專利名稱：：基于吡啶酮骨架的半胱天冬酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及吡啶酮衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽作為對(duì)抗多種半胱天冬酶(Caspase)的抑制劑，所述多種半胱天冬酶包括半胱天冬酶-l[白細(xì)胞介素-lp-轉(zhuǎn)化酶，ICE]，半胱天冬酶-3[凋亡酶/CPP-32]，半胱天冬酶-8，和半胱天冬酶-9，以及涉及包含吡啶酮衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽的藥物組合物用于抑制半胱天冬酶。
背景技術(shù)：
：半胱天冬酶是在最近10年期間被發(fā)現(xiàn)的為0C2P2四聚體形式的新型的半胱氨酸蛋白酶。直到目前為止已知約14種半胱天冬酶。其中，半胱天冬酶-l(ICE)是一種細(xì)胞因子并參與生物學(xué)無(wú)活性的白細(xì)胞介素(prointerleukin)-lP的前體向生物學(xué)活性的白細(xì)月包介素-lP的轉(zhuǎn)化。白細(xì)胞介素-1由白細(xì)胞介素-la和白細(xì)胞介素-lP組成，其二者都是在單核細(xì)胞中以31KDa前體的形式被合成。僅白細(xì)胞介素-ip的前體被ICE活化。被半胱天冬酶-1水解的位置是Asp27-Gly"和Asp116-Ala117，后一位置的水解得到白細(xì)胞介素-1P。白細(xì)胞介素-iP已被報(bào)導(dǎo)擔(dān)當(dāng)引起炎癥的重要遞質(zhì)(1,3)。半胱天冬酶-l在1989年被首次發(fā)現(xiàn)，并且由兩個(gè)獨(dú)立研究小組通過(guò)X射線結(jié)晶學(xué)方法測(cè)定了其立體三維結(jié)構(gòu)。廣泛地研究了半胱天冬酶-3(CPP-32)作用或作用機(jī)理，并且在1996年測(cè)定了其三維結(jié)構(gòu)(2)。從半胱天冬酶-3的前體活化得到的半胱天冬酶-3(凋亡酶)在(P,)Asp-X-X-Asp(P0模體(motif)的位置被水解，并且已知的底物包括聚(ADP-核糖)聚合酶、Ul70，000Mr核內(nèi)小核糖核蛋白、460,000MrDNA-依賴性蛋白激酶的催化亞單位等。半胱天冬酶-7的X射線結(jié)構(gòu)據(jù)報(bào)導(dǎo)與半胱天冬酶-3的X射線結(jié)構(gòu)非常相似(4)。半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9存在于半胱天冬酶-3，6，7的上游，并且已知所有這些半胱天冬酶參與細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)。半胱天冬酶-8的X射線結(jié)構(gòu)在1999年被測(cè)定(5)，并且其抑制劑可特別有利地被用來(lái)治療與細(xì)胞凋亡有關(guān)的疾病。半胱天冬酶抑制劑是指抑制半胱天冬酶的活性并因此控制由半胱天冬酶活性引起的諸如炎癥、細(xì)胞凋亡等癥狀的那些化合物?？赏ㄟ^(guò)給藥該抑制劑進(jìn)行治療或被減弱的疾病或癥狀包括以下癡呆，腦中風(fēng)，由AIDS引起的腦損傷，糖尿病，胃潰瘍，由肝炎病毒引起的腦損傷，肝炎誘導(dǎo)的肝臟疾病，急性肝炎，暴發(fā)性肝衰竭，膿毒病，器官移植排斥，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，缺血性心臟病、和肝硬化(6)。在目前為止已知的半胱天冬酶抑制劑中，最值得注意的不可逆的抑制劑如下所示IDN-1965MX-1013上述兩個(gè)抑制劑都是基于它們不可逆地使該酶失活而抑制細(xì)胞凋亡的普通機(jī)理來(lái)表現(xiàn)出其活性(不可逆的、廣譜的抑制劑)。已報(bào)道說(shuō)不可逆的抑制劑具有比可逆的抑制劑更加有效的抑制活性(7)。IDUN公司的IDN-1965和Maxim公司的MX-1013二者據(jù)才艮道在肝損傷的細(xì)胞凋亡模型中都表現(xiàn)出活性(8，9)。這些化合物目前處于臨床前試驗(yàn)階段。不可逆的抑制劑IDN-6556作為丙型肝炎患者的肝保護(hù)劑目前處于II期臨床試驗(yàn)階段(IO，6-肝硬化-i)。OFIDN-6556H-N:01N-HOH—NO」7參考文獻(xiàn)(1)Inflammation:BasicPrinciplesandClinicalCorrelates,第二版,Gallin，Goldstein和Snyderman編,RavenPressLtd.，NewYork.1992,pp211-232;Blood,1996，87(6)，2095-2147。(2)Wilson，K.P.等人，Nature,1994，370.270;Walker,N.,P.C.等人，Cell,1994，78，343;NatureStructuralBiology,1996，3(7)，619。(3)Thornberry，N.A.等人，Nature,1992，356.768;NatureBiotechnology,1996,14，297;ProteinScience,1995，4，3;Nature,1995，376(July6)，37;ProteinScience,1995，4，2149。(4)Wei，Y.等人，ChemistryandBiology,2000，7，423。(5)BlanchardH.等人，Structure,1999，7，1125;BlanchardH.等人，J.ofMol.Biol.,2000，302，9。(6)與半胱天冬酶相關(guān)的疾病有關(guān)的參考文獻(xiàn)。癡呆ArchNeurol2003Mar;60(3):369-76,CaspasegeneexpressioninthebrainasafunctionoftheclinicalprogressionofAlzheimerdisease.PomplPN，YemulS，XiangZ，HoL，HaroutunianV，PurohitD，MohsR,PasinettiGM。腦中風(fēng)ProcNatlAcadSciUSA2002Nov12;99(23):15188-93，Caspaseactivationandneuroprotectionincaspase-3-deficientmiceafterinvivocerebralischemiaandinvitrooxygenglucosedeprivation.LeDA,WuY，HuangZ,MatsushitaK，PlesnilaN，AugustinackJC,HymanBT,YuanJ，KuidaK,FlavellRA，MoskowitzMA。由AIDS引起的腦損傷JNe訓(xùn)sci2002May15;22(10):4015-24，Caspasecascadesinhumanimmunodeficiencyvirus-associatedneurodegeneration.GardenGA，BuddSL,TsaiE，HansonL，KaulM，D'EmiliaDM,FriedlanderRM，YuanJ，MasliahE，LiptonSA。糖尿病Diabetes2002Jun;51(6):1938-48，Hyperglycemia-inducedapoptosisinmousemyocardium:mitochondrialcytochromeC-mediatedcaspase-3activationpathway.CaiL，LiW，WangG，GuoL，JiangY，KangYJ。胃潰瘍JPhysiolPharmacol1998Dec;49(4):489-500，Roleofbasicfibroblastgrowthfactorinthesuppressionofapoptoticcaspase-3duringchronicgastriculcerhealing.SlomianyBL，PiotrowskiJ,SlomianyA。由肝炎病毒引起的腦損傷JViralHepat2003Mar;10(2):81-6，CerebraldysfunctioninchronichepatitisCinfection.FortonDM,Taylor-RobinsonSD，ThomasHC。暴發(fā)性肝衰竭Gastroenterology2000Aug;119(2):446-60，Tumornecrosisfactoralphainthepathogenesisofhumanandmurinefulminanthepaticfailure.StreetzK，LeifeldL，GrundmannD，RamakersJ,EckertK，SpenglerU，BrennerD，MannsM，TrautweinC。膿毒病NatImmunol2000Dec;1(6):496-501，Caspaseinhibitorsimprovesurvivalinsepsis:acriticalroleofthelymphocyte.HotchkissRS，ChangKC，SwansonPE，TinsleyKW,HuiJJ，KlenderP，XanthoudakisS,RoyS，BlackC,GrimmE，AspiotisR，HanY，NicholsonDW，KarlIE。器官移植排斥Xenotransplantation2001May;8(2):115-24，Invitropreventionofeell-mediatedxeno-graftrejectionviatheFas/FasL-pathwayinCrmA-transductedporcinekidneycells.FujinoM，LiXK，SudaT，HashimotoM，OkabeK，Yagin畫H，MikoshibaK，GuoL，OkuyamaT，EnosawaS，AmemiyaH,AmanoT，SuzukiS。風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎ProgMedChem2002;39:1-72，Caspaseinhibitorsasanti-inflammatoryandantiapoptoticagents.GraczykPP.缺血性心臟病AmJPhysiolHeartCircPhysiol2002Sep;283(3):H990-5，Hypoxia-inducedcleavageofcaspase-3andDFF45/ICADinhumanfailedcardiomyocytes.TodorA,SharovVG，TanhehcoEJ，SilvermanN，BernabeiA，SabbahHN。抗炎JImmunol2003Mar15;170(6):3386-91，Abroad—spectrumcaspaseinhibitorattenuatesallergicairwayinflammationinmurineasthmamodel.IwataA，NishioK，WinnRK，ChiEY，HendersonWRJr，HarlanJM。