專利名稱：：含有西洋參的組合物和西洋參茶飲料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種具有提高免疫力，緩解體力疲勞功能的組合物，尤其涉及一種含西洋參原料制成的組合物。本發(fā)明還涉及一種含西洋參的保健飲料。
背景技術(shù)：
：現(xiàn)代社會人們的競爭日趨激烈，工作壓力日益提高，生活節(jié)奏加快，生存環(huán)境的污染又越來越嚴(yán)重，機(jī)體免疫力低下，處于疲勞或過度疲勞等亞健康狀態(tài)的人群比例不斷上升。疲勞是一種生理現(xiàn)象。疲勞可根據(jù)致病原因分為3種類型體力疲勞、病理性疲勞及心理疲勞。其中體力疲勞是由于肌肉過度過久地處于緊張狀態(tài)，新陳代謝加快、代謝產(chǎn)物二氧化碳和乳酸在血液中的濃度升高而產(chǎn)生的，常表現(xiàn)為感覺肌肉缺乏能量或力量，進(jìn)行一定的體力活動后容易疲勞，或疲勞不易消失，甚至不同程度地影響日常生活及工作。工作時間長、體力勞動過度、體育鍛煉運(yùn)動量過大，均可造成體力疲勞。短暫的體力疲勞一般休息后可以恢復(fù)，如果長期處于疲勞狀態(tài)又得不到充分休息，就會使身體處于亞健康狀態(tài)，會使身體抵抗力下降，產(chǎn)生各種疾病。人體運(yùn)動后產(chǎn)生的身體疲勞是一種綜合性的生理過程。它是以中樞作用為主導(dǎo)，在中樞和周圍組織相互影響下發(fā)生的。它既與神經(jīng)細(xì)胞的變化有關(guān)，也與周圍組織的反射性和體液性影響有關(guān)。疲勞時的生化變化帶有全身性的特點(diǎn)，它是伴有機(jī)體內(nèi)環(huán)境的變化和不同生理機(jī)能的失調(diào)。疲勞感是一種保護(hù)性反應(yīng)，這種保護(hù)性反應(yīng)可使與機(jī)體生命攸關(guān)的機(jī)能免于過度衰竭，所以人體在產(chǎn)生疲勞時應(yīng)及時調(diào)整自身的身體狀況和精神狀態(tài)。緩解體力疲勞最根本的措施是通過運(yùn)動和營養(yǎng)改善體質(zhì)。免疫力是指機(jī)體抵抗外來侵襲，維護(hù)機(jī)體內(nèi)部環(huán)境穩(wěn)定性的一種能力。不管是何種原因引起的“亞健康”，不管是那種表現(xiàn)的“亞健康”，最主要、最本質(zhì)的是人體自身免疫功能下降。只要提高自身免疫功能，“亞健康”就會遠(yuǎn)離。據(jù)世界衛(wèi)生組織調(diào)查，全球約有35%以上的人處于疲勞狀態(tài)，男性人群疲勞狀態(tài)者更高達(dá)60-70%。疲勞正成為現(xiàn)代人尤其是男性健康的大敵。有統(tǒng)計顯示我國大約有2億人處于亞健康的疲勞狀態(tài)，疲勞綜合癥在我國城市發(fā)病率為10-20%，而需要提前預(yù)防疲勞的人群就更加廣泛。專家們指出，持續(xù)過度疲勞、長期睡眠不佳后果嚴(yán)重，會引發(fā)慢性咽喉炎、頸部或腋窩淋巴結(jié)腫痛、肌肉酸痛、多發(fā)性非關(guān)節(jié)炎性關(guān)節(jié)疼痛、頭暈、頭痛等病癥，并最終導(dǎo)致免疫力下降。因此，如何讓人們在現(xiàn)代節(jié)奏及壓力越來越大的生活環(huán)境下增強(qiáng)身體免疫力，緩解人們的體力疲勞，遠(yuǎn)離亞健康狀態(tài)，保護(hù)人類的正常身體機(jī)能和提高人類的生存質(zhì)量，是保健食品的研發(fā)者所要解決的問題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的是提供一種具有緩解體力疲勞、增強(qiáng)免疫力等保健功能的組合物，其由以下重量份原料制成西洋參15_45份左旋肉堿10-30份牛磺酸2.5-7.5份其中西洋參制成乙醇提取物。優(yōu)選由以下重量份原料制成西洋參30份左旋肉堿20份?；撬?份其中西洋參制成乙醇提取物。本發(fā)明的另一個目的在于提供一種具有緩解體力疲勞、增強(qiáng)免疫力等保健功能的保健飲料(以下也稱西洋參茶飲料)，在上述組合物配方的基礎(chǔ)上，將其制成飲料，更利于身體的吸收，能快速達(dá)到緩解體力疲勞和提高免疫力的效果。本發(fā)明的保健飲料，每升飲料由以下成份組成西洋參1.5-4.5g;制成乙醇提取物左旋肉堿l_3g;?；撬?.25-0.75g；余量為調(diào)味劑輔料和水。優(yōu)選每升飲料由以下成分組成西洋參3g；制成乙醇提取物左旋肉堿2g;?；撬?.5g；余量為調(diào)味劑、輔料和水。其中，原料西洋參是以30%-90%的食用乙醇浸泡西洋參，獲得西洋參醇浸液；再將獲得的西洋參醇浸液濃縮，獲得的西洋參膏，作為制備保健飲料的原料。優(yōu)化的提取工藝是將西洋參用乙醇浸泡為6-10次，第一次加入西洋參原料重量的3-7倍量(w/w)的乙醇浸泡至少1天，第29次每次分別加入西洋參原料重量的2-4倍量的乙醇浸泡，每次至少1天，獲得西洋參醇浸液。濃縮回收乙醇，得西洋參膏，將西洋參膏濃縮至在4555°C測定相對密度彡1.20，總皂苷含量彡18.0%。本發(fā)明的組合物可以選擇常用的輔料制成片劑、膠囊、口服液等劑型。本發(fā)明的保健飲料優(yōu)選將其制備成罐裝飲料。罐裝飲料輔料可以選用葡萄糖作為甜味劑，改善口感。葡萄糖用量，每升可加33_99g；優(yōu)選的用量為，每升飲料加66g。制成飲料的工藝將提取物中加入適量純水，攪拌使其溶解分散，加入到配液容器內(nèi)，再將規(guī)定量的左旋肉堿、?；撬岷推咸烟怯眠m量純水溶解加入上述配液容器，然后加入適量純化水至規(guī)定量，攪拌、過濾、灌裝、滅菌，獲得西洋參茶飲料的最終產(chǎn)品。