專利名稱：三七總皂苷口服劑型的制作方法
所屬領(lǐng)域本發(fā)明涉及口服藥物劑型。
背景技術(shù)：
三七總皂苷是從三七中提取的有效成份，是一類與人參皂苷類似的化合物，主要成份為人參皂苷Rb1、Rd、Re、Rg1、Rh1及七葉膽苷，還含有少量的三七皂苷R1、R2、R3、R4、R6等。藥理研究表明，三七總皂苷具有抗心肌缺血、抗缺血性腦損傷、抑制血小板聚集、降低血粘度、抗體內(nèi)外血栓形成等作用，對心腦血管缺血性疾病療效較好，并且對心、肝、脾、肺、腎和胃功能無損害，也無毒副作用。以三七總皂苷為有效成份的“血塞通片”、“血塞通顆?！薄ⅰ把z囊”、“血塞通軟膠囊(商品名理洫王)”、“血塞通注射液”、“血塞通粉針(商品名絡(luò)泰)”已由衛(wèi)生部批準(zhǔn)生產(chǎn)。但上述劑型或生物利用度低，或攜帶及給藥、服用不方便、不利于推廣應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種三七總皂苷口服給藥劑型，它以滴丸劑型使用，能夠滿足該類劑型藥物在生物利用度、穩(wěn)定性、療效性、方便性方面的要求。
本發(fā)明提供的藥物劑型根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局制定的新藥審批辦法之規(guī)定屬于新藥(中藥)四類。提供的口服藥物，含有有效劑量的三七總皂苷作為有效成分，與適量的基質(zhì)摻合起來制成滴丸劑。該劑型按重量每粒含有三七總皂苷1-50mg和適量的基質(zhì)?；|(zhì)選自水溶性基質(zhì)?？诜┬褪堑瓮鑴?。
水溶性基質(zhì)可采用聚乙二醇、硬脂酸鈉、甘油明膠等。
本發(fā)明提供的口服劑型藥物的制備方法取三七總皂苷研細(xì)，過180目篩，加蒸餾水適量于100℃水浴上攪拌均勻，備用。取聚乙醇置100℃水浴中溶化，在不停攪拌下加入上述三七總皂苷，待混合均勻即倒入已預(yù)熱的滴丸機(jī)內(nèi)(內(nèi)溫保持80-85℃)以每分鐘50-60滴的速度滴入冷卻的液體石蠟(4-10℃)中，制成滴丸，選丸，包裝即得。
本發(fā)明按上述方法制備，其詳細(xì)組份由下列實施例給出，但本發(fā)明的保護(hù)范圍，不局限于此。
實施例1組分 量(克/粒)三七總皂苷 0.005聚乙二醇0.035總重0.04g實施例2組分量(克/粒)三七總皂苷 0.01聚乙醇 0.03總重0.04g實施例3組分量(克/粒)三七總皂苷 0.008聚乙二醇0.032總重0.04g實施例4組分 量(克/粒)三七總皂苷 0.005聚乙二醇 0.020總重0.025g
實施例9組分 量(克/粒)三七總皂苷 0.01聚乙二醇 0.02總重0.03g實施例10組分 量(克/粒)三七總皂苷 0.005聚乙二醇 0.025總重0.03g實施例11組分 量(克/粒)三七總皂苷 0.006聚乙二醇 0.024總重0.03g實施例12組分 量(克/粒)三七總皂苷 0.0075聚乙二醇 0.0225總重0.03g根據(jù)新藥(中藥)穩(wěn)定性試驗滴丸劑項下的要求，對三七總皂苷滴丸三批樣品在室溫放置三個月以上，進(jìn)行質(zhì)量觀察，并測定了各項數(shù)據(jù)，結(jié)果如下
批號990211 表批號990212
