專利名稱：一種可攜帶糖皮質(zhì)激素作為炎癥靶向藥物新制劑的合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種可攜帶糖皮質(zhì)激素作為炎癥靶向藥物新制劑的合成方法， 屬于藥物制造的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
潑尼松龍是糖皮質(zhì)激素類藥物，該類藥物是臨床常用的抗炎藥物，應(yīng)用十分 廣泛。由于體內(nèi)存在著類固醇受體，這些受體廣泛分布在體內(nèi)許多效應(yīng)細(xì)胞內(nèi)，糖皮質(zhì) 激素的生理效應(yīng)是多種多樣的，包括改變糖類、蛋白質(zhì)和脂肪代謝，維持體液和電解質(zhì) 平衡，維護(hù)心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、腎、骨骼肌、內(nèi)分泌系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能， 另外，皮質(zhì)類固醇可以賦予機(jī)體一抵抗緊張狀態(tài)的能力。糖皮質(zhì)激素的作用與劑量密切 相關(guān)，大劑量，即糖皮質(zhì)激素作為藥物超過(guò)生理劑量時(shí)，其藥理學(xué)作用也十分廣泛，特 別是具有抗炎、免疫抑制和抗休克等重要的藥理效應(yīng)，但同時(shí)會(huì)產(chǎn)生許多不良反應(yīng)，有 些不良反應(yīng)如高血糖，負(fù)氮平衡和骨質(zhì)疏松等會(huì)對(duì)機(jī)體造成較嚴(yán)重的損害，特別是骨質(zhì) 疏松及股骨頭壞死，限制了類固醇藥物在臨床上的應(yīng)用。糖皮質(zhì)激素對(duì)骨骼的影響十分 敏感，生理劑量和低劑量的糖皮質(zhì)激素是骨細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育必須的促進(jìn)因素，大劑量，特 別是藥理劑量時(shí)可以抑制成骨細(xì)胞的生長(zhǎng)，導(dǎo)致骨質(zhì)疏松。糖皮質(zhì)激素導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松 臨床上稱為類固醇性骨質(zhì)疏松，在骨質(zhì)疏松的發(fā)病率中排行第三，占長(zhǎng)期應(yīng)用糖皮質(zhì)激 素治療患者的30%~50%，類固醇性骨質(zhì)疏松目前還沒(méi)有好的治療方法，多以預(yù)防為主， 一旦發(fā)現(xiàn)，馬上停藥。對(duì)癥治療目前還沒(méi)有理想的藥物。
水溶性N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺[N-(2-hydroxypropyl) methacrylamide， HPMA]聚 合物作為抗癌藥物載體的研究已有IO多年的歷史，它具有良好的生物相容性、非免疫 原性、無(wú)毒性及可根據(jù)使用目的對(duì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾等優(yōu)點(diǎn)，已應(yīng)用于與小分子抗癌藥物接 合，開(kāi)發(fā)成為新型的抗癌藥物。這些水溶性高分子聚合物與小分子抗癌藥物接合，組成 的新的藥劑學(xué)改造的抗癌藥物，與小分子抗癌藥物相比，具有兩大優(yōu)點(diǎn):一是能避免被 腎臟快速清除,從而延長(zhǎng)了藥物在血液循環(huán)中的半衰期；二是對(duì)實(shí)體瘤具有傾向性沉積 作用，稱為"增強(qiáng)的透過(guò)和滯留效應(yīng)"(EPR效應(yīng))。