專利名稱：一種大葉茜草素及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種大葉茜草素及其制備方法，同時(shí)還涉及其在制備降血糖藥物方面的應(yīng)用及制備治療糖尿病藥物方面的應(yīng)用，屬于天然藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
糖尿病(diabetes)是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各種致病因子作用于機(jī)體導(dǎo)致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征。糖尿病主要分為兩種類型I型糖尿病(即胰島素依賴型糖尿病)和II型糖尿病(即非胰島素依賴型糖尿病)。臨床上以高血糖為主要特點(diǎn)，典型病例可出現(xiàn)多尿、多飲、多食、消瘦等表現(xiàn)，即“三多一少”癥狀。糖尿病(血糖)一旦控制不好會(huì)引發(fā)并發(fā)癥，導(dǎo)致腎、眼、足等部位的衰竭病變，且無(wú)法治愈。國(guó)外給它的別名叫〃沉默的殺手"(Silent Killer)，特別是〃成人型糖尿病〃。四十歲以上的中年 人染患率特別高，一旦患上〃糖尿病〃，將減少壽命十年之多，可能發(fā)生的并發(fā)癥遍及全身。所有的糖尿病并發(fā)癥可以通過(guò)嚴(yán)格血糖控制，從最大程度上進(jìn)行預(yù)防，如果糖尿病患者能將自己的血糖水平控制在接近正常的血糖范圍內(nèi)，則糖尿病并發(fā)癥就不會(huì)出現(xiàn)，或者出現(xiàn)得比較晚并且程度也較輕。多年來(lái)糖尿病的治療藥物以西藥為主，長(zhǎng)期以來(lái)主要集中于磺脲類與雙胍類藥物。但這些藥物存在著低血糖癥和胃腸道反應(yīng)等不良反應(yīng)，因而尋找高效低毒的降糖藥仍是醫(yī)藥專家追求的目標(biāo)。由于傳統(tǒng)中藥及天然植物藥具有相對(duì)安全和價(jià)格低廉、作用溫和持久和可延緩并發(fā)癥等優(yōu)點(diǎn)，不失為尋找降糖新藥的一條重要途徑，因此開(kāi)發(fā)中藥及天然植物藥作為降糖藥可以提供更廣泛的糖尿病治療藥物來(lái)源，而中藥中有效的降血糖成分更是目前研究開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)。茜草，俗名血見(jiàn)愁、小活血、活血草、鋸子草、拉拉藤、小血藤，為茜草科植物茜草(Rubia cordifolia L.)的干燥根及根莖。菌草科菌草屬植物全世界有60余種,主要分布于亞洲、歐洲、美洲和非洲。我國(guó)有24種10變種，遍布全國(guó)各地，尤以西南地區(qū)種類最多。茜草分布甚廣，但至今仍以陜西、山西和河南為主產(chǎn)區(qū)，茜草性寒味苦，歸心肝經(jīng)，具有涼血止血、祛風(fēng)除濕、祛淤通經(jīng)、活血祛瘀、止咳祛痰之功效，主治吐血、衄血、血熱崩漏、閉經(jīng)、跌打損傷。茜草中主要含有水溶性的環(huán)已肽系列物、脂溶性成分蒽醌及其糖苷、萘醌及其糖苷，此外還含有萜類、β -谷留醇、脂肪酸化合物和微量元素。大葉茜草素是茜草中提取、分離出來(lái)的一種化合物，目前，主要用于胃腸痙攣、胃腸炎、腸蛔蟲(chóng)癥、膽道蛔蟲(chóng)癥、膽石癥及其它膽道疾病引起的疼痛的治療，但對(duì)大葉茜草素其它方面藥理活性未見(jiàn)研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種大葉茜草素。為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是提供一種大葉茜草素，由以下方法制備獲得茜草原藥材經(jīng)石油醚加熱回流提??；回收石油醚，得到提取物；將提取物經(jīng)硅膠200-300目柱色譜，用石油醚洗脫，TLC檢測(cè)合并組分，經(jīng)S印hadex LH-20凝膠柱色譜，用氯仿石油醚甲醇=5:5:1洗脫，再經(jīng)硅膠H柱減壓柱色譜，用石油醚洗脫，熱乙醇結(jié)晶即得。