批號990213 本發(fā)明通過下面試驗證明其性能一、急性毒性試驗昆明種小鼠；雌雄各半，體重20.46±0.97g，三七總皂苷滴丸。動物隨機(jī)分成給藥組與對照組，給藥后觀察7日，結(jié)果顯示給藥后7日內(nèi)，動物未見死亡，一般狀況良好，飲食，二便正常，小鼠體重增長正常，未見其它明顯異常反應(yīng)，其灌胃給藥的最大給藥量為16g/kg，相當(dāng)于臨床人用量的400倍。
二、長期毒性試驗(一)試驗材料1、藥品三七總皂苷滴丸粉。
2、動物SD大鼠，雌雄各半；雄性平均體重為83.74±4.33g，雌性平均體重為81.93±6.51g。
(二)試驗方法
1、分組給藥試驗所用80只大鼠隨機(jī)分為4組對照組，三七總皂苷大、中、小劑量組。每組20只，雌雄各半。對照組灌胃等容積0.5％CMC；三七總皂苷大劑量組灌胃給予2400mg/kg的三七總皂苷滴丸粉，相當(dāng)于人臨床用量的60倍；三七總皂苷中劑量組給予1200mg/kg的三七總皂苷滴丸粉，相當(dāng)于人臨床用量的30倍；三七總皂苷小劑量組給予400mg/kg的三七總皂苷滴丸粉，相當(dāng)于人臨床用量的10倍。每周7日，連續(xù)3個月，給藥容量為1ml/100g體重。給藥3個月后，每組殺檢14只(雌、雄各7只)，進(jìn)行各項指標(biāo)檢測，觀察有無毒性反應(yīng)。剩余大鼠停止給藥2周后殺檢，以觀察有無繼發(fā)性不良反應(yīng)。
(三)結(jié)論三七總皂苷高劑量300mg/kg(相當(dāng)于臨床人用量的60倍)，中劑量150mg/kg(相當(dāng)于臨床人用量的30倍)，小劑量50mg/kg(相當(dāng)于臨床人用量的10倍)，連續(xù)灌胃3個月和停藥2周后均未發(fā)現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，動物外觀行為、體重、血象、肝腎功能、主要臟器病理組織檢查均未發(fā)現(xiàn)與藥物有關(guān)的毒性病變。
三、藥效學(xué)實驗(一)三七總皂苷滴丸對垂體后葉素致豚鼠心肌缺血性心電圖的影響動物豚鼠，雌雄各半，231±克。
藥品1、三七總皂苷滴丸。
2、三七總皂苷片(血塞通片)。
3、垂體后葉素。
4、化學(xué)試劑羧甲基纖維素鈉、氯化鈉、烏拉坦。
1、分組與給藥模型對照組豚鼠10只，采用0.5％CMC(羧甲基纖維素鈉)灌胃。
血塞通滴丸1組，劑量為50mg三七總甙/kg，為臨床用量的16倍。
血塞通滴丸2組，內(nèi)含三七總甙40mg/kg，為臨床用量的8倍。
三七總甙片(血塞通片)1組，劑量為80mg三七總甙/kg，為臨床用量的16倍。給藥量為10ml/kg。
三七總甙片(血塞通片)2組，劑量為40mg三七總甙/kg，為臨床用量的8倍。給藥量為10mg/kg。
上述藥物均灌胃給藥，連續(xù)給藥4天。
2、實驗方法與結(jié)果麻醉，按1g/kg劑量給豚鼠腹腔注射20％烏拉坦溶液。
豚鼠背位固定，安插針狀電極，描記正常心電圖；分離一側(cè)頸靜脈，按0.5u/kg劑量靜脈推注垂體后葉素。注入垂體后葉素立即描記心電圖。
剪下心電圖紙，測量各時間段描記的心電圖ST段的變化，記錄2分鐘內(nèi)ST段的變化。
3、結(jié)論(1)三七總皂苷滴丸和片劑的高劑量組與對照組相比，ST段抬高有顯著性差異(P＜0.05)。說明80mg/kg滴丸和片劑均有抗垂體后葉素所致心肌缺血作用。
(2)三七總皂苷滴丸和片劑的低劑量組與對照組相比，ST段抬高沒有顯著性差異。