這種效應(yīng)產(chǎn)生的原因主要是由于腫 瘤組織血管豐富，且腫瘤血管能產(chǎn)生血管壞死因子、滲透因子等物質(zhì)使其通透性增加， 聚合物易于通過(guò)血液循環(huán)到達(dá)實(shí)體瘤組織，同時(shí)，腫瘤部位的淋巴循環(huán)較正常組織的滲 透率低，從而使得聚合物很難通過(guò)淋巴循環(huán)排出，最終進(jìn)入腫瘤細(xì)胞。這些接合物通過(guò) EPR效應(yīng)進(jìn)入實(shí)體瘤組織后，再通過(guò)胞飲作用進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，被溶酶體吞噬后經(jīng)溶酶體 酶分解多肽間隔基而釋放出藥物[5~6]。研究表明，此類接合物能顯著改善小分子藥物在體內(nèi)的分布和藥代動(dòng)力學(xué)特性[7]， HPMA聚合物-阿霉素接合物等HPMA聚合物-抗癌藥 物接合物已進(jìn)入臨床I、 II期試驗(yàn)。
HPMA聚合物作為糖皮質(zhì)激素類藥物載體及運(yùn)載系統(tǒng)目前還沒(méi)有得到充分的研 究，本發(fā)明以HPMA聚合物為載體，接合潑尼松龍，組成一種新的靶向制劑，研究結(jié) 果表明，這種新型的靶向制劑，可以把潑尼松龍定向地運(yùn)送到炎癥組織，特別是關(guān)節(jié)炎 的發(fā)炎組織中，再炎癥組織中釋放，發(fā)揮良好的抗炎作用，而這種新制劑攜帶的潑尼松 龍?jiān)谡＝M織中不釋放，不產(chǎn)生藥理作用，也沒(méi)有不良反應(yīng)，是一個(gè)十分優(yōu)良的新新型 的炎癥靶向制劑
發(fā)明內(nèi)容
一種可攜帶糖皮質(zhì)激素作為炎癥靶向藥物的新型制劑的合成方法，其特 征是以N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺聚合物作為藥物載體，通過(guò)下述五個(gè)步驟，合成N-(2-
羥丙基)甲基丙烯酰胺聚合物與潑尼松龍接合的炎癥靶向制劑
(1) 合成高分子N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(HPMA)
方法將甲基丙烯酰氯100ml (l.Olmol)加到含有l(wèi)-氨基-2-丙醇160ml (2.02mol) 的乙腈溶液中，室溫?cái)嚢?0 40min，濾去沉淀，濾液在-5(TC保溫0.5~lh，直至沉淀完 全析出，過(guò)濾，沉淀用丙酮重結(jié)晶。
(2) 合成短肽鏈Ma-Gly-Phe- Leu-Gly-ONp
方法取甲基丙烯酰氯Ma.Cl 10ml (O.lmol)，緩慢滴加到甘氨酰苯丙氨酸 Gly-Phe-OH的DMF溶劑中，保持溫度在O'C攪拌反應(yīng)8~10h，反應(yīng)完畢減壓蒸除溶劑 得粗產(chǎn)物Ma-Gly-Phe-OH。
取亮氨酸Leu (2.0g， llmmol)溶解于20ml甲醇中，甲醇中預(yù)先溶解亞硫酰二氯 (1.39g， 11.7mmo1)，保持溫度在O'C攪拌反應(yīng)4~6h，反應(yīng)完畢減壓蒸除溶劑得粗產(chǎn)物 H陽(yáng)Leu-GIy-OMe.HCl。
取H-Leu-Gly-OMe.HCl (254mg， 1.07匪o1)溶解于2mlN,N-二甲基甲酰胺，加入 150mlTEA，混合物低溫?cái)嚢柘拢尤?mlDMF溶劑，在DMF中預(yù)先溶解Ma-Gly-Phe-OH (307mg， 1.06mmo1)，在反應(yīng)液中加入1-羥基苯并三唑(175mg， 1.15mmo1)禾B DCCI (232mg， 1.15mmol)， DCCI中預(yù)先溶解于4mlDMF中。保持反應(yīng)溫度在0。C攪拌lh。 反應(yīng)液置于冰箱中過(guò)夜，次日過(guò)濾，取濾液減壓蒸餾除去DMF,殘留物溶解于乙酸乙酯， 依次用5%碳酸氫鈉水溶液、檸檬酸水溶液和氯化鈉水溶液萃取，保留有機(jī)相，用無(wú)水 硫酸鈉干燥脫水，然后蒸干，產(chǎn)物用乙酸乙酯-乙醚混合溶劑重結(jié)晶。
