專利名稱：：中藥制劑中黃芪的質量控制方法中藥制劑中黃芪的質量控制方法
技術領域：
-本發(fā)明涉及益心舒中藥制劑中黃芪的質量控制方法，屬于藥品的
技術領域：
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背景技術：
：益心舒中藥制劑是以人參、麥冬、五味子、丹參等七味藥組成，具有益氣復脈，活血化瘀，養(yǎng)陰生津的功效，用于氣陰兩虛，心悸脈結代，胸悶不舒、胸痛及冠心病心絞痛見有上述癥狀者，目前臨床上廣泛用于治療心絞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心絞痛患等。藥物制劑必須要在保證產品質量穩(wěn)定可控安全的基礎上，才能不斷的更新發(fā)展，為了更好的控制該中藥制劑的質量，所以必須從源頭加以控制，才能更好的保證用藥的安全性。如今，在中藥制劑作為最具發(fā)展?jié)摿Φ乃幬镔Y源已經被全世界所認知的情況下，我國政府已經建立了一系列廣泛的政策來應對傳統(tǒng)中藥制劑標準化，現(xiàn)代化的要求。其中最重要的就是如何控制中藥制劑的質量。目前我們最常用的方法就是選擇中藥材的主要活性成分或其指標性成份，對這些成分的鑒別和含量測定以達到控制這些中藥制劑質量的目的。但是，這種只針對中藥及中藥制劑指標性成分進行控制的方法并不能科學而全面的確保中藥的藥效。藥理作用顯示，黃芪具有明顯的心血管改善作用，可明顯的降低血壓，同時有使心臟收縮加強、心輸出量增加及心律變慢的作用。而益心舒中藥制劑是以人參、麥冬、五味子、丹參等七味藥經加工制成的制劑，臨床上廣泛用于治療心絞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心絞痛患等。所以在益心舒制劑中黃芪的質量直接關系到該制劑的療效，對于黃芪的質量控制方法的提高從而確保益心舒中藥制劑的療效顯得十分必要。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一種益心舒中藥制劑中黃芪的質量控制方法，這種方法向相關的生產、檢測機構提供了檢測的指標、檢測的手段、技術方法等等；以便更好的控制益心舒中藥制劑的質量，為臨床提供一種療效確切的益心舒中藥制劑，保證用藥的安全和療效，同時能夠更好的指導生產，使消費者能全面認識益心舒中藥制劑的品質。本發(fā)明涉及益心舒中藥制劑中黃芪的質量控制方法，它包括黃芪的產地、采集、加工、鑒別、含測項目作為該制劑中黃芪質量控制的指標。上述的益心舒中藥制劑中黃芪的質量控制方法，采用以下的部分或全部-(1)黃芪的產地為山西、甘肅、黑龍江、內蒙古、遼寧、吉林、河北、山東、陜西、青海、四川等地。(2)黃芪的采集時間為每年的2-10月份后采挖。(3)黃芪的采集加工方法為挖取的鮮黃芪，除盡泥土，切去根頭部及支根，曬干。(4)黃芪的鑒別方法為方法l:采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530W之間任一體積，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲垸或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲垸、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、10%硫酸溶液、5%三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色的方法；方法2:采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200600nm范圍內；(6)黃芪含量采用以下方法方法l:采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠Gi^w或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530|4之間任一體積，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以水或醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲烷或正丁醇提取后再用層析分離精制的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己垸、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，顯色包括噴以硫酸乙醇溶液或濃硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或10%硫酸溶液或5%三氯化鐵乙醇溶液的方法，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為500750nm;方法2:采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、異鼠李素中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200600nm范圍內；上述的益心舒中藥制劑中黃芪的質量控制方法，采用以下的方法(1)黃芪的產地為山西、黑龍江、內蒙古、遼寧、吉林地區(qū)。(2)黃芪的采集時間為每年的春季或秋季采挖。(3)黃芪的采集加工方法為挖取的鮮黃芪，除盡泥土，切去根頭部及支根，曬干后分別打捆。(4)黃芪的鑒別方法為采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為0.5W30W之間某一體積，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷作為對照品，樣品前處理是三氯甲烷、二氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、甲酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、甲醇、乙醇、乙醚、石油醚中的一種或者是它們任意混合溶劑提取雜質，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們任意混合溶劑提取后再濃縮方法，再用正丁醇、水、氨試液提取精制的方法，展開劑為三氯甲烷、甲醇、水的按照常規(guī)比例配制而成，檢視條件為噴以230%硫酸乙醇顯色后紫外下檢視的方法；(5)黃芪含量采用以下方法采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中黃芪甲苷，樣品前處理以氫氧化鉀、甲醇按一定的比例混合溶劑提取，然后用水、醋酸乙酯、正丁醇、氨試液精制的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水在常規(guī)的合適比例條件下為流動相。