專利名稱：：一種納米血栓通注射制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，具體涉及一種納米血栓通注射制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：納米中藥主要是指運(yùn)用納米技術(shù)制造的，徑粒小于100納米的中藥有效成分、有效部位、原藥及復(fù)方制劑。生物機(jī)體對藥物的吸收、代謝是一個復(fù)雜的過程，中藥制劑產(chǎn)生的藥理效應(yīng)不能僅僅歸之于藥物特有的化學(xué)組成還與該制劑的物理狀態(tài)密切相關(guān)。因此，改變藥物制劑的物理狀態(tài)是新藥研制的一種有效方法。在改變物理狀態(tài)方面，改變藥物的單元尺寸是十分有效的。當(dāng)顆粒尺寸進(jìn)入納米量級時由于量子尺寸效應(yīng)和表面效應(yīng)，納米粒子呈現(xiàn)出新奇的物理化學(xué)和生物學(xué)特性。這就是應(yīng)用納米技術(shù)于中藥研究可能使藥物活性和生物利用度提高乃至產(chǎn)生新的特性依據(jù)所在。納米中藥的制備是研究納米中藥最基礎(chǔ)的，也是最重要的問題。將納米技術(shù)引入中藥的研究時，必須考慮中藥組方的多樣性、中藥成分的復(fù)雜性，例如中藥單味藥可分為礦物藥、植物藥、動物藥和菌物藥等，中藥的有效部位和有效成分又包括無機(jī)化合物和有機(jī)化合物、水溶性成分和脂溶性成分等。因此，針對不同的藥物，在進(jìn)行納米化時必須采用不同的技術(shù)路線。納米中藥與中藥新制劑關(guān)系十分密切，如何在中藥理論的指導(dǎo)下進(jìn)行納米中藥新制劑的研究，將中藥制成高效、速效、長效、計量小、低毒、服用方便的現(xiàn)代制劑，也是進(jìn)行中藥納米化時必須考慮的問題。目前，納米技術(shù)在中藥研究中存在的問題也不能忽視的。一.納米中藥的制備困難我國雖已制備一些納米級的中藥，可是由于中藥品種繁多，成分復(fù)雜，不同的成分由于其作用部位、作用機(jī)制及作用緩急的不同而要求其粒徑大小、載體成分及給藥劑量均有可能不同。同時納米中藥應(yīng)該有它自己的一套質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，使其生產(chǎn)規(guī)范化；二.納米中藥的毒副作用藥物制成納米微粒，其物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)均發(fā)生了顯著的變化，這些變化對人體是否有毒副反應(yīng)均未有有關(guān)的研究報道。但由于納米材料的特殊性，除了可穿透皮膚，還會進(jìn)入細(xì)胞器內(nèi)，是否會直接參與或作為催化劑擾亂機(jī)體正常的化學(xué)反應(yīng)，均未見有關(guān)報道。此外，納米中藥還可以通過機(jī)體的屏障系統(tǒng)，那它是否會影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)，精子的生成及其活力、胎兒的發(fā)育等，這些問題均無法回避；三.中藥在納米級粉碎后，納米微粒表面積變大，由于納米微粒表面的活性使他們很容易團(tuán)聚在一起，這給納米微粒的收集及其藥效的穩(wěn)定性帶來很大的困難?，F(xiàn)代中藥的研究就是要在繼承中藥傳統(tǒng)的基礎(chǔ)上，充分利用現(xiàn)代科技手段，使中藥具有先進(jìn)的生產(chǎn)工藝和現(xiàn)代劑型，做到“有效、安全、可控”，將納米技術(shù)應(yīng)用于中藥領(lǐng)域是現(xiàn)代中藥發(fā)展的重要方向之一。納米中藥一般不是簡單地將中藥材進(jìn)行粉碎至納米量級，而是針對組成中藥方劑的某味藥的有效部位甚至是有效成分進(jìn)行納米技術(shù)加工處理，賦予傳統(tǒng)中藥以新的功能，如提高生物利用度，增強(qiáng)靶向性；降低毒副作用；呈現(xiàn)新的藥效，拓寬原藥的適應(yīng)證；豐富中藥的劑型選擇；減少用藥量，節(jié)省中藥資源等。同傳統(tǒng)中藥相比，納米中藥具有以下特點(diǎn)①提高了藥物的利用度，減少用藥量。②增強(qiáng)藥物的靶向性。③具有緩釋功能，將中藥納米粒進(jìn)行一定的表面修飾后，可能使中藥具有緩釋作用。④呈現(xiàn)新的藥效，拓寬原藥適應(yīng)癥，中藥加工至納米尺寸時，由于其量子尺寸等效應(yīng)導(dǎo)致其物理、化學(xué)特性的改變，從而可使中藥呈現(xiàn)出新功能。⑤豐富中藥的劑型選擇，提升傳統(tǒng)給藥途徑。徐輝碧等檢索了1998年～2000年美國專利中涉及納米科技的專利，發(fā)現(xiàn)該類專利與生物醫(yī)學(xué)相關(guān)的專利占總數(shù)的80％以上，楊孟君在2001年一年內(nèi)申請了940多件納米中藥的專利，但其申請的大部分都是中藥原料藥進(jìn)行納米粉碎，其專利實(shí)用性不強(qiáng)。目前納米中藥的研究主要集中于利用納米技術(shù)對少數(shù)成分比較明確的單體有效成分進(jìn)行納米處理制成納米制劑，或?qū)⒃纤幹苯臃鬯槌杉{米級，對大部分中藥的納米制劑研究還很少，主要是因?yàn)橹兴幱行С煞趾陀行Р课惶貏e是中藥復(fù)方中有效部位本身就是一個“黑匣子”，中藥中真正起藥理作用的有效成分或有效部位研究本身就是一個難題，而且由于中藥成分比較復(fù)雜，所以將其制備成納米制劑需要克服的困難較多，因此，中藥納米制劑及技術(shù)是醫(yī)藥科研工作者的重要研究課題。三七藥用部位主要為主根和蘆頭，三七主根中主要含有三七總皂苷，具有抑制血小板聚集、降低血粘度等作用，臨床上應(yīng)用較廣泛的是以三七主根為原料制備的血栓通注射液，本產(chǎn)品用于治療血瘀兼氣陰兩虛癥的暴盲(視網(wǎng)膜靜脈阻塞)、中心性漿液性脈絡(luò)視網(wǎng)膜病變及冠心病心絞痛，但血栓通這一作用的產(chǎn)生，需要一定的時間，體內(nèi)試驗(yàn)時，家兔靜脈注入血栓通注射液，每日1次，需要連續(xù)20日，才出現(xiàn)明顯作用，提示臨床用以治療血栓性疾患時，如用藥時間過短可能無效，三七主根中三七總皂苷對抑制血小板聚集、降低血粘度雖有一定作用，但對視網(wǎng)膜靜脈阻塞等疾病的治療作用仍不夠強(qiáng)大，如能從別的機(jī)制加強(qiáng)抑制血小板聚集功能，形成抑制，加強(qiáng)其作用，同時，如能改善微循環(huán)、激活纖溶，則療效更好。查閱文獻(xiàn)和專利，未檢索到納米血栓通注射制劑的資料。
