺，將它溶解在水(300ml)中，用1-芐基-哌嗪(102g)處理并再回流24小時。過濾反應(yīng)混合物，獲得了26g的標(biāo)題化合物。(質(zhì)譜APCI[M+H]＝332)。
B)4-[4-(哌嗪-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代-丁基-氨基甲酸叔丁酯將4-(N-叔丁氧羰基)-氨基丁酸(3.05g)溶解在四氫呋喃(30ml)中，并用N，N’羰基二咪唑(2.5g)處理?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?5分鐘，在回流下加熱15分鐘并在室溫下攪拌1小時。加入來自步驟A的產(chǎn)物(3.3g)并將混合物攪拌一整夜。蒸發(fā)溶劑，殘余物與二氯甲烷和水混合。分離、干燥有機(jī)相，和蒸發(fā)溶劑。殘余物使用二氯甲烷/甲醇(9∶1)作為洗脫劑進(jìn)行硅膠色譜法提純。產(chǎn)物使用鈀碳催化劑在甲醇中進(jìn)行催化氫化，獲得了2.5g的標(biāo)題化合物。(質(zhì)譜APCI[M-H]＝425)。
C)N-(4-氨基-丁?；?-4-4-[2，4，6-三氧代-5-(4-苯氧基-苯基)-六氫-嘧啶-5-基]-哌嗪-1-基-苯磺酰胺與實施例1步驟H類似，使在步驟B中獲得的產(chǎn)物與5-溴-5-(4-(苯氧基)-苯基)-嘧啶-2，4，6-三酮反應(yīng)。后一化合物用類似于在實施例1中所述的操作程序，用酚替代對氯酚來制備。為除去BOC保護(hù)基團(tuán)，將產(chǎn)物(290mg)溶解在HCl在二噁烷的4N溶液中。在室溫下1小時之后，潷析溶液和殘余物用醚研磨，獲得了180mg的標(biāo)題化合物。(質(zhì)譜APCI[M+H]＝621)。
實施例8使用實施例7的操作程序，用適合的N-叔丁氧羰基保護(hù)氨基酸替代4-(N-叔丁氧羰基)-氨基-丁酸，來制備以下化合物。最終產(chǎn)物通過質(zhì)譜法得到確認(rèn)。
實施例92-氧代-2-(4-4-[2，4，6-三氧代-5-(4-苯氧基-苯基)-六氫-嘧啶-5-基]-哌嗪-1-基-苯磺酰氨基)-乙基]-氨基甲酸4-甲氧基苯酯將實施例5 no.1的產(chǎn)物(140mg)溶解在二氯甲烷(10ml)，與三乙胺(0.14ml)混合和用氯甲酸4-甲氧基苯基酯處理。混合物在室溫下攪拌90分鐘，并蒸發(fā)。殘余物使用二氯甲烷/甲醇(9∶1)作為洗脫劑進(jìn)行硅膠色譜法提純。合并相關(guān)級分，獲得了90mg的標(biāo)題化合物。(質(zhì)譜APCI[M+H]＝743)。
實施例10為了測定MMP，例如HNC(MMP-8)的抑制作用，催化區(qū)域(分離和純化，例如參看Schnierer，S.，Kleine，T.，Gote，T.，Hillemann，A.，Knuper，V.，Tschesche，H.，Biochem.Biophys.Res.Commun.(1993)191，319-326)用具有各種濃度的抑制劑孵育。隨后，以類似于Grams F.等人，F(xiàn)EBS335(1993)76-80的方式測定在標(biāo)準(zhǔn)底物的轉(zhuǎn)化中的初始反應(yīng)速度。通過描繪互逆反應(yīng)速度對抑制劑濃度的曲線來評價結(jié)果。根據(jù)Dixon，M.，Biochem.J.(1953)55，170-202，通過圖解法獲得了作為橫坐標(biāo)的負(fù)數(shù)部分的抑制常數(shù)(Ki)。
合成膠原酶底物是在C末端用DNP(二硝基酚)偶聯(lián)的七肽。所述DNP殘基通過七肽的相鄰色氨酸的熒光的位阻來猝滅。在包括DNP基團(tuán)的三肽的裂解之后，色氨酸熒光增加。底物的蛋白水解裂解因此能夠通過熒光值來測定。