上述的益心舒中藥制劑中黃芪的質量控制方法，采用以下方法(1)黃芪的產地為山西、內蒙古地區(qū)。(2)黃芪的采集期為每年的秋季采挖。(3)黃芪的采集加工方法為挖取的鮮黃芪，除盡泥土，切去根頭部及支根，曬干后分別打捆?；蛘邥裰亮?、七成干，捆成小捆，再曬干即可。(4)黃芪的鑒別方法為取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，加甲醇20ml，加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉移到分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對照藥材同法制成對照藥材溶液。再取黃芪甲苷對照品加甲醇制成每lml含2mg的溶液作為對照品溶液。吸取上述對照品溶液10ul，供試品溶液15ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13:7:2)，l(TC以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105X:加熱至斑點顯色清晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點。(5)黃芪的含測方法為采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法色譜條件:色譜柱迪瑪ODSC18柱；流動相乙腈-水(37:63)柱溫25。C;流速O.5ml/min;ELSD漂移管溫度100°C;載氣流速2.7L/min;進樣量10ul。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計算，應不低于4000。供試品溶液的制備取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，加甲醇20ml，加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉移到分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗漆兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品19.8mg，加50ml甲醇制成0.396mg/ml的對照品溶液，作為對照品溶液。測定法分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10P1，注入液相色譜儀，測定，即得。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明提供的質量控制方法能更好的、更進一步的控制一種益心舒中藥制劑的產品質量，保證用藥的安全性，使用本發(fā)明后，使生產該產品的單位或檢測機構從源頭原料黃芪來控制，確保該益心舒的療效，能夠保證藥物制成品的質量；我們在進行試驗時發(fā)現(xiàn)為了達到益心舒中藥制劑的確切療效，就必須從源頭開始控制，包括黃芪的產地、采集、加工、鑒別、含測項目。這樣更有利于指導生產，讓消費者全面認識產品品質、放心使用這類藥品。為簡便而全面地控制黃芪藥材的質量提供更為有效的分析方法。為證明利用本發(fā)明提供的黃芪質量控制方法能更好的控制益心舒中藥制劑的產品質量，得到的藥物具有有效的效果，申請人進行了一系列實驗；試驗例1益心舒中藥制劑中黃芪產地的考察本實驗通過對相同采集時期以及相同加工方法的內蒙古黃芪、山西黃芪、河北黃芪以及四川黃芪中的黃芪甲苷的含量測定來考察不同產地黃芪的品質。1.1儀器與材料色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相乙腈-水(37:63);流速0.5ml/min;蒸發(fā)光散射檢測ELSD漂移管溫度100。C;載氣流速2.7L/min;進樣量10ul。1.2測定法1.2.l對照品溶液制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.4mg的溶液，即得。1.2.2供試品溶液的制備取本品內容物5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入2呢K0H-甲醇50ml，回流lh，甲醇提取液蒸至盡干，加水20ml使溶解后，轉移至分液漏斗中，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml;合并醋酸乙酯液，加水15ml洗滌,合并水液;用水飽和正丁醇提取4次，每次20ml;合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次20ml;棄去氨試液,正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇使溶解轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過，即得。1.2.3測定法分別精密吸取上述對照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測定，即得。1.3結果和討論1.3.1樣品測定結果不同產地黃芪藥材樣品，單位(mg/g)，結果見表l一l樣品_黃芪甲苷_黃芪甲苷蒙古黃貧0.45760.4601山西黃甚0.45420.4588河北黃芪0.37520.3746四川黃芪0.32150.32421.3.2討論研究結果表明，不同產地黃芪中的黃芪甲苷成分含量差異較大，說明不同產地藥材的種內變異造成藥材品質的差異。其中以山西及蒙古的黃芪為佳。試驗例2益心舒中藥制劑中黃甚采集時期的考察實驗通過對不同采集期蒙古黃芪中黃芪甲苷含量測定來考察黃芪品質。2.1儀器與材料色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相乙腈-水(37:63);流速0.5ml/min;蒸發(fā)光散射檢測ELSD漂移管溫度100。C;載氣流速:2.7L/min;進樣量10ul。春季采挖的黃芪和秋季采挖的黃芪。2.2測定法2.2.l對照品溶液制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.4mg的溶液，即得。