專利名稱：銀杏酚酸在制備治療皮膚腫瘤的外用制劑中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及銀杏酚酸在制備治療皮膚腫瘤的外用制劑中的用途。
背景技術(shù)：
皮膚癌是人類常見的惡性腫瘤之一，在過去的二十年，人類皮膚腫瘤的發(fā)病率顯著增加，并以每年4%的速率繼續(xù)增長。皮膚鱗癌可發(fā)生于正常皮膚，亦可由日光性角化等癌前病變發(fā)展而來，其侵襲性和轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)，臨床危害大。因此人們一直在探討皮膚腫瘤的有效治療方案。皮膚腫瘤可采用手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療、中醫(yī)治療等綜合治療方法。但某些患者不能接受手術(shù)治療，且手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療對(duì)患者損害大，放化療毒副作用明顯，部分患者不能耐受。對(duì)于某些不適于接受皮膚外科手術(shù)治療和放化療，或者術(shù)
后需要預(yù)防復(fù)發(fā)的病例，選擇適當(dāng)有效的外用藥物進(jìn)行局部治療非常重要；且外用藥物比口服藥物具有更好的安全性。因此，臨床需要研制開發(fā)一種來源于天然、效果顯著、無明顯不良反應(yīng)的治療皮膚腫瘤的外用制劑，以減輕患者痛苦。開發(fā)此類治療皮膚腫瘤的外用制劑產(chǎn)品具有良好的臨床應(yīng)用前景，對(duì)患者是十分有益和必要的。銀杏是我國珍貴的藥用植物，銀杏的葉、果和外種皮等皆具有藥用開發(fā)價(jià)值。據(jù)《本草綱目》記載，銀杏性甘、苦、平、澀；有定喘止咳、止帶濁、止痛之功；主治寒嗽痰喘、哮喘、小便頻數(shù)、赤白帶下、手足皸裂等。特別是近幾十年來人們發(fā)現(xiàn)銀杏葉中含有多種有效成分，主要有效成分為黃酮類和萜類內(nèi)酯化合物，具有防治心腦血管疾病的功能。銀杏酚酸為無色或淡黃色的油狀或粉末狀物質(zhì)，是存在于銀杏葉、果和外種皮中一類具有重要生理活性的組分。本發(fā)明所涉及的銀杏酚酸為烷基或烯基苯酚酸類物質(zhì)，根據(jù)分子中苯環(huán)上是否連接有羧基，將其分為銀杏酸和銀杏酚兩大類。銀杏酸是水楊酸分子在苯環(huán)C6位上有飽和或不飽和長鏈烷基的系列化合物，按化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為5種，側(cè)鏈R為C13H27' C15H29' C15H31' C17H31 和 C17H33，對(duì)應(yīng)的分子量分別為 320、346、348、372、374。銀杏酚酸包括白果酸、氫化白果酸、白果新酸、白果亞酸、氫化白果亞酸、漆樹酸、銀杏酚、銀杏二酚、白果醇等。銀杏酚酸(銀杏酸、銀杏酚、銀杏二酚)結(jié)構(gòu)見下。
OH1 R=C13H27 (C13:0) hoYVr 銀杏勘
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V^r 5—⑴ I銀杏酚酸的結(jié)構(gòu)隨著對(duì)銀杏酚酸類物質(zhì)研究的逐漸深入，發(fā)現(xiàn)銀杏酚酸具有多種生物活性。已有研究表明，銀杏酚酸對(duì)體外多種細(xì)菌有良好的抑制作用，能抑制部分農(nóng)業(yè)病原菌的生長；銀杏酚酸對(duì)部分內(nèi)臟器官腫瘤細(xì)胞株的生長有良好的抑制作用。有關(guān)銀杏酚酸的提取、分析及體外抗菌活性、抗農(nóng)業(yè)病原菌和病原蟲、抗部分內(nèi)臟器官腫瘤已有文獻(xiàn)報(bào)道。目前尚未見銀杏酚酸在制備治療皮膚腫瘤的外用制劑中的用途的報(bào)道。因此，有關(guān)銀杏酚酸外用制劑治療皮膚腫瘤新型藥物的研究開發(fā)，以及對(duì)銀杏資源的充分開發(fā)利用，將產(chǎn)生巨大的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供銀杏酚酸的新用途，即銀杏酚酸在制備治療皮膚腫瘤的外用制劑中的用途。它具有療效顯著和使用安全的特點(diǎn)。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的提供銀杏酚酸在制備治療皮膚腫瘤的外用制劑中的用途。所述銀杏酚酸包括銀杏酸、銀杏酚、銀杏二酚等，可通過化學(xué)分離方法，從銀杏的葉、果、外種皮、根莖等部位的提取物中得到；或?qū)︺y杏葉、果、外種皮、根莖提取加工產(chǎn)物在提取加工過程中剩余的廢料中重新回收；或從其它植物含有本類化合物的各部分提取物中獲得；或通過化學(xué)合成的方法獲得。本發(fā)明要求保護(hù)該類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物、結(jié)晶形態(tài)等物質(zhì)。還提供含有銀杏酚酸的治療皮膚腫瘤的藥物外用制劑，含有銀杏酚酸
