專利名稱：一種治療禽流感和傳染性支氣管炎的卵黃抗體及其制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的一種治療禽流感和傳染性支氣管炎的卵黃抗體及其制作方法屬于動(dòng)保行業(yè)獸用生物制品領(lǐng)域，屬于抗體藥物，所提供卵黃抗體用于診斷、檢測(cè)、預(yù)防和治療禽流感和傳染性支氣管炎。
背景技術(shù)：
禽流感是“禽流行性感冒”的簡(jiǎn)稱，是由A型流感病毒引起的禽類烈性傳染病，又稱“真性雞瘟”或“歐洲雞瘟”，是一種人畜共患病，對(duì)人類健康存在極大威脅。臨床主要表現(xiàn)為急性高致死性，產(chǎn)蛋量下降，輕度呼吸系統(tǒng)疾病等。禽流感是全世界范圍內(nèi)的禽類傳染病，因?qū)︷B(yǎng)禽業(yè)造成的毀滅性經(jīng)濟(jì)損失而被視為嚴(yán)重威脅家禽養(yǎng)殖業(yè)的頭號(hào)傳染病， 1 O Q多年來人類尚未發(fā)現(xiàn)有效的預(yù)防和治療方法。從2003年12月開始，由H5W禽流感病毒引起的高致病性禽流感突襲亞洲，在不到2個(gè)月的時(shí)間內(nèi)，席卷了韓國(guó)、日本、越南、泰國(guó)、柬埔寨、老撾、中國(guó)和印度尼西亞等8 個(gè)東亞和南亞國(guó)家。此次禽流感流行的規(guī)模之大、地理分布范圍之廣、破壞程度之深在人類養(yǎng)禽業(yè)歷史上均是史無前例的。當(dāng)前，禽流感在世界局部地區(qū)仍然活躍，疫情范圍呈繼續(xù)擴(kuò)大之勢(shì)。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，從2003年到現(xiàn)在，僅亞洲各國(guó)死亡或淘汰的禽只總數(shù)大約，15億只，全球已有超過1000人感染禽流感，因患禽流感死亡的人數(shù)已接近700人。發(fā)生禽流感時(shí)，往往伴發(fā)傳染性支氣管炎。兩者互相影響，往往加重快速死亡。盡管當(dāng)前已開發(fā)出多種治療禽流感和傳染性支氣管炎的藥物，諸如利巴韋林、金剛烷胺、病毒唑、碘苷、阿昔洛韋、更昔洛韋等，并制定出許多防控方案，取得一定成效，但是臨床情況千差萬別，往往導(dǎo)致本就捉襟見肘的防控方案更顯得力不從心，而且化學(xué)藥物因越來越多的副作用和食品安全隱患而由農(nóng)業(yè)部宣布禁止使用。在生物藥物領(lǐng)域，除去做疫苗免疫就是用抗體藥物臨時(shí)治療。疫苗用的毒株雖然開始增多，但是與臨床需求相比還是有很大差距。疫苗作為商品從科研到市場(chǎng)以及靶動(dòng)物是一個(gè)很慢長(zhǎng)的程序，因此，疫苗免疫如杯水車薪，臨時(shí)救急的還要首推抗體藥物。當(dāng)前卵黃抗體提取純化方法有乙二醇提取法、氯仿提取法、辛酸萃取法、鹽析法等，這些方法收率低、雜蛋白多、產(chǎn)品活性低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種治療禽流感和傳染性支氣管炎的卵黃抗體及其制作方法。本發(fā)明所提供的卵黃抗體含有兩類抗體，用于檢測(cè)、預(yù)防和治療禽流感和傳染性支氣管炎。其制作方法如下
1)、購(gòu)買禽流感(H5+H9)二價(jià)滅活疫苗(H5N1 Re_5株+H9N2 Re_2株)、生理鹽水存儲(chǔ)于 2 8°C備用；雞傳染性支氣管炎活疫苗(H120、H52、W93株)新城疫活疫苗(C30-86株)、雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)存儲(chǔ)于_15°C以下備用；
2)、購(gòu)買經(jīng)檢疫合格的SPF蛋雞雛作隔離飼養(yǎng)；
3)、分別于21日齡、35日齡、70日齡、110日齡給全雞群做禽流感(H5+H9)二價(jià)滅活疫苗(H5N1 Re-5株+H9N2 Re-2株)免疫，頸部皮下注射分別依次為2羽份、4羽份、8羽份、10 羽份；以后每4個(gè)月重復(fù)一次頸部皮下注射10羽份；
4)、在10日齡、30日齡、60日齡時(shí)，給雞全群做傳染性支氣管炎活疫苗(H120株、W93 株)免疫，飲水途徑，劑量皆分別依次為2羽份、4羽份、8羽份；
5)、在100日齡時(shí)給雞全群做傳染性支氣管炎活疫苗(H52株、W93株)免疫，飲水途徑， 劑量皆為10羽份；以后每隔3個(gè)月重復(fù)一次；
