專(zhuān)利名稱(chēng)：西氫吡喃衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)化合物領(lǐng)域，尤其是四氫吡喃衍生物。更具體地講，本發(fā)明涉及游離形式的式Ⅰ化合物及其鹽(如果這種形式存在的話) 其中R1代表下式的一個(gè)基團(tuán)， 其中或者R7代表任選被保護(hù)的羥基、酰氧基、鹵素、-OR10(其中R10代表低級(jí)烷基)、任選被保護(hù)的-O(CH2)mOH(其中m為數(shù)字2-4)或-OCONH2，并且R7a代表氫;
或者R7和R7a一起代表氧代;
R8代表羥基或甲氧基;和R9代表羥基或酰氧基;
R2代表氫、酰氧基或任選被保護(hù)的羥基，并且在被虛線連接的兩個(gè)碳原子間存在一個(gè)單鍵或雙鍵;
R3代表甲基、乙基、正丙基或烯丙基;
或者R4代表氫或羥基而R4a代表氫;
或者R4和R4a一起代表氧代;
或者R5代表羥基而R5a代表氫;
或者R5和R5a一起代表氧代;和A代表式-CH(OR6)-CH2-(CH2)n-或-CH＝CH-(CH2)n-中的一個(gè)基團(tuán)，因此其(CH2)n-部分與碳原子相連，R6代表低級(jí)烷基，和n代表數(shù)字1或2;
上述化合物及其鹽在下文中簡(jiǎn)稱(chēng)“本發(fā)明化合物”。
上面對(duì)于式Ⅰ中R2和R7所定義的任選被保護(hù)的羥基不應(yīng)理解為包括另外定義的一個(gè)R2或R7基團(tuán)，例如酰氧基或-OCONH2。
而且還應(yīng)了解，“被保護(hù)的羥基”或“被保護(hù)的-O(CH2)mOH”是指具有被可提供必要保護(hù)以使其免于在化學(xué)合成中降解的基團(tuán)所取代的OH的藥理活性化合物;所述保護(hù)基團(tuán)優(yōu)選為常規(guī)羥基保護(hù)基團(tuán)，例如叔丁氧羰基或三烷基甲硅烷基，特別是叔丁基二甲基甲硅烷基。
R1優(yōu)選代表如上所定義的取代的環(huán)己基。R2和R7優(yōu)選代表任選被保護(hù)的羥基，尤其是羥基。R3優(yōu)選代表乙基或烯丙基，尤其是乙基。R4優(yōu)選與R4a一起代表氧代。R5優(yōu)選與R5m一起代表氧代。R6優(yōu)選代表甲基或乙基。R8優(yōu)選代表甲氧基。R9優(yōu)選代表羥基。R10優(yōu)選代表甲基。m和n優(yōu)選代表數(shù)字2。A優(yōu)選代表式-CH＝CH-(CH2)n-基團(tuán)。
低級(jí)烷基優(yōu)選為具有1-4個(gè)，尤其是1或2個(gè)，特別是1個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基。鹵素為氟、氯、溴或碘，優(yōu)選氯或溴，尤其是氯。羥基優(yōu)選為游離羥基，即未被保護(hù)的羥基。酰氧基優(yōu)選為甲酰氧基、苯甲酰氧基或在其烷基羰基部分總共含有2-5個(gè)碳原子的烷基羰基氧基。
優(yōu)選在由虛線連接的兩個(gè)碳原子間存在一個(gè)單鍵。
優(yōu)選的一組式Ⅰ化合物由式Ⅰx化合物組成
其中各取代基的定義如上所述。
本發(fā)明化合物具有許多手性中心，因此可以各種立體異構(gòu)體形式存在。本發(fā)明的方法變體一般可產(chǎn)生這些異構(gòu)體的混合物。取決于反應(yīng)條件和反應(yīng)類(lèi)型的不同，所述方法可以?xún)?yōu)選產(chǎn)生特定異構(gòu)體的方式進(jìn)行。本發(fā)明提供了所有立體異構(gòu)體和光學(xué)異構(gòu)體以及外消旋混合物。所述異構(gòu)體可以通過(guò)常規(guī)技術(shù)進(jìn)行拆分或分離。在各種手性碳原子的優(yōu)選立體化學(xué)構(gòu)型如式Ⅰs所示 其中各取代基的定義如上所述。
當(dāng)R1為上述定義的取代的環(huán)己基(其中R7和R7a不為氧代，且R7不為鹵素)時(shí)，則優(yōu)選的立體化學(xué)構(gòu)型如下式所示 而當(dāng)R7為鹵素時(shí)，其立體化學(xué)構(gòu)型優(yōu)選為β-構(gòu)型。
當(dāng)R5為羥基時(shí)，其立體化學(xué)構(gòu)型優(yōu)選為α-構(gòu)型。
基團(tuán)A中的OR5部分優(yōu)選為β-構(gòu)型。該附加的手性中心是在用于制備式Ⅰa化合物的方法變體a)中產(chǎn)生的。α和β異構(gòu)體可以常規(guī)方法(例如色譜法)進(jìn)行分離。
另一優(yōu)選的一組式Ⅰ化合物由式Ⅰss化合物組成 其中R1s代表下式的一個(gè)基團(tuán)， 其中或者R7s代表羥基或任選被叔丁基二甲基甲硅烷基保護(hù)的2-羥基乙氧基，或代表異丙基羰基氧基或氯，且R7aa代表氫?；蛘逺7s和R7aa一起代表氧代;
R2s代表氫、異丙基羰基氧基或羥基，并且在由虛線連接的兩個(gè)碳原子間存在一個(gè)單鍵或雙鍵;
R33代表乙基或烯丙基;
R4和R4a及R5和R5a的定義如上所述;和As代表式-CH(OR6s)-CH2-(CH2)n-或-CH＝CH-(CH2)n-中的一個(gè)基團(tuán)，因此CH2-基團(tuán)與碳原子連接，R6s代表甲基或乙基，且n的定義如上所述，另一組式Ⅰ化合物由式ⅠP1化合物組成 其中R2P和R7P可相同或不同，并代表任選被保護(hù)的羥基，而其它取代基的定義如上所述。
另一組式Ⅰ化合物由式ⅠP2化合物組成
其中各取代基的定義如上所述。
另一組式Ⅰ化合物由式ⅠP3化合物組成 其中R2p代表氫或任選被保護(hù)的羥基，并且在由虛線連接的兩個(gè)碳原子之間存在一個(gè)單鍵或雙鍵;