本發(fā)明的目的還在于提供一種大葉茜草素的制備方法。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案還在于提供一種大葉茜草素的制備方法，由以下方法制備獲得取茜草原藥材，用5 15倍量的石油醚加熱回流提取2(T40min ;回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物經(jīng)過(guò)硅膠200-300目柱色譜，用石油醚洗脫，TLC檢測(cè)，合并富含大葉茜草素組分，后經(jīng)S印hadex LH-20凝膠柱色譜，用氯仿石油醚甲醇=5 5 I洗脫，然后再經(jīng)硅膠H柱減壓柱色譜，用石油醚洗脫，最后用熱乙醇重結(jié)晶得到大葉茜草素。所述的茜草原藥材經(jīng)干燥處理。本發(fā)明的目的還在于提供一種大葉茜草素在制備降血糖藥物方面的應(yīng)用。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案還在于提供了一種大葉茜草素在制備降血糖藥物方面的應(yīng)用。本發(fā)明的目的還在于提供一種大葉茜草素在制備治療糖尿病藥物方面的應(yīng)用。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案還在于提供了一種大葉茜草素在制備治療糖尿病藥物方面的應(yīng)用。四氧嘧啶(Alloxan)是胰島β細(xì)胞毒劑，可選擇性的損傷多種動(dòng)物的胰島β細(xì)胞，進(jìn)而引起糖尿病。小鼠四氧嘧啶糖尿病模型造模方法簡(jiǎn)便，形成率高，是最常見(jiàn)的糖尿病動(dòng)物模型。對(duì)于四氧嘧啶小鼠糖尿病模型的穩(wěn)定性研究中，主要是通過(guò)四氧嘧啶溶液，在注射后所致糖尿病，一定時(shí)間內(nèi)檢測(cè)小鼠血清中血糖值。糖尿病時(shí)，機(jī)體內(nèi)糖原合成過(guò)程中的某些酶活性低下，糖原合成減少，表現(xiàn)為肝糖原含量減少。另外，糖尿病同時(shí)可造成組織的氧化損傷，表現(xiàn)為肝組織中的超氧化物歧化酶(SOD)降低和丙二醛(MDA)的含量的升高。還可引起脂類代謝障礙，表現(xiàn)為血清甘油三酯(TG)、血清總膽固醇(TC)的升高。本發(fā)明以四氧嘧啶誘導(dǎo)小鼠β細(xì)胞損傷，造成糖尿病模型后，以化合物大葉茜草素溶液灌胃，檢測(cè)小鼠血清中的空腹血糖值、餐后血糖值、TC含量、TG含量、肝糖原含量、SOD和MDA值。實(shí)驗(yàn)表明化合物大葉茜草素高劑量組和中劑量組作用顯著，能有效降低四氧嘧啶致高血糖小鼠的血糖值、TC值、TG值和MDA含量，且能顯著的升高小鼠血清的SOD活力值以及增加組織肝糖原含量，證明大葉茜草素具有很好的降血糖以及治療糖尿病作用。通過(guò)采用本發(fā)明的方法處理所得的化合物大葉茜草素，可以制成各種制劑，包括栓劑、片劑、丸劑、顆粒劑、膜劑、微囊劑、滴丸劑、氣霧劑、酒劑、糖漿劑、口服液等。茜草是一種很常見(jiàn)的中藥材，在自然界中分布廣泛，因此，化合物大葉茜草素的原料容易得到，成本很低。本發(fā)明制備大葉茜草素的方法操作簡(jiǎn)單、工序較少，便于工業(yè)化的推廣。實(shí)驗(yàn)表明，化合物大葉茜草素具有良好的降血糖作用，化合物大葉茜草素在制備降血糖藥物方面及制備治療糖尿病藥物方面有著很好的應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I
本實(shí)施例的大葉茜草素，是從茜草中提取后洗脫得到的，具體制備方法如下取干燥的茜草原藥材，用5倍量的石油醚加熱回流提取40min ;回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物經(jīng)過(guò)硅膠200-300目柱色譜，用石油醚洗脫，TLC檢測(cè)，合并富含大葉茜草素組分，后經(jīng)S印hadex LH-20凝膠柱色譜，用氯仿石油醚甲醇=5 5 :1洗脫，然后再經(jīng)硅膠H柱減壓柱色譜，用石油醚洗脫，最后用熱乙醇重結(jié)晶得到大葉茜草素。實(shí)施例2本實(shí)施例的大葉茜草素，是從茜草中提取后洗脫得到的，具體制備方法如下取干燥的茜草原藥材，用10倍量的石油醚加熱回流提取30min ;回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物經(jīng)過(guò)硅膠200-300目柱色譜，用石油醚洗脫，TLC檢測(cè)，合并富含大葉茜草素組分，后經(jīng)S印hadex LH-20凝膠柱色譜，用氯仿石油醚甲醇=5 5 :1洗脫，然后再經(jīng)硅膠H柱減壓柱色譜，用石油醚洗脫，最后用熱乙醇重結(jié)晶得到大葉茜草素。實(shí)施例3