(二)三七總皂苷滴丸對三氯化鐵致大鼠大腦中動脈栓塞性腦缺血損傷的影響動物Wistar大鼠，雌雄各半，體重207.28±6.84g。
藥品1、三七總皂苷滴丸。
2、三七總皂苷片(血塞通片)。
3、天保寧。
4、化學(xué)試劑FeCl3·6H2O、TTC。
1、分組及給藥實驗動物隨機(jī)分為六組，即假手術(shù)對照組、MCAT模型組、血塞通滴丸90mg/kg組、30mg/kg組、10mg/kg組，分別相當(dāng)于臨床人用量的18、6和2倍、血塞通片30mg/kg組。預(yù)先連續(xù)灌胃給藥兩天，其中假手術(shù)組和血栓模型組灌服等量的0.5％CMC，第五次給藥后60分鐘施行手術(shù)，術(shù)后繼續(xù)給藥三天。
2、造模癥狀計分標(biāo)準(zhǔn)在術(shù)后不同時間(24h，72h)，對動物進(jìn)行行為評分。1、提鼠尾離開地面約一尺，觀察前肢屈曲情況。2、將動物置于平滑桌面上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動，檢查阻力。3、將動物兩前肢置一金屬網(wǎng)上，提鼠尾向后拉，觀察兩前肢的肌張力。4、提鼠尾離開地面約一尺，觀察動物旋轉(zhuǎn)情況。
結(jié)果顯示，假手術(shù)組未見行為異常改變，模型組大鼠在術(shù)后24h，72h出現(xiàn)偏癱樣癥狀，主要表現(xiàn)為手術(shù)對側(cè)前肢內(nèi)收，肩內(nèi)旋，前肢和肩肌張力降低。給藥組大鼠在術(shù)后24h，72h其神經(jīng)癥狀均有不同程度的改善。
4、對腦梗塞范圍的影響動物經(jīng)末次行為評分后斷頭取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，剩余部份在4℃以下冠狀切成5片。迅速將腦片置于TTC染液中，37℃避光溫孵30分鐘，再取出，置于10％甲醛液中避光保存。經(jīng)染色后非缺血區(qū)為玫瑰紅色，梗塞區(qū)為白色。將白色組織仔細(xì)挖下稱重，以梗塞組織重量占總腦重量的百分比作為腦梗塞范圍。
結(jié)果顯示，術(shù)后72h，除假手術(shù)組未見梗塞灶外，模型組大鼠均有不同程度梗塞灶，高、中劑量給藥組可明顯減少其梗塞范圍，與模型組相比具有明顯差異。
5、對腦組織水含量的影響造模方法、分組與給藥同上，術(shù)后72小時后斷頭取腦，切除嗅球、小腦及腦干，保留前腦，并沿矢狀縫將前腦均分成左右兩半，分別稱量左、右腦重量，105℃烘烤48小時至恒重，精確稱取干重，計算腦水含量。
結(jié)果顯示，術(shù)后72h，除假手術(shù)組未見左右側(cè)大腦含水量異常改變外，模型組、給藥組大鼠手術(shù)側(cè)均有不同程度腦水腫，即手術(shù)側(cè)腦含水量增加。給藥組手術(shù)側(cè)血塞通滴丸90mg/kg組腦含水量與模型組腦含水量相比具有顯著差異。
6、結(jié)論(1)大腦中動脈梗塞模型神經(jīng)癥狀分值和腦梗塞比均明顯增高，說明造模成功。
(2)三七總皂苷滴丸除小劑量外，均能明顯改善神經(jīng)癥狀，并降低梗塞比，且有一定的量效關(guān)系。
(3)三七總皂苷滴丸只有大劑量組能明顯改善手術(shù)側(cè)腦含水量。
(4)陽性對照藥三七總皂苷片能明顯改善動物神經(jīng)癥狀，并降低梗塞范圍，但不能降低手術(shù)側(cè)腦含水量。
