專利名稱：鐘花報(bào)春花總黃酮的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鐘花報(bào)春花總黃酮的新用途，屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
心肌缺血，是指心臟的血液灌注減少，導(dǎo)致心臟的供氧減少，心肌能量代謝不正常，不能支持心臟正常工作的一種病理狀態(tài)。心肌缺血常見的原因是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化，其次還有炎癥(風(fēng)濕性、梅毒性、川崎病和血管閉塞性脈管炎等)、痙攣、栓塞、結(jié)締組織疾病、 創(chuàng)傷和先天性畸形等多種。研究發(fā)現(xiàn)，心肌缺血不僅有發(fā)生心肌梗塞和猝死的危險(xiǎn)，而且， 更為嚴(yán)重的是，心肌缺血會(huì)給心肌細(xì)胞帶來損傷，可出現(xiàn)心肌細(xì)胞水腫、細(xì)胞膜和細(xì)胞器膜完整性破壞等，最終可能會(huì)導(dǎo)致正常心肌細(xì)胞凋亡，嚴(yán)重危害人體健康。當(dāng)前治療心肌缺血的藥物中，西藥主要有抗血小板藥物、β -受體阻斷劑、鈣離子拮抗劑、他汀類藥物、硝酸脂類藥物等，中藥主要有牡丹皮、人參、銀杏葉、油茶、四逆湯等。鐘花報(bào)春(Primula sikkmensis Hook)，屬于報(bào)春花科報(bào)春花屬植物，花黃色，鐘狀，聚生于花葶頂端，主產(chǎn)于西藏東部及南部、青海東南部、四川西部、云南西北部；生于海拔3750-4500米的林緣濕草地、水溝邊；分布于尼泊爾、錫金、不丹、緬甸。它是一種常見的藏藥材，藏族民間用全草作止瀉藥，其療效獨(dú)特顯著。具有清熱解毒，瀉肝膽火、止血等作用，還能用于心脈瘀阻、血脈不暢，療效確切，在治療小兒熱痢方面，有效率達(dá)到80%，同時(shí)， 由于鐘花報(bào)春資源十分豐富，使其在甘孜藏族地區(qū)廣泛被使用。當(dāng)前對鐘花報(bào)春的研究多集中在報(bào)春花的系統(tǒng)分類、地理分布及資源調(diào)查等方面，也有研究人員對鐘花報(bào)春花的總黃酮提取工藝進(jìn)行了初步研究，他們利用正交試驗(yàn)研究了從鐘花報(bào)春的花中提取總黃酮的優(yōu)選工藝，并指出以60%乙醇，20倍溶媒用量，回流提取3次，每次1小時(shí)，提取得到的總黃酮含量較高，提取物中總黃酮含量可達(dá)到7%左右。 (邱建平，等，正交設(shè)計(jì)優(yōu)化鐘花報(bào)春花總黃酮提取工藝，成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009年4卷4 期)。目前，還未見將鐘花報(bào)春花總黃酮用于治療心肌缺血、保護(hù)缺血心肌細(xì)胞的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供鐘花報(bào)春花總黃酮的新用途。本發(fā)明的另一目的是提供一種治療心肌缺血的藥物組合物。鐘花報(bào)春花總黃酮在制備預(yù)防或/和治療心肌缺血的保健品或/和藥物中的用途。進(jìn)一步地，所述保健品或/和藥物是預(yù)防或/和治療急性心肌缺血的保健品或/ 和藥物。進(jìn)一步地，所述保健品或/和藥物是保護(hù)缺血心肌細(xì)胞的保健品或/和藥物。其中，鐘花報(bào)春花總黃酮中，黃酮的含量以蘆丁計(jì)不得低于50% w/w。進(jìn)一步地，鐘花報(bào)春花總黃酮中，黃酮的含量以蘆丁計(jì)為50-60% w/w。
進(jìn)一步優(yōu)選地，鐘花報(bào)春花總黃酮中，黃酮的含量以蘆丁計(jì)為50-55% w/w。其中，所述的鐘花報(bào)春花總黃酮來源于報(bào)春花科報(bào)春花屬植物鐘花報(bào)春!Simula sikkimensis Hook的花的提取物。進(jìn)一步地，鐘花報(bào)春花總黃酮是通過如下方法制備的(1)取鐘花報(bào)春花，以50-95% V/V乙醇提取，合并提取液備用；(2)將步驟(1)中的提取液回收乙醇后，用正丁醇萃取，將正丁醇層回收正丁醇后，上大孔吸附樹脂，先用水洗脫至不發(fā)生三氯化鐵反應(yīng)和鹽酸鎂粉反應(yīng)，再用30% -95% 的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收溶劑后，干燥，即得鐘花報(bào)春總黃酮。更進(jìn)一步地，步驟(1)中采用50-70% V/V乙醇提取；步驟O)中選用30-40% V/ V乙醇進(jìn)行洗脫。進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟⑴中采用60% V/V乙醇提?。徊襟E⑵中選用30% V/V乙醇進(jìn)行洗脫。更進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟⑴中采用60% ν/ν乙醇提取3次。步驟⑵中選用30% V/V乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫至不發(fā)生三氯化鐵反應(yīng)和鹽酸鎂粉反應(yīng)。