或者R4P代表羥基而R4ap代表氫;
或者R4P和R4ap一起代表氧代;
R7p代表鹵素;和其它取代基的定義如上所述。
另一組式Ⅰ化合物由式ⅠP4化合物組成 其中各取代基的定義如上所述。
另一組式Ⅰ化合物由式ⅠP5化合物組成
其中各取代基的定義如上所述。
在一組式ⅠP5化合物中，A代表如上所定義的式-CH＝CH-(CH2)n-基團(tuán)。在另一組中，A代表如上所定義的式-CH(OR5)-CH2-(CH2)n-基團(tuán)，尤其是-CH(OCH3)-CH2-(CH2)n-基團(tuán)(其中n的定義如上所述)。
本發(fā)明化合物可以通過(guò)下述方法制備，該方法包含a)為制備式Ⅰa化合物，
其中各取代基的定義如上所述，在R6OH的存在下適當(dāng)?shù)卣丈湎鄳?yīng)的式Ⅱ化合物， 其中各取代基的定義如上所述，或者b)為制備式Ⅰb化合物，
其中各取代基的定義如上所述，適當(dāng)?shù)匮趸鄳?yīng)的式Ⅰc化合物， 其中各取代基的定義如上所述，或者c)為制備式Ⅰd化合物，
其中各取代基的定義如上所述，從相應(yīng)的式Ⅰe化合物中適當(dāng)?shù)叵齊5OH， 其中各取代基的定義如上所述，或者d)為制備式Ⅰf化合物，
其中各取代基的定義如上所述，適當(dāng)?shù)剡€原相應(yīng)的式Ⅰb化合物;并且任選將具有合適反應(yīng)基的所得式Ⅰ化合物中的反應(yīng)基進(jìn)行轉(zhuǎn)化，例如-為了制備其中R7代表鹵素的式Ⅰ化合物，鹵化其中R7代表羥基的相應(yīng)式Ⅰ化合物，或者-為了制備其中R2、R7和/或R9代表酰氧基的式Ⅰ化合物，?；渲蠷2、R7和/或R9代表羥基的相應(yīng)式Ⅰ化合物;
任選在所得具有被保護(hù)的羥基的式Ⅰ化合物中脫去一個(gè)或多個(gè)羥基的保護(hù)基，或者在所得具有游離羥基的式Ⅰ化合物中保護(hù)一個(gè)或多個(gè)羥基。
任選將所得式Ⅰ化合物的立體異構(gòu)體混合物分離成單一異構(gòu)體;和回收以游離形式存在的式Ⅰ化合物或其鹽(如果這種形式存在的話)。
本發(fā)明方法也可以常規(guī)方式進(jìn)行。
方法變體a)(照射反應(yīng))是一種由光引發(fā)的分子內(nèi)氧化/還原反應(yīng)。它可以UV和/或可見(jiàn)光，并任選在惰性氣氛中進(jìn)行，例如用發(fā)射單色或非單色UV和/或可見(jiàn)光的紫外燈，例如在溫度為約-78℃至約100℃，優(yōu)選約0℃至約30℃，優(yōu)選使用通過(guò)派熱克斯耐熱玻璃或長(zhǎng)的玻璃濾光片過(guò)濾了的光，例如NaBr和Pb(NO3)2在醇R5OH或醇R5OH與飽和或不飽和烴、醚、酮或酯或這些溶劑的混合物中的含水溶液，可通過(guò)這些溶劑或其組分參與反應(yīng)或作為(例如)敏化劑，并且任選在可參與反應(yīng)(例如作為敏化劑或作為電子轉(zhuǎn)移助劑)的其它化合物的存在下進(jìn)行反應(yīng)。
方法變體b)(氧化反應(yīng))可按常規(guī)方式進(jìn)行，例如在溶劑例如在醇(例如甲醇)或環(huán)醚(例如四氫呋喃)或水中或在這些溶劑的混合物中，在O2氣氛下或在某些其它氧化劑的存在下，優(yōu)選在約0℃至約90℃的溫度下使式Ⅰc化合物與可選擇性地與鄰近氧代的羥基反應(yīng)的氧化劑(例如Cu(OAc)2)反應(yīng)。
方法變體c)(消除反應(yīng))優(yōu)選在溶劑，例如乙腈、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷或二甲基甲酰胺或水或這些溶劑的混合物中，優(yōu)選在約-30℃至約100℃的溫度下通過(guò)使式Ⅰe化合物(例如)與酸(例如HF、HCl或?qū)妆交撬?反應(yīng)來(lái)進(jìn)行，或者優(yōu)選在溶劑如二甲基甲酰胺，優(yōu)選在約-30℃至約100℃的溫度下，優(yōu)選在低壓下通過(guò)使式Ⅰe化合物與鹽(例如NH4Cl或NH4Br)反應(yīng)來(lái)進(jìn)行，因此被保護(hù)的羥基的去保護(hù)反應(yīng)可以在同一步驟或在單獨(dú)的步驟中進(jìn)行。
反應(yīng)變體d)(還原反應(yīng))可優(yōu)選在溶劑或溶劑混合物(例如吡啶/二甲基甲酰胺)中，優(yōu)選在約-70℃至約100℃的溫度下通過(guò)將式Ⅰb化合物用還原劑(例如硫化氫)處理來(lái)進(jìn)行。
反應(yīng)基的轉(zhuǎn)化反應(yīng)可以如下進(jìn)行，例如對(duì)于鹵化反應(yīng)，在堿存在下在合適的溶劑中(例如在甲苯或四氫呋喃中)在約0℃至70℃的溫度下通過(guò)與鹵化劑(如三苯基二氯正磷)反應(yīng)來(lái)完成;對(duì)于?；磻?yīng)，例如在惰性溶劑(例如乙腈或二氯甲烷)中，通過(guò)與酰氯或酸酐在酸結(jié)合劑(例如4-二甲基氨基吡啶)存在下反應(yīng)或與酸在酸結(jié)合劑(例如4-二甲基氨基吡啶)存在下反應(yīng)或與酸在碳化二亞胺(例如二環(huán)己基碳化二亞胺)的存在下反應(yīng)來(lái)完成。
用于除去(例如)叔丁基二甲基甲硅烷基或叔丁氧基羰基的去保護(hù)反應(yīng)可以(例如)通過(guò)在溶劑(例如乙腈、甲醇或甲醇和醚的混合物)中用氫氟酸或鹽酸處理來(lái)實(shí)現(xiàn)。根據(jù)所選擇的反應(yīng)條件(例如反應(yīng)時(shí)間或溫度)的不同，該去保護(hù)反應(yīng)可以消除所有保護(hù)基團(tuán)或只消除某些保護(hù)基團(tuán)的方式進(jìn)行。當(dāng)某一羥基要在隨后的反應(yīng)中進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，特別指出要用部分去保護(hù)反應(yīng)。