本實(shí)施例的大葉茜草素，是從茜草中提取后洗脫得到的，具體制備方法如下取干燥的茜草原藥材，用15倍量的石油醚加熱回流提取20min ;回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物經(jīng)過(guò)硅膠200-300目柱色譜，用石油醚洗脫，TLC檢測(cè)，合并富含大葉茜草素組分，后經(jīng)S印hadex LH-20凝膠柱色譜，用氯仿石油醚甲醇=5 5 :1洗脫，然后再經(jīng)硅膠H柱減壓柱色譜，用石油醚洗脫，最后用熱乙醇重結(jié)晶得到大葉茜草素。實(shí)施例4本實(shí)施例為化合物大葉茜草素的治療糖尿病作用的實(shí)驗(yàn)，采用小鼠四氧嘧啶糖尿病模型。實(shí)驗(yàn)選取雄性小鼠，體重22±2g。儀器UV-2000型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(尤尼可上海儀器有限公司)；CS_H1型混合器(北京博勵(lì)陽(yáng)科技公司)；LRH-150生化培養(yǎng)箱(上海一恒科技有限公司)；Multiskan MK3酶標(biāo)儀(熱電上海儀器有限公司)JGL-16高速離心機(jī)(江蘇金壇市中大儀器廠)；各種規(guī)格移液器等。試劑Alloxan (alfa asear公司批號(hào)2244_11_3);阿卡波糖片(杭州中美華東制藥有限公司批號(hào)080105);葡萄糖測(cè)定試劑盒(上海榮盛生物技術(shù)有限公司批號(hào)20080705);血清總膽固醇(TC)測(cè)定試劑盒(上海北海生物技術(shù)工程有限公司批號(hào)BH20510);血清甘油三酯(TG)測(cè)定試劑盒(上海北海生物技術(shù)工程有限公司批號(hào)BH20612);肝糖原檢測(cè)試劑(南京建成生物工程研究所批號(hào)20090604);丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所批號(hào)20090604) ;S0D測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所批號(hào)20090727)，其他試劑均為分析純。小鼠適應(yīng)7d后，隨機(jī)分組，選取10只作為空白對(duì)照組，其余小鼠作為糖尿病造模組。糖尿病造模組于禁食不禁水12h后，按80mg/kg —次性尾靜脈注射4%四氧嘧啶致糖尿病。小鼠正常飲食飲水96h后，禁食不禁水6h，稱重，眼眶靜脈取血，分離血清。以血糖值大于11. lmmol/L作為成功造模的標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)血糖值均衡原則將造模成功的小鼠分成6組，每組10只，分別為空白組、模型組、阿卡波糖陽(yáng)性對(duì)照組、大葉茜草素高、中、低三個(gè)劑量組。
分組后對(duì)阿卡波糖陽(yáng)性對(duì)照組和大葉茜草素高、中、低三個(gè)劑量組每天灌胃相應(yīng)的藥物，阿卡波糖陽(yáng)性對(duì)照組每天灌胃75mg/kg，化合物大葉茜草素高劑量組每天灌胃200mg/kg,中劑量組每天灌胃100mg/kg,低劑量組每天灌胃50mg/kg?？瞻讓?duì)照組和模型組每天灌胃一定量的CMC-Na，給藥8d后禁食6h，摘眼球取血分離血清測(cè)定空腹血糖值、TC含量、TG含量、MDA和SOD值。