本發(fā)明還提供了一種預(yù)防或/和治療心肌缺血的保健品或/和藥物組合物，它是由鐘花報(bào)春花總黃酮為活性成分，加上藥學(xué)上常用的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。鐘花報(bào)春花總黃酮可以降低心電ST段的偏移和血清LDH、CK含量，能夠有效預(yù)防或/和治療急性心肌缺血，保護(hù)缺血心肌細(xì)胞，其抗心肌缺血作用顯著，為臨床用藥提供了新的選擇。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本發(fā)明鐘花報(bào)春花總黃酮的制備取干燥的鐘花報(bào)春花粗粉，加入20倍量60%乙醇浸泡后，加熱回流提取3次，每次 lh，趁熱抽濾，合并濾液，減壓回收至無醇味后，加入適量蒸餾水后，用正丁醇萃取，減壓回收正丁醇溶液至無正丁醇味后，加入適量蒸餾水溶解，過濾后，濾液上經(jīng)預(yù)處理的DlOl大孔吸附樹脂，先用蒸餾水洗脫至不發(fā)生三氯化鐵反應(yīng)和鹽酸鎂粉反應(yīng)，然后用30%乙醇洗脫，收集洗脫液，直至不發(fā)生三氯化鐵反應(yīng)和鹽酸鎂粉反應(yīng)，合并洗脫液，回收溶劑后，干燥即得鐘花報(bào)春花總黃酮，其中，黃酮以蘆丁計(jì)含量為52. 5%。本發(fā)明鐘花報(bào)春花總黃酮的制備方法不限于實(shí)施例中所述的方式，現(xiàn)有的黃酮提取方法均能用于對鐘花報(bào)春花總黃酮的提取，如堿水提取等；對總黃酮的精制也可采用其他型號(hào)的大孔吸附樹脂進(jìn)行精制，洗脫溶劑除采用乙醇以外，也可以采用弱堿溶液進(jìn)行洗脫，也可提高黃酮含量。實(shí)施例2鐘花報(bào)春花總黃酮制備方法的篩選1.總黃酮含量測定方法1.1對照品溶液的制備取蘆丁對照品0. 01006g，置于50ml容量瓶中，加60 %乙醇定容至刻度，制得濃度為0. 2012mg/ml的對照品溶液，備用。1.2樣品溶液的制備按照各制備方法制備得到的浸膏轉(zhuǎn)移至IOOml容量瓶中，并定容至刻度，從此溶液中精密移取IOml于IOOml容量瓶中，并用60%乙醇定容至刻度，即制得樣品溶液，備用。1.3測定波長的確定精密移取對照品溶液7ml和供試品溶液2ml，分別置于2支25ml容量瓶中，均加入 60 %乙醇稀釋至7ml，混勻，加5 %亞硝酸鈉溶液Iml，搖勻，放置6min，再加10 %硝酸鋁溶液 lml，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉溶液10ml，再加60%乙醇至刻度，搖勻，放置15min，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外可見分光光度法(《藥典》05年版附錄VA)，在200-800nm進(jìn)行掃描， 測得對照品溶液和樣品溶液的最大吸收波長分別為506. 5Inm和498. 67nm。兩者的最大吸收波長接近，因此確定506nm為測定波長。1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液(0.2012mg/ml) 0. 0ml, 1. Oml，2. Oml，3. Oml，4. Oml，5. Oml，
6.Oml，7. Oml，分別置于25ml容量瓶中，各加60 %乙醇至7. Oml，加5 %亞硝酸鈉溶液 (0. 050g/ml) 1. 0ml，搖勻，放置 6min，再加 10%硝酸鋁溶液(0. 09972g/ml) 1. 0ml，搖勻，放置6min.加氫氧化鈉試液(0. 04308g/ml) 10ml，再加60%乙醇至刻度，搖勻，放置15min,以相應(yīng)試劑為空白，找紫外可見分光光度法(《藥典》05版附錄VA)，在506nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求得的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y = 12. 785X-0. 001 R2 = 0. 9992。1.5樣品液的測定從供試品溶液中精密移取細(xì)1于1支25ml容量瓶中，然后用60%乙醇溶液稀釋至
7.0ml，然后按照對照品溶液的顯色方法顯色。精密量取60%乙醇細(xì)1，作為空白對照，后續(xù)顯色處理同上述對照品。在506nm處測定吸光度A，由標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算總黃酮含量。2、鐘花報(bào)春花總黃酮提取方法考察2. 1單因素方法考察本實(shí)驗(yàn)以不同乙醇濃度為考察因素，以鐘花報(bào)春花總黃酮得率為考察指標(biāo)，篩選鐘花報(bào)春花總黃酮的最佳提取工藝條件。2. 1. 