肝炎誘導(dǎo)的肝臟疾病i)JViralHepat.2003Sep;10(5):335_42.ApoptosisinhepatitisCKountourasJ，ZavosC，ChatzopoulosD.;ii)Apoptosis2003Dec;8(6):655-63ApoptosisparticipatestoliverdamageinHSV-inducedfulminanthepatitis.PretetJL，PelletierL，BernardB，Coumes-MarquetS，KantelipB，MouginC.;iii)ProcNatlAcadSciUSA.2003Jun24;100(13):7797-802.Caspase8smallinterferingRNApreventsacuteliverfailureinmice.ZenderL，HutkerS，LiedtkeC,TillmannHL，ZenderS，MundtB，WaltematheM，GoslingT,FlemmingP,MalekNP，TrautweinC，MannsMP,KuhnelF，KubickaS。肝硬化:i)JPharmacolExpTher.2004Mar;308(3):1191-6,ThecaspaseinhibitorIdn—6556attenuateshepaticinjuryandfibrosisinthebileductligatedmouse.CanbayA.，F(xiàn)ledsteinA.，Baskin-BeyE.，B醒kF.S.GoresGJ:ii)Hepatology.2004Feb.;39(2):273-8，Apoptosis:thenexusofliverinjuryandfibrosis.CanbayA，F(xiàn)riedmanS，GoresGJ.;iii)Hepatology.2003Nov.;38(5):1188-98，Kupffercellengulfmentofapoptoticbodiesstimulatesdeathligandandcytokineexpression.CanbayA，F(xiàn)eldsteinAE,HiguchiH,WerneburgN，GrambihlerA，BronkSF，GoresGJ。(7)WuJ.等人，Methods:ACompaniontoMethodsinEnzymology，1999,17,320。(8)HoglenN.C.等人，J.ofPharmacoloyandExperimentalTherapeutics,2001，297，811。(9)JaeschkeH.等人,ToxicologyandAppliedPharmacology,2000，169，77。(10)HoglenN.C.等人，J.PharmacolExp.Ther.，2004，309(2):634.CharacterizationofIDN-6556(3-[2-(2-tert-butyl-phenylaminooxalyl)-amino]-propionylamino)-4-oxo-5-(2，3,5，6-tetrafluoro-phenoxy)-pentanoicacid):a1iver-targetedcaspaseinhibitor。天冬酶更具選擇性的抑制劑的新型化合物。解決技術(shù)問(wèn)題的方案為了實(shí)現(xiàn)這一目的，本發(fā)明人合成出許多化合物，并且測(cè)定了它們對(duì)半胱天冬酶的結(jié)合能力和抑制活性。結(jié)果，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了下式(l)的吡啶酮化合物確實(shí)滿足這種要求，并完成了本發(fā)明。[式l]R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、RS和X的定義參見(jiàn)下文。因此，本發(fā)明提供了對(duì)半胱天冬酶具有有效抑制活性的式(l)的新型吡咬酮衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于抑制半胱天冬酶的藥物組合物，特別是用于預(yù)防炎癥和細(xì)胞凋亡的組合物，其包括作為活性成分的式
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題其中ii(l)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽以及藥學(xué)可接受的栽體。有益效果本發(fā)明的式(l)的化合物對(duì)半胱天冬酶具有優(yōu)異的抑制活性，因此可有利地被用來(lái)治療各種由半胱天冬酶介導(dǎo)的疾病和癥狀。具體實(shí)施方式首先，本發(fā)明中的重要的術(shù)語(yǔ)如下定義a)d-Cs-烷基含1-5個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴，其包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基等。b)C廠d。-環(huán)烷基含3-10個(gè)碳原子的環(huán)烴，其包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。c)芳基芳基包括所有的芳香族的、雜芳族的及其被部分還原的衍生物。芳香族基團(tuán)是指5-15元的單個(gè)或稠合的不飽和烴。雜芳族基團(tuán)是指含1-5個(gè)選自氧、疏和氮的雜原子的芳基。所述芳基包括但不限于苯基、萘基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、咪唑啉基、異喝唑基、嚙唑基、瘞唑基等。所述d-Cs-烷基、C廣d。-環(huán)烷基或芳基中的一個(gè)或多個(gè)氬可被逸自以下的基團(tuán)代替?；被?、烷氧羰基、羧基、羧基氨基、氰基、鹵素、羥基、硝基、硫基、烷基、環(huán)烷基、烷氧基、芳基、芳基氧基、硫氧基(sulfoxy)和胍基。d)天然的氨基酸包括以下甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。另外，本說(shuō)明書包括以下縮寫N-溴代琥珀酰亞胺NBS0-(7-氮雜苯并三唑-l-基)-N，N，N'，r-四甲基脲六氟磷酸鹽]:HATUN，N-二甲基甲酰胺DMF12二甲基亞砜DMS0N-甲基嗎啉NMM2，2'-偶氮雙(2-曱基丙腈)aibn2，2，6，6-四曱基-l-哌啶基氧基，自由基TEMPO雙(三甲基曱硅烷基)氨基鋰Li服DSN-(2-羥基乙基)哌溱-N'-(2'-乙磺酸)HEPES3-[(3-膽酰胺丙基)二曱基氨基]-l-丙磺酸鹽CHAPS乙二胺四乙酸EDTA二硫蘇糖醇DTT下面更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明。本發(fā)明的一個(gè)方面涉及下式(l)的吡咬酮衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽，其可用作半胱天冬酶的抑制劑。[式l〗<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>其中i)r'表示h，d-c廣烷基，c廣d。-環(huán)烷基，芳基，或所有的天然氨基酸的側(cè)鏈殘基，n)W表示H,d-C「烷基，Cfd。-環(huán)烷基，芳基，或所有的天然氨基酸的側(cè)鏈殘基，m)R3表示H，d-C5-烷基,羥基，d-C廣烷氧基或卣素，IV)R4表示H，C廣Cs-烷基，c3-c1Q-環(huán)烷基或芳基，V)R5表示H,C廣Cs-烷基，C廣d。-環(huán)烷基或芳基，VI)r表示H，C廣C「烷基，C「d。-環(huán)烷基或芳基，VII)R'和RS彼此獨(dú)立地表示H，C,-Cr烷基，C3-d。-環(huán)烷基或芳基，VIH)X表示-CH20R9(R'是C廣C5-烷基，C廣d。-環(huán)烷基或芳基)，-ch2oc(-o)r1q(ir是d-c廣烷基，c3-d。-環(huán)烷基或芳基)或-ch廣w(w是鹵素)。在本發(fā)明的式(l)的化合物中，^優(yōu)選表示所有的天然氨基酸的側(cè)鏈殘基，更優(yōu)選是-CH2C00H。當(dāng)與W連接的碳由于R'基團(tuán)而變成立構(gòu)中心時(shí)，式(l)的化合物可包括兩類立體異構(gòu)體或其混合物(非對(duì)映異構(gòu)體混合物)。式(i)的化合物可包括酯形式(-coj1,其中yi是c廣Cs-烷基)，磺酰胺形式(-CONHS02Y2，其中Y'是d-Cs-烷基)，以及，當(dāng)R1是包含羧基部分的氨基酸的側(cè)鏈殘基時(shí)，式(l)的化合物是藥學(xué)可接受的鹽形式；或者當(dāng)Ri是包含堿部分的氨基酸的側(cè)鏈殘基時(shí)，式(l)的化合物也可以以藥學(xué)可接受的鹽的形式存在。當(dāng)R'是-CH2C00H時(shí)，本發(fā)明的化合物(式la)可以以環(huán)狀縮酮的形式(式lb)存在，因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員可理解的是環(huán)狀縮酮形式(式lb)也可被本發(fā)明所涵蓋。式la式lb另外，所述化合物的平衡形式應(yīng)當(dāng)被理解為涵蓋它們的互變異構(gòu)形式。W優(yōu)選表示C廣C5-烷基，更優(yōu)選曱基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或#又丁基。當(dāng)與W連接的碳由于W基團(tuán)而變成立構(gòu)中心時(shí)，式(1)的化合物可包括兩類立體異構(gòu)體或其混合物(非對(duì)映異構(gòu)體混合物)。式(1)的化合物可包括酯形式(-C02Y1，其中Y是C「C5-烷基)，磺酰胺形式(-CONHS02Y2，其中丫2是C,-C「烷基)，以及當(dāng)R2是包含羧基部分的氨基酸的側(cè)鏈殘基時(shí)，式(l)的化合物是藥學(xué)可接受的鹽形式；或者，當(dāng)R2是包含堿部分的氨基酸的側(cè)鏈殘基時(shí)，式(l)的化合物也可以以藥學(xué)可接受的鹽形式存在。f優(yōu)選表示H、d-C廣烷基、d-Cs-烷氧基或g素，更優(yōu)選H、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基、曱氧基、乙氧基、氟或氯。R4優(yōu)選表示H。R5優(yōu)選表示H。!^優(yōu)選表示未被取代的或者被C廠d。-環(huán)烷基或芳基取代的d-C5-烷基，Cfd。-環(huán)烷基或芳基各自是被取代或未被取代的；或者表示被取代的或未被取代的芳基。I^更優(yōu)選表示未被取代的或者被C廣d。-環(huán)烷基或芳基取代的d-Cr烷基，C3-d。-環(huán)烷基或芳基各自是未被取代的或被一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代基取代C廣C廣烷基、羥基、d-C廣烷氧基和卣素；或者表示芳基，其是未被取代的或被一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代基取代d-C5-烷基、羥基、d-C5-烷氧基和卣素。例如，R6是苯基，萘基，吲哚基，喹啉基，異喹啉基，咪唑啉基，異喁唑基，喁唑基或噻唑基，或者是被苯基、萘基、吲咪基、喹啉基、異喹啉基、咪唑啉基、異喁唑基、喁唑基、噻唑基或環(huán)己基取代的甲基，這些取代基各自是未被取代的或被一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代基取代甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、三鹵代甲基和鹵素。R'和R8各自優(yōu)選表示H。