發(fā)明內(nèi)容基于上述原因，我們經(jīng)過長期的實(shí)驗(yàn)研究，將三七主根提取的三七總皂苷與藥用載體組合，制備成納米血栓通注射制劑，從而解決臨床上應(yīng)用血栓通注射液時間較長等弊端，同時通過對有效部位三七總皂苷的納米制備，可以很好的通過血腦屏障，加強(qiáng)了對視網(wǎng)膜靜脈阻塞等疾病的治療作用，在增強(qiáng)藥理作用的同時，并沒有增加藥物的毒副作用。本發(fā)明在于提供一種納米血栓通的注射制劑；本發(fā)明還在于提供一種納米血栓通注射制劑的制備方法；本發(fā)明還在于提供納米血栓通注射制劑的應(yīng)用；本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。一.工藝制法血栓通納米技術(shù)處方為三七總皂苷6-8重量份，藥用載體30-80重量份，其中脂質(zhì)體制備中乳化劑為18-42重量份、脂質(zhì)12-38重量份。方法一取三七總皂苷6-8重量份、乳化劑18-42重量份和脂質(zhì)12-38重量份，在通氮?dú)鈼l件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和泊絡(luò)沙姆188(二者質(zhì)量比1∶1)的飽和水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻形成主藥混懸液。方法二取三七總皂苷6-8重量份、卵磷脂、泊絡(luò)沙姆F-68、土溫8018-42重量份，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯12-38重量份加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1h后超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。方法三取三七總皂苷6-8重量份，脂質(zhì)12-38重量份和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑18-42重量份，微熱使溶成有機(jī)相，另取助乳化劑泊絡(luò)沙姆F-68溶于水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)融媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相，繼續(xù)攪拌2h，即得混懸液。方法四取三七總皂苷6-8重量份，溶于30％-70％乙醇中；將脂質(zhì)中一種或多種共12-38重量份溶于烷烴，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)刮膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.1-0.2個大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，得到混懸液。本發(fā)明所用的脂質(zhì)如脂肪酸甘油酯類(包括三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、WitepsolW35、WitepsolH35、WitepsolH42、單硬脂酸甘油酯)及脂肪酸類(如硬脂酸、棕櫚酸)等；本發(fā)明所用的乳化劑如磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂及磷脂酰膽堿等)、泊洛沙姆、聚山梨醇、膽酸鹽、四丁酚醛等；方法五油相將三七總皂苷6-8重量份與油30-80重量份混勻成溶液(聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸、聚丙交酯-乙交酯、殼聚糖、明膠中的一種或幾種)，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑PluronicF68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得混懸液。制劑制備水針劑制備取上述混懸液，加注射用水溶解完全，加入穩(wěn)定劑PVP，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到水針劑；輸液劑制備取上述混懸液加入藥用輔料，加注射用水溶解完全，加入穩(wěn)定劑PVP，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到輸液劑；粉針劑制備取上述混懸液加入藥用輔料，加注射用水溶解完全，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，冷凍干燥，得到粉針劑；本發(fā)明輸液劑所用的藥用輔料為氯化鈉或葡萄糖；本發(fā)明粉針劑所用的輔料為蔗糖、乳糖或甘露醇；本發(fā)明納米水針劑、納米輸液劑加入少量PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，可以提高制劑的穩(wěn)定性。二.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測依據(jù)根據(jù)《中華人民共和國藥典》(2005年版，二部附錄XIXE微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則)進(jìn)行的納米質(zhì)量檢測。