1儀器與材料(1)儀器與試藥UV-2500 型紫外-可見分光光度計(jì) PerkinElmer Lambda 35UV/VIS Spectrometer ；熱回流裝置，超聲儀，R-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申順生物科技有限公司)， DZF-6021型真空干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，瑞士 PAG-160A電子天平，F(xiàn)Al 104 電子天平(上海精天電子儀器廠)，電子恒溫不銹鋼水浴鍋(上海宏興機(jī)械儀器實(shí)業(yè)制造公司)，DGG-9140B電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)，SHE-III循環(huán)水真空泵(上海亞榮生化儀器廠)，蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號(hào)為10080-200707)，95%乙醇，90%乙醇，80%乙醇，70%乙醇，60%乙醇，5%亞硝酸鈉溶液； 10%硝酸鋁溶液；4. 3%氫氧化鈉溶液以上試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)用水系重蒸水。(2)實(shí)驗(yàn)藥材鐘花報(bào)春花由重慶中藥研究所涂永勤博士鑒定為鐘花報(bào)春!Simula sikkimensis Hook 的干燥花。
將各自合并的濾液分別減壓濃縮(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮是的水浴溫度為50°C )到一定程度，然后轉(zhuǎn)移至相應(yīng)的蒸發(fā)皿中，60°C水浴揮干，然后將含浸膏的蒸發(fā)皿置減壓干燥器中 60°C減壓干燥過夜。含浸膏的蒸發(fā)皿經(jīng)壓干燥后，精密稱定各含膏蒸發(fā)皿總重，結(jié)果如下表所示表權(quán)利要求
1.鐘花報(bào)春花總黃酮在制備預(yù)防或/和治療心肌缺血的保健品或/和藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述保健品或/和藥物是預(yù)防或/和治療急性心肌缺血的保健品或/和藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述保健品或/和藥物是保護(hù)缺血心肌細(xì)胞的保健品或/和藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的用途，其特征在于鐘花報(bào)春花總黃酮中，黃酮的含量以蘆丁計(jì)不得低于50% w/w。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于鐘花報(bào)春花總黃酮中，黃酮的含量以蘆丁計(jì)為 50-60% w/w。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述的鐘花報(bào)春花總黃酮來源于報(bào)春花科報(bào)春花屬植物鐘花報(bào)春!Simula sikkimensis Hook的花的提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的用途，其特征在于鐘花報(bào)春花總黃酮是通過如下方法制備的(1)取鐘花報(bào)春花，以50-95%V/V乙醇提取，合并提取液備用；(2)將步驟(1)中的提取液回收乙醇后，用正丁醇萃取，將正丁醇層回收正丁醇后，上大孔吸附樹脂，先用水洗脫至不發(fā)生三氯化鐵反應(yīng)和鹽酸鎂粉反應(yīng)，再用30% -95%的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收溶劑后，干燥，即得鐘花報(bào)春總黃酮。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于步驟⑴中采用50-70%V/V乙醇提?。?步驟O)中選用30-40% V/V乙醇進(jìn)行洗脫。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于步驟⑴中采用60%V/V乙醇提??；步驟 ⑵中選用30% V/V乙醇進(jìn)行洗脫。
10.一種預(yù)防或/和治療心肌缺血的保健品或/和藥物組合物，其特征在于它是由鐘花報(bào)春花總黃酮為活性成分，加上藥學(xué)上常用的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了鐘花報(bào)春花總黃酮在制備治療心肌缺血的藥物中的用途。本發(fā)明還公開了一種治療心肌缺血的藥物組合物。鐘花報(bào)春花總黃酮可以降低心電ST段的偏移和血清LDH、CK含量，能夠有效預(yù)防或/和治療急性心肌缺血，保護(hù)缺血心肌細(xì)胞，其抗心肌缺血作用顯著，為臨床用藥提供了新的選擇。
文檔編號(hào)A61P9/10GK102423326SQ201110428899
公開日2012年4月25日 申請日期2011年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月20日
發(fā)明者彭騰, 李鴻翔, 賀鋼民, 鄧赟, 邱建平 申請人:成都中醫(yī)藥大學(xué)