R9優(yōu)選表示被一個(gè)或多個(gè)卣素取代的芳基，更優(yōu)選被一個(gè)或多個(gè)氟取代的苯基，最優(yōu)選是2，3，5，6-四氟苯基。R"優(yōu)選表示被一個(gè)或多個(gè)卣素取代的芳基，更優(yōu)選被一個(gè)或多個(gè)氯取代的苯基，最優(yōu)選是2，6-二氯苯基。W優(yōu)選表示F。最優(yōu)選的化合物是選自以下的化合物5-氟-3-[2-(4-甲基-2-氧代_1-苯基-1，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸(l);3-[2-(1-千基-4-甲基-2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸(2);5-氟-3-[2-(4-甲基-2-氧代-l-苯乙基-1，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸(3);5-氟-3-[2-(1-異丁基-4-曱基-2-氧代-1，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]_4-氧代-戊酸(4);3-[2-(l-節(jié)基-2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸(5);3-[2-(1-爺基-2-氧代-1，2-二氫-吡啶-3-基)-3-甲基-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸(6);3-[2-(l-爺基-2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基)-戊酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸(7);和3-{2-[1-(2-叔丁基-節(jié)基)-2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基]-丁酰氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸(8)。在以下的反應(yīng)路線1-4中描述了對(duì)半胱天冬酶顯示出抑制活性的式(l)的新型吡啶酮衍生物的制備方法。然而，在以下反應(yīng)路線中舉例說(shuō)明的那些僅代表本發(fā)明中所用的典型方法。操作順序、試劑、反應(yīng)條件、溶劑等可不受限制地發(fā)生改變。[反應(yīng)路線1]9一CH2(CN)2、0NCYCNNCVCNH2S04+MeCT、R3MeO"""^^R3MeO"-^^、R323456O如反應(yīng)路線l所示，乙?；胰┒谆s醛、丙二腈和乙酸哌咬錯(cuò)(piperidinium)在合適的溶劑例如甲苯中反應(yīng)，得到亞丙基丙二腈(2)和亞丙烯基丙二腈(3)。該混合物用濃硫酸處理，得到吡啶酮腈(4)，該吡啶酮腈(4)與甲基溴化鎂反應(yīng)得到乙?；拎ね?5)。乙?；拎ね衔?5)、疏和嗎啉反應(yīng)得到硫代酰胺化合物(6)，其然后與濃硫酸在合適的溶劑例如甲醇中反應(yīng)，得到所需的吡啶酮化合物(7)。當(dāng)R3是H時(shí)，所需的化合物可根據(jù)/j邊er.C力e邁.Soc.，1959,《入740-743中已知的方法制備。oH、R6.鹵化物R6、CO,MeNOR3Cs2C03R2-鹵化物C02Me_LiHMDSOR2R6、LiOHOR2C02MeR6、R3CO，HR310化合物(7)與合適的烷基面化物反應(yīng)以得到化合物(8)，如此獲得的化合物(8)與LiHMDS和合適的烷基卣化物反應(yīng)得到化合物(9)，如有必要，其然后被水解，得到脫保護(hù)的羧酸化合物(IO)。[反應(yīng)路線3]OR2R6、13OHATU10OR2Dess-Martin(X=CH2Z)在上面的反應(yīng)路線3和下面的反應(yīng)路線4中，Z表示-OR9(R9是C廣Cs-烷基、C廣d。-環(huán)烷基或芳基)、-0C(-0)R1。OT是d-Cr烷基、C3-d。-環(huán)烷基或芳基)或-W(W是卣素)。如反應(yīng)路線3所述，羧酸衍生物(10)與天冬氨酸衍生物(13)(參見(jiàn)下面的反應(yīng)路線4)偶聯(lián)，得到化合物(ll)，然后使化合物(ll)經(jīng)歷17Dess-Martin高碟化物(periodene)氧化反應(yīng)，并且，如有必要進(jìn)行脫保護(hù)反應(yīng)，得到所需化合物(l)。反應(yīng)路線3的化合物(1)中的官能團(tuán)Z可以通過(guò)首先根據(jù)反應(yīng)路線4的過(guò)程合成已經(jīng)具有所需Z基團(tuán)的化合物(13)、并使化合物(13)與羧酸化合物(10)反應(yīng)來(lái)形成(參見(jiàn)WO00/23421)?；蛘撸璧腪基團(tuán)可在羧酸化合物(10)與天冬氨酸(P-叔丁基)甲酯偶合并水解后根據(jù)反應(yīng)路線4的過(guò)程被隨后引入。當(dāng)Z是F時(shí)，可根據(jù)re"a力e(lro/2i:e"e"，1994，加2)，9693-9696中已知的方法制造外消旋化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>本發(fā)明的式(1)的化合物對(duì)半胱天冬酶具有廣譜抑制活性，這將通過(guò)以下試驗(yàn)結(jié)果被證實(shí)，并且因此其具有預(yù)防炎癥和細(xì)胞凋亡的效果。因此，本發(fā)明提供用于抑制半胱天冬酶的藥物組合物，特別是用于預(yù)防炎癥和細(xì)胞凋亡的治療性組合物，其包括式(l)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽作為活性成分以及藥學(xué)可接受的載體。具體而言，本發(fā)明的組合物對(duì)于以下疾病具有治療或預(yù)防效果癡呆、腦中風(fēng)、由AIDS引起的腦損傷、糖尿病、胃潰瘍、由肝炎引起的腦損傷、肝炎誘導(dǎo)的肝臟疾病、急性肝炎、暴發(fā)性肝衰竭、膿毒病、器官移植排斥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、由于缺血性心臟疾病導(dǎo)致的心臟細(xì)胞凋亡、或肝硬化。另外，本發(fā)明提供了式(1)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽抑制半胱天冬酶的用途，特別是用于預(yù)防炎癥和細(xì)胞凋亡的用途。本發(fā)明還提供預(yù)防患者的炎癥和細(xì)胞凋亡的方法，該方法包括對(duì)患者給予治療有效量的式a)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。本發(fā)明還提供治療或預(yù)防患者的以下疾病的方法癡呆、腦中風(fēng)、由AIDS引起的腦損傷、糖尿病、胃潰瘍、由肝炎引起的腦損傷、肝炎誘導(dǎo)的肝臟疾病、急性肝炎、暴發(fā)性肝衰竭、膿毒病、器官移植排斥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、由缺血性心臟病導(dǎo)致的心臟細(xì)胞凋亡、或肝硬化，該方法包括對(duì)患者給予治療有效量的式a)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。式(l)的化合物可被配制成多種藥物形式用于給藥目的。為了制備本發(fā)明的藥物組合物，將有效量的式(l)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽與可根據(jù)所制備制劑的不同而進(jìn)行選擇的藥學(xué)可接受的載體混合。半胱天冬酶抑制劑化合物可被配制成非腸道注射劑、經(jīng)皮或口服制劑，根據(jù)其應(yīng)用目的的不同而異。特別有利的是將該組合物配制成便于給藥并且具有劑量均勻性的單位劑型。對(duì)于口服制劑，可使用任何常用的藥物載體。例如，水、二醇類、油類、醇類等可被用于諸如混懸劑、糖漿劑、酏劑和溶液劑的口服液體藥劑；或者淀粉類、糖類、白陶土、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑等可被用于諸如粉劑、丸劑、膠嚢和片劑的固體制劑。由于片劑和膠嚢便于給藥，因此它們是最有利的劑量單位形式。還希望將片劑和丸劑配制成腸溶衣制劑。對(duì)于非腸道制劑，無(wú)菌水常被用作載體，盡管也可使用其它成分例如溶解助劑。注射劑例如注射用無(wú)菌水性或油性混懸劑，可以根據(jù)已知工序采用合適的分散劑、潤(rùn)濕劑或助懸劑來(lái)制備?？捎糜谥苽渥⑸鋭┑娜軇┌ㄋ?、林格氏流體和等滲NaCl溶液以及可方便地用作溶劑或助懸媒介物的無(wú)菌硬化油(fixingoil)。包括甘油單酯或甘油二酯在內(nèi)的任何無(wú)刺激性的硬化油可用于這一目的。脂肪酸例如油酸也可用于注射。對(duì)于經(jīng)皮給藥，載體可包括滲透增強(qiáng)劑和/或合適的潤(rùn)濕劑，任選地組合有無(wú)顯著皮膚刺激性的合適的添加劑。所述添加劑可使得容易穿過(guò)皮膚進(jìn)行給藥和/或可幫助所需組合物的制備。這些經(jīng)皮制劑可19通過(guò)多種方式諸如作為透皮貼劑、噴滴劑(spot-on)或軟骨劑被給予。當(dāng)本發(fā)明的半胱天冬酶抑制劑用于臨床目的時(shí)，優(yōu)選以O(shè).1-100mg/kg體重/天的量給予到受試患者?？偟娜談┝靠梢砸淮位蛞匀舾纱伪唤o予。然而，對(duì)于個(gè)體患者的具體給藥劑量可以根據(jù)所用的具體化合物、受試患者的體重、性別、衛(wèi)生學(xué)狀況或飲食、給藥時(shí)間或方法、排泄率、試劑的混合比、待治療疾病的嚴(yán)重程度等的不同而不同。實(shí)施例通過(guò)以下實(shí)施例更具體地說(shuō)明本發(fā)明，然而，可理解這些實(shí)施例意在舉例說(shuō)明本發(fā)明而并非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。制備例l-l)2-(3，3-二曱氧基-l-甲基-亞丙基)-丙二腈將乙?；依叶谆s醛(5Qg，378mmol)和乙酸哌啶鏘(5.5g，37.8mmol)溶解于甲苯(200ml),在20分鐘內(nèi)向其中緩慢加入丙二腈(25g，378mmo1)，將混合物在室溫下攪拌16小時(shí)，反應(yīng)混合物用水(100ml)洗滌，干燥(無(wú)水硫酸鈉)，并減壓濃縮，得到褐色液體化合物(63g，收率92%),其然后通過(guò)^-NMR鑒定，為2-(3，3-二曱氧基-l-甲基-亞丙基)-丙二腈和[(2幻-3-甲氧基-1-甲基丙-2-烯-l-亞基]丙二腈為約10:l比的混合物。'H-NMR(CDCl3，400MHz)54.57(t，1H)，3.39(s，6H)，2.88(d，2H)，2.35(s，3H)。制備例1-2)4-曱基-2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-甲腈向2-(3，3-二曱氧基-l-曱基-亞丙基)-丙二腈和[(2E)-3-曱氧基-l-甲基丙-2-烯-l-亞基]丙二腈(38g，211mmol)的10:l混合物中加入濃硫酸(34ml，633mmo1)，將混合物在50。