專利名稱：人胎盤膠原及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)用生物材料領(lǐng)域。
目前國際上用以填充小型凹陷性皮膚缺陷(如疤痕、皺紋、青年痤瘡疤痕等)的生物材料為注射性牛膠原。臨床證明牛膠原可能引起人體對異種系蛋白的免疫反應(yīng)。
為了避免人體對異種系蛋白的免疫反應(yīng)，尋找存留時間長、矯形效果優(yōu)于牛膠原的生物材料，用于整形美容、填充小型凹陷性皮膚缺陷，對人胎盤膠原進(jìn)行了研究。
取健康產(chǎn)婦的胎盤，冷凍保存過夜，次日精選無胎糞污染的周邊部分胎盤組織，經(jīng)清洗后將組織剪碎用丙酮浸泡，清洗。將剪碎的胎盤置于0.5mol/L乙酸中并打碎，加胃蛋白酶(0.1-2.9g/100g濕組織)消化。離心，留沉淀A。上清液加NaOH溶液，棄沉淀，上清液經(jīng)透析、離心，留沉淀(膠原A)。
沉淀A經(jīng)NaCl(5-15%)洗，用Na2HPO4反復(fù)提取，離心去除清洗液，沉淀用檸檬酸緩沖液(0.1-0.4mol/L，PH2.5-4.0)提取，離心，留沉淀(膠原B)。
將膠原A和膠原B按不同比例(10∶1，9∶1，……，1∶1)混勻，對磷酸緩沖液透析至平衡。
加入生長激素(0.01-0.2μ/ml)和利多卡因，分散化使之通過6號針頭，安全檢驗合格后用于填充皮膚小型凹陷性缺陷。
若無特別說明，以上操作均在無菌、0-4℃條件下進(jìn)行。
本生物材料不引發(fā)受術(shù)者產(chǎn)生免疫反應(yīng)，存留時間長，矯形效果優(yōu)于牛膠原同類產(chǎn)品。
最佳實施例取無肝炎、艾滋病及其他傳染病，無遺傳性膠原病的胎盤的無污染的周邊部分，用含酶抑制劑的磷酸緩沖液噴淋沖洗清除血液污染至胎盤組織呈乳白色。
將組織剪碎后用丙酮浸泡過夜，次日更換二次，再用磷酸緩沖液清洗5次。
將剪碎的胎盤置于0.5mol/L乙酸中(PH2.5)打碎，并加胃蛋白酶(0.1-2.0g/100g濕組織)，消化1-3天(具體劑量及天數(shù)依胎盤勻漿液的乳化程度確定)。離心30分鐘，14000rpm，留沉淀(沉淀A)。
上清中逐滴加入10mol/LNaOH調(diào)PH至7.2-7.8，棄沉淀，上清對0.02mol/LNa2HPO4透析4-6天，離心，棄上清，留沉淀(膠原A)。
沉淀A用5倍體積10%NaCL洗8次，再用5倍體積的0.067mol/LNa2HPO4反復(fù)提取3次，離心去除上清液，沉淀用5倍體積的檸檬酸緩沖液(PH3·7、0.15mol/L)提取4次，離心去上清，留沉淀(膠原B)。
將膠原A與膠原B按不同比例(1∶0，4∶1，3∶1，2∶1)混勻，對磷酸緩沖液透析至平衡(PH7.0-7.4)，加入生長激素(0.01-0.2μ/ml)和利多卡因(0.1-0.5%)。以上各部位依患者及注射部位不同而選定。
分散化使之通過6號針頭，通過安全試驗后可投入使用。
以上過程無特殊說明均在0-4℃條件下進(jìn)行，全部無菌操作。
權(quán)利要求
1.一種制備人胎盤膠原的方法，其特征在于將健康產(chǎn)婦胎盤之無胎糞污染的周邊部分胎盤組織，清洗、剪碎后置于乙酸中并打碎，加胃蛋白酶消化，離心留沉淀A；上清液經(jīng)透析離心留沉淀(膠原A)；沉淀A經(jīng)NaCl洗，用Na2HPO4提取，離心去除清洗液，沉淀用檸檬酸緩沖液提取，離心留沉淀(膠原B)；膠原A與膠原B按不同比例混勻?qū)α姿峋彌_液透析至平衡，再加入生長激素和利多卡因即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備人胎盤膠原的方法，其特征在于胃蛋白酶的量為0.1-2.9g/100g濕組織。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備人胎盤膠原的方法，其特征在于NaCl的濃度為5-15%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備人胎盤膠原的方法，其特征在于檸檬酸緩沖液的濃度為0.1-0.4mol/L，PH2.5-4.0。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備人胎盤膠原的方法，其特征在于膠原A和膠原B按10∶1、9∶1、8∶1、7∶1、6∶1、5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1的比例混勻。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備人胎盤膠原的方法，其特征在于所加入的生長激素的量為0.01-0.2μ/ml。
全文摘要
一種制備人胎盤膠原的方法，其特征是利用健康產(chǎn)婦的胎盤無胎糞污染的周邊部分胎盤組織，經(jīng)清洗、打碎、加胃蛋白酶消化、提取、混勻等處理后，可以制得無菌無副作用的人胎盤膠原。人胎盤膠原不引發(fā)受術(shù)者產(chǎn)生免疫反應(yīng)，存留時間長，矯形效果優(yōu)于牛膠原同類產(chǎn)品。人胎盤膠原用于填充小型凹陷性皮膚缺損。
文檔編號A61L31/00GK1081379SQ92108780
公開日1994年2月2日 申請日期1992年7月29日 優(yōu)先權(quán)日1992年7月29日
發(fā)明者劉秉慈 申請人:中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院勞動衛(wèi)生與職業(yè)病研究所