本發(fā)明的組合物是在傳統(tǒng)中藥西洋參(別名花旗參RadixPanacisquinquefolii)益氣養(yǎng)陰、滋補(bǔ)強(qiáng)壯、養(yǎng)血生津的作用基礎(chǔ)上，輔以L-肉堿、?；撬?，通過L-肉堿、?；撬醽碚{(diào)節(jié)機(jī)體各種酶的活性和調(diào)節(jié)人體各種代謝過程，中西醫(yī)理念合理結(jié)合，通過調(diào)節(jié)人體整體機(jī)能平衡，從而達(dá)到增強(qiáng)免疫力和緩解體力疲勞的保健功能。本發(fā)明的西洋參提取工藝不同目前常規(guī)的一些有機(jī)溶劑提取方法，而采用的是乙醇的浸提工藝，通過本工藝提取出的西洋參提取物，既最大限度保留了西洋參的功效成份，同時在制備口服液體劑型時，長時間存放不會出現(xiàn)沉淀，使溶液澄清透明，而且口感純正。本發(fā)明的西洋參茶飲料具有作用溫和持久、健康安全無害的特點(diǎn)，除了具有緩解體力疲勞和增強(qiáng)免疫力的功效外，還具有改善心血管功能，調(diào)節(jié)人體內(nèi)分泌、抗氧化等多重功效，因此作用面寬廣深厚、底蘊(yùn)豐富，支撐力量大。本發(fā)明的西洋參茶飲料在產(chǎn)品劑型上選擇了更有利于人體吸收的液體飲料形式，在包裝形式上也可以采用了更具時尚感的易拉罐或其他包裝形式，為市場帶來了差異化產(chǎn)品。在同時兼顧到產(chǎn)品的功效和口感的原則下，甜味劑選擇葡萄糖，一方面是葡萄糖口感綿和、純正，另一方面葡萄糖也可以快速供給能量能夠輔助降低疲勞。因本發(fā)明的西洋參茶飲料所用原料均來自普通食品原料、食品添加劑、保健食品原料中的可用品種，故本產(chǎn)品對人體健康安全無害。抽檢本發(fā)明的西洋參茶飲料樣品，未發(fā)現(xiàn)世界反興奮劑機(jī)構(gòu)2007年規(guī)定禁用的刺激劑、麻醉劑、β-阻斷劑、利尿劑和激素類藥物。本發(fā)明的西洋參茶飲料經(jīng)毒理試驗(yàn)驗(yàn)證其無毒副作用，雌雄小鼠經(jīng)口急性毒性最大耐受量(MTD)>20.Og/kgBW，其屬于無毒毒類，且無誘變、致畸、致癌等副作用。本發(fā)明的西洋參茶飲料經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證不會對機(jī)體的肝、腎、脾等臟器造成任何的負(fù)擔(dān)，不會對機(jī)體產(chǎn)生其他的不良反應(yīng)，服用本發(fā)明的西洋參茶飲料后其機(jī)體發(fā)育、機(jī)體代謝不會受到不良影響。經(jīng)興奮劑檢測，本發(fā)明的西洋參茶飲料也不包含興奮劑類物質(zhì)。經(jīng)過功能實(shí)驗(yàn)，本發(fā)明西洋參茶飲料在延長小鼠負(fù)重游泳時間的試驗(yàn)結(jié)果為陽性，降低小鼠運(yùn)動后血清尿素氮水平的試驗(yàn)結(jié)果為陽性，增加小鼠肝糖原貯量試驗(yàn)結(jié)果為陽性，依據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范(2003年版)》緩解體力疲勞功能的標(biāo)準(zhǔn)判斷，本品具有緩解體力疲勞功能。本發(fā)明的西洋參茶飲料的對小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)和ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化增殖試驗(yàn)的結(jié)果均為陽性，表明本發(fā)明的西洋參茶飲料具有增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能的作用；綿羊紅細(xì)胞免疫受試動物后血清溶血素檢測結(jié)果陽性，綿羊紅細(xì)胞免疫受試動物后脾細(xì)胞抗體生成試驗(yàn)結(jié)果陽性，表明本發(fā)明的西洋參茶飲料具有增強(qiáng)體液免疫功能作用，并且本發(fā)明的西洋參茶飲料具有增強(qiáng)NK細(xì)胞活性作用，依據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范(2003年版)》增強(qiáng)免疫力功能評價標(biāo)準(zhǔn)判斷，本品具有增強(qiáng)免疫力功能作用。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1西洋參茶飲料配制西洋參茶飲料配方西洋參提取物，將西洋參930g制成乙醇提取物；左旋肉堿620g；?；撬?55g；葡萄糖20.46Kg；1)西洋參的提取西洋參除去雜草、泥土等雜質(zhì)。將食用乙醇濃度調(diào)配成30%，第1次加入5倍量30%的乙醇浸泡時間24小時，第2次至第8次每次分別加入3倍量30%的乙醇，浸泡時間每次24小時(過濾，減壓回收乙醇，得總皂苷含量>18.0%的稠膏。出膏率約為50-60%)。2)飲料配制過程采用上述由930g西洋參制成的乙醇提取物，將浸提所得稠膏加入適量純水，攪拌使其溶解分散，加入到配液容器內(nèi)，將配方量的左旋肉堿、?；撬岷推咸烟怯眠m量純水溶解加入上述配液容器，加入西洋參香精155g，然后加入純化水至310L，然后攪拌、過濾、灌裝每罐310ml，合計1000罐、滅菌。實(shí)施例2西洋參茶飲料的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)將實(shí)施例1所述配方制備的鋁易開蓋兩片罐的西洋參茶飲料進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，其實(shí)驗(yàn)條件溫度40士1°C，濕度75士10%，三個月，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。