實(shí)驗(yàn)儀器H-7000型透射電鏡儀(日本Hitachi公司)；Zetamaster光子相關(guān)光譜儀(英國Malvern公司)；LC-10A高效液相色譜儀(日本島津)；TGL-18G型臺式高速離心機(jī)。1.形態(tài)觀察及粒徑將本專利納米藥物在透射電鏡下進(jìn)行形態(tài)觀察，可見呈圓球體，大小較均勻，表面光滑，無粘連。根據(jù)納米藥物的光學(xué)顯微照片測定了500個，平均粒徑為60±20nm，最大粒徑為120nm，最小粒徑為40nm，且粒徑分布符合正態(tài)分布規(guī)律。2.包封率和載藥量測定采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測定，并用下述公式計算包封率和載藥量包封率(％)＝(投藥量-游離藥物量)/投藥量×100％；載藥量(％)＝(投藥量-游離藥物量)/納米藥物的重量×100％。結(jié)果包封率為83.2％，載藥量為10％-20％。3.穩(wěn)定性考察將納米藥物分別置于小瓶內(nèi)，密封。于冰箱(3-5℃)、室溫(20-25℃)和37℃(RH75％)的環(huán)境中放置，于0、1、2和3月觀測納米藥物的外觀、大小、再分散性等。結(jié)果均未見明顯變化，3種條件下的納米藥物再分散性保持良好，無聚合現(xiàn)象的發(fā)生。結(jié)果見表1。表1穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)論通過上述實(shí)驗(yàn)表明，本專利納米藥物具有很好的穩(wěn)定性，充分說明本發(fā)明工藝具有實(shí)際意義。三.檢測分析實(shí)驗(yàn)血栓通注射制劑三七總皂苷的檢測分析照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定。色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑；乙晴-水(20∶80)為流動相。對照品溶液制備取經(jīng)干燥24小時的人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1對照品適量，精密稱定，加流動相稀釋成1ml中含人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg10.8mg的溶液，即得對照品溶液。供試品溶液的制備取本專利注射制劑和市售血栓通注射液(水針劑、輸液劑干燥)約100mg，精密稱定，置25ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得到供試品溶液。測定方法精密量取對照品溶液和供試品溶液10ul，分別注入高效液相色譜儀中，按照外標(biāo)法以峰面積計算含量，即得，測得結(jié)果見表2。表2血栓通注射制劑含量比較結(jié)論通過上述實(shí)驗(yàn)表明，本專利工藝具有實(shí)際意義。四.刺激性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明各組納米血栓通制劑(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)實(shí)驗(yàn)動物健康大耳家兔，雌雄兼用。實(shí)驗(yàn)方法取健康大耳家兔3只，將動物固定于兔箱內(nèi)，用酒精將皮膚消毒后，于右側(cè)耳緣靜脈處注射本專利納米血栓通注射制劑，于另一側(cè)對應(yīng)部位注射同一體積的等滲葡萄糖水作為對照。每日注射1次，連續(xù)3次，觀察兔耳緣靜脈反應(yīng)。于末次給藥24h后將兔放血處死，取下兩耳，用10％甲醛溶液浸泡，距注射部位1-4cm處，解剖取出靜脈，做組織切片檢查，觀察注射部位的反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)過程中，肉眼觀察兩耳靜脈注射部位處，未見紅腫、熱等刺激表現(xiàn)。表明給藥組切片部位組織形態(tài)無明顯差異，未見本品毒性所致的病理形態(tài)學(xué)改變(血管結(jié)構(gòu)正常，無內(nèi)皮細(xì)胞損傷，無血栓形成及其他病理性變化)。五.毒理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)1溶血毒性考察實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明各組納米血栓通制劑(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)實(shí)驗(yàn)方法2％紅細(xì)胞混懸液的制備取兔耳緣靜脈取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血。加10倍量的生理鹽水溶液，搖勻，離心，除去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用生理鹽水溶液洗滌2-3次，至上清液不呈紅色時為止。將所得的紅細(xì)胞用用生理鹽水配成濃度為2％的混懸液，即得。試驗(yàn)方法取試管6支，按表3中的配比量依次加入2％紅細(xì)胞混懸液和生理鹽水溶液，混勻，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的本發(fā)明納米血栓通注射制劑(以第6管為空白對照)，搖勻后，置37℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察1次，1小時后，每隔1小時觀察1次，共觀察2小時。表3各組別配比量實(shí)驗(yàn)結(jié)果以第3試管為準(zhǔn)，各管均未染有紅色，顯微鏡下觀察未見有紅細(xì)胞破裂，說明本專利納米血栓通注射制劑不溶血，安全性好。