專利名稱：老鸛草總黃酮提取物及其在制備抗病毒藥物中的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬中藥領域，涉及一種抗病毒的藥物，具體涉及老鸛草總黃酮提取物及其在制備抗病毒藥物中的用途。
1995年蘇州中醫(yī)學研究所報導直接采用老鸛草水煎劑治療慢性乙型肝炎，結果認為老鸛草中含有的鞣質具有很強的抗氧化作用和抗過氧化脂質體的作用，在抑制血清和肝臟中過氧化脂質的上升中抑制了其對肝細胞的損害。但沒有涉及到對乙肝病毒的抑制。
綜觀國內外的報導，均未見老鸛草(Gerancium carolinianum L)的干燥地上部分的總黃酮提取物其藥物及抗病毒藥效。
本發(fā)明的進一步目的是提供老鸛草總黃酮提取物及其制備抗病毒藥物中的新用途。
本發(fā)明從我國產的pang牛兒苗科植物老鸛草(Gerancium carolinianumL)的干燥地上部分(藥材中文名稱老鸛草，拉丁文名Herba Geranii)分離提取得到總黃酮提取物，其主要組分為皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷。
所述老鸛草總黃酮提取物經體外細胞模型和體內動物模型試驗后，證實其具有很強的抗病毒活性。
本發(fā)明通過下述方法進行，1、提取老鸛草總黃酮用50％酒精提取中藥材老鸛草，濃縮提取液至1/4-1/5體積，上D101大孔樹脂，用水和70％酒精洗脫，收集洗脫液，經鎂粉/鹽酸檢測驗證，收集黃酮含量高的部分，洗脫液濃縮至干得固形物即有效部位產物，稱重且測定總黃酮，有效部位產物收率達1％以上，總黃酮含量超過50％。
2.老鸛草總黃酮提取物主要化學組分結構鑒定經質譜和13C、1H測定，證實本發(fā)明老鸛草總黃酮提取物的主要化學成分為槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖，其化學結構如下
3，老鸛草總黃酮提取物用于抗乙型肝炎病毒、流行型感冒病毒、皰疹病毒和艾滋病毒試驗。經體外細胞試驗，證實老鸛草總黃酮對皰疹病毒、流感病毒、乙肝病毒及艾滋病毒均有抑制。
1)采用流感病毒MDCK細胞，A3毒株(購于上海市衛(wèi)生防疫站)按衛(wèi)生部新藥臨床前藥理指南規(guī)定的方法進行測試，結果為Ic50＝200μg/ml Ec50＝50μg/ml TI＝42)采用單純皰疹病毒vero細胞HSV-1毒株Sm44，(由中國醫(yī)學科學院生物醫(yī)藥研究所提供)按衛(wèi)生部新藥臨床前藥理指南規(guī)定的方法進行測試，結果為Ic50＝200μg/ml Ec50＝25μg/ml TI＝83)抗乙肝病毒試驗體外試驗按衛(wèi)生部新藥臨床前藥理指南規(guī)定，采用HepG22.215細胞，對藥物的抗乙肝病毒作用進行測試，結果表明老鸛草總黃酮對HBsAg和HbeAg均有抑制。
表1是不同濃度老鸛草總黃酮對HBsAg和HBeAg的抑制。
表2是不同時間50μg/ml的老鸛草總黃酮對抗原的抑制。
表1100μg/ml50μg/ml25μg/ml抑制HBsAg(％)70 52 41抑制HBeAg(％)51 43 38表2天 3 6 9 12HBsAg(％)43.448.2 58.333.3HBeAg(％)48.454.35 41.525.6
抗乙肝病毒體內試驗按衛(wèi)生部新藥臨床前藥理指南規(guī)定，采用北京芙蓉鴨作為乙肝新藥的動物模型，給藥10天，結果證明老鸛草總黃酮提取物對鴨乙肝病毒有抑制作用。
表3是老鸛草總黃酮提取物對鴨乙肝病毒抑制作用。
表3劑量(克/公斤) 天 DHBVsAg的抑制(％)3(以生藥計) 5 29.41051.01335.11.5(以生藥計) 5 22.01042.61321.7拉米呋定(50毫克/公斤) 5 52.21029.8134.2實驗結束取出試驗鴨肝臟，做電鏡檢測，未見因乙肝病毒感染而引起的肝壞死，結果證實口服老鸛草總黃酮后，對鴨乙肝病毒感染引起的肝損傷有明顯的保護作用。