2.2.2供試品溶液的制備取本品內容物5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入2yoKOH-甲醇50ml，回流lh，甲醇提取液蒸至盡干，加水20ml使溶解后，轉移至分液漏斗中，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml;合并醋酸乙酯液，加水15ml洗滌，合并水液:用水飽和正丁醇提取4次，每次20ml;合并正丁醇提取液,用氨試液洗滌3次，每次20ml;棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇使溶解轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過，即得。2.2.3測定法分別精密吸取上述對照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測定，即得。2.3結果和討論2.3.1結果不同采集期黃芪藥材樣品，單位(％)，結果見表2—1樣品黃芪甲苷黃芪甲苷春季0.04160.0402秋季0.04670.04582.3.2討論研究結果表明，不同采集期黃芪中的黃芪甲苷成分含量差異較大，說明不同采集期采集的藥材的種內變異造成藥材品質的差異。其中秋季采集的含量最高為佳。試驗例3益心舒中藥制劑中黃賞的加工方法考察本實驗通過對蒙古黃芪不同的加工方法，依其黃芪甲苷的含量為指標來評價黃芪加工方法的考察。3.1儀器與材料色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相乙腈-水(37:63);流速0.5ml/min;蒸發(fā)光散射檢測ELSD漂移管溫度100。C;載氣流速2.7L/min;進樣量10ul。樣品A:挖取的鮮黃芪，除盡泥土，切去根頭部及支根，曬干后分別打梱?；蛘邥裰亮?、七成干，捆成小捆，再曬干即可。樣品B:挖取的鮮黃芪，除盡泥土，切去根頭部及支根，曬干。3.2測定法3.2.1對照品溶液制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.4mg的溶液，即得。3.2.2供試品溶液的制備取本品內容物5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入2%K0H-甲醇50ml，回流lh,甲醇提取液蒸至盡干,加水20ml使溶解后，轉移至分液漏斗中，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml;合并醋酸乙酯液，加水15ml洗滌，合并水液;用水飽和正丁醇提取4次，每次20ml;合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次20ml;棄去氨試液，正丁醇液蒸干,殘渣加甲醇使溶解轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度,搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過，即得。3.2.3測定法分別精密吸取上述對照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測定，即得。3.3結果及討論3.3.1結果不同加工方法黃芪藥材樣品，單位(％)，結果見表3—1樣品黃芪甲苷黃芪甲苷樣品A0.47060.4684樣品B0.42140.41873.3.2討論研究結果表明，依照樣品A采集加工的黃芪以及依照樣品B采集加工的黃芪中的黃芪甲苷成分含量差異較大，說明不同的樣品加工方法對黃芪中的成分影響較大，其中樣品A的加工方法為佳?？梢员ＷC黃芪中有效成分的含量，所以以樣品A加工方法的黃芪為佳。試驗例4益心舒中藥制劑中黃芪鑒別的穩(wěn)定性考察本實驗通過對5批黃芪進行鑒別方法學考察，以確定該方法的穩(wěn)定性。4.1標準溶液的制備4.1.1供試品溶液的制備取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，加甲醇20ml，加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉移到分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。4.1.2對照品溶液溶液的制備另取黃芪對照藥材同法制成對照藥材溶液。再取黃芪甲苷對照品加甲醇制成每lml含2mg的溶液作為對照品溶液。4.2鑒別吸取上述對照品溶液10ul，供試品溶液15ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13:7:2)，l(TC以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加熱至斑點顯色清晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點。4.3結果供試品與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；同時5批樣品均比較穩(wěn)定，說明此方法可以作為黃芪藥材的鑒別方法來進行黃芪藥材的鑒別。試驗例5益心舒中藥制劑中黃芪藥材含測的方法學考察5.l儀器條件島津高效液相色譜儀，LC-2010AHT;蒸發(fā)光散射檢測ELSD20005.2試藥；乙腈為色譜純，甲醇、醋酸乙酯、正丁醇、氨水均為分析純，氫氧化鉀為化學純，水為重蒸水；黃芪甲苷(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用)，蒙古黃芪藥材5批。5.3色譜條件色譜柱美國Phenomenex公司C18柱；流動相乙腈-水(37:63)柱溫25°C;流速0.5ml/min;ELSD漂移管溫度:100。C;載氣流速:2.7L/min;進樣量10ul。5.4標準曲線及線性范圍精密稱取黃芪甲苷對照品19.8mg，加50ml甲醇制成0.396mg/ml的對照品溶液，作為對照品貯備液。分別精密吸取上述對照品溶液lml、3ml、5ml、7ml、9ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進樣10(ul)，以進樣量(ug)的常用對數(shù)值為橫坐標，以峰面積的常用對數(shù)值為縱坐標，作標準曲線，得回歸方程為Y二4.9358+1.4956X，r=0.9995,進樣量在0.3963.564ug范圍內線性關系良好。因該標準曲線不過原點，樣品測定采用外標兩點法計算。5.5精密度實驗取同一份供試品溶液,連續(xù)重復進樣6次，每次進樣10ul，測定峰面積，RSD為0.48%。5.6穩(wěn)定性試驗取供試品溶液，分別在0h、2h、4h、6h、8h、24h、進樣，進行穩(wěn)定性試驗，測定結果表明，在24h之內黃芪甲苷色譜峰面積無明顯改變。RSD為1.1%。5.7重現(xiàn)性試驗取同一樣品按供試品溶液的制備方法制備6份供試液，分別進樣，測定黃芪甲苷的峰面積，計算含量，RSD為1.15%。5.8回收率試驗精密稱取18.8mg黃芪甲苷對照品置200ml量瓶中，加2呢K0H-甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備溶液。