表1.鷹牌西洋參茶飲料穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(三次加速)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例3毒理試驗(yàn)一、30天喂養(yǎng)試驗(yàn)1.檢驗(yàn)依據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范(2003年版)》2.檢驗(yàn)結(jié)果與評價對健康SPF級SD種大鼠每天給予3.32,6.63、13.27g/kg本發(fā)明花旗茶飲料40倍去糖濃縮液，相當(dāng)于市售產(chǎn)品的132.7,256.3、530.6g/kgBW，為人體推薦量的25、50、100倍，試驗(yàn)時間共30天，終期結(jié)果(1)、大鼠一般生理體征、行為、大小便、皮毛等均無異；(2)、體重、攝食量和食物利用率指標(biāo)正常；(3)、血液常規(guī)指標(biāo)下常；(4)、生化指標(biāo)正常；(5)、各臟器重量、臟/體比值正常；(6)、病理學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)與受試物有關(guān)的特殊病理學(xué)改變。二、小鼠經(jīng)口急性毒性、微核試驗(yàn)、精子畸變、Ames試驗(yàn)1.檢驗(yàn)依據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范(2003年版)》2.檢驗(yàn)結(jié)果與評價(1)、小鼠經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)雌雄小鼠經(jīng)口急性毒性最大耐受量(MTD)>20.Og/kgBff,根據(jù)急性毒性分級，受試物西洋參茶飲料屬無毒級物質(zhì)。(2)、小鼠骨髓微核試驗(yàn)2.50-10.Og/kgBW劑量的微核試驗(yàn)結(jié)果為陰性，受試物對體細(xì)胞無誘變作用。(3)、小鼠精子畸形試驗(yàn)2.50-10.Og/kgBff劑量的精子畸變試驗(yàn)結(jié)果為陰性，受試物對生殖細(xì)胞無誘變作用。(4)、Ames試驗(yàn)用濃度為85000μg/皿的受試物對鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型菌株TA97、TA98、TA100、TA102進(jìn)行平皿摻入試驗(yàn)，無論在加入不加S9混合液時，各劑量組均未引起試驗(yàn)菌株的回復(fù)突變菌落數(shù)顯著增加，Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性，受試物無直接或間接的致突變作用。實(shí)施例4功能學(xué)試驗(yàn)檢驗(yàn)依據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范(2003年版)》一、[緩解體力疲勞功能試驗(yàn)]1、材料1.1受試樣品樣品本發(fā)明茶飲料，淺黃色液體，310ml/罐，具體配方見實(shí)施例1。人體推薦日服量為每天一次，每次一罐。按60公斤體重成人計算推薦日服液為5.167ml/kgBW。樣品的密度為1.027g/ml，故其推薦量為5.306g/kgBW。本實(shí)驗(yàn)采用實(shí)施例1西洋參茶飲料40倍的濃縮液(Ikg去糖濃縮液，相當(dāng)于40kg市售產(chǎn)品)作為受試樣品。1.2劑量設(shè)計設(shè)0.66、1.33,3.98g/kgBW三個劑量組，為推薦日服量的5、10、30倍，另設(shè)純水對照組。劑量如下純水對照組純凈水低劑量組0.66g/kgBff(5倍推薦量日服量)中劑量組1.33g/kgBW(10倍推薦日服量)高劑量組3.98g/kgBff(30倍推薦日服量)1.3受試物制備每天按設(shè)計量分別稱取樣品濃縮液2.64,5.32、15.92g，用純凈水分別定容至40ml。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果所報告的劑量均為樣品40倍去糖濃縮液的劑量。1.4給受試物的方法各劑量組按每日一次，每次以0.10ml/10gBW灌胃量灌胃給予受試物，純水對照組按同等容量灌胃給予純凈水。1.5動物SPF級昆明種雄性小白鼠，6-8周齡、體重18_22g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供(動物生產(chǎn)許可證號2006-0015號，合格證編號N00030765)。顆粒飼料由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。1.6動物試驗(yàn)室條件動物實(shí)驗(yàn)室為SPF級，實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號SYXK(粵)2003-0011。室溫22士2°C，濕度60-80%。1.7儀器游泳箱(50cmX50cmX40cm)，上海7230分光光度計，美國IKA生產(chǎn)的T25高速剪切分散器，日立7060全自動生化分析儀。1.8試劑測定尿素氮用酶法試劑盒，由中生北控生物科技公司提供；測定乳酸用LACTATE-PAP酶法試劑盒，由北京利德曼生化技術(shù)公司提供。其他所有試劑為AR級，從廣州生化試劑商店購買。