實(shí)驗(yàn)2急性毒性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明各組納米血栓通制劑(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)血栓通注射液(麗珠醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司)實(shí)驗(yàn)動物健康小鼠18-22g，，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)方法取小鼠，分為市售血栓通注射液組、本專利納米血栓通水針劑組、輸液劑組、粉針劑組，尾靜脈給藥，給藥劑量按照人給藥劑量的50倍，按照體表面積換算成小鼠給藥劑量，本專利納米血栓通注射劑與市售血栓通注射液給藥量相同，每天給藥1次，連續(xù)7天，觀察小鼠死亡情況，記錄數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4表4小鼠用藥、存活情況比較結(jié)論通過上述實(shí)驗(yàn)表明，本專利納米血栓通注射制劑與市售血栓通注射液具有相同的安全性六.藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)1透過血腦屏障實(shí)驗(yàn)?zāi)X脊液中藥物濃度的測定實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明各組納米血栓通制劑(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)血栓通注射液(麗珠醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司)實(shí)驗(yàn)動物新西蘭家兔，體重約2.5kg，雌雄不限。實(shí)驗(yàn)方法取新西蘭家兔，分為市售血栓通注射液組、本專利納米血栓通水針劑組、輸液劑組、粉針劑組，耳緣靜脈給藥，在不同時間抽取0.5ml左右腦脊液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，取樣時間分別為注射藥物后的5、10、20、30、60min，120min。取腦脊液0.25ml加適量溶劑混懸15min后，靜置15min，以10000r/min離心1min，取上清液20μl進(jìn)樣。結(jié)果見表5。表5腦脊液中藥物濃度的測定(ug/ml)<tablesid="table5"num="005"><tablewidth="826">組別5min10min20min30min60min90min120min市售血栓通注射液組本發(fā)明納米血栓通水針劑組本發(fā)明納米血栓通輸液組本發(fā)明納米血栓通粉針劑組7.330.229.830.712.942.343.043.18.437.237.837.7-31.231.431.1-23.123.723.4-14.715.114.8-8.98.78.6</table></tables>結(jié)論通過上述實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明納米血栓通注射制劑可以很好的通過血腦屏障。實(shí)驗(yàn)2對家兔視網(wǎng)膜靜脈的影響實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明各組納米血栓通制劑(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)血栓通注射液(麗珠醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司)高分子右旋糖酐(70)(桂林市第三制藥廠生產(chǎn))實(shí)驗(yàn)動物家兔，雌雄兼用。實(shí)驗(yàn)方法對家兔球視網(wǎng)膜毛細(xì)血管叉網(wǎng)點(diǎn)數(shù)影響試驗(yàn)取家兔，雌雄兼用，隨機(jī)分成血栓通注射液組、本發(fā)明納米血栓通水針劑組、輸液劑組、粉針劑組。以3％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，自耳緣靜脈注入10％高分子右旋糖酐生理鹽水溶液15ml/kg，造成急性微循環(huán)障礙模型。在注射后20min用顯微鏡觀察兔左眼球視網(wǎng)膜上的微血管，通過帶有測量面積裝置(1m×1mm方格)的目鏡選擇觀察球視網(wǎng)膜上固定面積范圍內(nèi)的毛細(xì)血管交叉網(wǎng)點(diǎn)數(shù)(藥前值)，然后再每組分別靜注2ml/kg(輸液劑與粉針劑配制成與水針劑相同密度的溶液)，給藥40min后同法觀察測量固定部位的毛細(xì)血管交叉網(wǎng)點(diǎn)數(shù)(藥后值)，以差值(藥后值-藥前值)為指標(biāo)，給藥組與對照組進(jìn)行組間比較(t或t′檢驗(yàn))，結(jié)果如表6。表6血栓通對家兔球視網(wǎng)膜毛細(xì)血管叉網(wǎng)點(diǎn)數(shù)影響結(jié)論通過上述實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明納米血栓通注射制劑對視網(wǎng)膜靜脈阻塞具有更好的藥理作用。實(shí)驗(yàn)3對大鼠心肌缺血再灌注損傷不同時間的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)藥物本發(fā)明各組納米血栓通制劑(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)血栓通注射液(麗珠醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司)實(shí)驗(yàn)動物wistar大鼠，雌雄不限，體重250±45g。