精密稱取樣品0.15g，精密加入對照品貯備溶液5ml,上述方法制成供試品溶液，每次進樣量為10ul。平均回收率為97.94%，RSD為0.68%。5.9結果按照上述方法測定的10批樣品中方法穩(wěn)定。試驗例6不同產地的黃芪在益心舒中藥制劑中黃芪甲苷的影響本實驗通過對內蒙古黃芪、山西黃芪、河北黃芪以及四川黃芪在益心舒中藥制劑中黃芪甲苷的含量為指標來評價黃芪對益心舒制劑的影響。6.1儀器與材料色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相乙腈-水(37:63);流速0.5ml/min;蒸發(fā)光散射檢測ELSD漂移管溫度10(TC;載氣流速2.7L/min;進樣量10ul。內蒙古黃芪(蒙制)、山西黃芪(西制)、河北黃芪(北制)以及四川黃芪(川制)。6.2測定法6.2.l對照品溶液制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.4mg的溶液，即得。6.2.2供試品溶液的制備取本品5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入2WK0H-甲醇50ml，回流lh，甲醇提取液蒸至盡干，加水20ml使溶解后，轉移至分液漏斗中，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml;合并醋酸乙酯液，加水15ml洗滌，合并水液;用水飽和正丁醇提取4次，每次20ml:合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次20ml;棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇使溶解轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，甩O.45um微孔濾膜濾過，即得。6.2.3測定法分別精密吸取上述對照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測定，即得。6.3結果及討論6.3.1結果不同產地黃芪制劑的含量比較，單位(mg/g)，結果見表6—1<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>6.3.2討論研究結果表明，不同產地黃芪的益心舒制劑中的黃芪甲苷成分含量差異較大，說明不同產地黃芪對益心舒制劑有較大的影響，其中，以蒙古和山西的黃芪藥材較好。7實施實例益心舒中藥制劑中黃芪藥材的質量控制方法黃芪的產地為山西、內蒙古地區(qū)。黃芪的采集期為每年的秋季。黃芪的采集加工方法為挖取的鮮黃芪，除盡泥土，切去根頭部及支根，曬干后分別打捆?；蛘邥裰亮⑵叱筛?，捆成小捆，再曬干即可。黃芪的鑒別方法為取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，加甲醇20ml，加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉移到分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對照藥材同法制成對照藥材溶液。再取黃芪甲苷對照品加甲醇制成每lml含2mg的溶液作為對照品溶液。吸取上述對照品溶液10ul，供試品溶液15ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13:7:2)，l(TC以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105"C加熱至斑點顯色清晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點。黃芪的含測方法為采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法色譜條件色譜柱迪瑪0DSC18柱；流動相乙腈-水(37:63)柱溫25。C;流速O.5ml/min;ELSD漂移管溫度100°C;載氣流速2.7L/min;進樣量10ul。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計算，應不低于4000。供試品溶液的制備取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，加甲醇20ml，加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉移到分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗漆兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品19.8mg，加50ml甲醇制成0.396mg/ml的對照品溶液，作為對照品溶液。測定法分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10W，注入液相色譜儀，測定，即得。本品中黃芪甲苷的含量不得少于0.10mg/g.權利要求1、益心舒中藥制劑中黃芪的質量控制方法，其特征在于它是將黃芪的產地、采集、加工、鑒別、含測項目一項或多項作為該制劑中黃芪質量控制的指標。2、根據(jù)權利要求1所述的益心舒中藥制劑中黃芪的質量控制方法，其特征在于采用以下方法的部分或全部(1)黃芪的產地為山西、甘肅、黑龍江、內蒙古、遼寧、吉林、河北、山東、陜西、青海、四川等地。(2)黃芪的采集時間為每年的2-10月份后采挖。(3)黃芪的采集加工方法為挖取的鮮黃芪，除盡泥土，切去根頭部及支根，曬干。(4)黃芪的鑒別方法為方法l:采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF2S4或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530W之間任一體積，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲垸或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己垸、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、10%硫酸溶液、5%三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色的方法；方法2:采用高效液相色譜法或蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200600nm范圍內；(6)黃芪含量采用以下方法方法l:采用薄