2.方法2.1試驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)動物在實(shí)驗(yàn)室條件下適應(yīng)3天后，將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分成4批，每批按劑量設(shè)計分成4組，每組12-13只動物。每日經(jīng)口灌胃給予西洋參茶飲料受試樣品，給樣量根據(jù)動物每周體重變化調(diào)整，共42天。試驗(yàn)結(jié)束時測定小鼠負(fù)重游泳時間、尿素氮含量、血乳酸曲線下面積和肝糖原含量。2.1.1負(fù)重游泳試驗(yàn)給予本發(fā)明茶飲料受試樣品42天，末次給予受試物30min后，將尾根部負(fù)荷5%體重鉛皮的小鼠置于水深30cm、水溫25士0.5°C的游泳箱中游泳，記錄小鼠自游泳開始至死亡的時間，即小鼠負(fù)重游泳時間。2.1.2尿素氮、血乳酸及肝糖原測定尿素氮測定給予本發(fā)明茶飲料受試樣品42天，末次給予受試物30min后，各組無負(fù)重的小鼠分別在水溫30°C水中游泳90min，休息60分鐘后采眼球血，4°C冰箱放置3小時后分離血清，用酶法試劑盒測定尿素氮。肝糖原測定采用蒽酮法，末次給予受試物30min后，準(zhǔn)確稱取50mg肝，加入4mlTCA液，每管勻漿lmin，以3000轉(zhuǎn)/min離心15min，取上清液lml，加入95%乙醇4ml，充分混勻，37°C水浴3h，用2ml蒸餾水溶解糖原，震蕩直至糖原完全溶解后將IOml蒽酮試劑加入各管，浸入沸水15min，冷卻后用上海7230分光光度計(波長620nm)比色測定。按公式計算肝糖原含量。血乳酸含量測定給予西洋參茶飲料受試樣品42天，末次給予受試物30min后，第一次采眼球血后即放于水溫30°C游泳lOmin，第二次采眼球血，然后停止安靜20min，第三次才眼球血，用LACTATE-PAP試劑盒分別測定游泳前乳酸和游泳后0min、20min的乳酸，根據(jù)公式計算三時點(diǎn)乳酸曲線下面積。血乳酸曲線下面積=5X(游泳前血乳酸值+3X游泳后Omin的血乳酸值+2X游泳后休息20min的血乳酸值)2.2統(tǒng)計所有數(shù)據(jù)用SPSS11.0軟件包進(jìn)行方差分析統(tǒng)計。3.試驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明茶飲料對小鼠負(fù)重游泳時間的影響結(jié)果見表2，各劑量組的小鼠負(fù)重游泳時間延長，其中中劑量組與純水對照組比較，差異有非常顯著性意義(P<0.01)，試驗(yàn)結(jié)果陽性。表2本發(fā)明茶飲料對小鼠負(fù)重游泳時間的影響(x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>本發(fā)明茶飲料對小鼠運(yùn)動后血清尿素氮含量的影響結(jié)果見表3，各劑量組的血清尿素氮水平降低，其中中、低劑量組與純水對照組比較，差異有非常顯著性意義(P<0.01)，試驗(yàn)結(jié)果陽性。表3本發(fā)明茶飲料對小鼠運(yùn)動后血清尿素氮含量的影響(x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>本發(fā)明茶飲料對小鼠運(yùn)動前后血乳酸含量的影響結(jié)果見表4、5，各劑量組的三時點(diǎn)血乳酸曲線下面積，與純水對照組比較差異無顯著性意義(P>0.05)，試驗(yàn)結(jié)果陰性。表4小鼠運(yùn)動前、后血乳酸含量(I土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表5對小鼠運(yùn)動前、后血乳酸含量的影響(士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>本發(fā)明茶飲料對小鼠肝糖原的影響結(jié)果見表6，各劑量組小鼠的肝糖原含量明顯增加，其中低、中劑量組與純水對照組比較，差異有非常顯著性意義(P<0.01)，試驗(yàn)結(jié)果陽性。表6對小鼠的肝糖原的影響GrtS)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>本發(fā)明茶飲料對小鼠體重的影響，由表2、3、5、6可見，各劑量組與純水對照組比較，始重、終重的差異均無顯著性意義(P>0.05)，表明受試樣品對試驗(yàn)小鼠體重增長物明顯影響。4.小結(jié)對SPF級昆明種小鼠經(jīng)口每日分別給予0.66、1.33、3.98g/kgBff劑量的本發(fā)明茶飲料40倍去糖濃縮液，相當(dāng)于市售產(chǎn)品25.7,51.8、155.0ml，為推薦日服量的5,10,30倍，試驗(yàn)時間共42天。結(jié)果顯示1)受試樣品可延長小鼠負(fù)重游泳時間，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。2)受試樣品可降低小鼠運(yùn)動后血清尿素氮水平，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。3)受試樣品不能降低小鼠運(yùn)動前后三時點(diǎn)乳酸曲線下面積，試驗(yàn)結(jié)果為陰性。4)受試樣品可增加小鼠肝糖原儲量，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。依據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范(2003年版)》緩解體力疲勞功能的標(biāo)準(zhǔn)判斷，檢驗(yàn)樣品本發(fā)明茶飲料具有緩解體力疲勞功能。