a)第一種方法檢測在25℃下的新鮮制備的50mM Tris緩沖液(pH8.0)中進(jìn)行，該緩沖液用雙硫腙處理以除去痕量的重金屬。加入4mM CaCl2，以及緩沖液用氬氣飽和。蛇毒蛋白酶II的儲備溶液通過將蛋白從硫酸銨懸浮液中離心和隨后溶解在檢測緩沖液中來制備。膠原酶的儲備溶液用檢測緩沖液稀釋。酶濃度通過UV測量法(ε280＝2.8 104M-1cm-1，ε2882.2 104M-1.cm-1)來測定和將儲備溶液冷貯存。該溶液按1∶100稀釋，以獲得最終16nM檢測濃度。以21.4μM的濃度使用具有52μM的Km的熒光底物DNP-Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-Ala-D-Arg-NH2；已經(jīng)使用12.8μM的濃度用于Ki測定。用裝有恒溫吸收池夾具的分光熒光計(Perkin Elmer，Model 650-40)，分別在λ＝320和420nm的激發(fā)和發(fā)射波長下測量底物熒光。在加入酶之后立即監(jiān)測底物水解10分鐘。所有反應(yīng)至少進(jìn)行三次。從通過vo/vi對[抑制劑濃度]的曲線獲得的直線的交點計算抑制劑的Ki值，而IC50值通過用簡單穩(wěn)健加權(quán)的非線性回歸從vi/vo對[抑制劑濃度]的曲線來計算。
b)第二種方法檢測緩沖液50mM Tris/HCl pH7.6(Tris＝三-(羥甲基)-氨基甲烷)100mM NaCl/10mM CaCl2/5％MeOH(如果需要)酶8nM人嗜中性膠原酶(MMP-8)的催化區(qū)域(Met80-Gly242)。
底物10μM DNP-Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-Ala-D-Arg-NH2
總檢測體積1ml制備酶和抑制劑在檢測緩沖液(25℃)中的溶液。通過將底物加入溶液中來開始反應(yīng)。熒光底物的裂解之后，分別用280nm和350nm的激發(fā)和發(fā)射波長進(jìn)行熒光光譜法分析。根據(jù)抑制劑濃度計算IC50值，它對于降低反應(yīng)的速度至一半(與沒有抑制劑的反應(yīng)相比)是必要的。
表1表示了與在專利申請EP0869947中列舉的來自實施例26的化合物和優(yōu)選化合物no.118相比的IC50值。
表1MMP-抑制劑的IC50值(對MMP-8，催化區(qū)域)
權(quán)利要求
1.下式的化合物 其中R1表示苯基，苯氧基，苯基硫基，苯基亞硫酰基，苯基磺?；?，苯基氨基或苯基甲基殘基，其中苯基結(jié)構(gòu)部分能夠被一個或多個鹵素原子，羥基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷基，氰基，或硝基取代，R2表示任選取代的芳基或雜芳基，以及它們的藥學(xué)可接受的鹽或式I化合物的藥物前體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的式I的化合物，其中R1是苯氧基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的式I的化合物，其中R1是被氯、溴、甲基或叔丁基取代一次或多次的苯氧基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的式I的化合物，其中R2是嘧啶、吡嗪或它的N-氧化物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的式I的化合物，其中R2是被-SO2NR3R4取代的苯基，其中R3和R4能夠是相同或不同的，和表示氫；直鏈或支化的C1-C6烷基，它能夠被OH，N(CH3)2取代一次或幾次，或者能夠插入氧，或者表示COR5，其中R5是能夠被NH2取代的烷基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的式I的化合物，其中R3表示氫和R4表示氫，-CH2CH2OH；-CH2CH2-N(CH3)2；-CH2CH(OH)-CH2OH；-CH-(CH2OH)2；-CH2-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2OH；或-C(CH2OH)3。