C攪拌2小時(shí)，反應(yīng)混合物被冷卻到室溫，向其中加入水(IOOml)，所得固體化合物經(jīng)過(guò)濾，用水(50ml)洗滌，并干燥，得到標(biāo)題化合物(21.1g，收率75%)。W-飄(DMSO-d"400MHz)512.31(s，1H)，7.65(d，1H)，6.30(d，1H)，2.36(s，3H)。制備例l-3)3-乙?；?4-曱基-1V-吡咬-2-酮在室溫下在氮?dú)夥障略?0分鐘內(nèi)向甲基溴化鎂(1.4M甲苯/四氫呋喃(75/25)溶液，327ml，458mmo1)中加入制備例1-2)的化合物(20.5g，153mmo1)，混合物攪拌回流3小時(shí)，反應(yīng)混合物被冷卻到室溫，并攪拌i2小時(shí)，在or;反應(yīng)混合物被緩慢加入6N鹽酸水溶液(IOOffll)中，萃取，干燥(無(wú)水硫酸鈉)，并減壓濃縮，向殘余物中加入乙醚(100ml)，得到淺黃色固體化合物，其然后經(jīng)過(guò)濾和干燥，得到標(biāo)題化合物(21.7g，收率94%)。力一NMR(CDCl3，400MHz)512.94(s，1H)，7.31(d，1H)，6.18(d，1H)，2.58(s,3H)，2.26(s，3H)。制備例l-4)4-甲基-3-(2-嗎啉-4_基-2-硫代-乙基)-1^吡啶-2-酮向3-乙酰基-4-甲基-l^"吡p定-2-酮(21.5g，142mmol)中加入硫(4.79g，149mmol)和嗎啉(18.7ml，213騰1)，將混合物加熱到120匸達(dá)8小時(shí)，反應(yīng)混合物被冷卻到室溫，加入乙醇(50ml)，得到灰色固體化合物，其然后經(jīng)過(guò)濾和干燥，得到標(biāo)題化合物(27.3g，收率76%)。'H-NMR(固SO-d"400MHz)511.31(s，1H)，7.15(d，1H)，6.03(d，1H)，4.24(t，2H)，4.OO(t，2H)，3.80(s，2H)，3.68(m，4H)，2.ll(s，3H)。制備例l-5)(4-甲基-2-氧代-l，2_二氫-吡啶-3-基)-乙酸甲酯向4-甲基-3-(2-嗎啉-4-基-2-疏代-乙基)-1^吡啶-2-酮(27.3g，108mmo1)中加入曱醇(30ml)和濃石克酸(30ml)，將混合物加熱到100。C達(dá)3小時(shí)，反應(yīng)混合物被冷卻到室溫，用飽和碳酸鈉水溶液中和，并通過(guò)硅藻土過(guò)濾以除去沉淀物，水層用二氯甲烷(50mlx3)萃取，干燥(無(wú)水硫酸鈉)，并減壓濃縮，向殘余物中加入乙醚(IOOml)，得到淺褐色固體化合物，其然后經(jīng)過(guò)濾和干燥，得到標(biāo)題化合物(16.9g，收率86%)。'H-NMR(CDCl3，400MHz)512.35(s，1H)，7.20(d，1H),6.13(d，1H)，3.70(s，3H)，3.66(s，2H)，2.20(s，3H)。制備例1-6)(4-甲基-2-氧代-l-苯基-l，2-二氫-吡啶-3-基)-乙酸甲酯向制備例l-5)的化合物(181mg，1.Ommol)、苯基硼酸(244mg，2.0eq)、Cu(0Ac)2.H2O(40rag,0.2eq)、吡淀(0.16ml，2.0eq)、TEMP0(172mg，1.1eq)和分子篩(100mg，4A，粉末，預(yù)干燥)的混合物中加入CH2Ch(10ml)，將混合物在室溫下在氮?dú)庀聰嚢鑜小時(shí)，反應(yīng)混合物然后暴露于空氣下，并攪拌1天，向其中加入飽和乙酸銨(30ml),混合物用乙酸乙酯(100ml)萃取兩次，將萃取物用低濃度的碳酸氫鈉水溶液(NaHC03，lGGmlx2)洗滌，干燥(無(wú)水Na2S0j，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色譜(30-60%乙酸乙酯-己烷)純化，得到標(biāo)題化合物(236mg，收率92%)。力-NMR(500MHz，CDC13)57.47-7.44(m，2H)，7.40-7.35(m，3H)7.21(d，1H)，6.12(d，1H)，3.69(s，3H)，3.68(s，2H)，2.23(s，3H)。制備例l-7)2-(4-甲基-2-氧代-1-苯基-1，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酸甲酯在氮?dú)庀聦⒅苽淅齦-6)的化合物(230mg，0.89mmol)溶解于無(wú)水THF(IOml)，向其中加入1.0MLi,S/THF(1.07ml，1.2eq)，將混合物攪拌10分鐘同時(shí)保持溫度為-78。C，然后加入碘乙烷(O.11ml，1.5eq)并攪拌2小時(shí)，期間混合物緩慢回溫到室溫，加入水(20ml),混合物用乙酸乙酯(50mlx2)萃取，用氯化鈉水溶液(IOOml)洗滌，干燥22(無(wú)水Na2S0,)，并減壓濃縮，得到260mg的標(biāo)題化合物，為化學(xué)計(jì)量的收率。該化合物無(wú)需進(jìn)一步純化即可直接用于后續(xù)反應(yīng)。NMR(500MHz，CDC13)57.44(t，2H)，7.40-7.34(m，3H)，7.18(d，1H)，6.09(d，1H)，3.77(dd，1H)，3.65(s，3H)，2.29-2.20(m1H)，2.23(s，3H)，1.87(m，1H)，0.91(t，3H)。制備例l-8)2-(4-甲基-2-氧代-1-苯基-1，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酸將制備例l-7)的化合物(253mg，0.89mmo1)溶解于溶劑混合物(6ml，四氫呋喃MeOH:H20=3:2:1)，加入LiOH.H20(112mg，3.0eq)，將混合物加熱和攪拌約4小時(shí)，反應(yīng)混合物用1N鹽酸水溶液中和，并減壓蒸餾以除去大部分四氫呋喃，將殘余物溶解于過(guò)量的乙酸乙酯(50ml),用氯化鈉水溶液洗涂，干燥(無(wú)水Na2S0J,并減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物(240mg)，為化學(xué)計(jì)量的收率。該化合物無(wú)需進(jìn)一步純化即可直接用于后續(xù)反應(yīng)。力-NMR(500固z，CDCU57.53(t，2H)，7.47(m，1H)，7.37(d，2H)，7.32(d，1H)，6.37(d，1H)，2.39(s，3H)，2.29(m，1H)，2.03(m，2H)，0.95(t，3H)。制備例l-9)5-氟-3-[2-(4-甲基-2-氧代-l-苯基-1，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]_4-氧代-戊酸叔丁基酯將制備例l-8)中獲得的羧酸衍生物(240mg，G.89mmo1)、3-氨基-5-氟-4-羥基-戊酸叔丁基酯(參見(jiàn)7Wra/etfro/丄e"ers，1994，加2)，9693-9696,213mg，1.3eq)和HATU(406mg，1.2eq)的混合物冷卻到0。C，向其中加入含三乙胺(O.50ml，4.0eq)的DMF溶劑(5ml)，將混合物反應(yīng)l天。溶劑被減壓蒸餾。殘余物用乙酸乙酯(30mlx2)萃取，用水、碳酸氫鈉水溶液和氯化鈉水溶液洗滌，干燥(無(wú)水Na肌)，并減壓濃縮，向如此獲得的化合物和Dess-Martin試劑(755mg，2.0eq)中加入無(wú)水二氯甲烷(4ml)，將混合物在室溫下攪拌l小時(shí)，加入異丙醇(lml)使反應(yīng)停止，反應(yīng)混合物在減壓下通過(guò)硅藻土過(guò)濾以除去固體，用乙酸乙酯(20mlx2)萃取，將萃取物用水、飽和碳酸氬鈉溶液和氯化鈉水溶液洗涂，干燥(無(wú)水Na2S0j,并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色鐠純化(30-50%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(298mg，收率73%)。^-NMR(500MHz，CDC13)57.86(brs，1H)，7.36-7.22(m，5H)，7.15(t，1H)，6.08(m，1H)，5.23-4.82(m，2H)，4.75(m,1H)，3.75(m，1H)，2.90-2.60(m，2H)，2.34&2.33(兩個(gè)s，3H),2.30-1.98(m，2H)，1.40&1.38(兩個(gè)s，9H)，0.87(m，3H)。5-氟-3-[2-(4-曱基-2-氧代-1-苯基-1，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸將制備例1-9)的化合物(240mg，0.524mmo1)溶解于二氯甲烷(4ml)，在0。C向其中加入三氟乙酸(2ml)，將反應(yīng)混合物攪拌l小時(shí)同時(shí)緩慢回溫到室溫，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色譜純化(10%甲醇-二氯甲烷)，得到標(biāo)題化合物(179mg，收率85%)。^一NMR(500MHz，DMSO-&)57.81(m，1H),7.46(m，3H)，7.39(m1H)，7.31(m，2H)，6.21(t，1H)，5.30-4.80(m，2H)，4.57-4.45(m，1H)，3.54(m，1H)，2.66-2.47(m，2H),2.17(s，3H)，2.05-1.68(m，2H)，0.74(m，3H)。制備例2-1)(l-千基-4-甲基-2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基)-乙酸曱酯向制備例l-5)中的化合物(544mg，3.0mmol)和NaH(60。/D，分散在實(shí)施例l)礦物油中，132mg，1.1eq)的混合物中加入DMF(5ml)，將混合物在O。C攪拌10分鐘，向其中加入芐基溴(O.36ml，l.Oeq)，將混合物在室溫下在氮?dú)庀聰嚢?小時(shí)，將反應(yīng)混合物減壓濃縮，殘余物用乙酸乙酯(100ml)萃取兩次，將萃取物用飽和碳酸氫鈉溶液(NaHC03，100mlx2)和氯化鈉水溶液洗滌，干燥(無(wú)水Na2S0j，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色傳純化(30-50%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(676mg，收率83%)。^一NMR(500MHz，CDC13)57.35-7.26(m，5H)，7.10(d，1H)，6.02(d，1H)，5.12(s，2H)，3.70(s，3H)，3.67(s，2H)，2.16(s，3H)。制備例2-2)2-(1-芐基-4-甲基-2-氧代-l,2-二氫-吡啶-3-基)-丁酸甲酯在氮?dú)庀聦⒅苽淅?-1)的化合物(271mg，1.Oramol)溶解于無(wú)水THF(6ml)，向其中加入1.0MLiHMDS/THF(1.1ml，1.1eq)，將混合物攪拌10分鐘同時(shí)保持溫度為-78。C，然后加入碘乙烷(O.21ml,1.5eq)并攪拌2小時(shí)，期間將混合物緩慢回溫到室溫，加入飽和乙酸銨溶液使反應(yīng)停止，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(50mlx2)萃取，用氯化鈉水溶液(100ml)洗滌，干燥(無(wú)水Na2S(h)，減壓濃縮，并通過(guò)柱色語(yǔ)純化(40-50%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(142mg，收率47%)。