專利名稱：桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物的制備方法。
技術(shù)背景發(fā)明內(nèi)容:
桑枝(Ramulus mori)是桑科植物桑(Morus alba L.)的一年生干燥嫩枝，作為民間常用中草 藥，中國(guó)藥典記載桑枝具有祛風(fēng)濕、利關(guān)節(jié)、行水之功效，適用于風(fēng)寒濕痹、四肢拘攣、腳 氣浮腫之病癥。其所含化學(xué)成分種類較多，主要有多糖、黃酮類化合物、香豆素類化合物、 生物堿，此外還含有揮發(fā)油、氨基酸、有機(jī)酸及各種維生素等。另有報(bào)道桑枝中含有二苯乙 烯類化合物桑皮苷。雖然桑枝有較好的臨床基礎(chǔ)，但一直沒有找到適當(dāng)?shù)闹苽淦渲械纳ＶS 酮和二苯乙烯類提取物的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于公開桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物的制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是桑枝通過水醇法，大孔吸附樹脂柱洗脫得到的桑枝黃酮和二
苯乙烯類提取物，以Quercetin-3-0-p-D-mannopyranoside為對(duì)照品經(jīng)紫外分光光度法和HPLC 法分別測(cè)得黃酮類化合物重量比含量為30%-70%;以桑皮苷為對(duì)照品經(jīng)紫外分光光度法和 HPLC法分別測(cè)得二苯乙烯類化合物重量比含量為30X-70。/0。 桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物的制備
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過， 濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為l一BV/h上已預(yù)處理好的大孔吸附樹脂柱，以2—6倍量柱床體積 的蒸餾水洗脫，流速為1-4BV/h，棄去水洗脫液，再以2—6倍量柱床體積的60 %乙醇按 l一BV/h的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合 物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-0-p-D-mann叩yranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙 烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30 % -70% 。
大孔吸附樹脂柱最好為HPD-600型大孔吸附樹脂柱。
桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物可以應(yīng)用在制備抑制尿酸重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)子藥物中。該新用途 包括了以本發(fā)明所述的桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物，配以常用的藥用輔料(如賦形劑、 助溶劑、控釋劑)，制成各種劑型包括口服液、注射劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、微囊劑，用于制備抑制尿酸重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)子藥物。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是，提供了桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物的制備方法。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，
濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為lBV/h上己預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以2倍量柱床 體積的蒸餾水洗脫，流速為lBV/h，棄去水洗脫液，再以6倍量柱床體積的60 %乙醇按lBV/h 的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即 得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合 物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-O-p-D-mannopyraiioside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙 烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30%-70%。
實(shí)施例2:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過， 濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為2BV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以2倍量柱床 體積的蒸餾水洗脫，流速為2BV/h，棄去水洗脫液，再以5倍量柱床體積的60 %乙醇按2BV/h 的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即 得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合 物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-O-p-D-mannopyranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙 烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30%-70%。
實(shí)施例3:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過， 濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為3BV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以2倍量柱床 體積的蒸餾水洗脫，流速為3BV/h，棄去水洗脫液，再以4倍量柱床體積的60 %乙醇按3BV/h 的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合 物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-O-p-D-mannopyranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙 烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30%-70%。
實(shí)施例4:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過， 濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為4BV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以3倍量柱床 體積的蒸餾水洗脫，流速為4BV/h，棄去水洗脫液，再以3倍量柱床體積的60 %乙醇按4BV/h 的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即 得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合 物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-0-p-D-maimopyranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙 烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30%-70%。
實(shí)施例5:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過， 濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為2BV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以3倍量柱床 體積的蒸餾水洗脫，流速為3BV/h，棄去水洗脫液，再以2倍量柱床體積的60 %乙醇按4BV/h 的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即 得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合 物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-O-p-D-mannopyranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙 烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30%-70%。
實(shí)施例6:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過， 濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為lBV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以3倍量柱床體積的蒸餾水洗脫，流速為4BV/h，棄去水洗脫液，再以6倍量柱床體積的60 %乙醇按3BV/h 的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即 得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合 物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-O-p-D-mannopyranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙 烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30 % -70%。