二、[增強(qiáng)免疫力功能動物試驗(yàn)]1.實(shí)驗(yàn)材料樣品本發(fā)明茶飲料，淺黃色液體，310ml/罐。樣品的人體推薦日服量為每天一次，每次一罐，以成人體重60kg計為5.167ml/kgBW，樣品的密度為1.027g/ml，故其推薦量為5.306g/kgBff0由于本發(fā)明茶飲料推薦日服量較大，本實(shí)驗(yàn)采用40倍的濃縮液作為受試樣品，其折算后推薦量為0.133g/kgBW。劑量與分組將動物分為I、II、III、IV批，每批48只動物隨機(jī)分為四組，分別給予純凈水和低、中、高三個劑量，劑量如表7表7各組劑量m\40倍濃縮液劑量市售樣品劑量低劑量0.67g/kgBW26.8g/kgBW相當(dāng)于推薦量5倍中劑量1.33g/kgBW53.2g/kgBW相當(dāng)于推薦量10倍高劑量3.99g/kgBW_159.6g/kgBW_相當(dāng)于推薦量30倍_樣品處理實(shí)驗(yàn)時稱量40倍濃縮液樣品1.34,2.66,7.89g，用純凈水配制成20ml的樣液，分別供低、中、高三個劑量組動物灌胃使用。以下試驗(yàn)結(jié)果標(biāo)示的劑量均為40倍濃縮液樣品的劑量。動物SPF級NIH種雌性小白鼠，6-8周齡(體重18_22g)，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號SCXK(粵)2003-0002，質(zhì)量合格證編號0032206，顆粒飼料由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。動物實(shí)驗(yàn)室SPF級，室溫22士2°C；濕度60-80%。給予受試物途徑每天按0.lml/10gBff量灌胃動物給予受試物。2.試驗(yàn)方法動物在實(shí)驗(yàn)室條件下檢疫三天后，以下每個實(shí)驗(yàn)均隨機(jī)將48只鼠分成四，每組12只，每日灌胃給予受試物，給樣量根據(jù)每周體重增減調(diào)整，實(shí)驗(yàn)時間為4周。2.1小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)(足跖厚度增加法)試驗(yàn)結(jié)束前第4天免疫動物，用2%(ν/ν)綿羊紅細(xì)胞腹腔注射0.2ml致敏動物，5天后測定左后足跖部厚度，接著于該處皮下注射20%(ν/ν)綿羊紅細(xì)胞20ul/鼠，注射后24小時測定左后足跖部厚度三次，得平均值.2.2ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)(MTT法)脾細(xì)胞懸液制備無菌取脾，置于盛有適量無菌Hanks液的小平皿中，用嵌子輕輕將脾撕碎，制成單個細(xì)胞懸液。經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾，Hanks液洗3次，每次離心IOmins(lOOOr/min)。然后將細(xì)胞懸浮于2ml的完全培養(yǎng)液中，用CASYDT細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)脾細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度3XIO6個/ml。淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)將細(xì)胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1ml，一孔75ulConA液(相當(dāng)于7.5ug/ml)，另一孔作為對照，置5%CO2，37°C培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4小時，每孔吸去上清液0.7ml，加入0.7ml無血清RPMI1640培養(yǎng)液，同時加入MTT(5mg/ml)50ul/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入Iml酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶溶解，分加于96孔培養(yǎng)板中，作3個孔的平行樣，以570nm波長測定光密度值。2.3小鼠血清溶血素滴度測定(血凝法)實(shí)驗(yàn)結(jié)束前的第4天免疫動物，每只腹腔注射2%的綿羊紅細(xì)胞0.2ml，5天后摘除眼球采血，分離血清備用。凝集反應(yīng)用生理鹽水將血清倍比稀釋于微量反應(yīng)板內(nèi)，各50ul，加入0.5%的綿羊紅細(xì)胞50ul，混勻，裝入濕潤飯盒內(nèi)蓋好，置于37°C溫箱3小時后，觀察抗體凝集反應(yīng)程度。2.4小鼠脾細(xì)胞抗體生成試驗(yàn)免疫動物取脫纖維的羊血，用生理鹽水洗滌3次，每次離心(2000r/min)IOmin,壓積SREC用生理鹽水配成2%(ν/ν)的細(xì)胞懸液，每只鼠腹腔注射0.2ml。脾細(xì)胞懸浮液制備將SRBC免疫4天后的小鼠頸椎脫經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾，離心(1000r/min)10mins，用Hank，s液洗2遍，最后將細(xì)胞懸浮在5mlRPMI1640培養(yǎng)液中，用CASYDT細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)脾細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度5XIO6個/ml?？