專利名稱：一種連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基及制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物制品技術領域，涉及一種改良的增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基，尤其涉及一種雞毒支原體增菌培養(yǎng)工藝。
背景技術：
雞毒支原體(Mycoplasmagalliseptium, MG)是雞慢性呼吸道病(chronicrespiratory disease, CRD)的病原,且感染率很高。CRD可通過水平和垂直方式傳播并在雞群中長期存在和蔓延。雞場感染MG后，雛雞的弱雛率升高，蛋雞的產蛋率、肉雞的體重及飼料轉化率均下降，對養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展造成嚴重危害。目前各雞場對雞毒支原體的治療主要是使用抗生素，而雞毒支原體易產生耐藥性，效果也不理想。免疫疫苗是控制雞毒支原體病的最好措施，但優(yōu)質疫苗的前提需要有一種好的培養(yǎng)基來支撐。目前生產雞毒支原體疫苗，主要應用改良Frey氏培養(yǎng)基或其他支原體培養(yǎng)基培養(yǎng)雞毒支原體。其制苗用菌液培養(yǎng)工藝為將合格的雞毒支原體生產用種子液按1: 10的比例接種于培養(yǎng)基，逐步擴大培養(yǎng)，一直到所需的量；每代均置37°c培養(yǎng)24-48h，待培養(yǎng)基的PH下降到6. 4左右收獲；按此傳統工藝培養(yǎng)所獲得的雞毒支原體制苗用菌液(半成品)的濃度最高只能達到I X 109(XU/ml。
`
上述傳統培養(yǎng)基及培養(yǎng)工藝所培養(yǎng)的雞毒支原體培養(yǎng)滴度低(培養(yǎng)菌液濃度低)，制苗用菌液(半成品)生產滅活疫苗時不能直接使用，需對半成品進行一定濃縮后方可制備成品疫苗，而半成品的濃縮操作繁瑣、濃縮過程損失較大，最終影響成品疫苗的保護效力，并且使疫苗生產成本提高。

發(fā)明內容
`
本發(fā)明要解決的技術`問題是提供一種連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基及其制備方法，該方法能夠提高雞毒支原體菌液濃度及培養(yǎng)滴度。本發(fā)明提供的一種連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基及其制備方法，包括如下步驟1、連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基
PPLO 肉湯20.0-25.5g
酵母浸出粉3-7g
葡萄糖7-9g
質量濃度為0.4%的酚紅溶液2ml加去離子水700-800ml
121°C高壓滅菌15分鐘，4°C保存。培養(yǎng)時，再加150-200ml豬血清和1000單位/ml青霉素，20%Na0H調ρΗ7· 6-7. 8。
2、上述連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基制備按如下步驟進行(I)將雞毒支原體生產用種子按1: 10的比例接種于所述的雞毒支原體培養(yǎng)基中，在36-37°C培養(yǎng)18-24h收獲；以同樣方法將收獲的培養(yǎng)液按1: 10的比例再接種傳代I次；(2)將上述傳代后的菌液按1: 10的比例接種于本發(fā)明的連續(xù)增菌培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)，待pH下降至6. 5左右，添加連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基為原培養(yǎng)體積的30%，用20%Na0H調pH7. 6-7. 8，如此進行兩次增菌培養(yǎng)，待第二次增菌培養(yǎng)pH下降到6. 4時，加甲醛滅活，連續(xù)增菌培養(yǎng)結束。本發(fā)明的連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基對不同碳源、氮源、無機鹽、蛋白質和膽固醇等諸多營養(yǎng)組分進行了篩選，在培養(yǎng)過程中對雞毒支原體的生長特性進行了全面的了解掌握，在培養(yǎng)過程中適時地添加培養(yǎng)基，使得雞毒支原體繁殖菌體延長生長穩(wěn)定期時段，最大限度地利用消耗培養(yǎng)基中的有效成分，從而雞毒支原體有效抗原大大增值增量，最終菌液可直接或稀釋后制備滅活疫苗，菌液無需濃縮，不僅簡化了生產工藝，而且降低了生產成本。
具體實施例方式實施例1本發(fā)明培養(yǎng)基的制備1、連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基
PPLO 肉湯21g
酵母浸出粉4g 葡萄糖7g
質量濃度為0.4%的酚紅溶液2ml加去離子水700ml
121°C高壓滅菌15分鐘，4°C保存。培養(yǎng)時，再加200ml豬血清和1000單位/ml青霉素，20%Na0H調ρΗ7· 6-7. 82、上述連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基制備按如下步驟進行(I)將雞毒支原體生產用種子按1: 10的比例接種于所述的雞毒支原體培養(yǎng)基中，在36-37°C培養(yǎng)18-24h收獲；以同樣方法將收獲的培養(yǎng)液按1: 10的比例再接種傳代I次；(2)將上述傳代后的菌液按1: 10的比例接種于本發(fā)明的連續(xù)增菌培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)，待pH下降至6. 5左右，添加連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基為原培養(yǎng)體積的30%，用20%Na0H調pH7. 6-7. 8，如此進行兩次增菌培養(yǎng)，待第二次增菌培養(yǎng)pH下降到6. 4時，加甲醛滅活，連續(xù)增菌培養(yǎng)結束。實施例2本發(fā)明培養(yǎng)基的制備1、連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基PPLO肉湯酵母浸出粉葡萄糖質量濃度為0.4%的酚紅溶液加去離子水121°C高壓滅菌15分鐘，4°C保存。