實(shí)驗(yàn)方法取大鼠，隨機(jī)分組，乙醚開放吸入麻醉，血液肝素化，剪開胸腔，立即向胸腔內(nèi)加入少許碎冰屑進(jìn)行供心表面降溫，剪開心包，近無名動脈處剪斷升主動脈，近肺動脈分叉處剪斷主肺動脈，然后提起心臟，結(jié)扎上、下腔靜脈及肺動脈，并在其遠(yuǎn)端切斷，迅速將心臟置于冷停搏液(4℃)中，用同樣的停搏液自剪斷的升主動脈斷端恒壓灌洗(壓力3.99-5.32kpa)至心跳停止，心肌顏色變白為止，灌注停搏液后停跳的離體心臟仍保存在原停搏液中。從正中線剪開腹腔，游離出腹主動脈和下腔靜脈，在雙側(cè)腎動脈以下、髂動脈分叉以上，阻斷通向背側(cè)的中、小交通支，同時將供心套入冷循環(huán)牽引兩用袋內(nèi)，在同一平面縱行剪開腹主動脈、下腔靜脈前壁約3cm，將供心升主動脈與受體鼠的腹主動脈切口做全層連續(xù)縫合，將供心主肺動脈與受體鼠的下腔靜脈切口做連續(xù)縫合，自供體心取出，灌注心臟停搏液后40min，恢復(fù)移植心臟供血，30min內(nèi)移植心臟復(fù)跳，將腸管按原位送回腹腔，關(guān)腹，正常飼養(yǎng)，通過腹壁觸診移植心臟搏動情況，判斷移植心臟是否存活。24h實(shí)驗(yàn)組和空白組分別采血1ml，離心出血清，用日立公司生產(chǎn)的全自動生化分析儀7150測定1天、3天、7天、15天、20天、25天CK活力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7表7對大鼠心肌缺血再灌注損傷的不同時間的保護(hù)作用注與空白對照組比較**P＜0.01，#P＜0.05；與陽性對照組比較*P＜0.05結(jié)論通過上述實(shí)驗(yàn)表明，市售血栓通注射液在20天左右才具有一定治療作用，而本專利納米血栓通注射制劑在3天時就具有治療作用，充分說明將三七總皂苷進(jìn)行納米制備后，在治療血栓性疾病時具有起效迅速的特點(diǎn)；本專利納米血栓通注射制劑與市售血栓通注射液比較，具有更好的藥理作用。七.制備實(shí)施例實(shí)施例1血栓通納米技術(shù)處方為三七總皂苷60克，藥用載體300克，其中脂質(zhì)體制備中乳化劑為180克、脂質(zhì)120克。方法一取三七總皂苷60克、乳化劑大豆卵磷脂180克和脂質(zhì)三硬脂酸甘油酯120克，在通氮?dú)鈼l件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和泊絡(luò)沙姆188(二者質(zhì)量比1∶1)的飽和水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻形成主藥混懸液。方法二取三七總皂苷60克、卵磷脂、泊絡(luò)沙姆F-68、土溫80共180克，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯120克加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1h后超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。方法三取三七總皂苷60克，脂質(zhì)三棕櫚酸甘油酯120克和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑蛋黃卵磷脂180克，微熱使溶成有機(jī)相，另取助乳化劑泊絡(luò)沙姆F-68溶于水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)融媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相，繼續(xù)攪拌2h，即得混懸液。方法四取三七總皂苷60克，溶于30％乙醇中；將脂質(zhì)中三月桂酸甘油酯溶于正己烷中，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)刮膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.1個大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，得到混懸液。方法五油相將三七總皂苷60克與聚氰基丙烯酸烷酯300克混合成油溶液，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑PluronicF68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得混懸液。制劑制備水針劑制備取上述混懸液，加注射用水溶解完全，加入穩(wěn)定劑PVP，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到水針劑1000瓶；輸液劑制備取上述混懸液加入藥用輔料氯化鈉，加注射用水溶解完全，加入穩(wěn)定劑PVP，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到輸液劑1000瓶；粉針劑制備取上述混懸液加入藥用輔料蔗糖，加注射用水溶解完全，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，冷凍干燥，得到粉針劑1000瓶；將上述納米制劑進(jìn)行檢測，其納米粒徑為40-120納米實(shí)施例2血栓通納米技術(shù)處方為三七總皂苷80克，藥用載體800克，其中脂質(zhì)體制備中乳化劑為420克、脂質(zhì)380克。方法一取三七總皂苷80克、乳化劑蛋黃卵磷脂420克和脂質(zhì)三肉豆蔻酸甘油酯380克，在通氮?dú)鈼l件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和泊絡(luò)沙姆188(二者質(zhì)量比1∶1)的飽和水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻形成主藥混懸液。