對(duì)于游離羥基的保護(hù)反應(yīng)來(lái)講，根據(jù)所選擇的反應(yīng)條件的不同，所述反應(yīng)可以保護(hù)所有的或只保護(hù)某些潛在的反應(yīng)羥基的方式進(jìn)行。適宜的保護(hù)基為常規(guī)的羥基保護(hù)基基團(tuán)，例如叔丁氧羰基或三烷基甲硅烷基，優(yōu)選叔丁基二甲基甲硅烷基。
所得立體異構(gòu)體混合物的分離可以用(例如)色譜法進(jìn)行。
上述本發(fā)明的方法變體，例如a)和b)或a)和c)也可以用不需分離各中間體的一鍋煮反應(yīng)進(jìn)行。
以游離形式存在的本發(fā)明化合物可用常規(guī)方法轉(zhuǎn)化為鹽形式(如果這種形式存在的話)，例如酸加成鹽形式，反之亦然。
本發(fā)明化合物可用常規(guī)方法從反應(yīng)混合物中分離出并純化。
本文并未具體描述用作起始物質(zhì)的各化合物的制備，例如在各實(shí)施例中，用作起始物質(zhì)的化合物是已知的或可用常規(guī)方法由已知化合物得到，例如由適合的鏈霉菌菌株，例如描述于(例如)Fujisawa EP184162中的Streptomyces tsukubaensis No.9993得到。根據(jù)布達(dá)佩斯條約的各條款，菌樣可由Fermentation Research Institute，Tsukuba，Ibaraki 305，Japan得到，其保藏號(hào)為No.FERM BP-927。根據(jù)布達(dá)佩斯條約的各條款，該菌株在1989年4月27日又重新保藏在Agricultural Research Culture Collection International Depository，Peoria， Illinois 61604，USA，保藏號(hào)為No.NRRL 18488。
式Ⅱa化合物可用常規(guī)方法由可制備它的微生物得到，
例如用描述于EP478235中的方法用Streptomyces hygroscopicus var.ascomycetus的變異菌株(ATCC55087)來(lái)制備。根據(jù)布達(dá)佩斯條約的各條款，已將ATCC55087于1994年4月13日保藏于American Type Culture Collection，Rockville，MD20852，USA，保藏號(hào)為ATCC55558。
下列實(shí)施例說(shuō)明了本發(fā)明。它們不是限制性的。所有溫度均為攝氏溫度。在NMR光譜中，所有化學(xué)位移值均以ppm表示;樣品是在CDCl3中測(cè)量的(除非另外指出)。在各種碳原子上的立體化學(xué)構(gòu)型均對(duì)應(yīng)于FK506，除非另外指出。所有化合物均以游離形式存在。
使用了下列縮寫(xiě)Ac ＝乙酰基cf ＝無(wú)色泡沫體db ＝在由虛線連接的兩個(gè)碳原子間的雙鍵depr ＝去保護(hù)反應(yīng)iPr ＝異丙基m ＝在所標(biāo)出位置的立體異構(gòu)體的混合物m.p. ＝熔點(diǎn)O ＝氧代OtBDMS ＝叔丁基二甲基甲硅烷氧基sb ＝在由虛線連接的兩個(gè)碳原子間的單鍵tBDMS ＝叔丁基二甲基甲硅烷基

FK506＝式Ⅱf化合物，其中R3＝CH2CH＝CH2FR520＝式Ⅱf化合物，其中R3＝C2H5實(shí)施例1式Ⅰ化合物[R1＝B;R2＝OH;sb;R3＝C2H5;R4＝OH(m);R5＝OH(α);R4a，R5a＝H;
A＝-CH(OR6)-CH2-(CH2)2-其中OR6＝OCH3(β)][方法變體去保護(hù)反應(yīng)]將250mg實(shí)施例1a化合物(參見(jiàn)下文)、10ml甲醇和用干燥HCl飽和的0.15ml乙醚在冰浴中攪拌2小時(shí)。將該混合物傾入碳酸氫鹽水溶液中，并用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用MgSO4干燥，并蒸發(fā)溶劑。用硅膠色譜法純化殘余物得到標(biāo)題化合物(cf)。
實(shí)施例1a式Ⅰ化合物[R1＝B′;其它取代基如實(shí)施例1中所定義;sb][方法變體a)(照射反應(yīng))]在冰浴中將用氫氣脫氣了的3.8g式Ⅱ化合物[R1＝B′;R2＝OH;sb;R3＝C2H5;R5＝OH(α);R5a＝H;n＝2]在1200ml甲醇中的溶液冷卻，并在井式反應(yīng)器中用Hanau TQ-150燈并使用派熱克斯耐熱玻璃濾光片照射10小時(shí)。合并如此制得的三批產(chǎn)物，并用polygosyl柱使用環(huán)己烷/異丙醇(9/1)作洗脫劑進(jìn)行HPLC色譜法純化，得到標(biāo)題化合物(cf)。

實(shí)施例8式Ⅰ化合物[R1＝B;R2＝OH;sb;R3＝C2H5;R4+R4a＝R5+R5a＝O;A＝-CH＝CH-(CH2)2-][方法變體b)(氧化反應(yīng))]在O2氣氛中將5g實(shí)施例9化合物(參見(jiàn)下文)、1.9gCu(OAc)2·H2O和500ml四氫呋喃的混合物在回流溫度下攪拌7小時(shí)，在真空下除去溶劑，將殘余物分配于飽和的碳酸氫鹽水溶液和乙酸乙酯中，分出有機(jī)相，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，在真空下除去溶劑，殘余物用硅膠(用2% w/w NaHCO3水溶液預(yù)處理，并在烘箱中干燥)進(jìn)行色譜法純化，用乙酸乙酯洗脫，得到標(biāo)題化合物(泡沫體)。該泡沫體的結(jié)晶是通過(guò)將其溶于乙醚中，分小批量加入正戊烷，并用刮鏟刮反應(yīng)器內(nèi)壁以誘發(fā)結(jié)晶的方式進(jìn)行的(m.p.169°～172°)。
