專利名稱：包含羽扇醇的來(lái)自羽扇豆種子豆莢的提取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含羽扇醇的來(lái)自羽扇豆種子豆莢的提取物，特別是富含羽扇醇的提取物。本發(fā)明也涉及獲得這樣提取物的方法。
羽扇豆是相當(dāng)廣泛的植物，它發(fā)現(xiàn)于歐洲、亞洲和發(fā)現(xiàn)于北美洲和南美洲。此植物是碗豆、蠶豆、大豆和法國(guó)豆的近親。幾種羽扇豆可以提及為最公知的白羽扇豆(白羽扇豆)、狹葉羽扇豆(藍(lán)羽扇豆)、黃羽扇豆(黃羽扇豆)、南美羽扇豆(珠羽扇豆)、graecus羽扇豆、羽扇豆、hispanicus羽扇豆、皮洛蘇羽扇豆、cosentinii羽扇豆、atlanticus羽扇豆、princei羽扇豆和somaliensis羽扇豆。在歐洲最通常的一種是甜白羽扇豆(白羽扇豆)，特別是顯示pauper基因的Ares種類。
盡管種子通常用作肥料和由于它們的高蛋白質(zhì)含量也用于人類和動(dòng)物食品中，在工業(yè)上僅僅非常少地使用羽扇豆種子的豆莢或表皮。然而它們構(gòu)成富含羽扇醇的天然來(lái)源。
羽扇醇(1)屬于三萜烯族，和更特別地屬于三萜烯醇族。
羽扇醇依靠它的許多生物活性而具有明確的價(jià)值。特別已知它的抗炎(Singh S.等人，F(xiàn)iloterapia，1997，68，No.1，9)和止痛(DeMiranda A.L.等人，Planta Med，2000，66(3)，284)性能，它關(guān)于重金屬的腎保護(hù)作用(Nagaraj M.等人，J.Appl.Toxicol，2000，20(5)，413)，它的抗組胺作用(De Medrano Villar M.J.等人，Methods FindExp.Clin.Pharmacol.1997，19，No.8,515)，和它的抗有絲分裂(Zachariah R.等人，Indian J.Pharm.Sci.，1994，56，No.4,129)和抗病毒(Kahlos K.，F(xiàn)iloterapia，1996，67，No.4,344)活性。
羽扇醇也可用作合成中間體，特別是用于制備植物激素和類固醇類似物。
羽扇醇在許多植物，如庫(kù)拉索蘆薈或努爾瓦拉Crataeva的樹皮中存在。在幾種情況下，它已經(jīng)從各種植物如“Bresk”分離。然而，它從沒(méi)有從羽扇豆豆莢提取。在專利FR2 762 512中從羽扇豆種子提取包含羽扇醇的羽扇豆油，但油當(dāng)時(shí)來(lái)自已經(jīng)預(yù)先剝皮和因此除去它們豆莢的種子，和包含在油中的羽扇醇顯示0.5wt％的最大含量，相對(duì)于油的總組合物。
現(xiàn)在，由于羽扇豆豆莢構(gòu)成富含羽扇醇的潛在來(lái)源，它比大多數(shù)它的同系數(shù)便宜和更容易獲得，因此需要從羽扇豆種子的豆莢分離提取物，特別是富含羽扇醇的提取物，和開(kāi)發(fā)獲得這樣提取物的方法。采用現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)，一般的羽扇豆，特別是白羽扇豆(白羽扇豆)事實(shí)上是大規(guī)模生長(zhǎng)的產(chǎn)油和蛋白質(zhì)的植物，不象包含羽扇醇的較不廣泛植物，如庫(kù)拉索蘆薈或努爾瓦拉Crataeva。
本發(fā)明的目的因此是一種包含羽扇醇的來(lái)自羽扇豆種子豆莢的提取物。有利地，根據(jù)本發(fā)明的提取物的羽扇醇含量大于30wt％，優(yōu)選大于50wt％。甚至更有利地，根據(jù)本發(fā)明來(lái)自羽扇豆種子豆莢的提取物的羽扇醇含量為70-100wt％。
對(duì)于本發(fā)明的目的，術(shù)語(yǔ)“羽扇豆種子豆莢”用于表示圍繞種子的表皮。豆莢平均占干燥種子的15wt％。
從來(lái)自種子機(jī)械剝皮的羽扇豆種子豆莢制備根據(jù)本發(fā)明的提取物。
在本發(fā)明的特別實(shí)施方案中，羽扇豆選自窄葉羽扇豆、白羽扇豆、黃羽扇豆、南美羽扇豆、graecus羽扇豆、羽扇豆、hispanicus羽扇豆、皮洛蘇羽扇豆、cosentinii羽扇豆、atlanticus羽扇豆、princei羽扇豆和somaliensis羽扇豆。根據(jù)本發(fā)明，羽扇豆有利地是歐洲類型的白羽扇豆(甜白羽扇豆)，優(yōu)選帶有pauper基因的Ares種類。
