專利名稱：環(huán)六肽抗菌化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，是從土壤放線菌發(fā)酵液中提取分離的一類
yanglingmycinso
背景技術(shù)：
從微生物次生代謝物中篩選生物活性物質(zhì)是新藥研究與開(kāi)發(fā)的一個(gè)重要途徑。截 止目前為止，已經(jīng)明確結(jié)構(gòu)的微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物超過(guò)50000多個(gè)，其中具有明確生物活 性的化合物22000多個(gè)。自Wakesman從灰鏈霉菌的培養(yǎng)液中分離到鏈霉素以后，土壤放線 菌就成為抗生素的最主要來(lái)源，其所產(chǎn)生的抗生素?cái)?shù)量占所有微生物活性代謝物的47%。Yanglingmycins i 由^> 畠自 K M ^ ± ^ Φ W Streptomyces alboflavus No. 313代謝產(chǎn)生的一類新型環(huán)六肽抗菌化合物，主要包括yanglingmycin A，B和C三個(gè)組 分。其氨基酸組成包括纈氨酸和其它非常見(jiàn)氨基酸，如2-甲氨基丙酸、哌嗪-3-羧酸以及 6_氯-3α-羥基-1，2，3，3α，8，8α-六氫吡咯[2，3_并]B引哚_2_羧酸等。目前已發(fā)現(xiàn)的 與此結(jié)構(gòu)類似的環(huán)六肽抗生素還有himastatin和chloptosin，但后二者均是兩個(gè)環(huán)六肽 形成的二聚體，同時(shí)在氨基酸組成上也存在差異。Yanglingmycins 對(duì)蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)，枯草桿菌(B. subtilis)， 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)以及耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(Methicil lin-resistantStaphtlococcus aureus)等多種革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌具有強(qiáng)烈的抑制作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類新型環(huán)六肽抗菌藥物yanglingmycins。采用高分辨質(zhì)譜和核磁共振等波譜技術(shù)，確定了本發(fā)明所涉及化合物的化學(xué)結(jié) 構(gòu)，其結(jié)構(gòu)式如下所示。 Yanglingmycin A由一分子纈氨酸、2-甲氨基丙酸、6_氯_3 α -羥基-1，2，3，3 α， 8，8α-六氫吡咯[2，3-并]吲哚-2-羧酸和三分子哌嗪-3-羧酸共計(jì)四種氨基酸組成，各 氨基酸的構(gòu)型為L(zhǎng)-型或D-型。Yanglingmycin B由一分子纈氨酸、2-甲氨基丙酸、6_氯_3 α -羥基-1，2，3，3 α， 8，80-六氫吡咯[2，3-并]吲哚-2-羧酸、2，3，4，5_四氫噠嗪-3-羧酸和二分子哌嗪-3-羧 酸共計(jì)四種氨基酸組成，各氨基酸的構(gòu)型為L(zhǎng)-型或D-型。Yanglingmycin C由一分子纈氨酸、2-甲氨基丙酸、6-氯_3 α -羥基-1，2，3，3 α， 8，8α-六氫吡咯[2，3-并]吲哚-2-羧酸、4-羥基-6-甲氧基_1，2，3，4-四氫噠嗪-3-羧 酸和二分子哌嗪-3-羧酸共計(jì)四種氨基酸組成，各氨基酸的構(gòu)型為L(zhǎng)-型或D-型。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是Yanglingmycins對(duì)蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)，枯 草桿菌(B. subtilis)，金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等多種革蘭氏陽(yáng)性 細(xì)菌具有強(qiáng)烈的抑制作用，尤其是對(duì)重要的抗性菌，如耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌 (Methicillin-resistant Staphylococcusaureus, MRSA)具有很好的抑制活性。
具體實(shí)施例方式通過(guò)下述實(shí)施例有助于理解本發(fā)明，但并不限制本發(fā)明的內(nèi)容。實(shí)施例一Yanglingmycin A的分離及結(jié)構(gòu)鑒定Streptomyces albofIavus 發(fā)酵液(50L)經(jīng) 200 目篩網(wǎng)過(guò)濾后，用草酸調(diào) pH 3.5， 靜置、過(guò)濾，加NaOH調(diào)濾液至中性，用2kg HPD-400大孔吸附樹(shù)脂靜態(tài)吸附過(guò)夜。將吸附 好的大孔吸附樹(shù)脂裝入層析柱中，先用去離子水洗脫5000mL，洗脫液棄去。再用水甲醇 =7 3,6 4,5 5,4 6 (V/V)及純甲醇五種洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，每種洗脫液洗脫 5000mL，收集水甲醇=4 6 (V/V)洗脫的餾分，減壓濃縮至50mL。濃縮液經(jīng)0. 45 μ m濾 膜過(guò)濾后用制備液相色譜純化，得到y(tǒng)anglingmycin A 6. 3g。