瞻叩臏y定將表層培養(yǎng)基加熱熔解后，放4550°C水浴保溫，與等量pH7.27.4、2倍濃度的Hank，s液混合，分裝小試管，每管0.5ml，再向管內(nèi)加50ul10%SRBC(ν/ν，用SA緩沖液配制)，25ul脾細(xì)胞懸液，迅速混勻，傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上，做平行片，待瓊脂凝固后，將玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育1-1.5h，然后用SA緩沖液稀釋的補(bǔ)體(18)加入到玻片架凹槽內(nèi)，繼續(xù)溫育1-1.5h后，計數(shù)溶血空斑數(shù)。2.5小鼠碳廓清試驗(yàn)?zāi)┐谓o藥后用14稀釋的印度墨汁，按每鼠IOg體重0.1ml尾靜脈注射，立即計時，間隔2、10分鐘分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20ul，加入2mlNa2C03溶液中，用721分光光度計于600nm波長處測OD值，用Na2C03溶液做空白對照，處死小鼠，取肝、脾臟稱重，計算吞噬指數(shù)。2.6小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)小鼠巨噬細(xì)胞的激活實(shí)驗(yàn)前4天給每只小鼠腹腔注射2%壓積羊紅細(xì)胞0.2ml。用頸椎脫臼法處死小鼠，腹腔注射加小牛血清的Hank’s液4ml/只，輕輕按揉腹部20次，以充分洗出腹腔巨噬細(xì)胞，然后將腹腔壁剪開一個小口，用膠頭吸管吸取腹腔洗液2ml于試管內(nèi)。用Iml加樣器吸取腹腔洗液0.5ml加入盛有0.5mll%雞血紅細(xì)胞懸液的試管內(nèi)，混勻。用注射器吸取0.5ml混合液，加入玻片的瓊脂圈內(nèi)。放置孵箱內(nèi)37°C孵育15-20分鐘。孵育結(jié)束后，迅速用生理鹽水將未貼壁細(xì)胞沖掉，于甲醇溶液中固定1分鐘，Giemsa液染色15分鐘。用蒸餾水沖洗干凈，晾干，用40倍顯微鏡計數(shù)吞噬率和吞噬指數(shù)。吞噬率為每100個巨噬細(xì)胞中，吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞所占的百分率吞噬指數(shù)為平均每個巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的個數(shù)。2.7NK細(xì)胞活性測定(LDH法)脾細(xì)胞懸液的制備(效應(yīng)細(xì)胞)無菌取脾，置于盛有適量無菌Hank’s液小平皿中，用鑷子輕輕將脾撕碎，制備單細(xì)胞懸液。經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾，Hank’s液洗3次，每次離IOmin(lOOOr/min)，然后將細(xì)胞懸浮于2ml的完全培養(yǎng)中，用CASYDT細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)脾細(xì)胞，最后用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為2XIO7個/ml。NK細(xì)胞活性檢測取濃度為4XIO5個/ml的YAC-1靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞各IOOul(效靶比501)，加入U型96孔培養(yǎng)板；靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各ΙΟΟμΙ，靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和NP4tl各100μ1；上述各項均設(shè)三個復(fù)孔，于37°C、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h，然后將96也培養(yǎng)板以1500r/min離心5min。每孔吸取上清IOOul置平底96孔培養(yǎng)板中，同時加入LDH基質(zhì)液100μ1，反應(yīng)3min，每孔加入lmol/LHC130y1，在酶聯(lián)儀492nm處測定光密度值。3.數(shù)據(jù)處理用SPSS10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析。4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明茶飲料對小鼠體重的影響血清溶血素與遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)見表8；淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、NK活性測定、抗體生成組見表9，碳廓清實(shí)驗(yàn)組見表10，吞噬雞紅細(xì)胞組見表11。各實(shí)驗(yàn)組各期體重與對照組相應(yīng)得體重比較，差異無顯著性意義，表明西洋參茶飲料對小鼠的體重生長物明顯影響。