力-NMR(500MHz，CDC13)57.34-7.22(m，5H)，7.06(d，1H)，5.98(d，1H)，5.18-5.Ol(ABq，2H)，3.72(dd，1H)，3.63(s，3H)，2.24(m，1H)，2.17(s，3H)，1.85(m，1H),0.88(t，3H)。制備例2-3)2-(1-芐基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酸將制備例2-2)的化合物(140mg，0.468mmol)溶解于溶劑混合物(10ml，四氫^^喃MeOH:H20=3:2:1)，加入1NLiOH.H20(1.4ml，3.0eq)，將混合物加熱和攪拌約5小時(shí)，將反應(yīng)混合物用1N鹽酸水溶液中和，并減壓蒸餾以除去大部分四氫呋喃，殘余物溶解于過(guò)量的乙酸乙25酯(50ml),用氯化鈉水溶液洗滌，干燥(無(wú)水Na2S(X),并減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物(134mg，收率100°/。)。該化合物無(wú)需進(jìn)一步純化即可直接用于后續(xù)反應(yīng)。'H-NMR(500MHz，CDC13)57.34-7.21(m，6H)，6.26(d，1H)，5.24-5.14(ABq，2H)，3.79(t，1H)，2.29(s，3H)，2.27(m，1H)，2.OO(m，1H)，0.92(t，3H)。制備例2-4)3-[2-(1-千基-4-曱基-2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁基酯將制備例2-3)中獲得的羧酸衍生物(133mg，0.468mmo1)、3-氨基-5-氟-4-幾基-戊酸叔丁基酯(參見(jiàn)re^ra力ecTro/Ze"ers，1994，加2),9693-9696，116mg，1.2eq)和HATU(213mg，1.2eq)的混合物冷卻到0。C，向其中加入三乙胺(O.26ml，4.0eq)的DMF溶劑(5ml)，將混合物在室溫下反應(yīng)2小時(shí)，溶劑被減壓蒸餾，殘余物用乙酸乙酯(30mlx2)萃取，用水、碳酸氫鈉水溶液和氯化鈉水溶液洗滌，干燥(無(wú)水Na2S0,),并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色譜純化(40-60%乙酸乙酯-己烷)，得到3-[2-(l-芐基-4-曱基-2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-5-氟-4-羥基-戊酸叔丁基酯(140mg，收率63%)。向該化合物和Dess-Martin試劑(184mg，1.5eq)中加入無(wú)水二氯甲烷(4ml)，將混合物在室溫下攪拌l小時(shí)，加入異丙醇(lml)使反應(yīng)停止，反應(yīng)混合物在減壓下通過(guò)硅藻土過(guò)濾以除去固體，用乙酸乙酯(20mlx2)萃取，將萃取物用水、飽和碳酸氫鈉溶液和氯化鈉水溶液洗滌，干燥(無(wú)7]CNa2S04)，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色鐠純化(30-40%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(110mg，收率81%)。'H-NMR(500MHz,CDC13)58.40(兩個(gè)brs，1H)，7.36-7.22(m，5H)，7.15(t，1H)，6.08(m，1H)，5.23—4.82(m，4H)，4.75(m，1H)，3.75(m，1H)，2.88-2.60(m，2H)，2.28&2.27(兩個(gè)s，3H)，2.28-2.04(m，2H)，1.41&1.38(兩個(gè)s，9H)，0.87(m，3H)。3-[2-(1-爺基-4-甲基-2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸將制備例2-4)的化合物(100mg，0.212mmo1)溶解于二氯甲烷(4ml)，在0。C向其中加入三氟乙酸(2ml),將反應(yīng)混合物攪拌l小時(shí)，同時(shí)緩慢回溫到室溫，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色譜純化(10%甲醇-二氯甲烷)，得到標(biāo)題化合物(60mg，收率68%，白色粉末)。'H-NMR(500MHz，DMS0-&)512.40(brs，1H)，7.74(m，1H)，7.56(t，1H),7.26-7.21(m，5H)，6.14(d，1H)，5.30-4.65(m，2H)，5.16(m，1H)，4.91(m，1H)，4.50-4.38(m，1H)，3.50(m，1H)，2.64-2.40(m，2H)，2.13(s，3H),2.04-1.69(m，2H)，0.69(m，3H)。制備例3-1)(4-甲基-2-氧代-1-苯乙基-1，2-二氫-吡啶-3-基)-乙酸甲酯向制備例l-5)的化合物(544mg，3.0mmol)和NaH(60。/。，分散在礦物油中，132mg,1.1eq)的混合物中加入DMF(5ml)，將混合物在0。C攪拌10分鐘，向其中加入苯乙基溴(O.45ml，l.leq)，將混合物在室溫下在氮?dú)庀聰嚢?小時(shí)，將反應(yīng)混合物減壓濃縮，殘余物用乙酸乙酯(100ml)萃取兩次，將萃取物用飽和碳酸氫鈉溶液(NaHC03，100mlx2)和氯化鈉水溶液洗滌，千燥(無(wú)水Na2S0J，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色i普純化(30-50%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(4Hmg，收率48%)。力-NMR(500MHz，CDCh)57.28-7,14(m，5H)，6.79(d，1H)，5.89(d,1H),4.09"，3H)，3.71(s，3H)，3.67(s，2H)，3.03(t，3H)，2.15(s，3H)。27制備例3-2)2-(4-甲基-2-氧代-1-苯乙基-1，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酸曱酯在氮?dú)庀聦⒅苽淅?-1)的化合物(405mg，1.Wmmol)溶解于無(wú)水THF(6ml)，向其中加入l,OMLiHMDS/THF(1.70ml，1.2eq)并攪拌10分鐘，同時(shí)使反應(yīng)混合物保持在-78。C，然后加入碘乙烷(O.17ml，l.5eq)并攪拌2小時(shí)，期間將混合物緩慢回溫到室溫，加入飽和乙酸銨溶液使反應(yīng)停止，將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(5Gralx2)萃取，用氯化鈉水溶液(10Gml)洗滌，干燥(無(wú)水Na2S04)，減壓濃縮，并通過(guò)柱色譜純化(30-40%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(320mg，收率72%)。^一NMR(400MHz，CDC13)57.28-7.19(m，5H)，6.74(d，1H)，5.84(d，1H)，4.13-4.06(m，2H)，3.74(m，1H)，3.68(s，3H)，3.02(t，2H),2.25(m，1H)，2.16(s，3H)，1.85(m，1H),0.89(t，3H)。制備例3-3)5-氟-3-[2-(4-曱基-2-氧代-l-苯乙基-1，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸叔丁基酯將制備例3-2)的化合物(313mg，1.0mmol)根據(jù)與制備例2-3)相同的方法被水解，得到羧酸衍生物(296mg，99%)。將由此獲得的羧酸衍生物(290mg，0.97mmo1)、3-氨基-5-氟-4-羥基-戊酸叔丁基酯(參見(jiàn)7WraAe&o"e"ers，1994，JJ(52)，9693-9696，270mg，1.3eq)和HATU(456mg，1.2eq)的混合物冷卻到0°C，向其中加入三乙胺(0.56ml,4.0eq)的DMF溶劑(5ml),將混合物反應(yīng)l天，溶劑被減壓蒸餾，殘余物用乙酸乙酯(30mlx2)萃取，用水、碳酸氫鈉水溶液和氯化鈉水溶液洗滌，干燥(無(wú)水Na2S0j，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色鐠純化(50-70%乙酸乙酯-己烷)，得到5-氟-4-羥基-3-[2-(4-甲基-2-氧代-l-苯乙基-l，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-戊酸叔丁基酯(232rag，49%)。向該化合物和Dess-Martin試劑(300mg，1.5eq)中力口入無(wú)7JC二氯甲烷(4ml),將混合物在室溫下攪拌l小時(shí)，加入異丙醇(lml)使反應(yīng)停止，將反應(yīng)混合物在減壓下通過(guò)硅藻土過(guò)濾以除去固體，用乙酸乙酯(20mlx2)萃取，將萃取物用水、飽和碳酸氫鈉溶液和氯化鈉水溶液洗滌，干燥(無(wú)水Na2S0j，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色譜純化(40-50%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(170mg，收率74%)。^-NMR(500MHz，CDCU58.52&8.37(兩個(gè)brs，1H)，7.28-7.20(m，3H)，7.ll(t，2H)，6.77(兩個(gè)d，1H)，5.92(m，1H)，5.26-4.93(m,2H)，4.79(m，1H)，4.18—4.05(m，2H)，3.75(m，1H)，3.08-2.98(m，2H)，2.93-2.66(m，2H)，2.25&2.24(兩個(gè)s，3H)，2.28-2.06(m，2H)，1.42&1.39(兩個(gè)s，9H)，0.87(m，3H)。實(shí)施例3)5-氟-3-[2-(4-甲基-2-氧代-1-苯乙基-l，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸將制備例3-3)的化合物(165mg，0.339mmo1)溶解于二氯曱烷(4ml)，在0。C向其中加入三氟乙酸(2ml)，將反應(yīng)混合物攪拌l小時(shí)，同時(shí)緩慢回溫到室溫，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色譜純化(80%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(135mg，收率92%，白色粉末)。力-腿(50醒z，DMS(W》512.31(brs，1H)，7.85—7.75(dd，1H)，7.31(m，1H)，7.24(m，2H)，7,18-7.14(m，3H)，6.02(t，1H),5.40-4.97(m，2H)，4.58-4.42(m，1H),4.07(ra，1H)，3.98(m，1H)，3.48(m，1H)，2.87(m，2H)，2.72(m,1H)，2.43(m，1H)，2.ll(m，3H)，2.01-1.73(m，2H)，0.69(m，3H)。