專利名稱：異柳珊瑚酸在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及倍半萜化合物異柳珊瑚酸(Isosubergorgic Acid)的用途，尤其涉及在制藥領(lǐng)域中的用途。
隨著世界人口平均壽命的提高，年齡相關(guān)性記憶缺損(AMMI)和阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease，簡稱AD)發(fā)病率上升，對其治療藥物的需求也日益增加；尤其是AD，一種臨床上常見的神經(jīng)退行性疾病(Neurodegenerative Disease)，它以記憶、認知及神經(jīng)功能的受損為主要特征，病情的發(fā)展可引起嚴重的癡呆甚至死亡。在西方65歲以上人群中，約有5％的人患此病，我國60歲以上人群患此病率達到3.46％-3.9％，這給患者、家庭、社會造成嚴重的負擔(dān)(據(jù)統(tǒng)計美國約有AD患者400萬人，每年照顧病人費用高達900億美元)；因此AD己經(jīng)成為當(dāng)前老年醫(yī)學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、藥物化學(xué)中極為關(guān)注的研究課題。
根據(jù)AD病因“膽堿能假說”，目前臨床應(yīng)用及處于臨床研究中的抗AD藥物主要是為了提高腦神經(jīng)中的乙酰膽堿(ACh)含量水平，恢復(fù)ACh神經(jīng)傳導(dǎo)，改善病人的記憶、認知和行為能力，延緩病情的發(fā)展。其中一類藥物是擬膽堿藥(Cholinomimetic drugs)，由于擬膽堿藥(乙酰膽堿酯酶抑制劑)有了明確的理論基礎(chǔ)，因此它是現(xiàn)有條件下藥物治療AD的主要手段。乙酰膽堿酯酶抑制劑是AD治療過程中使用最多、歷史最久的一類藥物。目前已發(fā)展到第二代乙酰膽堿酯酶抑制劑。
倍半萜化合物異柳珊瑚酸(3-羧基-4.5.9-三甲基-11-羰基三環(huán)[6.3.0.01，5]十一-2-烯)，其結(jié)構(gòu)式為[1]分子式為C15H20O3，無色針狀結(jié)晶，分子量為248，易溶于乙酸乙酯、三氯甲烷等有機溶劑。
該化合物可由海洋生物側(cè)扁軟柳珊瑚(SubergogiaSuberosa)，通過物理和化學(xué)的方法，用幾種途徑得無色針狀結(jié)晶物。已知該化合物可以用作乙酰膽堿酯酶復(fù)活劑。 本發(fā)明的目的在于提供倍半萜化合物異柳珊瑚酸的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。
本發(fā)明涉及倍半萜化合物異柳珊瑚酸作為乙酰膽堿酯酶抑制劑的應(yīng)用，具體涉及異柳珊瑚酸作為制備治療阿爾茨海默病的藥中的應(yīng)用。
為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下將用異柳珊瑚酸的藥理、藥效的試驗結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。
異柳珊瑚酸----Isosubergorgic Acid是作為乙酰膽堿酯酶抑制劑(擬膽堿藥)應(yīng)用，可提高腦神經(jīng)中的ACh水平，恢復(fù)ACh神經(jīng)傳導(dǎo)，改善病人的記憶、認知和行為能力，延緩病情的發(fā)展，尤其可用于阿爾茨海默病的治療；目前國內(nèi)外的擬膽堿藥(乙酰膽堿酯酶抑制劑)如他克林(Tacrine)、加蘭他敏(Galanthamine)、Aricept(donepezil,E2020)、石杉堿甲(HuperzineA)等等都是含氮化合物，本發(fā)明的化合物分子中無氮元素，是一種新型擬膽堿藥(乙酰膽堿酯酶抑制劑)；第二異柳珊瑚酸對人紅細胞的乙酰膽堿酯酶(AChE)有顯著選擇性的抑制作用(表二、五)，從而能提高腦神經(jīng)中的ACh水平，恢復(fù)ACh神經(jīng)傳導(dǎo)，改善病人的記憶、認知和行為能力，延緩病情的發(fā)展；異柳珊瑚酸對人血清丁酰膽堿酯酶(BuChE)無顯著抑制作用(表四)，而且是一個可逆性乙酰膽堿酯酶抑制劑(表三)；因此它不會象他克林(tacrine)，由于抑制假性膽堿酯酶(BuChE)而有副反應(yīng)；第三小鼠Y型迷宮實驗中，異柳珊瑚酸的記憶成績高于石杉堿甲(表一)，說明異柳珊瑚酸的療效要稍高于臨床藥物石杉堿甲；第四異柳珊瑚酸的LD50為68mg/Kg低于庚基毒扁豆堿(eptastigmine LD50為35mg/Kg)，更低于石杉堿甲(huperzine A)；第五異柳珊瑚酸分子呈球狀，在水和有機溶劑中都有一定的溶解度，因此可能通過血腦屏障，具有較好的選擇性及中樞作用。
可將異柳珊瑚酸溶于吐溫-80，或pH7.2磷酸鹽緩沖液(2/15mol/L磷酸氫二鈉溶液72ml與2/15mol/L磷酸二氫鉀溶液28ml混合)，供動物體內(nèi)外實驗用。
實施例1異柳珊瑚酸(Isosubergorgic Acid)的制備海洋生物側(cè)扁軟柳珊瑚(Subergogia Suberosa)經(jīng)過水洗、曬干、切碎、用95％乙醇浸泡。乙醇提取液減壓濃縮后用石油醚(60-90℃)萃取，除去石油醚得棕黑色稠狀物，經(jīng)硅膠(60-100目)柱層析，然后用不同比例石油醚和乙酸乙酯混合液沖洗，可得到草綠色固體；草綠色固體在0℃時用石油醚洗去色素，在乙酸乙酯中結(jié)晶，即異柳珊瑚酸(Isosubergorgic Acid)，含量是干柳珊瑚重的0.0033％。