表8對小鼠體重的影響(第I批動物，η=12，Szts)組別，/,Mlm、初始體重(g)中期體重(g)終期體重(g)增重(g)_(g/kgBW)_對照組OOO19.2士0.628.1士1.532.7士1.313.5士1.6低劑量組0.6718.9±0.728.6士1.233.3±1.514.4±1.7中劑量組1.3319.2士0.627.5±1.632.4士1.613.2士1.6高劑量組3.9919.0±0.627.9±1.632.2±1.713.3±1.4F值0.9331.2221.1371.517P值_>0.05_>0.05_>0.05_>0.05表9對小鼠體重的影響(第II批動物，η=12J土s)組別，/ι^^^λ初始體重(g)中期體重(g)終期體重(g)增重(g)_(g/kgBW)_對照組OOO19.3士0.927.7±1.633.4±1.714.1士1.6~低劑量組0.6719.3士0.827.2士1.432.8士1.513.4±1.4中劑量組1.3319.1士0.928.2±1.133.6士1.614.5士1.6高劑量組3.9919.1士0.827.4士1.333.4士0.914.3士0.8F值0.1991.2600.7751.318P值_>0.05_>0.05_>0.05_>0.05表10對小鼠體重的影響(第III批動物，η=12,x±S)組別t初始體重(g)中期體重(g)終期體重(g)增重(g)_(g/kgBW)_對照組OOO19.3士0.528.2士1.633.6士1.814.3士1.7低劑量組0.6719.1士0.427.5土1.433.0土1.713.9土1.5中劑量組1.3319.3士0.627.7±1.533.1土1.813.8士1.4高劑量組3.9919.4士0.427.6士1.333.2士1.713.8±1.7F值0.4920.6370.2120.215P值_>0.05_>0.05_>0.05_>0.05表11對小鼠體重的影響(第IV批動物，η=12,x±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>本發(fā)明茶飲料對小鼠脾臟重量和胸腺重量的影響各劑量組臟器/體重比值與對照組比較，差異均無顯著意義(見表12)。表明本發(fā)明茶飲料對小鼠的脾臟重量和胸腺重量無明顯影響。表12西洋參茶飲料對小鼠胸腺、脾臟重量的影響(n=12,^±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>本發(fā)明茶飲料對小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響32，中、高劑量組足跖增厚值與對照組比較，差異有顯著性意義(見表13)。表明西洋參茶飲料對小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果為陽性。表13西洋參茶飲料對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響(士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>本發(fā)明茶飲料對ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化反應(yīng)高劑量組光密度差值高于對照組，差異有顯著性意義(見表14)，表明西洋參茶飲料的脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)結(jié)果為陽性。表14對小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化反應(yīng)的影響士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>本發(fā)明茶飲料對受試動物血清溶血素抗體滴度水平的影響中、高劑量組的抗體積數(shù)均高于對照組，差異有顯著性意義(見表15)。表明西洋參茶飲料對受試動物血清溶血素抗體滴度水平測定試驗(yàn)結(jié)果為陽性。表15對小鼠血清溶血素抗體滴度水平的影響(x±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>本發(fā)明茶飲料對受試動物脾細(xì)胞抗體生成水平的影響高劑量組的脾細(xì)胞抗體生成水平高于對照組，差異有顯著性意義(見表16)，表明西洋參茶飲料對受試動物脾細(xì)胞抗體生成水平測定結(jié)果為陽性。表16對小鼠脾細(xì)胞生成水平的影響(x±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>本發(fā)明茶飲料對小鼠碳廓清吞噬功能的影響各劑量組碳廓清吞噬指數(shù)與對照組比較，差異均無顯著性意義(見表17)，表明旗參茶飲料的碳廓清吞噬作用試驗(yàn)結(jié)果為陰性。表17西洋參茶飲料對小鼠碳廓清吞噬功能的影響(x±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>本發(fā)明茶飲料對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞吞噬功能的影響見表18，各劑量組吞噬百分率轉(zhuǎn)換值及吞噬指數(shù)指標(biāo)與對照組比較，差異均無顯著性意義，表明西洋參茶飲料的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)結(jié)果為陰性。表18對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞吞噬功能的影響(η=10,χ±δ)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>本發(fā)明茶飲料對受試動物NK細(xì)胞活性的影響見表19，高劑量組的NK細(xì)胞活性與對照組比較差異有顯著性意義，表明西洋參茶飲料對受試動物NK細(xì)胞活性試驗(yàn)結(jié)果味陽性。