專利名稱：一種自乳化疫苗佐劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及疫苗佐劑領(lǐng)域，具體涉及一種新的自乳化的疫苗佐劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
高度純化的新型疫苗雖具良好的抗原特異性和低毒性，但免疫原性低，需要配合高效的佐劑使用。佐劑是先于抗原或同時(shí)注射于動(dòng)物體內(nèi)，能非特異性地改變或增強(qiáng)機(jī)體對抗原的特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)，也稱免疫增強(qiáng)劑。
由于疫苗研制日益變得復(fù)雜，同樣對佐劑也提出了更高的要求；例如生物化學(xué)專家發(fā)現(xiàn)先將疫苗中的有效抗原進(jìn)行純化(有效抗原通常是指細(xì)菌或病毒中那些能刺激免疫反應(yīng)的組成部分，也稱主要免疫抗原)，純化后的抗原能提高免疫效果，減少或避免部分副作用(不良反應(yīng))，這種疫苗稱為亞單位疫苗。不過，這些相對較小較少的免疫抗原，要在更大程度上依賴疫苗佐劑來增強(qiáng)免疫反應(yīng)；其他生產(chǎn)制造技術(shù)上的改進(jìn)創(chuàng)新，如延緩抗原釋放速度，能延長疫苗的免疫有效期，這些通常都是改進(jìn)疫苗佐劑的結(jié)果。所以研究開發(fā)新的佐劑技術(shù)，從而提高疫苗抗原刺激產(chǎn)生的免疫力并使疫苗(人用與獸用)更有效更安全，這是全球各大疫苗廠商進(jìn)行研究和開發(fā)的重點(diǎn)領(lǐng)域。
油乳劑疫苗是目前國內(nèi)外疫苗市場上產(chǎn)品最多的類型之一，油乳劑疫苗有三種類型1)油包水(W/O)型。此劑型應(yīng)用最普遍，顯著優(yōu)點(diǎn)是可獲得高水平持久的免疫增強(qiáng)效果。缺點(diǎn)是較粘稠，注射較困難。2)水包油(O/W)型。為減少乳劑中油含量建立此法，但未普遍應(yīng)用。該劑型優(yōu)點(diǎn)是粘度低，易于注射，缺點(diǎn)是免疫原性弱，僅誘導(dǎo)動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生較弱的免疫應(yīng)答。3)水包油包水(W/O/W)型。將W/O型疫苗經(jīng)第二次分散到水相中制備。目的是降低粘度，既便于注射又具有良好的免疫原性，此劑型兼具有W/O型和O/W型的優(yōu)點(diǎn)，效果很好。但制備技術(shù)上難度較大，疫苗穩(wěn)定性差，如能克服此缺點(diǎn)，它是最理想的乳劑疫苗。
國內(nèi)外公認(rèn)的最好進(jìn)口疫苗佐劑商品名為206(下稱進(jìn)口佐劑)通過自乳化技術(shù)制備了W/O/W型乳劑疫苗，解決了W/O/W型乳劑疫苗制備難的問題，而且具有一定的穩(wěn)定性，在全球范圍內(nèi)得到了廣泛應(yīng)用。其不足之處為所制備的W/O/W型乳劑疫苗穩(wěn)定性還不太令人滿意。因此，通過自乳化技術(shù)制備穩(wěn)定的W/O/W型乳劑具有極其重要的現(xiàn)實(shí)意義和市場價(jià)值。
本發(fā)明也通過自乳化技術(shù)開發(fā)了一種新的自乳化疫苗佐劑，解決了W/O/W型乳劑疫苗制備困難的難題，所制備的乳劑疫苗既便于注射又具有良好的免疫原性，而且穩(wěn)定性比進(jìn)口佐劑所制備的W/O/W型乳劑疫苗更好。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了一種新的自乳化疫苗佐劑及其制備方法，通過自乳化技術(shù)解決了W/O/W型乳劑疫苗制備困難的難題，所制備的W/O/W型乳劑疫苗穩(wěn)定性比現(xiàn)有的佐劑所制備的W/O/W型乳劑疫苗更好。