O.001-80%，以重量百分比計(jì)，以及藥學(xué)上常用的外用制劑基質(zhì)或外用制劑可接受的載體。更進(jìn)一步的，含有銀杏酚酸O. 001-30 %，以重量百分比計(jì)。更進(jìn)一步的，含有銀杏酚酸O. 5_20%，以重量百分比計(jì)。按上述重量比范圍取主藥銀杏酚酸、藥學(xué)上常用的外用制劑基質(zhì)或可接受的載體制備得到銀杏酚酸外用制劑；以及包含銀杏酚酸和任何物質(zhì)組合用于治療皮膚腫瘤的藥物外用制劑。所述制劑是任何一種藥劑學(xué)上所說的外用劑型，可以是液體制劑、膏霜?jiǎng)⒛z劑、粉劑、膜劑、洗劑、氣霧噴霧劑、透皮吸收制劑、皮下注射劑等。本發(fā)明的有益效果是，藥理藥效學(xué)試驗(yàn)研究表明，本發(fā)明銀杏酚酸外用制劑具有抑制皮膚腫瘤的發(fā)生和腫瘤增長、提高荷瘤小鼠生存率的作用，并能抑制皮膚癌細(xì)胞的增殖；對(duì)皮膚腫瘤具有顯著的治療作用。局部刺激性實(shí)驗(yàn)研究表明本發(fā)明安全，無皮膚刺激、過敏等不良反應(yīng)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地描述。實(shí)施例I :銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝如下將銀杏果外種皮剝離下來，曬干，用粉碎機(jī)將其粉碎。準(zhǔn)確稱取一定量經(jīng)粉碎的銀杏外種皮，加入料液比為I : 6(w/v)的80%乙醇，在水浴溫度60°C下，攪拌浸提2次，每次提取時(shí)間4小時(shí)，(注加液后，燒杯口用保鮮膜封住，以防止乙醇的揮發(fā))。浸提結(jié)束后，用抽濾器抽濾，收集濾液。用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮濾液，條件為溫度55°C，壓強(qiáng)O. 008-0. 009MPa,減壓濃縮。于60°C真空干燥，得銀杏酚酸浸膏，性狀為淺褐色浸膏，微臭，溶于醇，不溶于水；稱重，并測定銀杏酚酸含量(mg/g)。
銀杏酚酸含量測定采用HPLC法進(jìn)行測定。銀杏酚酸的標(biāo)準(zhǔn)品溶液在100-1200 μ g/ml之間，相應(yīng)峰面積與銀杏酚酸質(zhì)量濃度有顯著的線性關(guān)系，制訂了標(biāo)準(zhǔn)曲線。用無水乙醇(色譜純)將銀杏酚酸浸膏溶解，過濾。在柱溫室溫；流動(dòng)相甲醇-水(9 : I, v/v);流速lml/min ;進(jìn)樣量20μ I ;檢測波長310nm ;分析時(shí)間25min條件下測定浸膏中銀杏酚酸含量。根據(jù)標(biāo)樣的保留時(shí)間進(jìn)行定性，用外標(biāo)法計(jì)算銀杏酚酸的含量。浸膏中銀杏酚酸含量為662. 30mg/g。銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法為公知公用的方法。凝膠劑的制備將卡波普IOg灑在500ml蒸懼水表面,溶脹過夜。稱取甘油60g,丙二醇120ml，分別加入至溶脹好的卡波普中，迅速研磨均勻，得到透明的凝膠基質(zhì)。取上述銀杏酚酸浸膏40g，溶解于IOOml 95%乙醇溶液中，緩慢加入至凝膠基質(zhì)中，攪拌均勻。再緩慢加入三乙醇胺15ml，補(bǔ)蒸餾水至足量lOOOg，即得淡黃色銀杏酚酸凝膠lOOOg，銀杏酚
酸含量為2. 65% (W/W)。分裝于50支小管中，每支20g。凝膠劑制備工藝為公知公用的方法。實(shí)施例2 銀杏果實(shí)白果中銀杏酚酸提取工藝如下將白果去皮，放入組織搗碎機(jī)中粉碎。準(zhǔn)確稱取一定量經(jīng)粉碎的白果，加入料液比為I : 10(w/v)的80%乙醇，在水浴溫度60°C下，攪拌浸提2次，每次提取時(shí)間4小時(shí)，(注加液后，燒杯口用保鮮膜封住，以防止乙醇的揮發(fā))。浸提結(jié)束后，離心(5000轉(zhuǎn)/分，15分鐘)，取上清液。用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮上清液，條件為溫度551，壓強(qiáng)0. 008-0. 009MPa，減壓濃縮，并于60°C真空干燥，得銀杏酚酸浸膏，性狀為淺褐色浸膏，微臭，溶于醇，不溶于水。稱重，并測定銀杏酚酸含量(mg/g)。銀杏酚酸含量測定同實(shí)施例I。