實(shí)施例9式Ⅰ化合物[R1＝B;R2＝OH;sb;R3＝C2H5;R4＝OH(m);R4a＝H;R5+R5a＝O;A＝-CH＝CH-(CH2)2-][方法變體c)(消除反應(yīng))]在78℃在真空下并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中使50mg實(shí)施例2化合物和100mg氯化銨在100ml二甲基甲酰胺中的混合物反應(yīng)1.5小時(shí)，以使溶劑緩慢地蒸餾出。在高真空下除去剩余溶劑，并將殘余物分配在鹽水和乙酸乙酯中，分出有機(jī)相，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，在真空下除去溶劑，將殘余物在硅膠(用2% w/w NaHCO3預(yù)處理，并在烘箱中干燥)上進(jìn)行快速色譜法純化，用乙酸乙酯洗脫，得到標(biāo)題化合物(泡沫體)。該泡沫體的結(jié)晶是通過(guò)將其溶于乙醚中，分小批量加入正戊烷，并用刮鏟刮反應(yīng)器的內(nèi)壁以誘發(fā)結(jié)晶的方式來(lái)進(jìn)行(m.p.119°～123°)。

實(shí)施例33式Ⅰ化合物[R1＝B;R2＝OH;sb;R3＝C2H5;R4＝R4a＝H;R5+R5a＝O;A＝-CH＝CH-(CH2)2-][方法變體d)(還原反應(yīng))]向200mg實(shí)施例8化合物、0.3ml吡啶和4.8ml二甲基甲酰胺的混合物中通入10分鐘H2S氣體。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，再向混合物中通入10分鐘H2S氣體。再將混合物在室溫下攪拌2天時(shí)間。反應(yīng)混合物用甲苯稀釋?zhuān)诟哒婵障鲁ト軇堄辔锓峙溆谝宜嵋阴ズ惋柡吞妓釟溻c水溶液中。分出有機(jī)相，用鹽水洗，用MgSO4干燥，在真空下除去溶劑。殘余物用硅膠(用2%碳酸氫鹽水溶液預(yù)處理)進(jìn)行快速色譜法純化，用乙酸乙酯洗脫，得到標(biāo)題化合物(泡沫體)。
實(shí)施例 光譜1H-NMR-光譜1 5.83(t，J＝2.6Hz);5.29(br，d，J＝4.1Hz);4.32(d，J＝8.5Hz);3.70(dd，J＝1.2和9.5Hz);3.13(s).
10 (主要成分)5.63(br.d);3.84(dd).
11 (主要成分)5.69(br，t);4.61(dd，J＝2.0，5.5);3.21(s).
17 4.96(t，J＝2.8Hz);4.19(dd，J＝3.7和8.6Hz);3.92(m);3.63(d，J＝9.6Hz);3.33(s).
18 (約2∶1異構(gòu)體混合物)主要異構(gòu)體5.69(t，J＝2.7Hz);5.21(d，J＝9.0Hz);5.10(d，J＝1.6Hz);4.92(d，J＝10.1Hz);4.46(dd，J＝5.3和1.8Hz).
27 (約1∶1異構(gòu)體混合物)7.11(d，J＝8.4);6.89(d，J＝8.4);3.03-2.96(m);2.54-2.46(m);1.16-1.12(m).
28 (約1∶1異構(gòu)體混合物)7.10(d，J＝8.6);6.89(d，J＝8.4);4.71-4.64(m);3.90(dd，J＝9.5，3.0);2.57-2.48(m);1.18-1.12(m).
30 6.86(d，J＝8.6 Hz);7.13(d，J＝8.5Hz).
32a (約0.5∶0.7異構(gòu)體混合物)7.12(d，J＝8.5);6.82(d，J＝8.6);3.79-3.59(幾組多重峰);3.38(s);3.30(s);0.90(寬單峰).
32b (異構(gòu)體混合物)7.05(d，J＝8.5);6.43(d，J＝8.4);5.67(s);5.62(s);3.90-3.85(m)。
32c (異構(gòu)體混合物)7.09(d，J＝8.7);6.52(d，J＝8.5);5.69(s);5.64(s);3.07-3.0(m).
13C-NMR-光譜1a 173.8，170.6，136.7，130.4，129.3，125.5，97.3，84.3，80.1.
2 (主要成分)214.0，173.3，170.7，139.7，131.1，129.7，123.9，97.0，80.5，75.2，52.1.
3 (主要成分)214.0，173.1，170.3，139.7，132.6，130.1，123.9，96.9，84.2，78.2，76.9，75.3，74.9，73.52，73.46，72.5，71.1，63.7，52.2.
4 (主要成分)213.2，173.3，170.7，139.9，135.7，131.2，129.7，123.3，116.5，97.0，84.2，80.5，77.7，75.2，52，1.
5 (主要成分)213.1，173.2，169.2，140.2，131.9，130.0，122.8，99.6，88.3，84.2，78.5，77.0，74.1，73.5，71.6，71.2，69.3，59.7，54.2.
6 (主要成分)213.0，173.0，170.6，140.0，132.3，130.3，123.6，99.2，88.4，84.1，79.0，77.3，74.2，73.5，72.2，71.2，69.9，59.8，55.8，54.0.