實(shí)施例7:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過， 濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為4BV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以4倍量柱床 體積的蒸餾水洗脫，流速為lBV/h，棄去水洗脫液，再以5倍量柱床體積的60 %乙醇按2BV/h 的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即 得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合 物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-O-p-D-mannopyranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙 烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30%-70%。
實(shí)施例8:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過， 濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為3BV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以4倍量柱床 體積的蒸餾水洗脫，流速為2BV/h，棄去水洗脫液，再以4倍量柱床體積的60 %乙醇按lBV/h 的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即 得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合 物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-O-p-D-mannopyranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙 烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30%-70%。
實(shí)施例9:
(l)取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，
6濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為4BV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以4倍量柱床體積的蒸餾水洗脫，流速為lBV/h，棄去水洗脫液，再以3倍量柱床體積的60 %乙醇按3BV/h的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-0-p-D-m纖opymnoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30%-70%。
實(shí)施例10:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為3BV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以5倍量柱床體積的蒸餾水洗脫，流速為2BV/h，棄去水洗脫液，再以2倍量柱床體積的60 %乙醇按4BV/h的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-O-p-D-mannopyranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30%-70%。
實(shí)施例11:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為2BV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以5倍量柱床體積的蒸餾水洗脫，流速為3BV/h，棄去水洗脫液，再以6倍量柱床體積的60 %乙醇按lBV/h的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-O-p-D-mannopyranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30 % -70%。實(shí)施例12:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為lBV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以5倍量柱床體積的蒸餾水洗脫，流速為4BV/h，棄去水洗脫液，再以5倍量柱床體積的60 %乙醇按2BV/h的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-0-p-D-mannopyranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30%-70%。
實(shí)施例13:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為3BV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以6倍量柱床體積的蒸餾水洗脫，流速為3BV/h，棄去水洗脫液，再以4倍量柱床體積的60 %乙醇按2BV/h的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-O-p-D-mannopyranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30%-70%。
實(shí)施例14:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為4BV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以6倍量柱床體積的蒸鎦水洗脫，流速為4BV/h，棄去水洗脫液，再以3倍量柱床體積的60 %乙醇按lBV/h的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得千浸膏，粉碎成細(xì)粉，即得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合物重量比含量30%-70%。
8(4)以Quercetin-3-O-p-D-mannopyranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30%-70%。實(shí)施例15:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為lBV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以6倍量柱床體積的蒸餾水洗脫，流速為lBV/h，棄去水洗脫液，再以2倍量柱床體積的60 %乙醇按4BV/h的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-O-p-D-mannopyranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30%-70%。
實(shí)施例16:
(1) 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60%乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液經(jīng)減壓濃縮至每ml藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣。
(2) 取濾液，按流速為2BV/h上已預(yù)處理好的HPD-600型大孔吸附樹脂柱，以2倍量柱床體積的蒸餾水洗脫，流速為2BV/h，棄去水洗脫液，再以6倍量柱床體積的60 %乙醇按3BV/h的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細(xì)粉，即得桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物。
(3) 以桑皮苷為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中二苯乙烯類化合物重量比含量30%-70%。
(4) 以Quercetin-3-0-P-D-mannopyranoside為對(duì)照品，按照藥典法測(cè)定桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物中黃酮類化合物重量比含量為30%-70%。
權(quán)利要求
1. 一種桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物的制備方法，其特征在于，所述的制備方法包括以下步驟a. 取干燥桑枝，熱回流三次，每次加7倍60％乙醇，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液經(jīng)減壓濃縮至每m1藥液含有0.5g藥材，放冷，過濾，棄去藥渣；b. 取濾液，按流速為1—4BV/h上已預(yù)處理好的大孔吸附樹脂柱，以2—6倍量柱床體積的蒸餾水洗脫，流速為1--4BV/h，棄去水洗脫液，再以2—6倍量柱床體積的60％乙醇按1—4BV/h的速度洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至稠膏，減壓干燥，得干浸膏。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物的制備方法，其特征在于，大孔吸附樹脂柱為HPD-600型大孔吸附樹脂柱。
全文摘要
本發(fā)明涉及桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物的制備方法。具體的是，桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物通過水醇法，大孔吸附樹脂柱洗脫得到，以桑皮苷、Quercetin-3-O-β-D-mannopyranoside為指標(biāo)成份，經(jīng)紫外分光光度法和HPLC法測(cè)得該提取物中二苯乙烯類化合物重量比含量30％-70％、黃酮類化合物重量比含量30％-70％。本發(fā)明為桑枝黃酮和二苯乙烯類提取物提供了新的制備方法。
文檔編號(hào)A61P19/00GK101496834SQ200910095838
公開日2009年8月5日 申請(qǐng)日期2009年2月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月12日
發(fā)明者葉劍鋒, 孔令東, 憲 張, 星 王, 王彩萍, 胡季強(qiáng), 胡林水, 黃正標(biāo) 申請(qǐng)人:浙江康恩貝制藥股份有限公司;南京大學(xué)