浸膏中銀杏酚酸含量為503. 91mg/g。軟膏劑的制備取上述銀杏酚酸浸膏40g，溶解于IOOml 95%乙醇溶液中，再向其中加入三乙醇胺50ml，加溫至70°C。將石蠟300g、硬脂酸300g、丙二醇IOOml分別加入攪拌融化，補(bǔ)蒸餾水至足量lOOOg，攪拌均勻至膏狀，即得淡黃色銀杏酚酸軟膏l(xiāng)OOOg，銀杏酚酸含量為2. 02% (W/W)。分裝于50支小管中，每支20g。軟膏劑制備工藝為公知公用的方法。實(shí)施例3 銀杏葉中銀杏酚酸提取工藝如下將銀杏葉剪碎，放入粉碎機(jī)中將其粉碎。準(zhǔn)確稱取一定量經(jīng)粉碎的銀杏葉，加入料液比為I : 6(W/V)的80%乙醇，在水浴溫度60°C下，攪拌浸提2次，每次提取時(shí)間4小時(shí)，(注加液后，燒杯口用保鮮膜封住，以防止乙醇的揮發(fā))。浸提結(jié)束后，離心(5000轉(zhuǎn)/分，15分鐘)，取上清液。用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮上清液，條件為溫度55°C，壓強(qiáng)0. 008-0. 009MPa，減壓濃縮，并于60°C真空干燥，得銀杏酚酸浸膏，性狀為淺褐色浸膏，微臭，溶于醇，不溶于水。稱重，并測定銀杏酚酸含量(mg/g)。銀杏酚酸含量測定同實(shí)施例I。浸膏中銀杏酚酸含量為537. 68mg/g。酊劑的制備取上述銀杏酚酸浸膏80g，溶解于600ml 95%乙醇溶液中，再向其中分別加入三乙醇胺50ml，丙二醇200ml攪拌，補(bǔ)95%乙醇溶液至足量1000ml，即得淡黃色銀杏酚酸酊劑1000ml，銀杏酚酸含量為4. 3% (W/V)。分裝于50支小管中，每支20ml。酊劑制備工藝為公知公用的方法。實(shí)施例4
銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實(shí)施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為655. 04mg/g。取銀杏酚酸浸膏80g，按實(shí)施例I凝膠劑制備工藝制備銀杏酚酸凝膠1000g，銀杏酚酸含量為5.24% (W/W)。分裝于50支小管中，每支20g。實(shí)施例5 銀杏果實(shí)白果中銀杏酚酸提取工藝同實(shí)施例2，含量測定方法同實(shí)施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為534. 39mg/g。取銀杏酚酸浸膏10g，按實(shí)施例2軟膏劑制備工藝制備銀杏酚酸軟膏1000g，銀杏酚酸含量為O. 53% (W/W)。分裝于50支小管中，每支20g。實(shí)施例6 銀杏葉中銀杏酚酸提取工藝同實(shí)施例3，含量測定方法同實(shí)施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為552. 47mg/g。取銀杏酚酸浸膏200g，按實(shí)施例3酊劑制備工藝制備銀
杏酚酸酊劑1000ml，銀杏酚酸含量為11. 05% (W/V)。分裝于50支小管中，每支20ml。實(shí)施例7 銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實(shí)施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為634. 53mg/g。取銀杏酚酸浸膏300g，按實(shí)施例3酊劑制備工藝制備銀杏酚酸酊劑1000ml，銀杏酚酸含量為19. 04% (W/V)。分裝于50支小管中，每支20ml。實(shí)施例8 銀杏葉中銀杏酚酸提取工藝同實(shí)施例3，含量測定方法同實(shí)施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為549. 24mg/g。取銀杏酚酸浸膏200g，按實(shí)施例I凝膠劑制備工藝制備銀杏酚酸凝膠1000g，銀杏酚酸含量為10. 98% (W/W)。分裝于50支小管中，每支20g。實(shí)施例9 銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實(shí)施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為672. 02mg/g。取銀杏酚酸浸膏500g，按實(shí)施例3酊劑制備工藝制備銀杏酚酸酊劑1000ml，銀杏酚酸含量為33.6% (W/V)。分裝于50支小管中，每支20ml。實(shí)施例10 銀杏果實(shí)白果中銀杏酚酸提取工藝同實(shí)施例2，含量測定方法同實(shí)施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為441. 