制備例4-1)(1-異丁基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氫-吡啶-3-基)-乙酸甲酯向制備例l-5)的化合物(362mg，2.0mmol)和Cs2C03(977ing，1.5eq)的混合物中加入DMF(6ml)和異丁基溴(0.28ml，1.3eq),將混合物在60x:在氮?dú)庀聰嚢鑙天，反應(yīng)混合物經(jīng)減壓濃縮，殘余物用乙酸乙酯(100ml)萃取兩次。萃取物用飽和碳酸氫鈉溶液(NaHC03，100mlx2)和氯化鈉水溶液洗滌，干燥(無(wú)水Na2S0J，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色語(yǔ)純化(30-50%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(224mg，收率47%)。力-NMR(500MHz，CDC13)57.04(d，1H),6.OO(d，1H)，3.69(d，2H)，3.68(s，3H)，3.63(s，2H)，2.16(s，3H)，0.91(d，6H)。制備例4-2)2-(1-異丁基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氫-吡啶-3-基)-丁酸曱酯在氮?dú)庀聦⒅苽淅?-l)的化合物(217mg，0.916mmol)溶解于無(wú)水THF(IOml)，向其中加入1.0MLi,S/THF(1.10ml，1.2eq)并攪拌10分鐘，同時(shí)保持該反應(yīng)混合物在-78。C。然后加入碘乙烷(O.llml，1.5eq)并攪拌2小時(shí)，期間將混合物緩慢回溫到室溫，加入飽和乙酸銨溶液使反應(yīng)停止，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(50mlx2)萃取，用氯化鈉水溶液(100ml)洗滌，干燥(無(wú)水Na2S04),減壓濃縮，并通過(guò)柱色鐠純化(30-40%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(180mg，收率74%)。^一NMR(500MHz，CDC13)57.01(d，1H)，5.96(d，1H)，3.72-3.66(m，3H)，3.63(s，3H)，2.21(m，1H)，2.17(s，3H)，2.12(m，lH)，1.84(m，1H)，0.90-0.84(m，9H)。制備例4-3)5-氟-3-[2-(1-異丁基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸叔丁基酯將制備例4-2)的化合物(180mg，0.679mmol)根據(jù)與制備例3-3)相同的步驟反應(yīng)，得到標(biāo)題化合物(149rag，收率50%)。力-腿(500MHz，CDC13)58.49&8.44(兩個(gè)brs，1H)，7.07(m，1H)，6.06(m，1H),5.28-4.88(m，2H)，4.76(m,1H)，3.72(m，3H)，2.89-2.62(m，2H)，2.27(m，3H),2.26-2.06(m，3H)，1.42&301.38(兩個(gè)s，9H)，0.90(m，6H)，0.87(m，3H)。實(shí)施例4)5-氟-3-[2-(1-異丁基-4-甲基-2-氧代-1，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-4-氧代-戊酸將制備例4-3)的化合物(143mg，0.326mraol)溶解于二氯甲烷(4ml)，在(TC向其中加入三氟乙酸(2ml)，將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，同時(shí)緩慢回溫到室溫，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色譜純化(80%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(121mg，收率97%，白色粉末)。工H-NMR(500MHz，DMS(W》512.27(brs，1H)，7.81—7.72(dd，1H)，7.43(m，1H)，6.08(m，1H)，5.33—4.91&4.65-4.28(m，3H)，3.71(m，1H)，3.54-3.46(m，2H)，2.70(m，1H)，2.40(m，1H)，2.12(s，3H)，1.99-1.71(m，2H)，0.78(s，6H)，0.67(s，3H)。制備例5-1)(2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基)-乙酸甲酯將通過(guò)/.j邁er.C/e瓜Soc,1959，H，p740中的已知方法獲得的(2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基)-乙酸(1.51g，9.85mmol)溶解于MeOH(20ml),向其中加入濃HC1，將混合物回流1小時(shí)，再將反應(yīng)混合物減壓蒸餾，得到1.65g的標(biāo)題化合物，為化學(xué)計(jì)量的收率。^-NMR(500MHz，CDC13)512.86(brs，1H)，7.42(d，1H)，7.32(dd，1H)，6.26(t，1H),3.71(s，3H)，3.56(s，2H)。制備例5-2)(l-千基-2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基)-乙酸曱酯向制備例5-l)的化合物(303mg，1.81mmol)和Cs2C03(900mg，1.531eq)的混合物中加入DMF(4ml)和千基溴(0.28ml，1.3eq)，將混合物在60。C在氮?dú)庀聰嚢?天，將反應(yīng)混合物減壓濃縮，殘余物用乙酸乙酯(100ml)萃取兩次。萃取物用飽和碳酸氬鈉溶液(NaHC03，100mlx2)和氯化鈉水溶液洗滌，干燥(無(wú)水Na2S0j，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色諳純化(30-50%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(360mg，收率77%)。力-NMR(50固Hz，CDC13)57.35-7.25(m，6H),7.22(d，1H)，6.13(t，1H)，5.14(s，2H)，3.71(s，3H)，3.57(s，2H)。制備例5-3)2-(1-芐基-2-氧代-1，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酸甲酯在氮?dú)庀聦⒅苽淅?-2)的化合物(80mg，0.311咖ol)溶解于無(wú)水THF(4ml)，向其中加入l.OMLiHMDS/THF(0.40ml，1.2eq)并攪拌10分鐘，同時(shí)反應(yīng)混合物被保持在-78。C，然后加入碘乙烷(O.04ml，1.5eq)并攪拌2小時(shí)，期間將混合物緩慢回溫到室溫，加入飽和乙酸銨溶液使反應(yīng)停止，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(50mlx2)萃取，用氯化鈉水溶液(100ml)洗滌，千燥(無(wú)水Na2S04)，減壓濃縮，并通過(guò)柱色譜純化(30-40%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(33mg，收率37%)。力-NMR(500MHz，CDCU57.45-7.22(m，6H)，7.15(m，1H)，6.14(t，1H)，5.21-5.07(ABq，2H)，3.90(t，1H)，3.68(s，3H)，2.00-1.76(m，2H)，0.94(t，3H)。制備例5-4)3-[2-(l-節(jié)基-2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁基酯將制備例5-3)的化合物(33rag，0.116mmo1)根據(jù)與制備例3-3)的相同操作反應(yīng)，得到標(biāo)題化合物(42mg，收率79%)。^-NMR(500MHz，CDC13)57.89&7，82(兩個(gè)brd，1H),7.35-7.22(m，7H)，6.24(m，1H)，5.28-4.65(m，5H)，3.75(m，1H)，2.91-2.58(m，2H)，2.18(m，1H)，L72(m，1H)，1.41&1.39(兩個(gè)s，9H)，0.94(m，3H)。實(shí)施例5)3-[2-(1-千基-2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基)-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸將制備例5-4)的化合物(42mg,0.092mmol)溶解于二氯曱烷(4ml)，在0。C向其中加三氟乙酸(2ml)，將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，同時(shí)緩慢回溫到室溫，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)制備型色譜純化(10%甲醇/二氯甲烷)，得到標(biāo)題化合物(30mg,收率81%，白色粉末)。^-NMR(500MHz，DMSO-^)512.40(brs，1H)，8.48(brs，1H)，7.69(m，1H)，7.34(m，1H),7.28-7.23(m，5H)，6.23(m，1H)，5.30-4.76(m，2H)，5.08(m,2H)，4.56-4.45(m，1H)，3.57(m，1H)，2.62-2.32(m，2H)，1.72-1.56(m，2H)，0.80(m，3H)。制備例6-1)2-(1-芐基-2-氧代-1，2-二氫-吡啶-3-基)-3-曱基-丁酸甲酯在氮?dú)庀聦⒅苽淅?-2)(174mg，0.676ramo1)的化合物溶解于無(wú)水THF(IOml)，向其中加入l.0MLi,S/THF(1.00ml，1.5eq)并攪拌10分鐘，同時(shí)反應(yīng)混合物被保持在-78X:，然后加入2-碘丙烷(O.12ml,1.8eq)并攪拌O.5小時(shí)，期間將混合物緩慢回溫到-50°C，再回溫到ox:保持i.5小時(shí)，加入飽和乙酸銨溶液使反應(yīng)停止，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(50mlx2)萃取，用氯化鈉水溶液(IOOml)洗滌，干燥(無(wú)水Na2S04),減壓濃縮，并通過(guò)柱色鐠純化(25-30%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(95mg,收率47%)。'H-NMR(500MHz，CDCh)57.50(d，1H)，7.35-7.25(m，5H)，7.17(d，1H),6.15(t,1H)，5.20-5.09(ABq，2H)，3.96(d，1H)，3.65(s，3H),2.22(m，1H)，1.02(d，3H)，0.84(d，3H)。