7 (主要異構(gòu)體)214.1，173.4，170.7，139.7，123.9，97.0，67.3.
8 (主要成分)213.9，190.8，167.7，162.9，139.5，131.9，129.8，123.9，123.2，109.7，98.9，53.0.
9 (主要成分)212.9，171.2，168.8，140.3，132.4，130.3，125.4，123.1，106.7，99.5.
12 195.2，169.5，167.5，136.5，130.6，129.0，125.3，96.5，84.3，79.5，78.2，53.8，49.413 (主要成分)213.6，195.7，169.0，167.3，138.8，132.2，130.3，123.5，97.0，84.2，63.8，54.5.
14 (主要成分)212.9，195.4，169.1，167.3，139.0，135.5，131.2，129.9，123.1，116.7，96.9，84.3，79.4.
15 214.5，188.1，168.6，164.4，140.2，132.3，129.5，122.8，98.7，88.8，84.2，78.0，76.1，73.5，71.7，69.2，59.0，57.0，56.6，56.3，55.6，55.3.
16 213.6，188.0，168.1，163.9，139.9，131.6，130.0，123.1，99.1，88.6，84.2，78.4，76.1，73.6，71.4，69.1，59.0，55.0.
19 169.8，169.0，138.0，131.7，128.3，127.7，123.4，109.0，98.4，55.420 (主要成分)211.9，171.2，168.9，140.4，135.5，132.4，130.4，125.3，122.4，116.5，106.7，99.5，84.1，78.7，69.0.
21 213.4，170.0，169.0，140.3，132.1，130.6，130.4，122.9，109.3，100.0，84.1，78.9，74.1，73.5，71.4，70.5，69.4，59.0.
22 (主要異構(gòu)體)212.7，171.5，168.9，140.1，132.1，131.7，125.4，123.1，106.6，99.7，67.123 (約2∶3異構(gòu)體混合物)214.2，213.3，168.2，167.6，162.9，139.6，138.9，132.1，131.8，129.8，129.2，123.9，123.23，123.16，121.9，112.1，109.8，98.9，97.524 (主要成分)213.0，194.5 or 190.9，167.7，162.9，139.6，135.4，131.9，129.8，123.9，122.6，116.7，109.7，98.9，84.2.
25 213.7，187.0，167.7，159.0，140.3，132.0，130.4，129.4，122.8，113.2，99.2，84.2，79.0，76.5，73.58，73.55，71.5，69.1，59.0，57.7，56.5，56.2，55.426 (主要成分)195.7，168.0，162.8，135.4，131.4，128.3，127.9，123.0，109.5，99.6，52.629 (約45∶40異構(gòu)體混合物)201.4，199.4，194.9，188.8，168.4，167.5，163.3，163.1，148.1，145.3，139.1，138.2，133.9，131.4，129.9，129.6，129.5，127.7，124.0，123.7，123.5，121.8，110.9，110.2，99.0，98.131 213.8，195.4，169.2，167.4，138.7，123.8，96.9，83.4，79.4，78.3，74.7，73.6，72.6，71.5，67.432 213.9，190.8，167.7，-163，139.5，123.9，123.2，109.7，-99，67.333 214.8，170.9，168.1，140.9，132.6，129.2，123.7，122.3，107.3，98.5，84.2，77.4，76.9，74.2，73.6，70.9，69.4，37.4
游離形式的式Ⅰ化合物及其可藥用鹽(如果這些鹽形式存在的話)(上述化合物及其鹽在下文中簡(jiǎn)稱(chēng)本發(fā)明藥劑)具有藥理活性。因此它們可用作藥物。具體地講，它們具有抗炎、免疫抑制和抗增殖活性。
抗炎活性可以(例如)用下列試驗(yàn)方法測(cè)定1.體外肥大細(xì)胞脫粒的抑制[該試驗(yàn)方法被描述于例如EP 569337中]在該試驗(yàn)中，以50nM低濃度存在的本發(fā)明藥劑抑制肥大細(xì)胞的脫粒(ⅠC50)。
2.體內(nèi)噁唑酮誘發(fā)的(小鼠)變應(yīng)性接觸性皮炎[該試驗(yàn)方法被描述于例如F.M.Dietrich和R.Hess，Int.Arch.Allergy 38(1970)，246-259中]在該試驗(yàn)中，以0.01%溶液進(jìn)行單次局部給藥的本發(fā)明藥劑具有最多達(dá)50%的活性(炎性腫脹的抑制作用)。在這些條件下在此模型中氫化可的(1.2%)沒(méi)有活性。
3.體內(nèi)DNFB誘發(fā)的(豬)變應(yīng)性接觸性皮炎[該試驗(yàn)方法描述于例如EP315978中]兩次局部給藥0.13%本發(fā)明藥劑的制劑導(dǎo)致最多達(dá)50%的炎性反應(yīng)抑制。
免疫抑制和抗增殖活性可以(例如)用下列試驗(yàn)方法測(cè)定4.體外混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)中抑制對(duì)同種異基因刺激的淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)[該試驗(yàn)方法被描述于例如T.Meo，"The MLR in the Mouse"，Immunological Methods，L.Lefkovits and B.Pernis Eds，Academic Press，N.Y.(1979)，227-239]在該試驗(yàn)中，以1nM低濃度存在的本發(fā)明藥劑抑制淋巴細(xì)胞增殖(IC50)。