本發(fā)明的目的也是根據(jù)本發(fā)明從羽扇豆種子豆莢獲得提取物的方法。
有利地，根據(jù)本發(fā)明的方法至少包括一系列如下步驟-研磨羽扇豆豆莢，-使用選自脂族烷烴、芳族烷烴、脂族醇、及其鹵代衍生物的有機(jī)溶劑，提取包含在研磨的羽扇豆豆莢中的總脂質(zhì)，-精制獲得的脂質(zhì)以獲得富含羽扇醇的提取物。
使用圓筒碾磨機(jī)或錘磨機(jī)研磨從種子分離的豆莢。根據(jù)本發(fā)明獲得富含羽扇醇的提取物的方法是基于使用有機(jī)溶劑提取包含在羽扇豆莢中的脂質(zhì)。有利地，有機(jī)溶劑是己烷。精制的豆莢的總脂質(zhì)含量一般為0.5-5wt％，相對(duì)于豆莢的總重量。
對(duì)于本發(fā)明的目的，術(shù)語(yǔ)“富含羽扇醇的”提取物用于表示羽扇含量大于30wt％，有利地大于50wt％，和甚至更有利地70-100wt％的提取物。
或者由下述方法A、B和C進(jìn)行用于獲得根據(jù)本發(fā)明富含羽扇醇的提取物的獲得脂質(zhì)精制。
在本發(fā)明的特別實(shí)施方案(方法A)中，從羽扇豆豆莢提取的總脂質(zhì)的精制至少包括一系列如下步驟-在真空下通過(guò)有機(jī)溶劑的蒸發(fā)，包含脂質(zhì)的反應(yīng)介質(zhì)的濃縮以獲得0.1-90wt％，有利地10-30wt％，甚至更有利地20wt％的脂質(zhì)含量，和-結(jié)晶。
根據(jù)本發(fā)明，因此可以通過(guò)從有機(jī)溶液的直接結(jié)晶，直接獲得富含羽扇醇的提取物，在提取羽扇豆豆莢中存在的總脂質(zhì)的提取步驟期間獲得該有機(jī)溶液。在已經(jīng)濃縮包含脂質(zhì)的反應(yīng)介質(zhì)之后，然后冷卻溶液以引發(fā)羽扇醇的結(jié)晶。然后可以由一個(gè)或多個(gè)再結(jié)晶步驟，特別是從己烷精制獲得的富含羽扇醇的提取物。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案(方法B)中，從羽扇豆豆莢提取的總脂質(zhì)的精制至少包括一系列如下步驟-在真空下溶劑的蒸發(fā)，然后在脂族醇中的溶解，-皂化，
-通過(guò)冷卻的結(jié)晶，和-過(guò)濾和/或洗滌和/或旋轉(zhuǎn)過(guò)濾干燥。
根據(jù)本發(fā)明，脂族醇有利地是乙醇，用于皂化步驟的溶劑有利地是醇?xì)溲趸?。在皂化之后，通過(guò)冷卻將獲得的含水醇溶液進(jìn)行分級(jí)結(jié)晶。在過(guò)濾和/或洗滌和/或旋轉(zhuǎn)過(guò)濾干燥之后，獲得的固體提取物的羽扇醇含量至少為30wt％，有利地至少50wt％，和甚至更有利地至少60wt％。然后可以由一個(gè)或多個(gè)再結(jié)晶步驟，特別是從己烷精制獲得的富含羽扇醇的提取物。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案(方法C)中，從羽扇豆豆莢提取的總脂質(zhì)的精制至少包括一系列如下步驟-在真空下溶劑的蒸發(fā)，然后在脂族醇中的溶解，-皂化，-使用選自脂族烷烴及其鹵代衍生物的有機(jī)溶劑在羽扇豆豆莢脂質(zhì)中不皂化材料的液-液萃取，和-通過(guò)優(yōu)選采用水的洗滌，和然后在真空下溶劑的蒸發(fā)和干燥，精制不皂化材料。
根據(jù)本發(fā)明，因此可以通過(guò)皂化包含從羽扇豆豆莢提取的總脂質(zhì)的反應(yīng)介質(zhì)，然后提取羽扇豆豆莢脂質(zhì)的不皂化級(jí)分，獲得富含羽扇醇的提取物。
對(duì)于本發(fā)明的目的，術(shù)語(yǔ)“不皂化”用于表示脂肪物質(zhì)的級(jí)分，該級(jí)分在堿性堿的延長(zhǎng)作用之后，不溶于水和可以采用有機(jī)溶劑萃取。
根據(jù)本發(fā)明，在與不皂化材料有極大親合力的溶劑，如脂族烷烴及其鹵化衍生物存在下，在脈沖逆流塔中進(jìn)行液-液萃取。有利地，根據(jù)本發(fā)明，用于液-液萃取步驟的有機(jī)溶劑是二氯乙烷。然后將在塔出口的有機(jī)相采用水洗滌和然后在真空下蒸發(fā)，和干燥殘余物。然后可以由一個(gè)或多個(gè)再結(jié)晶步驟，特別是從己烷精制獲得的富含羽扇醇的提取物。
