專利名稱：一種螺旋藻多糖及其提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種螺旋藻多糖及其提取方法。
背景技術(shù)：
螺旋藻是一類低等植物，屬于藍(lán)藻門，顫藻科。它們與細(xì)菌一樣，細(xì)胞內(nèi)沒有真正的細(xì)胞核，所以又稱藍(lán)細(xì)菌。藍(lán)藻的細(xì)胞結(jié)構(gòu)原始，且非常簡(jiǎn)單，它生長于水體中，在顯微鏡下可見其形態(tài)為螺旋絲狀。有關(guān)螺旋藻多糖抗腫瘤活性研究已有報(bào)道，但多數(shù)為粗多糖，抗腫瘤活性是來源于哪種多糖，其明確結(jié)構(gòu)如何，未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種螺旋藻多糖以及它的提取方法。本發(fā)明的技術(shù)方案為
螺旋藻多糖的提取方法按以下步驟進(jìn)行
1)取螺旋藻生藥材(5kg)，加質(zhì)量濃度95%工業(yè)乙醇室溫下浸泡七天，傾去乙醇，固體物晾干，然后用沸水進(jìn)行多次提取，每次提取時(shí)間為4小時(shí)，用苯酚-硫酸法檢測(cè)提取液的糖含量，至糖反應(yīng)不明顯為止，每次的提取液經(jīng)過濾后合并，加熱濃縮至小體積，對(duì)流動(dòng)水透析2天，透析內(nèi)液濃縮后離心，加入質(zhì)量濃度30%的三氯乙酸(體積比，I :1 v/v)溶液去除蛋白，在4度條件下反應(yīng)4小時(shí)，加質(zhì)量濃度10% NAOH溶液(v/v)中和至pH值為6. 5 7. 5后，扎袋對(duì)流動(dòng)水透析48小時(shí)，透析內(nèi)液濃縮后離心，上清液加入三倍體積的質(zhì)量濃度95%工業(yè)乙醇，靜置過夜，離心收集沉淀，分別經(jīng)無水乙醇和丙酮洗滌后，于80 °C干燥，得水提螺旋藻粗多糖；
2)沸水提取后的固體殘?jiān)?°C下用5% v/v NaOH溶液浸提3小時(shí)，間歇攪拌，過濾，用10% ( v/v) HCl溶液中和至pH 6. 5 7. 5，扎袋對(duì)流動(dòng)水透析2天，透析內(nèi)液濃縮后離心，上清液加入三倍體積的(v/v) 95%工業(yè)乙醇沉淀，靜置過夜，離心收集沉淀，分別經(jīng)無水乙醇和丙酮洗滌后，于80 °C干燥，得堿提螺旋藻粗多糖；
3)水提螺旋藻粗多糖用DEAE-纖維素陰離子交換柱層析進(jìn)行分離，用去離子水和不同離子強(qiáng)度O. 1,0. 2,0. 3和O. 5 mol/L的NaCl溶液進(jìn)行分步洗脫，分別從去離子水、O. 1,0. 2，O. 3和O. 5 mol/L NaCl溶液的洗脫液中分離得到五個(gè)組分，洗脫液對(duì)去離子水透析，透析內(nèi)液減壓濃縮并冷凍干燥，所得產(chǎn)物分別命名為LXZ-W，LXZ-0. LLXZ-0. 2,LXZ-0. 3,LXZ-0. 5，取LXZ-W樣品用O. 2mol/L氯化鈉溶解，離心，上清液上S-300凝膠柱，用O. 2 mol/L氯化鈉洗脫液洗脫得LXZ-W-300組分，經(jīng)HPLC檢測(cè)為一純多糖，分子量在3 10 X IO4 Da。所述的螺旋藻多糖化學(xué)結(jié)構(gòu)特征為主鏈由1，4-連接a -D-葡萄糖構(gòu)成，平均每8個(gè)主鏈殘基上有一個(gè)分支，取代在分支點(diǎn)的6位，分支由I個(gè)或2個(gè)1 6連接的葡萄糖構(gòu)成，結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.