表19對小鼠NK細(xì)胞活性的影響(η=11，I土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>5.小結(jié)對SPF級NIH種小鼠經(jīng)口每日分別給予40倍濃縮的本發(fā)明茶飲料0.67、1.33、3.99g/kgBff0相當(dāng)于本發(fā)明茶飲料26.8、53.2、159.6g/kgBW，即推薦日服量的5、10、30倍，共4周，結(jié)果顯示綿羊紅細(xì)胞誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)(足跖增厚法)陽性，ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化增殖試驗(yàn)陽性，受試樣品具有增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能的作用；綿羊紅細(xì)胞免疫受試動物后血清溶血素檢測結(jié)果陽性，綿羊紅細(xì)胞免疫受試動物后脾細(xì)胞抗體生成試驗(yàn)結(jié)果陽性，受試樣品具有增強(qiáng)體液免疫功能作用；受試動物NK細(xì)胞活性試驗(yàn)陽性，受試樣品具有增強(qiáng)NK細(xì)胞活性作用。受試動物碳廓清試驗(yàn)陰性，受試動物巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)陰性，受試樣品不具有增強(qiáng)單核_巨噬細(xì)胞功能作用。依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范》增強(qiáng)免疫力功能評價標(biāo)準(zhǔn)判斷，本發(fā)明的西洋參茶飲料具有增強(qiáng)免疫力功能作用。實(shí)施例5西洋參片劑的制備取西洋參藥材155g，將食用乙醇濃度調(diào)配成40%，第1次加入5倍量40%的乙醇浸泡時間24小時，第2次至第8次每次分別加入4倍量40%的乙醇，浸泡時間每次24小時，過濾，減壓回收乙醇，得總皂苷含量>18.0%的稠膏，約90g。以稠膏為為黏合劑，加原料左旋肉堿103.3g，牛磺酸25.8g，葡萄糖510g，制粒，烘干，加潤滑劑硬脂酸鎂6.7g壓片，共制成1000片，每片重0.7g，每日服用6片。以上對本發(fā)明具體實(shí)施方式的描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明做出各種改變和變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求所限定的范圍。權(quán)利要求一種具有提高免疫力，緩解體力疲勞功能的組合物，其特征在于由以下重量份原料制成西洋參15-45份左旋肉堿10-30份?；撬?.5-7.5份其中西洋參制成乙醇提取物。2.權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于由以下重量份原料制成西洋參30份左旋肉堿20份牛磺酸5份其中西洋參制成乙醇提取物。3.權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中所述將西洋參制成乙醇提取物的方法為1)以30-90%的食用乙醇浸泡西洋參，獲得西洋參醇浸液；2)將獲得的西洋參醇浸液濃縮，獲得西洋參膏，即為所述乙醇提取物。4.權(quán)利要求3所述的組合物，其中步驟1)所述的乙醇浸泡為6-10次，第一次加入西洋參原料重量的3-7倍量(w/w)的乙醇浸泡至少1天，第29次每次分別加入西洋參原料重量的2-4倍量的乙醇浸泡，每次至少1天，獲得所述西洋參醇浸液；步驟2)所述的西洋參膏濃縮至在4555°C測定相對密度>1.20，總皂苷含量>18.0%。5.一種具有提高免疫力，緩解體力疲勞功能的保健飲料，其特征在于每升飲料由以下成份組成西洋參1.5-4.5g；制成乙醇提取物左旋肉堿l_3g;?；撬?.25-0.75g；余量為調(diào)味劑、輔料和水。6.如權(quán)利要求5所述的保健飲料，其特征在于每升飲料由以下成分組成西洋參3g;制成乙醇提取物左旋肉堿2g;?；撬?.5g；余量為調(diào)味劑、輔料和水。7.權(quán)利要求5所述的保健飲料，其中的調(diào)味劑為葡萄糖33-99g。8.權(quán)利要求6所述的保健飲料，其中的調(diào)味劑為葡萄糖66g。9.權(quán)利要求5至8任一所述的保健飲料，其中所述乙醇提取物的制備方法為1)以30-90%的食用乙醇浸泡西洋參，獲得西洋參醇浸液；2)將獲得的西洋參醇浸液濃縮，獲得西洋參膏，即為所述乙醇提取物。10.權(quán)利要求9所述的保健飲料，其中步驟1)所述的乙醇浸泡為6-10次，第一次加入西洋參原料重量的3-7倍量(w/w)的乙醇浸泡至少1天，第29次每次分別加入西洋參原料重量的2-4倍量的乙醇浸泡，每次至少1天，獲得所述西洋參醇浸液；步驟2)所述西洋參膏濃縮至在4555°C測定相對密度>1.20，總皂苷含量>18.0%。全文摘要本發(fā)明提供一種具有提高免疫力，緩解體力疲勞功能的組合物，其由以下重量份原料制成西洋參15-45份，左旋肉堿10-30份，牛磺酸2.5-7.5份，其中西洋參制成乙醇提取物。本發(fā)明也提供根據(jù)上述配方制成的保健飲料。文檔編號A61K31/205GK101810657SQ20091010548公開日2010年8月25日申請日期2009年2月20日優(yōu)先權(quán)日2009年2月20日發(fā)明者余孝云,張?zhí)N,張薇申請人:深圳太太藥業(yè)有限公司