培養(yǎng)時，再加180ml豬血清和1000單位/ml青霉素，20%Na0H調ρΗ7· 6-7. 8。
2、上述連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基制備按如下步驟進行
(I)將雞毒支原體生產用種子按1: 10的比例接種于所述的雞毒支原體培養(yǎng)基中，在36-37°C培養(yǎng)18-24h收獲；以同樣方法將收獲的培養(yǎng)液按1: 10的比例再接種傳代 I次；
(2)將上述傳代后的菌液按1: 10的比例接種于本發(fā)明的連續(xù)增菌培養(yǎng)基中， 37°C培養(yǎng)，待PH下降至6. 5左右，添加連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基為原培養(yǎng)體積的 30%，用20%Na0H調pH7. 6-7. 8，如此進行兩次增菌培養(yǎng)，待第二次增菌培養(yǎng)pH下降到6. 4 時，加甲醛滅活，連續(xù)增菌培養(yǎng)結束。
實施例3本發(fā)明培養(yǎng)基的制備
1、連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基
PPLO 肉湯168g酵母浸出粉30g葡萄糖55g質量濃度為0.4%的酚紅溶液16ml 加去離子水5500ml121°C高壓滅菌15分鐘4°C保存
培養(yǎng)時，再加1800ml豬血清和1000單位/ml青霉素，20%Na0H調ρΗ7· 6-7. 8。
2、上述連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基制備按如下步驟進行
(I)將雞毒支原體生產用種子按1: 10的比例接種于所述的雞毒支原體培養(yǎng)基中，在36-37°C培養(yǎng)18-24h收獲；以同樣方法將收獲的培養(yǎng)液按1: 10的比例再接種傳代 I次；
(2)將上述 傳代后的菌液按1: 10的比例接種于本發(fā)明的連續(xù)增菌培養(yǎng)基中， 37°C培養(yǎng)，待pH下降至6. 5左右，添加連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基為原培養(yǎng)體積的 30%，用20%Na0H調pH7. 6-7. 8，如此進行兩次增菌培養(yǎng)，待第二次增菌培養(yǎng)pH下降到6. 4 時，加甲醛滅活，連續(xù)增菌培養(yǎng)結束。
權利要求
1.一種連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基及制備方法，所述疫苗經雞毒支原體培養(yǎng)基配制、種子制備、制苗菌液連續(xù)增菌培養(yǎng)及滅活疫苗制備工序制成，其特征在于，所述雞毒支原體培養(yǎng)基按如下工藝配制 PPLO 肉湯20. 0-25. 5g 酵母浸出粉3-7 g 葡萄糖7-9g 質量濃度為0. 4%的酚紅溶液2ml 加去離子水700— 800ml 121°C高壓滅菌15分鐘4°C保存； 培養(yǎng)時，再加150-200ml豬血清和1000單位/ml青霉素，20%Na0H調pH7. 6-7. 8。
2.根據權利要求1所述的連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述培養(yǎng)制苗用培養(yǎng)基的制備按如下步驟進行 (1)將雞毒支原體生產用種子按1: 10的比例接種于所述的雞毒支原體培養(yǎng)基中，在36-37°C培養(yǎng)18-24h收獲；以同樣方法將收獲的培養(yǎng)液按1: 10的比例再接種傳代I次； (2)將上述傳代后的菌液按1: 10的比例接種于本發(fā)明的連續(xù)增菌培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)，待PH下降至6. 5左右，添加連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基為原培養(yǎng)體積的30%，用20%Na0H調pH7. 6-7. 8，如此進行兩次增菌培養(yǎng)，待第二次增菌培養(yǎng)pH下降到6. 4時，加甲醛滅活，連續(xù)增菌培養(yǎng)結束。
3.根據權利要求1和2所述的連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基的制備方法，包括雞毒支原體所有滅活疫苗抗原的制備。
全文摘要
發(fā)明涉及連續(xù)增菌培養(yǎng)雞毒支原體培養(yǎng)基及制備方法，屬于獸醫(yī)生物學技術領域。包括PPLO、酵母浸出粉、葡萄糖等組成，使用前加入健康豬血清。該培養(yǎng)基能夠既保證半成品生長滴度高而且穩(wěn)定，用本發(fā)明方法制備的半成品菌液高達1012CCU/ml；同時該培養(yǎng)基采用連續(xù)增菌培養(yǎng)工藝培養(yǎng)雞毒支原體，使得雞毒支原體繁殖菌體延長生長穩(wěn)定期時段，最大限度地利用消耗培養(yǎng)基中的有效成分，從而使得雞毒支原體有效抗原大大增值增量，最終菌液可直接或稀釋后制備滅活疫苗，菌液無需濃縮，不僅簡化了生產工藝，而且降低了生產成本。
文檔編號A61P31/04GK103060221SQ20121031997
公開日2013年4月24日 申請日期2012年8月31日 優(yōu)先權日2012年8月31日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請人:南京天邦生物科技有限公司