根據(jù)本發(fā)明方法的所有步驟對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的。
非限制性地給出以下實(shí)施例和以下實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施發(fā)明的實(shí)施例使用的原材料由帶有pauper基因的Ares種類甜白羽扇豆種子的豆莢組成。羽扇豆豆莢的總脂質(zhì)含量等于1.8wt％。
1.總脂質(zhì)的提取使用錘磨機(jī)預(yù)研磨75kg羽扇豆豆莢。然后將獲得的研磨材料裝入GUEDU攪拌過(guò)濾器以進(jìn)行采用己烷的8次連續(xù)洗滌(每次洗滌使用90升己烷)。提取溫度固定在45℃。每次洗滌包括將新鮮溶劑引入過(guò)濾器，攪拌懸浮液15分鐘和，最后過(guò)濾15分鐘以回收溶劑油。在工藝結(jié)束時(shí)，在真空下，在50℃的溫度下，用蒸汽噴脫脂的羽扇豆豆莢，以從餅狀物提取殘余溶劑油。最后將溶劑油相匯合，然后在真空下，通過(guò)在真空下蒸汽的注入，在120℃下蒸發(fā)?？刂拼瞬僮饕垣@得總脂質(zhì)含量為15-30wt％，優(yōu)選20wt％的己烷基溶液A。
2.羽扇醇提取2.1方法A將在總脂質(zhì)提取期間獲得的己烷基溶液A冷卻到20℃和緩慢攪拌12小時(shí)。然后將它通過(guò)布氏漏斗過(guò)濾以回收富含羽扇醇的結(jié)晶提取物。將此提取物最后采用冷己烷(15℃)洗滌和然后在60℃下在真空烘箱中干燥48小時(shí)。
獲得的提取物A的形式為羽扇醇含量為76％的淡黃色粉末。總的羽扇醇提取收率是72％。
2.2隨后為再結(jié)晶步驟的方法A通過(guò)從己烷的再結(jié)晶精制實(shí)施例1中獲得的500g提取物A。事實(shí)上將固體提取物溶于己烷(10wt％的溶液)。將混合物在回流下達(dá)到70℃下15分鐘，直到提取物完全溶解。然后將溫度返回到20℃和采用緩慢攪拌保持直到羽扇醇的完全沉淀。然后將后者濾出，采用冷己烷洗滌，和然后最后在60℃下在真空烘箱中干燥48小時(shí)。
獲得的提取物B的形式為羽扇醇含量為95％的白色粉末?？偟挠鹕却继崛∈章适?5％。
2.3方法B在200毫巴真空下和通過(guò)在120℃下注入活蒸汽，完全蒸發(fā)在總脂質(zhì)提取期間獲得的2kg己烷基溶液A。然后在攪拌的，帶夾套反應(yīng)器中，在240g的50％醇?xì)溲趸洿嬖谙?，皂化此新乙醇溶液。在回流下和?0℃溫度下進(jìn)行皂化反應(yīng)4小時(shí)。然后將肥皂溶液返回到20℃的溫度和采用緩慢攪拌保持24小時(shí)，直到羽扇醇的完全沉淀。然后將后者濾出，采用冷己烷洗滌，和然后最后在60℃下在真空烘箱中干燥48小時(shí)。
獲得的固體提取物B的形式為羽扇醇含量為84％的白色粉末?？偟挠鹕却继崛∈章适?1％。
2.4方法C在200毫巴真空下和通過(guò)在120℃下注入活蒸汽，完全蒸發(fā)在總脂質(zhì)提取期間獲得的2kg己烷基溶液A。然后采用900ml乙醇吸收獲得的固體。然后在攪拌的，帶夾套反應(yīng)器中，在240g的50％醇?xì)溲趸洿嬖谙?，皂化此新乙醇溶液。在回流下和?0℃溫度下進(jìn)行皂化反應(yīng)4小時(shí)。然后采用軟化水(按體積50/50稀釋)稀釋獲得的肥皂溶液。然后將此新的含水醇溶液送到脈沖逆流塔的底部。關(guān)于塔的項(xiàng)部，加入用作羽扇醇提取溶劑的1，2-二氯乙烷。獲得的有機(jī)相然后進(jìn)行如下常規(guī)簡(jiǎn)單精制操作1)在逆流塔中采用水洗滌2)在真空下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中的蒸發(fā)3)在真空烘箱中殘余物的干燥(70℃，48小時(shí))獲得的提取物C的形式為羽扇醇含量為85％的淡黃色粉末?？偟挠鹕却继崛∈章适?7％。
2.5隨后為再結(jié)晶步驟的方法C通過(guò)從己烷的再結(jié)晶精制實(shí)施例3中獲得的200g提取物C。事實(shí)上將固體提取物溶于己烷(10wt％的溶液)。將混合物在回流下達(dá)到70℃下15分鐘，直到提取物完全溶解。然后將溫度返回到20℃和采用緩慢攪拌保持直到羽扇醇的完全沉淀。然后將后者濾出，采用冷己烷洗滌，和然后最后在60℃下在真空烘箱中干燥48小時(shí)。
獲得的提取物D的形式為羽扇醇含量為96.5％的白色粉末?？偟挠鹕却继崛∈章适?0％。