制備例6-2)3-[2-(1-節(jié)基-2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基)-3-曱基-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁基酯將制備例6-1)的化合物(95mg，0.317mmol)根據(jù)與制備例3-3)相同的過(guò)程反應(yīng)，得到標(biāo)題化合物(14mg，收率97%)。'H-NMR(500MHz，CDC13)57.94&7.81(兩個(gè)brs，1H)，7.38-7.25(m，7H)，6.23(m，1H)，5.24-4.66(m，5H)，3.40(兩個(gè)d，1H)，2.86-2.58(m，H)，2.55(ra，1H),1.41&1.40(兩個(gè)s，9H),1.04(兩個(gè)d，3H)，0.78(d，3H)。實(shí)施例6)3-[2-(1-千基-2-氧代-1,2-二氫-吡啶-3-基)-3-曱基-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸將制備例6-2)(132mg，0.279mmol)的化合物溶解于二氯甲烷(4ml)，在Q。C向其中加入三氟乙酸(2ml)，將反應(yīng)混合物攪袢l小時(shí)，同時(shí)緩慢回溫到室溫，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色譜純化(60%乙酸乙酯/己烷，和10%甲醇/二氯曱烷)，得到標(biāo)題化合物(94mg，收率81%，白色粉末)。H-NMR(500MHz，DMS0-^)512.40(brs，1H)，8.63-8.52(dd,1H)，7.66(m，1H)，7.49(m，1H)，7.27-7.21(m，5H)，6.23(m,1H)，5.21-4.86(m,4H)，4.59-4.43(m，1H)，3.54(m，1H)，2.72-2.41(m，2H),2.10(m，1H)，0.88(m，3H)，0.69(m，3H)。34制備例7-1)2-(1-芐基-2-氧代-l，2-二氫-吡啶-3-基)-戊酸甲酯在氮?dú)庀聦⒅苽淅?-2)的化合物(183mg，0.711腿o1)溶解于無(wú)水THF(IOml)，向其中加入1.0MLiHMDS/THF(0.92ml，1.3eq)并攪拌10分鐘，同時(shí)反應(yīng)混合物被保持在-78°C，然后加入碘代正丙烷(O.10ml，1.5eq)并攪拌2小時(shí)，期間將混合物緩慢回溫到室溫，加入飽和乙酸銨溶液使反應(yīng)停止，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(50mlx2)萃取，用氯化鈉水溶液(lQQml)洗滌，干燥(無(wú)水Na2S0j,減壓濃縮，并通過(guò)柱色譜純化(30%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(133mg，收率62°/。)。^-NMR(500MHz，CDC13)57.36-7.27(m，6H)，7.18(dd，1H)，6.14(t，1H)，5.21-5.08(ABq，2H)，3.99(t，1H)，3.67(s，3H)，1.94(m，1H)，1.73(m，1H)，1.35(m，2H)，0.92(t，3H)。制備例7-2)3-[2-(1-節(jié)基-2-氧代-1，2-二氫-吡啶-3-基)-戊酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁基酯將制備例7-l)的化合物(130mg，0.434mmol)根據(jù)與制備例3-3)相同的步驟反應(yīng)，得到標(biāo)題化合物(110mg，收率54%)。力-NMR(500MHz，CDCh)57.88&7.82(兩個(gè)d，1H)，7.34-7.24(m，7H)，6.23(m，1H),5.24-4.64(m，5H)，3.84(m，1H)，2.89-2.56(m，2H)，2.13(m，1H)，1.64(ra，1H)，1.41&1.38(兩個(gè)s，9H)，0.92(m，3H)。實(shí)施例7)3-[2-(1-節(jié)基-2-氧代-1，2-二氫-吡啶-3-基)-戊酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸將制備例7-2)的化合物(110mg，0.233mmol)溶解于二氯曱烷(4ml)，在(TC向其中加入三氟乙酸(2ml),將反應(yīng)混合物攪拌l小時(shí)，同時(shí)緩慢回溫到室溫，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色譜純化(10%曱醇/二氯曱烷)，得到標(biāo)題化合物(58mg，收率60%,白色粉末)。^一NMR(500MHz，DMSO-^)58.44(brs，1H)，7.68(m，1H)，7.35(m，1H)，7.30-7.23(m,5H)，6.23(q，1H)，5.22-4.66(m，2H)，5.12-5.03(m，2H)，4.55-4.45(m，1H)，3.67(m，1H)，2.62(m，2H)，1.71-1.50(m，2H)，1.20(m，2H),0.82(m，3H)。制備例8-1)l-溴曱基-2-叔丁基-苯向l-叔丁基-2-甲基-苯(940mg，6.34mmo1)、NBS(1.24g，1.1eq)和AIBN(20mg，催化量)中加入CCh(12ml)，將混合物回流l小時(shí)，通過(guò)過(guò)濾除去混懸的粒子，用CClr洗滌，合并的有機(jī)層經(jīng)減壓濃縮，得到1.5g的黃色液體，為化學(xué)計(jì)量的收率。^-NMR(500MHz，CDC13)57.46(m，1H)，7.38(m，1H)，7.22-7.21(m，2H)，4.83(s,2H)，1.46(s，9H)。制備例8-2)-乙酸甲酯向制備例5-l)的化合物(177mg，0.598mmol)和Cs2C03(292mg，1.5eq)的混合物中加入DMF(6ml)和在制備例8-1)中獲得的1-溴曱基-2-叔丁基-苯(177mg，1.3eq)，將混合物在60。C在氮?dú)庀聰嚢?小時(shí)，將反應(yīng)混合物減壓濃縮，殘余物用乙酸乙酯(IOOml)萃取兩次。萃取物用飽和碳酸氫鈉溶液(NaHC03，100mlx2)和氯化鈉水溶液洗滌，干燥(無(wú)水Na2S(U，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)柱色譜純化(15-50%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(122mg，收率65%)。力-NMR(500MHz，CDC13)57.46(d，1H)，7.33(d，1H)，7.25(t，1H)，7.16(t，1H)，6.97(d，1H)，6.90(d，1H)，6.11(t，1H)，5.42(s，2H)，3.73(s，3H)，3.61(s，2H)，1，43(s，9H)。制備例8-3)2-[1-(2-叔丁基-爺基)-2-氧代-1，2-二氫-吡啶-3-基]-丁酸曱酯在氮?dú)庀聦⒅苽淅?-2)的化合物(120mg，0.383mmol)溶解于無(wú)水THF(IOml),向其中加入1.0MLiHMDS/THF(0.50ml,1.2eq)并攪拌10分鐘，同時(shí)反應(yīng)混合物被保持在-78。C，然后加入碘乙烷(O.05ml，1.5eq)并攪拌2小時(shí)，期間將混合物緩慢回溫到室溫，加入飽和乙酸銨溶液使反應(yīng)停止，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(50ralx2)萃取，用氯化鈉水溶液(100ml)洗滌，干燥(無(wú)水Na2S0j，減壓濃縮，并通過(guò)柱色譜純化(25-30%乙酸乙酯-己烷)，得到標(biāo)題化合物(50mg，收率38%)。力-醒R(500MHz，CDCU57.46(d，1H),7.36(d，1H)，7.25(t，1H)，7.16(t，1H)，6.93(d，1H)，6.88(d，1H)，6.12(t，1H)，5.48-5.34(ABq，2H)，3.95(t，1H)，3.63(s，3H)，2.OO(m，1H)，1.83(m，1H)，1，42(s，9H)，0.95(t，3H)。制備例8-4)3-{2-[1-(2-叔丁基-節(jié)基)-2-氧代-1，2-二氫-吡啶-3-基]-丁酰氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁基酯將制備例8-3)的化合物(50mg，0.146mmol)根據(jù)與制備例3-3)相同的步驟反應(yīng)，得到標(biāo)題化合物(S6mg,收率76%)。H-NMR(500MHz，CDC13)57.89&7.80(兩個(gè)d，1H),7.47(d，1H)7.37(m，1H)，7.25(t，1H)，7.16(m，1H)，7.01(t，1H)，6.82(兩個(gè)d，1H)，6.22(m，1H)，5.48-5.36(m，2H),5.24—4.68(m，3H),3.77(m，1H)，2.92-2.60(m，2H)，2.18(m，1H)，1.74(m，1H)，1，43(兩個(gè)s，9H)1.41&1.37(兩個(gè)s，9H)，0.95(m，3H)。實(shí)施例8)3-{2-[1-(2-叔丁基-千基)-2-氧代-1，2-二氫-吡啶-3-基]-丁酰氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸37o將制備例8-4)的化合物(56mg，0.110mmol)溶解于二氯曱烷(2ml)，在0。C向其中加入三氟乙酸(1ml)，將反應(yīng)混合物攪拌l小時(shí)，同時(shí)緩慢回溫到室溫，并減壓濃縮，將殘余物通過(guò)制備型色譜(10%甲醇/二氯曱烷)純化，得到標(biāo)題化合物(40mg，收率80%，白色粉末)。^-NMR(500MHz，DMSO-&)58.42(brs，1H)，7.52(m，1H)，7.43(t，1H)，7.37(d，1H)，7.15(t，1H)，7.07(m，1H)，6.56(d，1H)，6.29(m，1H),5.33(m，2H)，5.22-4.66(m，2H)，4.56-4.45(m，1H)，3.57(m，1H)，2.61-2.46(m，2H)，1.75-1.56(m，2H)，1.40(s，9H)，0.79(m，3H)。試驗(yàn)例1半胱天冬酶抑制效果的試驗(yàn)通過(guò)改進(jìn)Thornberry，N.A.等人，Nature,1992，356，768;Thornberry，N.A.MethodsinEnzymology，1994，244，615;Walker,N.P.C.等人，Cell,1994，78，343中的已知方法來(lái)表達(dá)、純化和活化了已知作為0C2P2形式的半胱氨酸蛋白酶的半胱天冬酶-1和半胱天冬酶-8，還通過(guò)類似方法純化了半胱天冬酶-9，并檢測(cè)了對(duì)它們的抑制活性。簡(jiǎn)而言之，將p10和p20亞單位(Thornberry,N.A.等人，Nature,1992,356，768)在大腸桿菌co//)中表達(dá)并通過(guò)鎳柱和陰離子交換色譜法純化，得到半胱天冬酶-1、半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9。對(duì)于如此獲得的半胱天冬酶-l使用熒光底物AcYVAD-AFC，對(duì)于如此獲得的半胱天冬酶-8使用熒光底物AcDEVD-AFC，對(duì)于如此獲得的半胱天冬酶-9使用熒光底物AcLEHD-AFC，用來(lái)測(cè)定所合成的抑制劑的比活度。