實施例2異柳珊瑚酸(Isosubergorgic Acid)的物理性質(zhì)1.薄層色譜(硅膠):石油醚Rf=0.05石油醚∶乙酸乙酯=1∶1 Rf=0.52.熔點174-174.5℃3.旋光度-143。(c.0.7 CHCl3)4.溶解度(100克溶劑)乙酸乙醋7.2g石油醚0.7g5.穩(wěn)定性a在常溫下保持4年，或在150℃下保持二小時其化學(xué)性質(zhì)不變。
b在水、有機溶劑(乙醇.氯仿.乙醚……)中其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定實施例3異柳珊瑚酸的急性毒性LD50為68mg/Kg(腹腔注射)*劑量(mg/Kg)4048587084100死亡數(shù) 0 2 3 5 6 10死亡率 0 0.20 0.30 0.50 0.60 1.00
*小鼠腹腔注射異柳珊瑚酸，觀察毒性反應(yīng)，小鼠在給藥后3-5分鐘即相繼出流涎多汗、呼吸困難全身顫抖及驚厥等反應(yīng)。嚴重的10分左死亡，輕的在數(shù)小時之后恢復(fù)正常。
實施例4表一 異柳珊瑚酸和石杉堿甲的Y型迷宮實驗*藥物(mg/Kg) 動物數(shù) 學(xué)習(xí)成績 記憶成績對照組**--- 10 2.4±1.43 2.1±1.10石杉堿甲 0.1210 2.2±1.23 1.2±0.79異柳珊瑚酸1.0 10 2.2±1.23 1.0±0.82*小鼠(25g±2)，雌雄各半，以36V電壓刺激，測定小鼠學(xué)習(xí)成績(以連續(xù)二次正確為合格)，24小時后ip給藥，15分鐘后測定記憶成績。
**溶劑對照組，給予1％吐溫-80的生理鹽水實施例5表二 不同濃度的異柳珊瑚酸對人紅細胞AChE的抑制(百分數(shù)％)異柳珊瑚酸的濃度 抑制反應(yīng)時間(mg/L)30(min)60(min)90(min)120(min)0.2 40 32 29352.0 55 55 534420.0 91 88 8888*按Ellman氏方法(Biochemical Pharmacology,Vol.38,No.4 pp.633-640.1989)測定人紅細胞膽堿酯酶(AChE)活性，pH=7.0。
實施例6表三 異柳珊瑚酸對人紅細胞AChE的抑制作用(百分數(shù)％)異柳珊瑚酸的濃度 抑制反應(yīng)時間(mg/L)2(min)3(min)4(min)5(min)6(min)7(min)0.000221.4 22.7 16.422.6 14.5 14.8*按Ellman氏方法(Biochemical Pharmacology,Vol.38,No.4 pp.633-640.1989)測定人紅細胞膽堿酯酶(AChE)活性，pH=7.0。
實施例7表四 異柳珊瑚酸和敵敵畏對人血清BuChE的影響時間 對照組 敵敵畏 異柳珊瑚酸(0.005mg/L)(0.2mg/L)(2mg/L)(20mg/L)60(min)1 0.202±0.01 1.085±0.110 1.095±0.120 0.920±0.0790(min)1 0.163±0.01 0.959±0.085 0.963±0.100 0.959±0.08120(min) 1 0.134±0.01 1.063±0.099 1.079±0.960 0.921±0.0724(h) 1 0.053±0.005 0.957±0.083 1.031±0.100 1.031±0.09*按Ellman氏方法(Biochemical Pharmacology,Vol.38,No.4 pp.633-640.1989)測定人血清BuChE活性，pH=7.0。
實施例8表五 異柳珊瑚酸對SD鼠腦勻漿膽堿酯酶的抑制作用*腦勻漿體積(μl) 200300 400500膽堿酯酶的抑制(％)64％23％ 9％0％*每毫升SD鼠腦勻漿液含15毫克腦；按Ellman氏方法(Biochemical Pharmacology，Vol.38,No.4 pp.633-640.1989)測定腦勻漿膽堿酯酶(AChE)活性，pH=7.0。
權(quán)利要求
1.異柳珊瑚酸作為乙酰膽堿酯酶抑制劑的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于異柳珊瑚酸作為制備治療阿爾茨海默病的藥中應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及異柳珊瑚酸在制藥領(lǐng)域中的新應(yīng)用。該物質(zhì)對人紅細胞的乙酰膽堿酯酶具有顯著選擇性的抑制作用、對人血清BuChE無顯著抑制作用,是一個可逆性乙酰膽堿酯酶抑制劑。它能提高腦神經(jīng)中的乙酰膽堿酯水平,恢復(fù)乙酰膽堿酯神經(jīng)傳導(dǎo),改善病人的記憶、認知和行為能力,延緩病情的發(fā)展,而且毒副作用小,可作為乙酰膽堿酯酶抑制劑應(yīng)用,尤其可作為在制備治療阿爾茨海默病的藥中應(yīng)用。
文檔編號A61K31/185GK1285190SQ0011733
公開日2001年2月28日 申請日期2000年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月18日
發(fā)明者葉和玨, 王霆, 黃方呂, 朱寧 申請人:中國科學(xué)院廣州化學(xué)研究所