將上述結(jié)晶產(chǎn)物溶解于50%甲醇水溶液中，加0.1M氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)到pH12， 加熱回流水解反應(yīng)4h，蒸除溶劑甲醇，溶液加0.1M鹽酸酸化到pH2，聚合短肽用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相加硫酸鈉干燥脫水，在乙酸乙酯-乙醚混合溶劑中重結(jié)晶即得產(chǎn)物 Ma-Gly-Phe國(guó)Leu-Gly-OH。
甲基丙烯酰四肽和4-硝基苯酚酯化制備甲基丙烯酰四肽硝酸酯。取Ma-Gly-Phe-Leu-Gly-OH溶解于THF中，緩慢滴加4-硝基苯酚THF溶液，保持室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24h， 過(guò)濾，取濾液減壓蒸除溶劑即得Ma-Gly-Phe- Leu-Gly-ONp。
(3) 合成聚合物-肽鏈共聚物(polymer- oligop印tidic sequence copolymer) HPMA/ Ma-Gly-Phe- Leu-Gly - ONp
方法以2， 2-偶氮二異丁腈(AIBN)為引發(fā)劑，HPMA與10% (mol/mol) MA-Gly-Phe-Leu-Gly通過(guò)自由基沉淀聚合反應(yīng)(單體-AIBN-溶劑12: 3: 85， wt%)制 備得到目標(biāo)產(chǎn)物。具體操作是HPMA (812.5mg， 6.9mmol)， MA-Gly-Phe-Leu-Gly-ONp U20mg， 0.7mmol)溶解于7.2ml丙酮中，加入AIBN (8.6mg)作為引發(fā)劑，加入 3-mercaptopropionic acid( 11.2mg)作為鏈轉(zhuǎn)移劑?；旌衔锶芤恨D(zhuǎn)入安瓿中氮?dú)夤呐?min， 排盡氧氣，密封置于50'C恒溫聚合反應(yīng)24h。反應(yīng)完畢后減壓蒸除丙酮，固體殘留物溶 解于甲醇中，柱層析純化，SephadexLH-60柱層析，用甲醇洗脫。低分子量和高分子量 聚合物棄去，收集分子量為MW10000的部分，收集液加壓濃縮，產(chǎn)物投入無(wú)水乙醚中， 析出沉淀即為終產(chǎn)物。產(chǎn)率60%， MW10000，分散度1.3。
(4) 合成聚合物先導(dǎo)分子(poly鵬r precursor) HPMA/ Ma-Gly-Phe- Leu-Gly-NHNH2 4 取聚合物(3) (317mg， 170umolONp)溶解于1.2ml DMSO中，保持室溫?cái)嚢柘拢?br> 逐滴加入過(guò)量水合肼(1700mg,34mmol),水合肼預(yù)先溶解于4mlDMF中，繼續(xù)攪拌 30min，加水稀釋到總體積50ml，透析，依次用20°/。乙醇水、稀鹽酸(pH3)、水透析 3d，聚合物凍干。產(chǎn)物用過(guò)量的羥基琥珀酰亞胺(HOSu)進(jìn)一步活化，得到具有肼基 的共聚物。
(5) 合成聚合物-肽鏈-潑尼松龍(P-Prs conjugate) HPMA/Ma-Gly-Phe-Leu-Gly-Prs
共聚物和過(guò)量的潑尼松龍(0.33g， 0.92mmol)混合，混合采用NN-二甲基甲酰胺 (lml)作為溶劑，并滴加一滴醋酸作為催化劑。室溫下攪拌反應(yīng)過(guò)夜，柱層析LH-20 分離2次除去未反應(yīng)的低分子量化合物。收集收集分子量為MW10000的部分，收集液 減壓濃縮，凍干后得到最終產(chǎn)物P-潑尼松龍(P-Prs)。潑尼松龍產(chǎn)品的含量為50mg/g 共聚物。