酶反應(yīng)在25"C下與各種濃度的抑制劑在包含50mMHEPES(pH7.50)、10。/。(w/v)蔗糖、0.l%(w/v)CHAPS、lOOraM50pMAcYVAD-AFC存在的條件下，對(duì)于2.lnM半胱天冬酶-8在50|uMAcDEVD-AFC存在的條件下，以及對(duì)于200nM半胱天冬酶-9在150|aMAcLEHD-AFC存在的條件下進(jìn)行。抑制劑的抑制常數(shù)Ki和K。^通過(guò)采用熒光光度計(jì)測(cè)量隨時(shí)間推移的反應(yīng)速率并通過(guò)獲得初始速率常數(shù)來(lái)進(jìn)行測(cè)定。Ki從LineweaverBurk曲線計(jì)算，K。&從以下公式1計(jì)算。[公式l〗K。bs--ln(H,/D/t其中At表示在時(shí)間t的裂解(cleavage)速率(％)，A。。表示最大裂解速率CO。在405nm的激發(fā)波長(zhǎng)和505nm的發(fā)射波長(zhǎng)處使用MolecularDevice/>司制的SpectraMAXGeminiXS焚光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。抑制劑的體內(nèi)抑制活性如下測(cè)定釆用Fas抗體(UpstateBiotech05-201)誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞(ATCCTIB-152)凋亡，當(dāng)使用沖中制齊'J處理該Jurkat細(xì)月包時(shí)，才艮據(jù)FrancoeurA.M.和AssalianA.(1996)Biochemica3，19-25中已知的WST-1方法檢測(cè)顏色改變，來(lái)觀察存活的Jurkat細(xì)胞數(shù)量。在440nm的吸收波長(zhǎng)處采用MolecularDevice公司制的SpectraMAX340光謙4義進(jìn)行測(cè)定。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>試驗(yàn)例2在小鼠中對(duì)由Fas抗體誘導(dǎo)的肝損傷的治療效果步驟i)血樣的制備將雄性Balb/c小鼠(6周齡，CharlesRiverLaboratory,Osaka,曰本)保持在22。C、55。/。的相對(duì)濕度和12小時(shí)光照-黑暗循環(huán)的條件下。隨意供給食物和水。在無(wú)熱原的磷酸鹽緩沖液中溶解Fas抗體(Jo2;BDpharmingen，SanDiego，California),然后將其以0.15mg/kg的量通過(guò)尾靜脈注射到每只小鼠中。在注射Fas抗體后，立刻給小鼠口服其中溶解有供試化合物的載體(將PEG400:乙醇=2:1的混合物用磷酸鹽緩沖液稀釋20倍)或單獨(dú)的載體，在給藥6小時(shí)后，從這些小鼠的心臟獲得血樣。步驟2:血漿轉(zhuǎn)氨酶的活性的試驗(yàn)Y吏用ALT測(cè)試盒(AsanPharm.Co.,Seoul,韓國(guó))根據(jù)廠商說(shuō)明書測(cè)定在步驟1中獲得的血樣的血漿ALT活性。結(jié)果顯示注射Fas抗體顯著增加了血漿的ALT活性，并且供試化合物以劑量依賴性方式抑制了增加的酶活性?；谶@些結(jié)果，采用GraphPad公司的Prism軟件計(jì)算了供試化合物的EDs。值，為0.001-10mg/kg。產(chǎn)業(yè)實(shí)用性以上的試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的式(1)的化合物對(duì)半胱天冬酶具有優(yōu)異的抑制活性，特別是在由Fas抗體誘導(dǎo)的肝損傷的動(dòng)物模型中表現(xiàn)出治療效果。因此，式(l)的化合物可有利地被用來(lái)治療各種由半胱天冬酶介導(dǎo)的疾病和癥狀。權(quán)利要求1.式(1)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽[式1]其中I)R1表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-環(huán)烷基，芳基，或所有的天然氨基酸的側(cè)鏈殘基，II)R2表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-環(huán)烷基，芳基，或所有的天然氨基酸的側(cè)鏈殘基，III)R3表示H，C1-C5-烷基，羥基，C1-C5-烷氧基或鹵素，IV)R4表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-環(huán)烷基或芳基，V)R5表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-環(huán)烷基或芳基，VI)R6表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-環(huán)烷基或芳基，VII)R7和R8彼此獨(dú)立地表示H，C1-C5-烷基，C3-C10-環(huán)烷基或芳基，VIII)X表示-CH2OR9(R9是C1-C5-烷基，C3-C10-環(huán)烷基或芳基)，-CH2OC(＝O)R10(R10是C1-C5-烷基，C3-C10-環(huán)烷基或芳基)或-CH2-W(W是鹵素)。2.權(quán)利要求l的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中r表示未被取代的或被C「d。-環(huán)烷基或芳基取代的d-C廣烷基，C廣d。-環(huán)烷基或芳基各自是取代或未被取代的；或者表示取代或未被取代的芳基。3.權(quán)利要求2的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中R6表示未被取代的或被C廠d。-環(huán)烷基或芳基取代的d-Cs-烷基，C3-d。-環(huán)烷基或芳基是未被取代的或被一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代基取代d-C5-烷基、羥基、d-C「烷氧基和囟素；或者表示芳基，其是未被取代的或被一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代基取代d-Cs-烷基、羥基、C廣C廣烷氧基和卣素。4.權(quán)利要求l的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中I)f表示所有的天然氨基酸的側(cè)鏈殘基，n)R2表示c「c「烷基，m)R3表示H、C廣Cs-烷基、d-C5-烷氧基或囟素，IV)R4表示H，v)rs表示h，vi)rs表示未被取代的或被c3-c！。-環(huán)烷基或芳基取代的c-C5-烷基，Cfd。-環(huán)烷基或芳基各自是未被取代的或被一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代基取代d-C廣烷基、羥基、d-(V-烷氧基和卣素；或者表示芳基，其是未被取代的或被一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代基取代C廣C廣烷基、羥基、d-C5-烷氧基和鹵素，VII)W和118彼此獨(dú)立地表示H，VIH)X表示-CH2OR9(R9是d-Cs-烷基、C3-d。-環(huán)烷基或芳基)、-CH20C(-0)R，R1。是d-C5-烷基、C廠d。-環(huán)烷基或芳基)或-CH廣W(W是囟素)。5.權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽，其中i)r'表示-CH2C00H，n)W表示c廣c廣烷基，m)R3表示H、C廣C廠烷基、C廣Cs-烷氧基或鹵素，iv)r4表示h，v)r5表示h，VI)R6表示未被取代的或被C3-d。-環(huán)烷基或芳基取代的d-C廣烷基，C3-d。-環(huán)烷基或芳基各自是未被取代的或被一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代基取代C廣C廣烷基、羥基、d-Cs-烷氧基和卣素；或者表示芳基，其是未被取代的或被一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代基取代C,-Cs-烷基、羥基、C廠Cs-烷氧基和鹵素，VII)117和118彼此獨(dú)立地表示H，VIII)X表示-CH20-(2，3，5,6-四氟苯基)、-CH20-(2，6-二氯苯甲?；?或-CH廣F。6.3-{2-[1-(2-叔丁基-千基)-2-氧代-1，2-二氫-吡啶-3-基]-丁酰氨基)-5-氟-4-氧代-戊酸。7.用于抑制半胱天冬酶的藥物組合物，其包括權(quán)利要求l-6中任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽作為活性成分以及藥學(xué)可接受的載體。8.權(quán)利要求7的組合物，用于預(yù)防炎癥和細(xì)胞凋亡。9.權(quán)利要求7的組合物，用于治療或預(yù)防癡呆、腦中風(fēng)、由AIDS引起的腦損傷、糖尿病、胃潰瘍、由肝炎引起的腦損傷、肝炎誘導(dǎo)的肝臟疾病、急性肝炎、暴發(fā)性肝衰竭、膿毒病、器官移植排斥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、由缺血性心臟病導(dǎo)致的心臟細(xì)胞凋亡、或肝硬化。10.權(quán)利要求7的組合物，用于治療急性肝炎或肝硬化。11.權(quán)利要求7的組合物，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。12.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽用于抑制半胱天冬酶的用途。13.預(yù)防患者的炎癥和細(xì)胞凋亡的方法，該方法包括對(duì)患者給予治療有效量的權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。14.治療或預(yù)防患者的以下疾病的方法癡呆、腦中風(fēng)、由AIDS引起的腦損傷、糖尿病、胃潰瘍、由肝炎引起的腦損傷、肝炎誘導(dǎo)的肝臟疾病、急性肝炎、暴發(fā)性肝衰竭、膿毒病、器官移植排斥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、由缺血性心臟病導(dǎo)致的心臟細(xì)胞調(diào)亡、或肝硬化，該方法包括對(duì)患者給予治療有效量的權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。全文摘要本發(fā)明涉及可用作半胱天冬酶抑制劑的吡啶酮衍生物，制備該吡啶酮衍生物的方法，和包含該吡啶酮衍生物的用于抑制半胱天冬酶的藥物組合物。文檔編號(hào)A61K31/44GK101558041SQ200780043915公開(kāi)日2009年10月14日申請(qǐng)日期2007年10月26日優(yōu)先權(quán)日2006年11月9日發(fā)明者吳英秀,張容溱,張惠卿,樸正圭,樸美貞,鄭哲雄,金圣燮,閔庚湜申請(qǐng)人:株式會(huì)社Lg生命科學(xué)