本發(fā)明的自乳化疫苗佐劑，由以下組分及重量百分比組成油相15-98％親水性表面活性劑1-30％親油性表面活性劑1-30％助乳化劑0-20％各組分重量百分比均以佐劑總重量計(jì)。
優(yōu)選的組分及重量百分比組成油相35-85％親水性表面活性劑7-25％親油性表面活性劑7-25％助乳化劑1-15％各組分重量百分比均以佐劑總重量計(jì)。
如上所述的疫苗佐劑，其中油相是礦物油、植物油、苯甲酸芐酯、油酸乙酯等中的一種或幾種。
如上所述的疫苗佐劑，其中親水性表面活性劑是HLB值在8以上的表面活性劑中的一種或幾種，如聚氧乙烯壬烷基酚醚(乳化劑0P)、聚氧乙烯脂肪醇醚(乳白靈A)、辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)、吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80、吐溫81、吐溫85、聚氧乙烯氫化蓖麻油、普朗尼克F-68、聚氧乙烯月桂醇醇醚等。
如上所述的疫苗佐劑，其中親油性表面活性劑是HLB值在3-8之間的表面活性劑中的一種或幾種，如卵磷脂、豆磷脂、司盤85、司盤83、司盤80、司盤65、司盤60、單硬脂酸甘油酯、單油酸甘油酯、單油酸縮山梨醇酯等。
如上所述的疫苗佐劑，其中助乳化劑選自聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、乙醇、丙二醇、油酸、十八胺、十八醇等中的一種或幾種。
本發(fā)明人在多次試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，疫苗佐劑更優(yōu)選的組分和重量組成為白油 60-85％辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯和/或吐溫5-12％單油酸縮山梨醇酯和/或司盤 10-20％
油酸3-9％各組分重量百分比均以佐劑總重量計(jì)。在此組分和重量百分比下，疫苗佐劑的穩(wěn)定性更佳。
本發(fā)明疫苗佐劑的制備方法稱取處方量乳化劑、助乳化劑和油相混合均勻，得到佐劑。
本發(fā)明疫苗佐劑與目前市場上供應(yīng)的同類佐劑相比，不僅具有了與其同樣的自乳化效果，穩(wěn)定性更好，并且主要原料均為國產(chǎn)，成本降低了近40％，極具經(jīng)濟(jì)價(jià)值和市場潛力。
用本發(fā)明疫苗佐劑與進(jìn)口佐劑(商品名206)以同樣的方法制備油乳劑疫苗，分別同時(shí)進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)、免疫保護(hù)試驗(yàn)及田間試驗(yàn)。
1油乳劑疫苗穩(wěn)定性試驗(yàn)先將預(yù)熱至30℃的佐劑2000ml加入至乳化機(jī)中，攪拌，在攪拌中緩慢加入預(yù)熱至30℃的抗原液2000ml(抗原∶油佐劑＝1∶1，V/V)，加完后攪拌15分鐘，使其均勻一致后，均質(zhì)乳化5分鐘，即完成乳化。然后在無菌條件下開啟乳化機(jī)底閥，灌入經(jīng)干烤滅菌的10000ml的血清瓶中，再從血清瓶中分裝至滅菌后的100ml塑料瓶中，加滅菌膠塞，壓鋁蓋。離心、粘度及外觀檢測。并分別于室溫條件下存放以觀察其穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、2、3。
表1外觀、粘度及離心檢測結(jié)果