5.體外人角質(zhì)化細(xì)胞增殖的抑制[該試驗(yàn)方法被描述于例如EP539326中]在該試驗(yàn)中，以7μM低濃度存在的本發(fā)明藥劑具有活性，導(dǎo)致約50%的抑制作用。
6.體外macrophilin-12結(jié)合分析[該試驗(yàn)方法被描述于K.Baumann等人，Tetrahedron Letters34(1993)，2295-2298]本發(fā)明藥劑與macrophilin的結(jié)合的親和力(ⅠC50)相當(dāng)于雷怕霉素及FK506的親和力。
7.體外IL-2報(bào)導(dǎo)基因(reporter gene)分析[該試驗(yàn)方法被描述于G.Baumann等人，Transpl.Proc.24/Suppl，2(1993)，43-48]在該試驗(yàn)中，本發(fā)明藥劑在0.2nM低濃度下具有IC50。
實(shí)施例8化合物(“5，6-脫氫-子囊環(huán)霉素”)，其化學(xué)全稱(chēng)也叫作“[1R，5Z，9S，12S-[1E(1R，3R，4R)]，13R，14S，17R，18E，21S，23S，24R，25S，27R]-17-乙基-1，14-二羥基-12-[2-(4-羥基-3-甲氧基環(huán)己基)-1-甲基乙烯基]-23，25-二甲氧基-13，19，21，27-四甲基-11，28-二氧雜-4-氮雜三環(huán)[22.3.1.0.4.9]二十八碳-5，18-二烯-2，3，10，16-四酮，是用于上述適應(yīng)證的優(yōu)選藥劑。例如這已在上述試驗(yàn)3中進(jìn)行了測(cè)定。以0.13%制劑形式存在的該化合物具有比地塞米松相應(yīng)的0.13%制劑更好的活性。因此指出，對(duì)于上述用途，通過(guò)類(lèi)似的給藥模型以類(lèi)似于或低于地塞米松的常用劑量，可將該化合物對(duì)較大的哺乳動(dòng)物(例如人)給藥。
與局部給藥有效的皮質(zhì)甾類(lèi)相比，本發(fā)明藥劑特別是實(shí)施例8化合物在局部給藥后顯示更少的皮膚萎縮，并且與FK506相比，也具有更小的全身性副作用，這可(例如)通過(guò)評(píng)估皮下給藥的大鼠的毒性來(lái)證明。
因此，本發(fā)明藥劑可在預(yù)防和治療炎癥和過(guò)度增殖癥狀以及需要免疫抑制的癥狀中用作局部和全身性使用的抗炎藥劑和用作免疫抑制劑及抗增殖藥劑，例如a)治療炎性疾病和過(guò)度增殖性皮膚疾病，例如牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎和其它濕疹性皮膚病、皮脂溢性皮炎、扁平苔癬、天皰瘡、大皰性類(lèi)天皰瘡、大泡性表皮松解、脈管炎(vasculitides)、紅斑、皮性嗜曙紅細(xì)胞增多、紅斑狼瘡及痤瘡;
b)預(yù)防和治療過(guò)敏性疾病，例如外源性氣喘、鼻炎、結(jié)膜炎、特應(yīng)性濕疹、蕁麻疹/血管性水腫、食物/藥物變應(yīng)性和過(guò)敏癥;
c)預(yù)防和治療-在(例如)心臟、腎、肝、骨髓和皮膚等器官或組織移植術(shù)情形中的排異性，-移植物抗宿主病，例如下列的骨髓移植物和自體免疫疾病，例如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡、慢性甲狀腺炎(Hashimoto′s thyroidis)、多發(fā)性硬化，重癥肌無(wú)力、糖尿?、裥秃脱凵貙友?，-免疫介導(dǎo)性疾病的皮膚表現(xiàn);和d)斑形脫發(fā)。
所述藥劑可進(jìn)行全身性給藥或局部給藥。當(dāng)用于上述適應(yīng)證時(shí)，適合的劑量當(dāng)然要取決于(例如)所用的具體藥劑、宿主、給藥方式及所在治療的癥狀的性質(zhì)和嚴(yán)重性。但是，一般指出，以日劑量為約0.15mg/kg至約1.5mg/kg動(dòng)物體重進(jìn)行全身性給藥可得到有益的結(jié)果。在較大哺乳動(dòng)物中所指示的日劑量為約10mg至約100mg，適宜以(例如)分開(kāi)的劑量至最高達(dá)每天四次或以緩釋的方式進(jìn)行給藥。對(duì)于局部給藥來(lái)講，以活性物質(zhì)的濃度約為0.1%至約3%每天局部給藥幾次(例如每天三次)可得到令人滿(mǎn)意的結(jié)果。所指示的蓋化制劑形式的實(shí)例為洗劑、凝膠劑、霜?jiǎng)婌F劑和溶液劑。
本發(fā)明藥劑可以通過(guò)任何常規(guī)途徑給藥，特別是經(jīng)腸道給藥(例如口服，例如采用片劑或膠囊劑的形式)，或局部給藥(例如采用洗劑、凝膠劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、眼用或鼻用溶液劑或氣霧劑的形式)，用于皮膚和粘膜(例如眼、呼吸道、陰道、口腔和鼻腔)的局部治療。
包含一種本發(fā)明藥劑以及至少一種可藥用載體或稀釋劑的(例如用于局部給藥)藥物組合物可以用常規(guī)方式制備，即將其與可藥用載體或稀釋劑混合。單位劑型含有(例如)約2.5mg至約50mg活性物質(zhì)。
局部給藥是指(例如)對(duì)皮膚給藥。局部給藥的其它形式為對(duì)眼給藥，以用于下列免疫介導(dǎo)的癥狀的治療，例如自體免疫疾病，例如眼色素層炎、角膜移植術(shù)和慢性角膜炎;過(guò)敏性癥狀，例如春季結(jié)膜炎;炎癥和角膜移植物，并以可藥用眼用載體的形式對(duì)眼表面局部給藥本發(fā)明藥劑。