權(quán)利要求
1.一種包含羽扇醇的來(lái)自羽扇豆種子豆莢的提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于它的羽扇醇含量大于30wt％，優(yōu)選大于50wt％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2任一項(xiàng)所述的提取物，其特征在于它的羽扇醇含量為70-100wt％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的提取物，其特征在于羽扇豆選自窄葉羽扇豆、白羽扇豆、黃羽扇豆、南美羽扇豆、graecus羽扇豆、羽扇豆、hispanicus羽扇豆、皮洛蘇羽扇豆、cosentinii羽扇豆、atlanticus羽扇豆、princei羽扇豆和somaliensis羽扇豆。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提取物，其特征在于羽扇豆是白羽扇豆，優(yōu)選帶有pauper基因的Ares種類。
6.獲得前述根據(jù)權(quán)利要求任意一項(xiàng)所述的提取物的方法。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于它包括至少一系列如下步驟-研磨羽扇豆豆莢，-使用選自脂族烷烴、芳族烷烴、脂族醇、及其鹵代衍生物的有機(jī)溶劑，提取包含在研磨的羽扇豆豆莢中的總脂質(zhì)，以及-精制獲得的脂質(zhì)以獲得富含羽扇醇的提取物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于有機(jī)溶劑是己烷。
9.根據(jù)權(quán)利要求7和8任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于獲得的脂質(zhì)的精制至少包括一系列如下步驟-在真空下通過(guò)有機(jī)溶劑的蒸發(fā)包含脂質(zhì)的反應(yīng)介質(zhì)的濃縮以獲得0.1-90wt％，有利地10-30wt％，甚至更有利地20wt％的脂質(zhì)含量，和-結(jié)晶。
10.根據(jù)權(quán)利要求7和8任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于獲得的脂質(zhì)的精制至少包括一系列如下步驟-在真空下溶劑的蒸發(fā)，和然后在脂族醇中的溶解，-皂化，-通過(guò)冷卻的結(jié)晶，和-過(guò)濾和/或洗滌和/或旋轉(zhuǎn)過(guò)濾干燥。
11.根據(jù)權(quán)利要求7和8任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于獲得的脂質(zhì)的精制至少包括一系列如下步驟-在真空下溶劑的蒸發(fā)，和然后在脂族醇中的溶解，-皂化，-使用選自脂族烷烴及其鹵代衍生物的有機(jī)溶劑，羽扇豆豆莢中不皂化材料的液-液萃取，和-通過(guò)洗滌，然后在真空下溶劑的蒸發(fā)和干燥，不皂化材料的精制。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于用于液-液萃取步驟的有機(jī)溶劑是二氯乙烷。
13.根據(jù)權(quán)利要求9-12任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于它也包括一個(gè)或多個(gè)最終的再結(jié)晶步驟。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種包含羽扇醇的來(lái)自羽扇豆種子豆莢所述的提取物，更特別地一種提取物，其中它的羽扇醇含量大于30wt％，優(yōu)選大于50wt％，甚至更有利地70－100wt％。本發(fā)明也涉及獲得該提取物所述的方法。
文檔編號(hào)A61P29/00GK1507429SQ02809529
公開(kāi)日2004年6月23日 申請(qǐng)日期2002年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月3日
發(fā)明者A·皮奇里利, J·列格蘭, N·布魯坦, A 皮奇里利, 程, 窶 申請(qǐng)人:科學(xué)發(fā)展實(shí)驗(yàn)室