6)、自130 150日齡起每日檢測(cè)雞蛋，將禽流感HI試驗(yàn)抗體水平在1:1 以上、并且傳染性支氣管炎病毒中和試驗(yàn)抗體效價(jià)在1 :32以上的保存在4°C環(huán)境備用；
7)、在超凈臺(tái)上收集蛋黃，按3 5倍比例加入滅菌蒸餾水?dāng)嚢?0分鐘以上，配成均一的蛋黃液，轉(zhuǎn)移至4°C環(huán)境冷藏、靜置12小時(shí)，用過濾氣泵回收上清液；
8)、將含卵黃抗體的蛋黃上清液依次通過0.45微米和0. 22微米的濾膜進(jìn)行超濾濃縮， 收集介于兩種濾膜之間的物質(zhì)即為卵黃抗體的濃縮液；
9)、將卵黃抗體濃縮液做50 56°C減壓干燥，制成卵黃抗體干粉，方便保存；
10)、將卵黃抗體干粉按照一定的劑量分裝即可。本方法利用適當(dāng)?shù)拿庖叱绦颢@得抗禽流感和傳染性支氣管炎兩種病毒的高效價(jià)雙聯(lián)五價(jià)雞蛋，利用蛋白質(zhì)的親水性特點(diǎn)，通過沉降法將卵黃抗體與脂類分離，且在濃縮過程中不破壞卵黃抗體的空間結(jié)構(gòu)而出去雜蛋白，充分保護(hù)了卵黃抗體的生物活性和純粹性，所制造的卵黃抗體純度高、活性強(qiáng)；本發(fā)明所提供的卵黃抗體干粉，可在符合GMP要求的環(huán)境下與葡萄糖、乳糖等適宜輔料以適當(dāng)比例可配制成粉劑、溶液劑、注射液、注射用粉劑等臨床適用劑型，可用于診斷、預(yù)防和治療禽流感兩個(gè)血清型和傳染性支氣管炎三個(gè)血清型病毒的單獨(dú)或者混合感染，可有效防控禽流感和傳染性支氣管炎。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例
1)、購(gòu)買禽流感(H5+H9)二價(jià)滅活疫苗(H5N1Re_5株+H9N2 Re_2株)、生理鹽水存儲(chǔ)于 2 8°C備用；雞傳染性支氣管炎活疫苗(H120、H52、W93株)新城疫活疫苗(C30-86株)、雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)存儲(chǔ)于_15°C以下備用；
2)、購(gòu)買經(jīng)檢疫合格的SPF蛋雞雛作隔離飼養(yǎng)；
3)、分別于21日齡、35日齡、70日齡、110日齡給全雞群做禽流感(H5+H9)二價(jià)滅活疫苗(H5N1 Re-5株+H9N2 Re-2株)免疫，頸部皮下注射分別依次為2羽份、4羽份、8羽份、10 羽份；以后每4個(gè)月重復(fù)一次頸部皮下注射10羽份；
4)、在10日齡、30日齡、60日齡時(shí)，給雞全群做傳染性支氣管炎活疫苗(H120株、W93 株)免疫，飲水途徑，劑量皆分別依次為2羽份、4羽份、8羽份；
5)、在100日齡時(shí)給雞全群做傳染性支氣管炎活疫苗(H52株、W93株)免疫，飲水途徑， 劑量皆為10羽份；以后每隔3個(gè)月重復(fù)一次；
6)、自130 150日齡起每日檢測(cè)雞蛋，將禽流感HI試驗(yàn)抗體水平在1:1 以上、并且傳染性支氣管炎病毒中和試驗(yàn)抗體效價(jià)在1 :32以上的保存在4°C環(huán)境備用；
7)、在超凈臺(tái)上收集蛋黃，按3 5倍比例加入滅菌蒸餾水?dāng)嚢?0分鐘以上，配成均一的蛋黃液，轉(zhuǎn)移至4°C環(huán)境冷藏、靜置12小時(shí)，用過濾氣泵回收上清液；
8)、將含卵黃抗體的蛋黃上清液依次通過0.45微米和0. 22微米的濾膜進(jìn)行超濾濃縮， 收集介于兩種濾膜之間的物質(zhì)即為卵黃抗體的濃縮液；
9)、將卵黃抗體濃縮液做50 56°C減壓干燥，制成卵黃抗體干粉，方便保存；
10)、將卵黃抗體干粉按照一定的劑量分裝即可。以上實(shí)施例僅為了對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，而本發(fā)明的范圍不受所舉實(shí)施例的局限。部分試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告
一種治療禽流感和傳染性支氣管炎的卵黃抗體的試驗(yàn)報(bào)告