表2低溫(0-4℃)穩(wěn)定性試驗(yàn)

表3室溫(20-25℃)穩(wěn)定性試驗(yàn)

2油乳劑疫苗免疫保護(hù)試驗(yàn)及田間試驗(yàn)2.1免疫保護(hù)試驗(yàn)用自制佐劑制成油乳劑疫苗(方法同1)，按《豬口蹄疫O型滅活疫苗(II)檢驗(yàn)規(guī)格》進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。
表4油乳劑疫苗對豬的免疫保護(hù)試驗(yàn)

2.2田間試驗(yàn)用自制佐劑制成油乳劑疫苗(方法同1)，在兩豬場進(jìn)行免疫注射，觀察其臨床反應(yīng)。注射后部分豬都有輕度臨床反應(yīng)體溫升高，減食。第3-4天恢復(fù)正常。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1按表5所列重量百分比稱取處方量乳化劑、助乳化劑和油相混合均勻，得到佐劑。
表5

實(shí)施例2按表6所列重量百分比稱取處方量乳化劑、助乳化劑和油相混合均勻，得到佐劑。
表6

實(shí)施例3按表7所列質(zhì)量百分比稱取處方量乳化劑、助乳化劑和油相混合均勻，得到佐劑。
表7

實(shí)施例4按表8所列質(zhì)量百分比稱取處方量乳化劑、助乳化劑和油相混合均勻，得到佐劑。
表8

權(quán)利要求
1.一種自乳化的疫苗佐劑，其特征是由以下組分及重量百分比組成油相15-98％親水性表面活性劑1-30％親油性表面活性劑1-30％助乳化劑0-25％各組成重量百分比均以佐劑總重量計(jì)。
2.權(quán)利要求1所述的疫苗佐劑，其特征是由以下組分及重量百分比組成油相35-85％親水性表面活性劑6-25％親油性表面活性劑6-25％助乳化劑3-15％各組分重量百分比均以佐劑總重量計(jì)。
3.權(quán)利要求1或2所述的疫苗佐劑，其中油相是礦物油、植物油、苯甲酸芐酯、油酸乙酯中的一種或幾種。
4.權(quán)利要求1或2所述的疫苗佐劑，其中親水性表面活性劑是HLB值在8以上的表面活性劑中的一種或幾種，選自聚氧乙烯壬烷基酚醚、聚氧乙烯脂肪醇醚、辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯、吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80、吐溫81、吐溫85、聚氧乙烯氫化蓖麻油、普朗尼克F-68或聚氧乙烯月桂醇醇醚。
5.權(quán)利要求1或2所述的疫苗佐劑，其中親油性表面活性劑是HLB值在3-8之間的表面活性劑中的一種或幾種，選自卵磷脂、豆磷脂、司盤85、司盤80、司盤65、司盤60、單硬脂酸甘油酯、單油酸甘油酯或單油酸縮山梨醇酯。
6.權(quán)利要求1或2所述的疫苗佐劑，其中助乳化劑選自聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、乙醇、丙二醇、油酸、十八胺、十八醇中的一種或幾種。
7.權(quán)利要求1或2所述的疫苗佐劑，由以下組分及重量百分比組成白油 60-85％辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯和/或吐溫5-12％單油酸縮山梨醇酯和/或司盤 10-20％油酸 3-9％各組分重量百分比均以佐劑總重量計(jì)。
8.權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的疫苗佐劑的制備方法稱取處方量乳化劑、助乳化劑和油相混合均勻，即得到佐劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及疫苗佐劑領(lǐng)域，具體涉及一種新的自乳化的疫苗佐劑及其制備方法。本發(fā)明佐劑由油相15－98％、親水性表面活性劑1－30％、親油性表面活性劑1－30％、助乳化劑0－20％組成，本發(fā)明疫苗佐劑與目前市場上供應(yīng)的同類佐劑相比，不僅具有了與其同樣的自乳化效果，而且穩(wěn)定性更好，成本更低。
文檔編號A61K9/107GK1679933SQ200510037639
公開日2005年10月12日 申請日期2005年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月7日
發(fā)明者邢為藩 申請人:邢為藩