(三)三七總皂甙滴丸抗大鼠血栓形成作用的實驗研究動物Wistar大鼠，♀♂各半，體重220-250g。
藥品1、三七總皂苷滴丸。
2、三七總皂苷片(血塞通片)。
3、肝素。
1、分組與給藥實驗用大鼠♀♂各半，分組與給藥劑量見表。連續(xù)3天，分上下午給藥，濃度稀釋1倍，對照組給0.5％CMC，給藥5次，于第3天實驗前禁食12h，給藥后1小時進(jìn)行試驗。
2、方法大鼠用1.5％戊巴比妥鈉按35mg/kg麻醉，頸部正中切口，分離右側(cè)頸總動脈及左頸外靜脈，在三段聚乙烯管的中段放入手術(shù)絲線，將肝素生理鹽水溶液(5u/ml)充滿聚乙烯管，將其一端插入右側(cè)頸總動脈，另一端插入左頸外靜脈，打開動脈夾，血液從右頸總動脈經(jīng)聚乙烯管返回左頸外靜脈。開放血流20分鐘，中斷血流，迅速取出絲線稱重，總重量減去絲線重，即為血栓濕重，然后放后烤箱(60℃)中烤1小時，冷卻后立即稱重，即為血栓干重。

3、結(jié)論(1)三七總皂苷滴丸高、中劑量組均可明顯降低血栓濕重和干重，且有一定的量效關(guān)系。
(2)三七總皂苷片30mg/kg可明顯降低血栓濕重和干重。
(四)三七總皂苷滴丸對大鼠在體血栓形成后溶栓作用的實驗研究動物Wistar大鼠，♀♂各半，體重240-260g。
藥品1、三七總皂苷滴丸。
2、三七總皂苷片(血塞通片)3、蚓激酶膠囊
1、分組與給藥試驗用大鼠♀♂各半，隨機(jī)分為7組，正常對照組，三七總皂苷滴丸90mg/kg、30mg/kg、10mg/kg三個劑量組，三七總皂苷片90mg/kg和30mg/kg組，蚓激酶膠囊組。造模后第二天開始灌胃給藥，連續(xù)3天(分2次/天給藥)。
2、造模采用頸總動脈溫度測定法，大鼠用1.5％戊巴比妥鈉按35mg/kg麻醉，頸部正中切口，分離右側(cè)頸總動脈，在近心端放刺激電極，遠(yuǎn)心端放溫度傳感電極，打開儀器開關(guān)，直流電刺激7分鐘，將電流表指針撥到0位置，當(dāng)血流完全阻斷時，溫度突然下降，儀器自動報警，顯示堵塞時間OT值，即為血栓形成時間。然后縫合頸部創(chuàng)口，回籠飼養(yǎng)。待大鼠清醒后，按上述藥物劑量灌胃給藥，每日劑量分上、下午2次給藥，連續(xù)給藥5次。
3、取材于末次給藥后1小時，麻醉，分離頸總動脈，小心完整剪取含血栓的頸總動脈，置20％福爾馬林標(biāo)本瓶中固定，4小時后，將動脈段置濾紙上1小時，分別稱量含血管血栓重量和等長度的血管重量，計算血栓重量和溶栓率，并測血栓長度。
4、結(jié)論(1)模型組血栓重量明顯高于蚓激酶組；血栓長度亦明顯長于蚓激酶組，說明模型可靠。
(2)三七總皂苷滴丸和三七總皂苷片90mg/kg組灌胃給藥，可使血栓重量明顯降低，但只有滴丸組可使血栓長度明顯降低(p＜0.01)。
(五)三七總皂苷滴丸對MCAT大鼠血小板聚集性及凝血因子的影響動物Wistar大鼠，雌雄各半，體重200.2±6.8。
藥品1、三七總皂苷滴丸。
2、三七總皂苷片(血塞通片)。
3、ADP。
4、膠原。
5、枸櫞酸鈉。
6、PT、TT、APTT試劑。
1、分組與給藥分組與給藥同試驗(二)。
2、造模造模同試驗(二)。