7.選自以下化合物的根據(jù)權(quán)利要求1的式I的化合物5-(4-(4-氯-苯氧基)-苯基)-5-(4-嘧啶-2-基-哌嗪)-嘧啶-2，4，6-三酮5-[4-(4-氯-苯氧基)-苯基]-5-(2，3，5，6-四氫-[1，2’]雙吡嗪基-4-基)-嘧啶-2，4，6-三酮5-[4-(3，4-二氯-苯氧基)-苯基]-5-(4-嘧啶-2-基-哌嗪-1-基)-嘧啶-2，4，6-三酮5-[4-(3，4-二氯-苯氧基)-苯基]-5-(2，3，5，6-四氫-[1，2’]雙吡嗪基-4-基)-嘧啶-2，4，6-三酮5-[4-(4-溴-苯氧基)-苯基]-5-(4-嘧啶-2-基-哌嗪-1-基)-嘧啶-2，4，6-三酮4-(4-5-[4-(4-氯-苯氧基)-苯基]-2，4，6-三氧代-六氫-嘧啶-5-基-哌嗪-1-基)-N-(2-羥基乙基)-苯磺酰胺4-(4-5-[4-(4-溴-苯氧基)-苯基]-2，4，6-三氧代-六氫-嘧啶-5-基-哌嗪-1-基)-苯磺酰胺4-(4-5-[4-(4-溴-苯氧基)-苯基]-2，4，6-三氧代-六氫-嘧啶-5-基-哌嗪-1-基)-N-(2-二甲基氨基-乙基)-苯磺酰胺4-(4-5-[4-(4-氯-苯氧基)-苯基]-2，4，6-三氧代-六氫-嘧啶-5-基-哌嗪-1-基)-苯磺酰胺4-(4-5-[4-(4-氯-苯氧基)-苯基]-2，4，6-三氧代-六氫-嘧啶-5-基-哌嗪-1-基)-N，N-雙-(2-羥乙基)-苯磺酰胺N-(2，3-二羥基-丙基)-4-4-[2，4，6-三氧代-5-(4-苯氧基-苯基)-六氫-嘧啶-5-基]-哌嗪-1-基-苯磺酰胺N-(2-羥基-1-羥甲基-乙基)-4-4-[2，4，6-三氧代-5-(4-苯氧基-苯基)-六氫-嘧啶-5-基]-哌嗪-1-基-苯磺酰胺N-2-[2-(2-羥基-乙氧基)-乙氧基]-乙基-4-4-[2，4，6-三氧代-5-(4-苯氧基-苯基)-六氫-嘧啶-5-基]-哌嗪-1-基-苯磺酰胺N-(2-羥基-1，1-雙-羥甲基-乙基)-4-4-[2，4，6-三氧代-5-(4-苯氧基-苯基)-六氫-嘧啶-5-基]-哌嗪-1-基-苯磺酰胺4-(4-5-[4-(4-氯-苯氧基)-苯基]-2，4，6-三氧代-六氫-嘧啶-5-基-哌嗪-1-基)-N-(2-羥基-1，1-雙-羥甲基-乙基)-苯磺酰胺N-(2-氧代-[1，3]二氧戊環(huán)-4-基甲基)-4-4-[2，4，6-三氧代-5-(4-苯氧基-苯基)-六氫-嘧啶-5-基]-哌嗪-1-基-苯磺酰胺。
8.含有作為活性成分的根據(jù)權(quán)利要求1-7的化合物與藥學(xué)可接受的賦型劑或稀釋劑的混合物的藥物組合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-7的化合物用于制備具有金屬蛋白酶抑制劑活性的藥劑的用途。
10.具有抗腫瘤和/或抗轉(zhuǎn)移活性的根據(jù)權(quán)利要求9的化合物的用途。
全文摘要
具有金屬蛋白酶抑制劑活性的式(I)的化合物:R
文檔編號A61P43/00GK1374954SQ00813006
公開日2002年10月16日 申請日期2000年9月29日 優(yōu)先權(quán)日1999年10月1日
發(fā)明者弗蘭克·格拉姆斯, 漢斯-威利·克雷爾, 赫伯特·萊納特, 埃內(nèi)斯托·門塔, 格爾德·齊默爾曼 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司