方法二取三七總皂苷80克、卵磷脂、泊絡(luò)沙姆F-68、土溫80共420克，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯380克加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1h后超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。方法三取三七總皂苷80克，脂質(zhì)三月桂酸甘油酯380克和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑磷脂酰膽堿420克，微熱使溶成有機(jī)相，另取助乳化劑泊絡(luò)沙姆F-68溶于水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)融媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的10ml水相，繼續(xù)攪拌2h，即得混懸液。方法四取三七總皂苷80克，溶于70％乙醇中；將脂質(zhì)WitepsolW35380克溶于液體烷烴中，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)刮膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.2個大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，得到混懸液。方法五油相將三七總皂苷80克和聚乳酸800克形成油溶液，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑PluronicF68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得混懸液。制劑制備水針劑制備取上述混懸液，加注射用水溶解完全，加入穩(wěn)定劑PVP，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到水針劑1000瓶；輸液劑制備取上述混懸液加入藥用輔料葡萄糖，加注射用水溶解完全，加入穩(wěn)定劑PVP，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到輸液劑1000瓶；粉針劑制備取上述混懸液加入藥用輔料乳糖，加注射用水溶解完全，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，冷凍干燥，得到粉針劑1000瓶；將上述納米制劑進(jìn)行檢測，其納米粒徑為40-120納米實(shí)施例3血栓通納米技術(shù)處方為三七總皂苷65克，藥用載體443克，其中脂質(zhì)體制備中乳化劑為301克、脂質(zhì)142克。方法一取三七總皂苷65克、乳化劑泊洛沙姆301克和脂質(zhì)單硬脂酸甘油酯142克，在通氮?dú)鈼l件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和泊絡(luò)沙姆188(二者質(zhì)量比1∶1)的飽和水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻形成主藥混懸液。方法二取三七總皂苷65克、卵磷脂、泊絡(luò)沙姆F-68、土溫80共301克，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯142克加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1h后超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。方法三取三七總皂苷65克，脂質(zhì)硬脂酸、棕櫚酸142克和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑聚山梨醇301克，微熱使溶成有機(jī)相，另取助乳化劑泊絡(luò)沙姆F-68溶于水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)融媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相，繼續(xù)攪拌2h，即得混懸液。方法四取三七總皂苷65克，溶于35％乙醇中；將脂質(zhì)三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯溶于正己烷中，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)刮膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.12個大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，得到混懸液。方法五油相將三七總皂苷65克和聚丙交酯-乙交酯、殼聚糖共443克形成油溶液，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑PluronicF68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得混懸液。制劑制備水針劑制備取上述混懸液，加注射用水溶解完全，加入穩(wěn)定劑PVP，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到水針劑1000瓶；輸液劑制備取上述混懸液加入藥用輔料葡萄糖，加注射用水溶解完全，加入穩(wěn)定劑PVP，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到輸液劑1000瓶；粉針劑制備取上述混懸液加入藥用輔料蔗糖，加注射用水溶解完全，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，冷凍干燥，得到粉針劑；將上述納米制劑進(jìn)行檢測，其納米粒徑為40-120納米實(shí)施例4血栓通納米技術(shù)處方為三七總皂苷70克，藥用載體503克，其中脂質(zhì)體制備中乳化劑為287克、脂質(zhì)216克。