選用臨床診斷為溫和性禽流感、傳染性支氣管炎的病雞4000只，隨機(jī)挑選40只最為空白對(duì)照，其余平均分為A、B兩組。網(wǎng)上平養(yǎng)，保持干凈，及時(shí)通風(fēng)，做好記錄。飼料參考NRC 肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，配制基礎(chǔ)日糧，自由采食，自由飲水，統(tǒng)一管理。A組添加本卵黃抗體凍干粉制劑(由廣東紫金正天藥業(yè)有限公司、廣東省中獸藥工程技術(shù)研究開發(fā)中心聯(lián)合制作)，按 1:100的比例兌水飲用；B組為黃芪多糖注射液(抗病毒I號(hào)注射液)(由河源市獸藥工程技術(shù)研究開發(fā)中心提供)，按每50ml兌水Ikg自由飲用；C組為空白對(duì)照組。表1 A、B、C三組治療對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果
由表1可以看出，使用了此種含有抗禽流感和支氣管炎兩種抗體的卵黃抗體凍干粉制劑治療的病雞，病死率從第三天開始明顯下降，采食量明顯恢復(fù)，治療用藥四天基本結(jié)束， 且效果優(yōu)于對(duì)照組，因此說明此種卵黃抗體可用于治療禽流感和支氣管炎病毒感染。
權(quán)利要求
1.一種治療禽流感和傳染性支氣管炎的卵黃抗體其制作方法如下1)、購(gòu)買禽流感(H5+H9)二價(jià)滅活疫苗(H5N1Re_5株+H9N2 Re_2株)、生理鹽水存儲(chǔ)于 2 8°C備用；雞傳染性支氣管炎活疫苗(H120、H52、W93株)新城疫活疫苗(C30-86株)、雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)存儲(chǔ)于_15°C以下備用；2)、購(gòu)買經(jīng)檢疫合格的SPF蛋雞雛作隔離飼養(yǎng)；3)、分別于21日齡、35日齡、70日齡、110日齡給全雞群做禽流感(H5+H9)二價(jià)滅活疫苗(H5N1 Re-5株+H9N2 Re-2株)免疫，頸部皮下注射分別依次為2羽份、4羽份、8羽份、10 羽份；以后每4個(gè)月重復(fù)一次頸部皮下注射10羽份；4)、在10日齡、30日齡、60日齡時(shí)，給雞全群做傳染性支氣管炎活疫苗(H120株、W93 株)免疫，飲水途徑，劑量皆分別依次為2羽份、4羽份、8羽份；5)、在100日齡時(shí)給雞全群做傳染性支氣管炎活疫苗(H52株、W93株)免疫，飲水途徑， 劑量皆為10羽份；以后每隔3個(gè)月重復(fù)一次；6)、自130 150日齡起每日檢測(cè)雞蛋，將禽流感HI試驗(yàn)抗體水平在1:1 以上、并且傳染性支氣管炎病毒中和試驗(yàn)抗體效價(jià)在1 :32以上的保存在4°C環(huán)境備用；7)、在超凈臺(tái)上收集蛋黃，按3 5倍比例加入滅菌蒸餾水?dāng)嚢?0分鐘以上，配成均一的蛋黃液，轉(zhuǎn)移至4°C環(huán)境冷藏、靜置12小時(shí)，用過濾氣泵回收上清液；8)、將含卵黃抗體的蛋黃上清液依次通過0.45微米和0. 22微米的濾膜進(jìn)行超濾濃縮， 收集介于兩種濾膜之間的物質(zhì)即為卵黃抗體的濃縮液；9)、將卵黃抗體濃縮液做50 56°C減壓干燥，制成卵黃抗體干粉，方便保存；10)、將卵黃抗體干粉按照一定的劑量分裝即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療禽流感和傳染性支氣管炎的卵黃抗體，該抗體可制成粉劑、溶液劑、噴霧劑、注射液、注射用粉劑。
全文摘要
一種治療禽流感和傳染性支氣管炎的卵黃抗體本發(fā)明屬于動(dòng)保行業(yè)獸用生物制品領(lǐng)域。本方法利用蛋白質(zhì)的親水性特點(diǎn)，通過沉降法將卵黃抗體與脂類分離，且在濃縮過程中不破壞卵黃抗體的空間結(jié)構(gòu)而出去雜蛋白，充分保護(hù)了卵黃抗體的生物活性和純粹性，所制造的卵黃抗體純度高、活性強(qiáng);本發(fā)明所提供的卵黃抗體干粉，可在符合GMP要求的環(huán)境下與葡萄糖、乳糖等適宜輔料以適當(dāng)比例可配制成粉劑、溶液劑、注射液、注射用粉劑等臨床適用劑型，可用于診斷、預(yù)防和治療禽流感兩個(gè)血清型和傳染性支氣管炎三個(gè)血清型病毒的單獨(dú)或者混合感染，可有效防控禽流感和傳染性支氣管炎。
文檔編號(hào)A61P31/16GK102558347SQ201210050300
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2012年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月1日
發(fā)明者萬徐萍, 劉易通, 李振天, 王慶福, 紀(jì)雯婧 申請(qǐng)人:廣東紫金正天藥業(yè)有限公司