采用高分辨質(zhì)譜和核磁共振波譜技術(shù)鑒定yanglingmycin A的化學(xué)結(jié)構(gòu)，其主要 物理常數(shù)如下YanglingmycinA，無(wú)色微晶，熔點(diǎn):208 210°C，[o^(cl. 0，-120°，MeOH)，UVw 218nm, IR :3425，1638，1534，1444，1406，1073，660CHT1。HR-ESI-MS :m/z 757. 3460[M+H]+， (C35H5tlNltlO7Cl,計(jì)算值757. 3552)，結(jié)合1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)，確定化合物的分子式為 C35H49N1q07C1。Yanglingmycin A 的核磁波譜數(shù)據(jù)見(jiàn)表 1。實(shí)施例二Yanglingmycins 的抑菌活性采用微量稀釋法測(cè)定yanglingmycin A對(duì)蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)，枯草 桿菌(B. subtilis)，金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，大腸桿菌(Escherichia coil)，綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)以及耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(Methici llin-resistantStaphylococcus aureus, MRSA)等六種供試細(xì)菌的抑菌活性，耐甲氧西林 金黃色葡萄球菌由南京醫(yī)科大學(xué)提供，其余菌種購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏中心。以接種環(huán)自培養(yǎng)平皿上挑取4 5個(gè)相同形態(tài)的供試菌菌落，接入 Mueller-Hinton肉湯中，35°C培養(yǎng)至輕度混濁后(約3 5h)轉(zhuǎn)入0. 9%生理鹽水中，調(diào)整 到麥?zhǔn)蠞岫葹?. 5 (使其在650nm波長(zhǎng)下吸光度為0. 020，此時(shí)相當(dāng)于1. 5 X IO8CFU · mL—1)， 再用Mueller-Hinton肉湯稀釋200倍，其接種量則相當(dāng)于7. 5X IO5CFU · mL—1。將稀釋好 的接種液轉(zhuǎn)入96孔板中，每孔加液量100 μ L，再分別加入無(wú)菌水配制的不同濃度待測(cè)藥液 100 μ L，每板另設(shè)不加任何藥劑的空白對(duì)照和加藥不接菌對(duì)照，實(shí)驗(yàn)中每個(gè)處理設(shè)三次重 復(fù)。氨芐青霉素為陽(yáng)性對(duì)照藥劑。將處理好的96孔板置培養(yǎng)箱中，35°C培養(yǎng)20h，650nm測(cè) 定透光率，記錄不同藥劑對(duì)供試細(xì)菌的MIC值。以透光率大于85%為抑制生長(zhǎng)的標(biāo)準(zhǔn)，MIC 為抑制生長(zhǎng)的最低濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。Yanglingmycin A對(duì)蠟狀芽孢桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌以及耐甲氧西林的 金黃色葡萄球菌均具有很強(qiáng)的抑制作用，其活性明顯優(yōu)于對(duì)照藥劑氨芐青霉素，但對(duì)革蘭 氏陰性菌無(wú)明顯活性。表1 Yanglingmycin A 的核磁波譜數(shù)據(jù)(CD3OD, 500MHz)
表2 Yanglingmycin A對(duì)六種供試細(xì)菌的抑菌活性
權(quán)利要求
一類新的環(huán)六肽抗菌藥物yanglingmycins，其結(jié)構(gòu)式如下所示F2009101279942C0000011.tif
2.如權(quán)利要求1所述，yanglingmycinA由一分子纈氨酸、2-甲氨基丙酸、6-氯-3α -羥 基-1，2，3，3α，8，8α-六氫吡咯[2，3_并]吲哚_2_羧酸和三分子哌嗪_3_羧酸共計(jì)四種 氨基酸組成，各氨基酸的構(gòu)型為L(zhǎng)-型或D-型。
3.如權(quán)利要求1所述，yanglingmycinB由一分子纈氨酸、2-甲氨基丙酸、 6-氯-3 α-羥基-1，2，3，3 α，8，8 α-六氫吡咯[2，3_并]吲哚_2_羧酸、2，3，4，5-四氫噠 嗪-3-羧酸和二分子哌嗪-3-羧酸共計(jì)四種氨基酸組成，各氨基酸的構(gòu)型為L(zhǎng)-型或D-型。
4.如權(quán)利要求1所述，yanglingmycinC由一分子纈氨酸、2-甲氨基丙酸、 6-氯-3 α-羥基-1，2，3，3 α，8，8 α-六氫吡咯[2，3-并]吲哚_2_羧酸、4_羥基_6_甲氧 基-1，2，3，4-四氫噠嗪-3-羧酸和二分子哌嗪-3-羧酸共計(jì)四種氨基酸組成，各氨基酸的 構(gòu)型為L(zhǎng)-型或D-型。
5.如權(quán)利要求1所述的化合物用作抗菌藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一類新的環(huán)六肽抗菌藥物yanglingmycins，屬藥物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及的化合物其結(jié)構(gòu)式如下所示，其氨基酸組成包括纈氨酸和其它非常見(jiàn)氨基酸，如2-甲氨基丙酸、哌嗪-3-羧酸以及6-氯-3α-羥基-1，2，3，3α，8，8α-六氫吡咯[2，3-并]吲哚-2-羧酸等，各氨基酸的構(gòu)型為L(zhǎng)-型或D-型。本發(fā)明涉及的化合物對(duì)蠟狀芽孢桿菌，枯草桿菌，金黃色葡萄球菌以及耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌等多種革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌具有強(qiáng)烈的抑制作用。
文檔編號(hào)A61K38/12GK101845081SQ20091012799
公開(kāi)日2010年9月29日 申請(qǐng)日期2009年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月24日
發(fā)明者吳文君, 姬志勤, 郭正彥 申請(qǐng)人:西北農(nóng)林科技大學(xué)農(nóng)藥研究所