方法一取三七總皂苷70克、乳化劑膽酸鹽、四丁酚醛287克和脂質(zhì)WitepsolH35、WitepsolH42、單硬脂酸甘油酯216克，在通氮?dú)鈼l件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和泊絡(luò)沙姆188(二者質(zhì)量比1∶1)的飽和水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻形成主藥混懸液。方法二取三七總皂苷70克、卵磷脂、泊絡(luò)沙姆F-68、土溫80共287克，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯216克加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1h后超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。方法三取三七總皂苷70克，脂質(zhì)單硬脂酸甘油酯、棕櫚酸216克和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑膽酸鹽287克，微熱使溶成有機(jī)相，另取助乳化劑泊絡(luò)沙姆F-68溶于水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)融媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相，繼續(xù)攪拌2h，即得混懸液。方法四取三七總皂苷70克，溶于50％乙醇中；將脂質(zhì)三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、WitepsolW35液體烷烴中，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)刮膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.16個大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，得到混懸液。方法五油相將三七總皂苷70克和聚丙交酯-乙交酯、殼聚糖、明膠油503克形成溶液，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑PluronicF68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得混懸液。制劑制備水針劑制備取上述混懸液，加注射用水溶解完全，加入穩(wěn)定劑PVP，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到水針劑1000瓶；輸液劑制備取上述混懸液加入藥用輔料葡萄糖，加注射用水溶解完全，加入穩(wěn)定劑PVP，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到輸液劑1000瓶；粉針劑制備取上述混懸液加入藥用輔料蔗糖，加注射用水溶解完全，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，冷凍干燥，得到粉針劑1000瓶；將上述納米制劑進(jìn)行檢測，其納米粒徑為40-120納米實(shí)施例5血栓通納米技術(shù)處方為三七總皂苷75克，藥用載體682克，其中脂質(zhì)體制備中乳化劑為412克、脂質(zhì)270克。方法一取三七總皂苷75克、乳化劑山梨醇412克和脂質(zhì)硬脂酸、棕櫚酸270克，在通氮?dú)鈼l件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和泊絡(luò)沙姆188(二者質(zhì)量比1∶1)的飽和水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻形成主藥混懸液。方法二取三七總皂苷75克、卵磷脂、泊絡(luò)沙姆F-68、土溫80共412克，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯270克加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1h后超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。方法三取三七總皂苷75克，脂質(zhì)WitepsolW35、WitepsolH35、三硬脂酸甘油酯共270克和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑大豆卵磷脂412克，微熱使溶成有機(jī)相，另取助乳化劑泊絡(luò)沙姆F-68溶于水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)融媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相，繼續(xù)攪拌2h，即得混懸液。方法四取三七總皂苷75克，溶于65％乙醇中；將脂質(zhì)三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、WitepsolW35溶于液體烷烴，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)刮膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.18個大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，得到混懸液。