ー種螺旋藻多糖的提取方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行 .1)取螺旋藻生藥材，加質(zhì)量濃度95%エ業(yè)こ醇室溫下浸泡七天，傾去こ醇，固體物晾干，然后用沸水進(jìn)行多次提取，每次提取時(shí)間為4小時(shí)，用苯酚-硫酸法檢測(cè)提取液的糖含量，至糖反應(yīng)不明顯為止，毎次的提取液經(jīng)過濾后合并，加熱濃縮至小體積，對(duì)流動(dòng)水透析2天，透析內(nèi)液濃縮后離心，加入質(zhì)量濃度30%的三氯こ酸(體積比，I 1 v/v)溶液去除蛋白，在4度條件下反應(yīng)4小時(shí)，加質(zhì)量濃度10% NAOH溶液v/v中和至pH值為6. 5 7. 5后，扎袋對(duì)流動(dòng)水透析48小吋，透析內(nèi)液濃縮后離心，上清液加入三倍體積的質(zhì)量濃度95%エ業(yè)こ醇，靜置過夜，離心收集沉淀，分別經(jīng)無水こ醇和丙酮洗滌后，于80で干燥，得水提螺旋藻粗多糖； .2)沸水提取后的固體殘?jiān)?で下用5%v/v NaOH溶液浸提3小時(shí)，間歇攪拌，過濾，用10% v/v HCl溶液中和至pH 6. 5 7. 5，扎袋對(duì)流動(dòng)水透析2天，透析內(nèi)液濃縮后離心，上清液加入三倍體積的v/v 95%エ業(yè)こ醇沉淀，靜置過夜，離心收集沉淀，分別經(jīng)無水こ醇和丙酮洗滌后，于80で干燥，得堿提螺旋藻粗多糖； .3)水提螺旋藻粗多糖用DEAE-纖維素陰離子交換柱層析進(jìn)行分離，用去離子水和不同離子強(qiáng)度O. 1,0. 2,0. 3和O. 5 mol/L的NaCl溶液進(jìn)行分步洗脫，分別從去離子水、O. 1,0. 2，.O.3和O. 5 mol/L NaCl溶液的洗脫液中分離得到五個(gè)組分，洗脫液對(duì)去離子水透析，透析內(nèi)液減壓濃縮并冷凍干燥，所得產(chǎn)物分別命名為LXZ-W，LXZ-0. LLXZ-0. 2,LXZ-0. 3,LXZ-0. 5，取LXZ-W樣品用O. 2mol/L氯化鈉溶解，離心，上清液上S-300凝膠柱，用O. 2 mol/L氯化鈉洗脫液洗脫得LXZ-W-300組分，經(jīng)HPLC檢測(cè)為ー純多糖，分子量在3 10 X IO4 Da。
2.一種用權(quán)利要求I所述的螺旋藻多糖的提取方法提取得到的螺旋藻多糖，其化學(xué)結(jié)構(gòu)特征為主鏈由1，4-連接a-D-葡萄糖構(gòu)成，平均每8個(gè)主鏈殘基上有ー個(gè)分支，取代在分支點(diǎn)的6位，分支由I個(gè)或2個(gè)1 6連接的葡萄糖構(gòu)成，結(jié)構(gòu)式如下
全文摘要
本發(fā)明是一種螺旋藻多糖及其提取方法。按以下步驟進(jìn)行 1)取螺旋藻生藥材 ，用工業(yè)乙醇室溫下浸泡七天，傾去乙醇，固體物晾干，然后用沸水進(jìn)行多次提取，流動(dòng)水透析2天，透析內(nèi)液濃縮后離心，加入三氯乙酸溶液去除蛋白，加NAOH溶液中和至pH值為6.5～7.5后，流動(dòng)水透析、濃縮后離心，上清液加入三倍體積的工業(yè)乙醇，靜置過夜，離心收集沉淀，分別經(jīng)無水乙醇和丙酮洗滌后，干燥，得水提螺旋藻粗多糖；2)固體殘?jiān)鼔A提得堿提螺旋藻粗多糖；粗多糖經(jīng)分離、洗脫后得純多糖。螺旋藻多糖化學(xué)結(jié)構(gòu)特征為主鏈由1,4-連接α-D-葡萄糖構(gòu)成，平均每8個(gè)主鏈殘基上有一個(gè)分支，取代在分支點(diǎn)的6位，分支由1個(gè)或2個(gè)1 6連接的葡萄糖構(gòu)成。本發(fā)明的螺旋藻多糖的提取方法簡(jiǎn)單，方便，重現(xiàn)性好。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102633901SQ20121013435
公開日2012年8月15日 申請(qǐng)日期2012年5月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月3日
發(fā)明者丁侃, 倪鑫淼, 姚健, 李俊 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院上海藥物研究所, 昆明振華制藥廠有限公司