3、采血及測試血小板聚集測定(Bom比濁法)于末次給藥后1小時大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液(350mg/kg)麻醉，頸總動脈放血，以3.8％枸櫞酸鈉(V/V為1∶9)抗凝，輕輕混勻后，離心10分鐘，剩余血漿繼續(xù)離心10分鐘，將血小板聚集凝血因子分析儀按鈕打到“聚集”檔，以PPP調(diào)零，取PRP399μL，加入比濁管，37℃溫育5分鐘，分別加入誘導(dǎo)劑300μmol/LADP20μl和膠原20μl，ADP聚集5分鐘，膠原聚集10分鐘，記錄最大聚集率。
凝血因子測定凝血酶原時間(PT)測定，將血小板聚集凝血因子分析儀按鈕打到“血凝”檔，取PPP300μl置于檢測杯中溫浴2min(37℃)。將測試杯置于檢測孔中，加入PT試劑100μl，按Start鍵檢測PT。
凝血酶時間(TT)測定，檢測方法同PT，不同點是加入TT試劑100μl，按Start鍵檢測TT。
部分凝血活酶時間(APTT)測定將血小板聚集血因子分析儀按鈕打到“血凝”檔，取PPP300μl置于檢測杯中，加入APTT試劑100μl，37℃溫浴min。將檢測杯置于檢測孔中，加入0.025mol/LCcCL2100μl，按Start鍵檢測APTT。
4、結(jié)論(1)對ADP和膠原誘導(dǎo)的假手術(shù)組及模型組血小板最大聚集率均達(dá)到50％以上，模型符合要求。
(2)三七總皂甙滴丸90mg/kg/日、30mg/kg/日對ADP和膠原所誘發(fā)的MCAT大鼠血小板聚集有明顯的抑制作用(P＜0.05，P＜0.01)。10mg/kg/日對膠原誘導(dǎo)的MCAT大鼠血小板聚集有明顯抑制作用(p＜0.05)，但對ADP誘導(dǎo)的MCAT大鼠血小板聚集無明顯抑制作用。
(3)三七總皂甙滴丸90mg/kg/日對MCAT大鼠TT、PT、APTT均有明顯延長作用(p＜0.05，p＜0.01)。30mg/kg/日、10mg/kg/日僅對MCAT大鼠TT有明顯延長作用(p＜0.01，p＜0.05)。
(六)三七總皂苷滴丸對高齡小鼠凝血時間的影響動物昆明種8-10個月齡小鼠，♀♂各半，體重41-48g。
藥品1、三七總皂甙滴丸。
2、三七總皂甙片(血塞通片)。
3、天保寧。
1、分組與給藥取小鼠124只，隨機(jī)分成7組，給藥劑量見表，按0.1mg/10g體重劑量灌胃，對照組給0.5％CMC，連續(xù)5天，分上下午給藥。
2、方法于第5天，實驗前禁食不禁水12h，在末次給藥1小時后毛細(xì)管刺入小鼠眼內(nèi)眥球后靜脈叢，深約4-5mm，輕輕轉(zhuǎn)動再抽回。自血液流入管內(nèi)開始記時，血流流滿后取出毛細(xì)血管平放于實驗臺上，每隔30s分別先后從兩端折斷0.5cm，并緩緩向兩側(cè)分開，觀察斷處是否有血凝絲，自計時開始至血凝絲出現(xiàn)為凝血時，記錄并計算統(tǒng)計組間差異。

3、結(jié)論(1)陽性對照藥天保寧可明顯延長小鼠凝血時。
(2)三七總皂甙滴丸大、中劑量組，三七總皂甙片中劑量組對小鼠毛細(xì)血管凝血時有明顯延長作用。
(七)三七總皂苷滴丸預(yù)防給藥對急性應(yīng)激性大鼠血液流變學(xué)的影響動物Wistar大鼠，雄性，體重190-210g。
藥品1、三七總皂甙滴丸。
2、三七總皂甙片(血塞通片)。
3、鹽酸腎上腺素注射液。
4、肝素。
5、化學(xué)試劑紅細(xì)胞變形性試劑。
1、分組與給藥分組與給藥劑量見表，每日分兩次給與，連續(xù)給藥五次，于末次給藥后造模，造模后再給藥兩次，于末次給藥后1h采血。