眼用載體是這樣一種物質(zhì)，它能使所述藥劑與眼表面保持足夠時(shí)間的接觸，以使該藥劑透過(guò)眼的角膜和內(nèi)部區(qū)域，例如前房、后房、玻璃體、水狀液、玻璃體液、角膜、虹膜/睫狀體、晶狀體、脈絡(luò)膜/視網(wǎng)膜及鞏膜?？伤幱醚塾幂d體可以為(例如)軟膏、植物油或膠囊化物質(zhì)。
另一種局部治療形式是將本發(fā)明藥劑通過(guò)吸入例如氣霧劑或粉劑施用到(例如)散光患者的支氣管上皮和牙槽上皮。
本發(fā)明藥劑在通過(guò)肺途徑對(duì)氣道局部給藥后，可抑制由抗原誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞滲入到氣道中。因此指出，它們可用于治療氣道或肺疾病(例如氣喘)。這種活性可以用標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法來(lái)證明，例如通過(guò)測(cè)量它們對(duì)變應(yīng)原誘導(dǎo)的肺嗜曙紅細(xì)胞增多的影響(體內(nèi))(描述于例如EP577544中)來(lái)證明。
因此，本發(fā)明藥劑可用于治療應(yīng)答或需要?dú)獾阑蚍蔚木植刊煼ǖ募膊』虬Y狀，特別是炎性疾病或阻塞性氣道疾病。它們尤其可用于治療與氣道或肺有關(guān)的疾病或癥狀、或其特征為炎性細(xì)胞滲入或伴隨炎性細(xì)胞的其它炎性情況的疾病或癥狀(例如嗜曙紅細(xì)胞和/或中性白細(xì)胞累積)，特別尤其用于治療氣喘。它們也可用于治療支氣管炎或用于治療與其有關(guān)的慢性或急性氣道阻塞、塵肺和與嗜曙紅細(xì)胞相關(guān)的氣道疾病。
為了上述目的，本發(fā)明藥劑可以任何適于局部給藥的劑型對(duì)所需部位給藥，例如通過(guò)從適合的配藥裝置吸入的肺途徑，例如以能夠?qū)獾阑蚍谓o藥的任何適宜的精細(xì)分散的或可精細(xì)分散的形式，例如以精細(xì)分離的干燥顆粒形式或以在任何適合的(即可經(jīng)肺給藥的)固體或液體載體介質(zhì)中的分散體或溶液的形式給藥。對(duì)于以干燥顆粒形式給藥來(lái)說(shuō)，本發(fā)明藥劑本身可以(例如)以下列形式使用，即以沒(méi)有任何添加物質(zhì)的微粒化形式、以用其它適合的精細(xì)分離的惰性固體載體或稀釋劑稀釋的形式、以包衣的顆粒形式或以用于精細(xì)分離的固體的經(jīng)肺給藥的本領(lǐng)域已知的任何其它適合形式。
經(jīng)肺給藥也可以用本領(lǐng)域已知的用于以干燥的或液體形式通過(guò)吸入法(例如噴霧器、噴灑器、干粉吸入器等裝置)給藥藥物的任何適合體系來(lái)進(jìn)行。優(yōu)選使用計(jì)量的給藥裝置，即在每次開(kāi)動(dòng)時(shí)能夠給藥預(yù)定量的本發(fā)明藥劑。這些裝置是本領(lǐng)域中已知的。
可用于肺局部給藥的可藥用稀釋劑或載體包括(例如)以基本上純的形式存在的活性成分(即本發(fā)明藥劑)的干燥粉劑，例如在本領(lǐng)域中用于通過(guò)干粉吸入裝置給藥。能夠或促進(jìn)局部給藥的工具或裝置包括，特別是吸入裝置以及容器等，借助這些裝置，可以將活性成分以可局部給藥的形式給藥。優(yōu)選的實(shí)施方案是在氣道或肺中能夠進(jìn)行局部給藥，例如通過(guò)吸入法。
用于治療氣道或肺的疾病或癥狀，例如通過(guò)吸入法用于治療炎性或阻塞性氣道疾病(例如氣喘)的本發(fā)明藥劑的劑量為每天0.1mg至10mg，例如約0.5mg至約5mg，優(yōu)選約1mg～約3mg/天。這些劑量適宜通過(guò)一種計(jì)量的給藥體系，以每次給藥1～5股，每天給藥1～4次的方式進(jìn)行。因此，每次給藥劑量適合為約0.0025mg至約10mg，更適宜為約0.125mg至約5mg，并(例如)以每次開(kāi)動(dòng)可給藥約0.25mg至約3mg藥劑的計(jì)量的給藥裝置給藥。
盡管抗炎和免疫抑制以及抗增殖活性是本發(fā)明藥劑的主要活性，但是它們還具有在某種程度上增加對(duì)藥物的化學(xué)療法的敏感性或增加藥物的化學(xué)療法的效力的活性。這種活性可以(例如)用描述于EP360760中的試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定。
因此，本發(fā)明藥劑也可用于逆轉(zhuǎn)各種類(lèi)型(例如獲得性的或先天的)對(duì)藥物化學(xué)療法的抵抗力，或用于增加對(duì)給藥的藥物療法的敏感性，例如作為減少常規(guī)化學(xué)治療的劑量水平的手段，例如在抗腫瘤或抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的藥物療法中，用作降低總體藥物毒性的手段，并且更尤其地，作為逆轉(zhuǎn)或降低對(duì)化學(xué)療法的抵抗力(包括先天的和獲得性抵抗力)的手段。
因此，本發(fā)明也涉及本發(fā)明藥劑作為藥物，特別是作為抗炎藥劑、免疫抑制劑及抗增殖藥劑的應(yīng)用;用作藥物的本發(fā)明藥劑;本發(fā)明藥劑在制備藥物組合物中的應(yīng)用(包含將本發(fā)明藥劑與至少一種可藥用載體或稀釋劑混合);用于制備藥物組合物的方法(它包含將本發(fā)明藥劑與至少一種可藥用載體或稀釋劑一起混合)。本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含本發(fā)明藥劑及至少一種可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物。本發(fā)明還提供了治療炎癥和過(guò)度增殖癥以及需要免疫抑制的癥狀的方法，它包含對(duì)需要這種治療的患者給藥治療有效量的本發(fā)明藥劑。
權(quán)利要求
