專利名稱：塵螨過敏原Derf26和Derf27及其基因和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種塵螨過敏原Der f 26和Der f 27及其基因和應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
過敏性疾病(如哮喘、過敏性鼻炎等)是臨床上的常見病、多發(fā)病，世界各國過敏性疾病的總發(fā)病率高達(dá)10-30%，是當(dāng)前世界性的重大衛(wèi)生學(xué)問題，目前我國現(xiàn)有哮喘患者2000多萬，過敏性鼻炎患者5000多萬，并且其發(fā)病率和死亡率仍呈上升趨勢(shì)，近二十年來發(fā)病率幾乎翻了一倍。在引起過敏性疾病的眾多吸入性過敏原中，塵螨是導(dǎo)致呼吸道變態(tài)反應(yīng)性疾病的最重要因素。自從Voorhorst和Spieksma (1964)首次證實(shí)塵螨及代謝產(chǎn)物是屋塵中的主要過敏原以來，世界各國(歐美國家、日本、中國等)變態(tài)反應(yīng)學(xué)工作者通過大量調(diào)查也一致證實(shí)塵螨是世界性的主要變應(yīng)原。塵螨在過敏性疾病患者特異性免疫診斷中陽性率約70-80%。自從Noon和Freeman( 1911)首次應(yīng)用梯牧草花粉變應(yīng)原浸液(allergenextract)用于治療花粉癥以來，脫敏治療至今已有90多年的歷史。隨著對(duì)變態(tài)反應(yīng)疾病發(fā)病機(jī)制的深入研究以及免疫治療機(jī)制的進(jìn)一步了解，WHO (1997)建議將變應(yīng)原浸液改稱為變應(yīng)原疫苗(allergen vaccine)，并且在《WHO有關(guān)免疫治療的指導(dǎo)文件》(1998)指出(I)鼓勵(lì)應(yīng)用和發(fā)展標(biāo)準(zhǔn)化的變應(yīng)原疫苗；(2)成功的免疫治療取決于高質(zhì)量的變應(yīng)原疫苗。因此，研制出新一代 高效變應(yīng)原疫苗仍是國內(nèi)外該領(lǐng)域研究熱點(diǎn)。由于塵螨系醫(yī)學(xué)節(jié)肢動(dòng)物，結(jié)構(gòu)和成份復(fù)雜，盡管目前人們?cè)趬m螨數(shù)百種蛋白中已初步鑒定出16種過敏原成份，研究顯示塵螨含有的過敏原多大30余種。就某一個(gè)塵螨過敏病人而言，他可能僅對(duì)塵螨中的一類或數(shù)類過敏原蛋白產(chǎn)生過敏反應(yīng)。而目前在臨床上用于塵螨過敏患者診斷和脫敏治療的仍然為塵螨粗浸液，其中含有大量對(duì)患者非特異的過敏原及其它雜質(zhì)，這嚴(yán)重阻礙了塵螨過敏原試劑標(biāo)準(zhǔn)化的制定及其在臨床上的使用。所以進(jìn)一步探明塵螨過敏原的確切組分，將會(huì)為塵螨過敏患者帶來個(gè)體化的脫敏治療。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種塵螨過敏原Der f 26和Der f 27及其基因和應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案如下Der f 26 屬于一轉(zhuǎn)錄延長因子 _2 (Translation elongation factor 2),分子量約43 kDa。Der f 26由429個(gè)氨基酸組成，其氨基酸序列如下(SEQ ID NO:1)MGPNYVHGKKEDLVEKAIQRTVLMMGRYVESIENVPCGNICGLVGVDQFLVKTGTISTFK 60DAHNMKVMKFSVSPVVRVAVEPKNPADLPKLVEGLKRLAKSDPMVQCIIEESGEHIVAGA 120GELHLEICLKDLEEDHAQIPIKTSDPVVSYRETVSEESEIMCLSKSPNKHNRLFMKACPL 180QDGIAEDIDKGDINPRDDFKVRARFLADKYNWDATDARKIWAFGPEGTGPNLLVDVTKGV 240QYLNEIKDSVVAGFQWATKESVLCEENMRGVRFNIHDVTLHADAIHRGGGQIIPTARRCL 300YACLLTAQPRLLEPVYLVEIQCPEQAVGGIYGVLNRRRGHVFEESQVAGTPMFIVKAYLP 360
VNESFGFTADLRSNTGGQAFPQCVFDHWQILPGDPLDGKSRPYQIVMDTRKRKGLKDSLP 420ELDNYFDKL429塵螨過敏原Dei f 26基因克隆步驟包括塵螨總RNA提取，mRNA純化，mRNA反轉(zhuǎn)錄及cDNA文庫構(gòu)建，設(shè)計(jì)引物，利用PCR方法擴(kuò)增編碼基因?