方法五油相將三七總皂苷75克和聚丙交酯-乙交酯682克形成油溶液，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑PluronicF68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得混懸液。制劑制備水針劑制備取上述混懸液，加注射用水溶解完全，加入穩(wěn)定劑PVP，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到水針劑1000瓶；輸液劑制備取上述混懸液加入藥用輔料氯化鈉，加注射用水溶解完全，加入穩(wěn)定劑PVP，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到輸液劑1000瓶；粉針劑制備取上述混懸液加入藥用輔料甘露醇，加注射用水溶解完全，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，冷凍干燥，得到粉針劑1000瓶；將上述納米制劑進(jìn)行檢測，其納米粒徑為40-120納米。權(quán)利要求1.一種納米血栓通注射制劑，其特征在于其組成包括三七總皂苷6-8重量份，藥用載體30-80重量份；其特征還在于納米血栓通注射制劑中納米粒徑為40-120納米。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種納米血栓通注射制劑的制備方法，其特征包括以下步驟血栓通納米技術(shù)方法一取三七總皂苷6-8重量份、乳化劑18-42重量份和脂質(zhì)12-38重量份，在通氮?dú)鈼l件下加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油和泊絡(luò)沙姆188(二者質(zhì)量比1∶1)的飽和水溶液，制成粗乳，在80±5℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻形成主藥混懸液。方法二取三七總皂苷6-8重量份、卵磷脂、泊絡(luò)沙姆F-68、土溫8018-42重量份，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取單硬脂酸甘油酯12-38重量份加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1h后超聲分散室溫，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得澄明的混懸液。方法三取三七總皂苷6-8重量份，脂質(zhì)12-38重量份和丙酮加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑18-42重量份，微熱使溶成有機(jī)相，另取助乳化劑泊絡(luò)沙姆F-68溶于水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)融媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相，繼續(xù)攪拌2h，即得混懸液。方法四取三七總皂苷6-8重量份，溶于30％-70％乙醇中；將脂質(zhì)中一種或多種共12-38重量份溶于烷烴，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)刮膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.1-0.2個大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，得到混懸液。方法五油相將三七總皂苷6-8重量份與油30-80重量份混勻成溶液(聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸、聚丙交酯-乙交酯、殼聚糖、明膠中的一種或幾種)，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑PluronicF68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得混懸液。制劑制備水針劑制備取上述混懸液，加注射用水溶解完全，加入穩(wěn)定劑PVP，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到水針劑；輸液劑制備取上述混懸液加入藥用輔料，加注射用水溶解完全，加入穩(wěn)定劑PVP，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，灌裝，得到輸液劑；粉針劑制備取上述混懸液加入藥用輔料，加注射用水溶解完全，調(diào)節(jié)PH值，過濾，滅菌，冷凍干燥，得到粉針劑。3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的納米血栓通注射制劑具有活血化瘀、擴(kuò)張血管、改善血液循環(huán)的功用，在治療視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、心腦血管病及后遺癥、內(nèi)眼病、眼前房出血等癥的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種納米血栓通注射制劑及其制備方法，其特征在于從中藥三七主根提取純化的有效部位三七總皂苷與藥用載體組合，制備成納米血栓通水針劑、輸液劑、粉針劑；其特征還在于本發(fā)明注射制劑中三七總皂苷6－8重量份、藥用載體30－80重量份，其中納米粒徑為40－120納米；藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明納米注射制劑應(yīng)用安全，與市售血栓通注射液比較具有更好的藥理作用。文檔編號A61P7/02GK1879639SQ20051007750公開日2006年12月20日申請日期2005年6月17日優(yōu)先權(quán)日2005年6月17日發(fā)明者張晴龍申請人:張晴龍