1.游離形式的式Ⅰ化合物及其鹽(如果這種形式存在的話) 其中R1代表下式的一個(gè)基團(tuán)， 其中或者R7代表任選被保護(hù)的羥基、酰氧基、鹵素、-OR10(其中R10代表低級(jí)烷基)、任選被保護(hù)的-O(CH2)mOH(其中m為數(shù)字2-4)或-OCONH2，并且R7a代表氫；或者R7和R7a一起代表氧代；R8代表羥基或甲氧基；和R9代表羥基或酰氧基；R2代表氫、酰氧基或任選被保護(hù)的羥基，并且在被虛線連接的兩個(gè)碳原子間存在一個(gè)單鍵或雙鍵；R3代表甲基、乙基、正丙基或烯丙基；或者R4代表氫或羥基而R4a代表氫；或者R4和R4a一起代表氧代；或者R5代表羥基而R5a代表氫；或者R5和R5a一起代表氧代；和A代表式-CH(OR6)-CH2-(CH2)n-或-CH=CH-(CH2)n-中的一個(gè)基團(tuán)，因此其(CH2)n-部分與碳原子相連，R6代表低級(jí)烷基，和n代表數(shù)字1或2；
2.根據(jù)權(quán)利要求1的式Ⅰs化合物 其中各基團(tuán)的定義如權(quán)利要求1中所述。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的式Ⅰss化合物 其中Rls代表下式的一個(gè)基團(tuán)， 其中或者R7S代表羥基或任選被叔丁基二甲基甲硅烷基保護(hù)的2-羥基乙氧基，或代表異丙基羰基氧基或氯，且R7aa代表氫?；蛘逺7S和R7aa一起代表氧代;R2S代表氫、異丙基羰基氧基或羥基，并且在由虛線連接的兩個(gè)碳原子間存在一個(gè)單鍵或雙鍵;R3S代表乙基或烯丙基;R4和R4a及R5和R5a的定義如權(quán)利要求1所述;和As代表式-CH(OR6s)-CH2-(CH2)n-或-CN＝CH-(CH2)n-中的一個(gè)基團(tuán)，因此CH2-基團(tuán)與碳原子連接，R6S代表低級(jí)烷基，且n的定義如權(quán)利要求1所述。
4.游離形式的式Ⅰ化合物及其鹽(如果這種形式存在的話)，其中R1代表式B基團(tuán); R2代表羥基，并且在由虛線連接的兩個(gè)碳原子之間存在一個(gè)單鍵;R3代表乙基;R4代表α-或β-構(gòu)型的羥基;R5代表α-構(gòu)型的羥基;R4a和R5a代表氫;和A為基團(tuán)-CH(OR5)-CH2-(CH2)2-，其中OR5代表β-構(gòu)型的甲氧基;并且在各種其它不對(duì)稱(chēng)取代的碳原子上的立體化學(xué)構(gòu)型均對(duì)應(yīng)于FK506;即式Ⅰ化合物為以游離形式或其鹽形式(如果這種形式存在的話)存在的[1R，5Z，9S，12S-[1E(1R，3R，4R)]，13R，14S，17R，18E，21S，23S，24R，25S，27R]-17-乙基-1，14-二羥基-12-[2-(4-羥基-3-甲氧基環(huán)己基)-1-甲基乙烯基]-23，25-二甲氧基-13，19，21，27-四甲基-11，28-二氧雜-4-氮雜三環(huán)[22.3.1.0.4.9]-二十八碳-5，18-二烯-2，3，10，16-四酮。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物的制備方法，該方法包含a)為制備式Ⅰa化合物， 其中各取代基的定義如權(quán)利要求1中所述，在R5OH的存在下適當(dāng)?shù)卣丈湎鄳?yīng)的式Ⅱ化合物， 其中各取代基的定義如權(quán)利要求1中所述，或者b)為制備式Ⅰb化合物， 其中各取代基的定義如權(quán)利要求1中所述，適當(dāng)?shù)匮趸鄳?yīng)的式Ⅰc化合物， 其中各取代基的定義如權(quán)利要求1中所述，或者c)為制備式Ⅰd化合物， 其中各取代基的定義如權(quán)利要求1中所述，從相應(yīng)的式Ⅰe化合物中適當(dāng)?shù)叵齊5OH， 其中各取代基的定義如權(quán)利要求1中所述，或者d)為制備式Ⅰf化合物， 其中各取代基的定義如權(quán)利要求1中所述，適當(dāng)?shù)剡€原相應(yīng)的式Ⅰb化合物;并且任選將具有合適反應(yīng)基的所得式Ⅰ化合物中的反應(yīng)基進(jìn)行轉(zhuǎn)化，例如-為了制備其中R7代表鹵素的式Ⅰ化合物，鹵化其中R7代表羥基的相應(yīng)式Ⅰ化合物，或者-為了制備其中R2、R7和/或R9代表酰氧基的式Ⅰ化合物，?；渲蠷2、R7和/或R9代表羥基的相應(yīng)式Ⅰ化合物;任選在所得具有被保護(hù)的羥基的式Ⅰ化合物中脫去一個(gè)或多個(gè)羥基的保護(hù)基，或者在所得具有游離羥基的式Ⅰ化合物中保護(hù)一個(gè)或多個(gè)羥基。任選將所得式Ⅰ化合物的立體異構(gòu)體混合物分離成單一異構(gòu)體;和回收以游離形式存在的式Ⅰ化合物或其鹽(如果這種形式存在的話)。
6.一種藥物組合物，該藥物組合物包含根據(jù)權(quán)利要求1的游離形式的化合物或其可藥用鹽(如果這種形式存在的話)以及至少一種可藥用載體或稀釋劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及游離形式的式I化合物及其鹽(如果這些鹽形式存在的話)；它們的各種制備方法(例如通過(guò)照射反應(yīng)；氧化反應(yīng)；消除反應(yīng)；還原反應(yīng)；轉(zhuǎn)化反應(yīng)，例如鹵化反應(yīng)或?；磻?yīng)；脫除被保護(hù)的羥基的保護(hù)基的反應(yīng)；游離羥基的保護(hù)反應(yīng)；以及將立體異構(gòu)體分離成單一異構(gòu)體)；以及它們作為藥物，尤其是作為抗炎藥劑、抗增殖藥劑和免疫抑制劑的應(yīng)用。其中各取代基的定義如說(shuō)明書(shū)中所述。
文檔編號(hào)A61K31/352GK1099756SQ9410593
公開(kāi)日1995年3月8日 申請(qǐng)日期1994年5月26日 優(yōu)先權(quán)日1993年5月27日
發(fā)明者A·R·C·M·布盧蘇 申請(qǐng)人:山道士有限公司