血糖值、TC、TG、肝糖原含量、SOD和MDA的測(cè)定均按照試劑盒的要求進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)x±S表示，實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)采用spssll. O統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析。(I)化合物大葉茜草素高、中、低劑量對(duì)四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖值、餐后血糖值、肝糖原含量的影響(結(jié)果見(jiàn)表I)表I數(shù)據(jù)顯示與模型組比較，大葉茜草素高劑量和中劑量空腹血糖值和餐后血糖值均顯示有顯著性降低，降血糖作用明顯，低劑量組作用則不顯著。肝糖原含量高劑量組和中劑量組也有顯著性差異，且高劑量組升高肝糖原含量作用優(yōu)于中劑量組；低劑量組無(wú)顯著升高糖原含量作用。因此，大葉茜草素高、中劑量有顯著的治療糖尿病作用，低劑量不·明顯。與阿卡波糖陽(yáng)性對(duì)照組比較各劑量組均無(wú)顯著性差異，說(shuō)明劑量組有較好的降血糖和餐后血糖效果，與阿卡波糖相差不大，因此說(shuō)明化合物大葉茜草素有降血糖作用，且在一定劑量下作用顯著。表I大葉茜草素對(duì)糖尿病小鼠的治療作用(i±S)
權(quán)利要求
1.一種大葉茜草素，其特征在于，由以下方法制備獲得茜草原藥材經(jīng)石油醚加熱回流提取；回收石油醚，得到提取物；將提取物經(jīng)硅膠200-300目柱色譜，用石油醚洗脫，TLC檢測(cè)合并組分，經(jīng)S印hadex LH-20凝膠柱色譜，用氯仿石油醚甲醇=5:5:1洗脫，再經(jīng)硅膠H柱減壓柱色譜，用石油醚洗脫，熱乙醇結(jié)晶即得。
2.一種如權(quán)利要求I所述的大葉茜草素的制備方法，其特征在于，由以下方法制備獲得取茜草原藥材，用5 15倍量的石油醚加熱回流提取2(T40min ;回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物經(jīng)過(guò)硅膠200-300目柱色譜，用石油醚洗脫，TLC檢測(cè)，合并富含大葉茜草素組分，后經(jīng)S印hadex LH-20凝膠柱色譜，用氯仿石油醚甲醇=5 5 1洗脫，然后再經(jīng)硅膠H柱減壓柱色譜，用石油醚洗脫，最后用熱乙醇重結(jié)晶得到大葉茜草素。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種大葉茜草素的制備方法，其特征在于，所述的茜草原藥材經(jīng)干燥處理。
4.大葉茜草素在制備降血糖藥物方面的應(yīng)用。
5.大葉茜草素在制備治療糖尿病藥物方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種大葉茜草素及其制備方法，由以下步驟制得取茜草原藥材，用5~15倍量的石油醚加熱回流提取20~40min；回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物經(jīng)過(guò)硅膠200-300目柱色譜，用石油醚洗脫，TLC檢測(cè)，合并富含大葉茜草素組分，后經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜，用氯仿石油醚甲醇=551洗脫，然后再經(jīng)硅膠H柱減壓柱色譜，用石油醚洗脫，最后用熱乙醇重結(jié)晶得到大葉茜草素。本發(fā)明同時(shí)公開(kāi)了大葉茜草素在制備降血糖藥物方面的應(yīng)用及制備治療糖尿病藥物方面的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)表明，大葉茜草素能有效降低四氧嘧啶致高血糖小鼠的血糖值、TC、TG值和MDA含量，能顯著升高小鼠的SOD活力值和肝糖原含量。
文檔編號(hào)A61K31/352GK102875517SQ201210381008
公開(kāi)日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月8日
發(fā)明者康文藝, 張偉 申請(qǐng)人:河南大學(xué)