4).艾滋病毒采用pBMC細胞，取50μg/ml的老鸛草總黃酮提取物對5株HIV毒株進行試驗，結果表明老鸛草總黃酮提取物抑制HIV P24達85-96％。
本發(fā)明老鸛草總黃酮經檢測表明其中含有槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷的組分，由于在肝臟上有半乳糖的受體，因此采用野老鸛草總黃酮作為藥物，無疑會被肝臟很好吸收，達到良好的藥效。本發(fā)明老鸛草總黃酮提取物及其提取物有效組分槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖加入輔料可制成膠囊，片劑，顆粒和針劑等劑型，用于臨床治療病毒性肝炎、病毒性流感、皰疹病毒和艾滋病毒感染。


圖1是鴨乙肝病毒感染后，鴨肝臟細胞的照片(鴨肝臟細胞核出現(xiàn)壞死)。
圖2是正常鴨肝細胞照片.。
圖3是老鸛草總黃酮給藥后鴨肝臟細胞的照片。
圖4是拉米呋定給藥后鴨肝臟細胞的照片表4批號 1 2 3 平均產物產量(克)3.363.614.303.76總黃酮量(克)2.281.953.302.51產物收率％ 1.121.201.431.25總黃酮含量％67.954.076.766.7實施例2取老鸛草總黃酮提取物50克，粉碎過100目篩，加入淀粉3克混合均勻，再加入10％淀粉漿適量制成軟材，20目篩網(wǎng)制粒，60-70℃干燥，過30目篩整粒，加入羥丙基纖維素3克和硬脂酸鎂1克充分混勻，壓片，薄膜包衣，即得片劑1000片。每片含總黃酮提取物50mg。
實施例3取老鸛草總黃酮提取物50克，粉碎過100目篩，加入淀粉3克，微晶纖維適量，用稀乙醇制粒，20目篩網(wǎng)制粒，60-70℃干燥，整粒，加入硬脂酸鎂適量，充分混勻，填入膠囊即得，1000粒，實施例4取老鸛草總黃酮提取物30克，粉碎過100目篩，加入淀粉300克加入10％淀粉漿適量制成顆粒，60-70℃干燥，分裝200袋。
實施例5取老鸛草總黃酮提取物50克，加適量注射用水，加熱溶解，再加入0.5％活性炭充分攪拌，煮沸20分鐘，過濾，冷卻至室溫，冷庫過夜，加注射用水至1000ml，用碳酸氫鈉調節(jié)PH至7，過濾除菌，灌裝，封口，滅菌即得注射劑。規(guī)格調2ml，10ml，100ml。
權利要求
1.一種老鸛草總黃酮提取物，其特征是具有如下化學結構。
2.按權利要求1的老鸛草總黃酮提取物，其特征是制成膠囊，片劑，顆粒和針劑劑型。
3.老鸛草總黃酮提取物在制備抗病毒藥物中的用途。
4.老鸛草總黃酮提取物在制備抗乙肝病毒藥物中的用途。
5.老鸛草總黃酮提取物在制備抗皰疹病毒藥物中的用途。
6.老鸛草總黃酮提取物在制備抗流感病毒藥物中的用途。
7.老鸛草總黃酮提取物在制備抗艾滋病毒藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬中藥領域，涉及一種抗病毒的藥物，具體涉及老鸛草總黃酮提取物及其在制備抗病毒藥物中的用途。經體內外試驗，證實本發(fā)明對皰疹病毒、流感病毒、乙肝病毒及艾滋病毒均有抑制作用。本發(fā)明老鸛草總黃酮提取物及其提取物有效組分槲皮素－3－O－β－D－吡喃半乳糖加入輔料可制成膠囊，片劑，顆粒和針劑等劑型，用于臨床治療病毒性肝炎、病毒性流感、皰疹病毒和艾滋病毒感染。
文檔編號A61K31/7048GK1434052SQ03115358
公開日2003年8月6日 申請日期2003年2月12日 優(yōu)先權日2003年2月12日
發(fā)明者周珮, 李繼揚, 黃海, 鈕君健, 戴培興 申請人:復旦大學