93mg/g。取銀杏酚酸浸膏l(xiāng)g，按實(shí)施例2軟膏劑制備工藝制備銀杏酚酸軟膏1000g，銀杏酚酸含量為0.044% (W/W)。分裝于50支小管中，每支20g。用以上方法制成的銀杏酚酸外用制劑，進(jìn)行相關(guān)的藥理藥效學(xué)試驗(yàn)和局部刺激性安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)。下面是本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)慢性應(yīng)用窄譜中波紫外線(UVB)對(duì)各組小鼠背部剃毛部位皮膚進(jìn)行照射，建立小鼠皮膚腫瘤模型，干預(yù)治療小鼠皮膚腫瘤發(fā)生的數(shù)目及體積，進(jìn)行比較分析；同時(shí)比較各組小鼠存活率。腫瘤計(jì)數(shù)自照射28周出現(xiàn)第一個(gè)腫瘤起至33周停止照射，每周分別計(jì)數(shù)各組小鼠皮膚腫瘤數(shù)目。腫瘤體積的測量與計(jì)算自照射28周出現(xiàn)第一個(gè)腫瘤起至33周停止，分別測量各鼠背部腫瘤的最大直徑(a)及與之垂直的短徑(b)，單位mm;運(yùn)用公式(aXb2)/2計(jì)算腫瘤的體積，單位mm3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，表2。結(jié)果表明，與模型組小鼠相比，本發(fā)明銀杏酚酸組小鼠照射區(qū)皮膚腫瘤數(shù)目和腫瘤體積均明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組小鼠在實(shí)驗(yàn)過程中有一定比例的死亡，而本發(fā)明銀杏酚酸組小鼠存活率達(dá)100%。說明本發(fā)明銀杏酚酸外用制劑能有效地抑制慢性窄譜UVB照射所致小鼠皮膚腫瘤的發(fā)生和腫瘤增長，并能明顯提聞荷瘤小鼠的生存率。
表I.對(duì)UVB照射33w小鼠存活率及皮膚腫瘤體積的影響
權(quán)利要求
1.銀杏酚酸在制備治療皮膚腫瘤的外用制劑中的用途。
2.如權(quán)利要求I所述的銀杏酚酸外用制劑，為含有銀杏酚酸的具有治療皮膚腫瘤的藥物外用制劑；以及包含銀杏酚酸和任何物質(zhì)組合用于治療皮膚腫瘤的藥物外用制劑；其特征是，所述制劑是任何一種藥劑學(xué)上所說的外用劑型，可以是液體制劑、膏霜?jiǎng)⒛z劑、粉劑、膜劑、洗劑、氣霧噴霧劑、透皮吸收制劑、皮下注射劑等。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物外用制劑，其特征是，含有銀杏酚酸O.001-80%,以重量百分比計(jì)。
4.如權(quán)利要求2所述的藥物外用制劑，其特征是，含有銀杏酚酸O.001-30%，以重量百分比計(jì)。
5.如權(quán)利要求2所述的藥物外用制劑，其特征是，含有銀杏酚酸O.1-20%，以重量百分比計(jì)。
6.所述銀杏酚酸包括銀杏酸、銀杏酚、銀杏二酚等，可通過化學(xué)分離方法，從銀杏的葉、果、外種皮、根莖等部位的提取物中得到；或?qū)︺y杏葉、果、外種皮、根莖提取加工產(chǎn)物在提取加工過程中剩余的廢料中重新回收；或從其它植物含有本類化合物的各部分提取物中獲得；或通過化學(xué)合成的方法獲得；包括銀杏酚酸藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物，結(jié)晶形態(tài)的物質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明涉及銀杏酚酸在制備治療皮膚腫瘤的外用制劑中的用途。所述銀杏酚酸包括銀杏酸、銀杏酚、銀杏二酚等，可通過化學(xué)分離方法，從銀杏的葉、果、外種皮、根莖等部位的提取物中得到。含有銀杏酚酸的治療皮膚腫瘤的藥物外用制劑，含銀杏酚酸0.001-80％(以重量百分比計(jì))，以及藥學(xué)上常用的外用制劑基質(zhì)或可接受的載體；所述制劑是任何一種藥劑學(xué)上所說的外用劑型。藥理學(xué)試驗(yàn)研究表明，本發(fā)明具有抑制皮膚腫瘤的發(fā)生、抑制皮膚癌細(xì)胞的增殖和腫瘤增長、提高生存率的作用；且使用安全無副作用，具有良好的臨床應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102846677SQ201210292068
公開日2013年1月2日 申請(qǐng)日期2012年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月14日
發(fā)明者雷紅, 王青 申請(qǐng)人:王青