；驕y(cè)序結(jié)果表明塵螨過敏原Derf 26的編碼基因(GenBank accession KC305501)由1290個(gè)核苷酸組成，該基因的5’端至3’端序列為(核苷酸序列為SEQ ID NO:2)atgggaccaa attatgtgca tggtaaaaaa gaggatttgg ttgagaaggc cattcaacga 60actgtattga tgatgggtcg ttatgtggaa tcaattgaaa atgtaccatg cggcaatatt 120tgtggtttag ttggtgttga tcaatttttg gtcaaaaccg gtaccatttc aacatttaaa 180gatgcacaca acatgaaagt gatgaaattc tccgtatcgc ctgttgtgcg tgttgctgtt 240gaaccgaaaa atcctgccga tttacctaaa ttggtagaag gtttaaaacg tttggctaaa 300tctgatccta tggtacaatg tatcattgaa gaatcgggtg aacatattgt agcaggtgct 360ggtgaacttc atttggaaat ttgtctaaaa gatttggaag aagatcatgc ccaaattcca 420atcaaaacat cggatccagt tgtatcgtat cgagaaactg tttcagaaga atctgaaatt 480atgtgcttgt ctaaatcacc aaacaaacat aatcgtttgt tcatgaaagc atgtcctctt 540caggatggta ttgccgaaga cattgataaa ggtgacatca atccacgtga tgatttcaaa 600gtgcgtgctc gattcttagc tgataaatat aattgggatg caaccgatgc tcgtaaaatc 660tgggcttttg gacccgaagg tactggacca aatcttttgg tcgatgtaac caaaggtgtg 720caatatttaa acgaaatcaa agatagcgtt gttgctggat ttcaatgggc caccaaagag 780agtgtacttt gtgaagaaaa catgcgtggt gttcgtttca acattcatga tgtaactttg 840cacgctgatg ctatccatcg tggtggtggt caaatcattc cgacagctcg tcgttgtctt 900tatgcctgcc ttttgaccgc tcaacctcgt cttttggaac cggtctattt ggtggaaatt 960caatgtcctg aacaagccgt tggtggtatc tatggtgtgt tgaatagacg tcgtggccat 1020gtatttgaag aatcacaagt tgccggtaca cctatgttca ttgtcaaagc ctatttgcca 1080gtaaatgaat cattcggatt tactgccgat cttcgttcaa acactggtgg ccaagctttc 1140ccacaatgtg tatttgatca ttggcaaatt ttgcctggcg atccgttgga tggtaaatcc 1200cgtccatatc aaattgtcat ggatacacgt aaacgtaaag gtcttaagga ttcattgccc 1260gaattggaca attatttcga taaactttga1290Der f 27屬于一類Serpin蛋白家族，分子量約43KDa。Der f 27由427個(gè)氨基酸組成，其氨基酸序列如下(SEQ ID N0:3)MKFFLLSFVLMVVAATATYAAHVGSGSRDNNNNKPVPAEGFAKASNEFGFHLLKEVIQHR 60SSSGSRGSSENVLFSPYSVAVALSMVHQGTQGSTAEQFKRVLYYDRVQQLNGGEYQTVAN 120
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權(quán)利要求
1.塵螨過敏原Derf 26和Der f 267，其特征在于分別由SEQ ID N0:1和SEQ ID NO: 3所示的氨基酸序列組成。
2.編碼塵螨過敏原Derf 26和Der f 267的基因，其特征在于分別由SEQ ID N0:2和SEQ ID N0:4所示的核苷酸序列組成。
3.權(quán)利要求1所述的塵螨過敏原Derf 26和Der f 267在制備治療塵螨過敏性疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及塵螨過敏原Der f 26和Der f 27及其基因和應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。塵螨過敏原Der f 26和Der f 267、分別由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列組成。編碼塵螨過敏原Der f 26和Der f 267的基因，其分別由SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列組成。所述的塵螨過敏原Der f 26和Der f 267在制備治療塵螨過敏性疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果在于提供塵螨過敏原Der f 26和Der f 27及其基因，塵螨過敏原Der f 26和Der f 27能夠作為制備治療塵螨過敏性疾病藥物的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P37/08GK103059120SQ20131003405
公開日2013年4月24日 申請(qǐng)日期2013年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月29日
發(fā)明者賴仞, 安輸, 容明強(qiáng), 李東升 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所