層色譜掃描法，一般使用硅膠G或硅膠G&s4或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530W之間任一體積，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以水或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再用層析分離精制的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己垸、三氯甲垸、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己垸、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，顯色包括噴以硫酸乙醇溶液或濃硫酸溶液或茴香醛硫酸溶液或10%硫酸溶液或5%三氯化鐵乙醇溶液的方法，斑點在薄層掃描儀上采用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為500750nm;方法2:采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、異鼠李素中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲垸或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200600nm范圍內；3、根據(jù)權利要求1或2所述的益心舒中藥制劑中黃芪的質量控制方法，其特征在于-(1)黃芪的產地為山西、甘肅、黑龍江、內蒙古、遼寧、吉林地區(qū)。(2)黃芪的采集時間為每年的春季或秋季采挖。(3)黃芪的采集加工方法為挖取的鮮黃芪，除盡泥土，切去根頭部及支根，曬干后分別打捆。(4)黃芪的鑒別方法為采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為0.5W30W之間某一體積，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷作為對照品，樣品前處理是三氯甲烷、二氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、甲酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯、甲醇、乙醇、乙醚、石油醚中的一種或者是它們任意混合溶劑提取雜質，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們任意混合溶劑提取后再濃縮方法，再用正丁醇、水、氨試液提取精制的方法，展開劑為三氯甲垸、甲醇、水的按照常規(guī)比例配制而成，檢視條件為噴以230%硫酸乙醇顯色后紫外下檢視的方法；(5)黃芪含量采用以下方法采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中黃芪甲苷，樣品前處理以氫氧化鉀、甲醇按一定的比例混合溶劑提取，然后用水、醋酸乙酯、正丁醇、氨試液精制的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水在常規(guī)的合適比例條件下為流動相。4、根據(jù)權利要求13所述的益心舒中藥制劑中黃芪的質量控制方法，其特征在于-(1)黃芪的產地為山西、內蒙古地區(qū)。(2)黃芪的采集期為每年的秋季。(3)黃芪的采集加工方法為挖取的鮮黃芪，除盡泥土，切去根頭部及支根，曬干后分別打捆。或者曬至六、七成干，捆成小捆，再曬干即可。(4)黃芪的鑒別方法為取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，加甲醇20ml，加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉移到分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對照藥材同法制成對照藥材溶液。再取黃芪甲苷對照品加甲醇制成每lml含2mg的溶液作為對照品溶液。吸取上述對照品溶液10ul，供試品溶液15ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13:7:2)，l(TC以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加熱至斑點顯色清晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點或熒光斑點。(5)黃芪的含測方法為采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法色譜條件:色譜柱迪瑪ODSC18柱；流動相乙腈-水(37:63)柱溫25。C;流速O.5ml/min;ELSD漂移管溫度IOO'C;載氣流速2.7L/min;進樣量10ul。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計算，應不低于4000。供試品溶液的制備取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮干溶劑，加甲醇20ml，加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml使溶解，轉移到分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品19.8mg，加50ml甲醇制成0.396mg/ml的對照品溶液，作為對照品溶液。測定法分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10W，注入液相色譜儀，測定，即得。全文摘要本發(fā)明是一種中藥制劑中黃芪的質量控制方法，屬于藥品的
技術領域：
。益心舒中藥制劑是以人參、黃芪、丹參、麥冬、五味子等七味藥組成，具有益氣復脈，活血化瘀，養(yǎng)陰生津的功效，目前臨床上廣泛用于治療心絞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心絞痛患等。本發(fā)明提供了一種益心舒中藥制劑中黃芪的質量控制方法，該方法的提供直接向有關的生產益心舒制劑中黃芪的品質提供了檢測的指標、檢測的手段、技術方法等等；以便更好的控制該中藥制劑的質量，保證用藥的安全性和療效，能夠更好的指導生產，為消費者提供一種品質優(yōu)良的產品。文檔編號A61P9/00GK101670041SQ200910102679公開日2010年3月17日申請日期2009年7月17日優(yōu)先權日2009年7月17日發(fā)明者張觀福申請人:貴州信邦制藥股份有限公司