2、造模除假手術(shù)組皮下注射NS0.1ml/kg外，其余各組皮下注射Adr0.1mg/kg，2次，間隔4小時，期間于8℃冰水中浸泡5min。
3、采血及檢測造模24h后，麻醉大鼠，頸總動脈采血，置于肝素化的試管中進(jìn)行各項指標(biāo)的檢測。
取血樣0.04ml加入紅細(xì)胞變形性試劑1ml混勻，測其變形性。以紅細(xì)胞最大變形指數(shù)(MAXDI)和曲線下面積(SSS)表示紅細(xì)胞變形性。
取血樣0.8ml，測其聚集性。以紅細(xì)胞最大聚集指數(shù)(MAXD)和曲線下面積(SS)表示紅細(xì)胞聚集性。
取血樣0.8ml，測其高切、中切、和低切的全血粘度。
取剩余血樣，以2000轉(zhuǎn)/分離心8分鐘，取血漿0.8ml，測其100轉(zhuǎn)/分的血漿粘度。

4、結(jié)論(1)結(jié)果顯示，造模后24h，假手術(shù)組與血瘀模型組相比紅細(xì)胞變形性和聚集性有明顯改變，說明模型成功，三七總皂甙滴丸組、三七總皂甙片組的大鼠紅細(xì)胞聚集性均明顯降低，各給藥組對大鼠紅細(xì)胞變形性無明顯的改善作用。
(2)造模24小時，模型組與假手術(shù)組相比，大鼠全血粘度與血漿粘度均有明顯升高，說明血瘀模型成立，三七總皂甙滴丸各劑量組和三七總皂甙片對全血粘度有不同程度的降低作用，對中切和低切作用明顯，只有高、中劑量滴丸組對血漿粘度有明顯降低作用。
本試驗采用了腹腔注射垂體后葉素致豚鼠心肌缺血模型和三氯化鐵致大鼠大腦中動脈血栓栓塞性腦缺血損傷模型，觀察到三七總皂甙滴丸不同劑量組使缺血性心電圖ST段明顯降低；大鼠神經(jīng)癥狀得以改善，腦梗塞范圍明顯減少，腦水含量有所減輕。結(jié)果顯示，三七總皂甙滴丸具有抗心、腦血管缺血作用?？顾ā⑷芩ㄔ囼灲Y(jié)果顯示三七總皂甙滴丸具有抗血栓形成作用。分析研究顯示，此種抗栓、溶栓作用與三七總皂甙滴丸抑制血小板聚集和改善血瘀狀態(tài)大鼠的血液流變學(xué)有關(guān)。上述藥理作用與三七總皂甙滴丸主治心、腦血管缺血性疾病密切相關(guān)。
權(quán)利要求
1.一種含有三七總皂苷有效成份的口服劑型，其特征在于該劑型按重量每粒含三七總皂苷1-50mg和適量的基質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的口服劑型，其特征在于上述的基質(zhì)選自水溶性基質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的口服劑型，其特征在于口服劑型是滴丸劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的口服劑型，其特征在于水溶性基質(zhì)可采用聚乙二醇、硬脂酸鈉、甘油明膠等。
全文摘要
本發(fā)明提出具有三七總皂苷有效成分的滴丸劑，按重量配比含有有效劑量的三七總皂苷作為有效成分，與適量的基質(zhì)摻合起來制成滴丸劑，該劑型按重量每粒(丸)含三七總皂苷1－50mg和適量的基質(zhì)，該類劑型藥物在生物利用度、穩(wěn)定性、療效性、方便性方面的要求。
文檔編號A61K9/20GK1404839SQ0213398
公開日2003年3月26日 申請日期2002年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月28日
發(fā)明者陳臻 申請人:陳臻