以上方法，合成的炎癥靶向潑尼松龍新產(chǎn)品，經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，在炎癥部位的關(guān)節(jié) 囊里可檢測(cè)到有較多的潑尼松龍釋放，在正常關(guān)節(jié)囊卻沒(méi)有觀察到有藥物的釋放。毒理 學(xué)研究沒(méi)有發(fā)現(xiàn)該產(chǎn)品有明顯的毒性。本合成方法還可以接合其他類固醇藥物，如可的松、氫化可的松、潑尼松、醋酸潑 尼松、潑尼松龍、醋酸潑尼松龍，地塞米松磷酸鈉和倍他米松等制劑。
權(quán)利要求
1、一種可攜帶糖皮質(zhì)激素作為炎癥靶向藥物的新型制劑的合成方法，其特征是以N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺聚合物作為藥物載體，通過(guò)下述五個(gè)步驟，合成N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺聚合物與潑尼松龍接合的炎癥靶向制劑(1)合成高分子N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺聚合物方法將甲基丙烯酰氯100ml(1.01mol)加到含有1-氨基-2-丙醇160ml(2.02mol)的乙腈溶液中，室溫?cái)嚢?0～40min，濾去沉淀，濾液在-50℃保溫0.5～1h，直至沉淀完全析出，過(guò)濾，沉淀用丙酮重結(jié)晶；(2)合成短肽鏈方法取甲基丙烯酰氯10ml(0.1mol)，緩慢滴加到甘氨酰苯丙氨酸Gly-Phe-OH的DMF溶劑中，保持溫度在0℃攪拌反應(yīng)8～10h，反應(yīng)完畢減壓蒸除溶劑得粗產(chǎn)物Ma-Gly-Phe-OH；取亮氨酸Leu(2. 0g，11mmol)溶解于20ml甲醇中，甲醇中預(yù)先溶解亞硫酰二氯(1.39g，11.7mmol)，保持溫度在0℃攪拌反應(yīng)4～6h，反應(yīng)完畢減壓蒸除溶劑得粗產(chǎn)物H-Leu-Gly-OMe.HCl；取H-Leu-Gly-OMe.HCl(254mg，1.07mmol)溶解于2mlN，N-二甲基甲酰胺，加入150mlTEA，混合物低溫?cái)嚢柘?，加?mlDMF溶劑，在DMF中預(yù)先溶解Ma-Gly-Phe-OH(307mg，1.06mmol)，在反應(yīng)液中加入1-羥基苯并三唑(175mg，1.15mmol)和DCCI(232mg，1.15mmol)，DCCI中預(yù)先溶解于4mlDMF中。保持反應(yīng)溫度在0℃攪拌1h，反應(yīng)液置于冰箱中過(guò)夜，次日過(guò)濾，取濾液減壓蒸餾除去DMF，殘留物溶解于乙酸乙酯，依次用5％碳酸氫鈉水溶液、檸檬酸水溶液和氯化鈉水溶液萃取，保留有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥脫水，然后蒸干，產(chǎn)物用乙酸乙酯-乙醚混合溶劑重結(jié)晶；將上述結(jié)晶產(chǎn)物溶解于50％甲醇水溶液中，加0.1M氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)到pH12，加熱回流水解反應(yīng)4h，蒸除溶劑甲醇，溶液加0.1M鹽酸酸化到pH2，聚合短肽用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相加硫酸鈉干燥脫水，在乙酸乙酯-乙醚混合溶劑中重結(jié)晶即得產(chǎn)物Ma-Gly-Phe-Leu-Gly-OH；甲基丙烯酰四肽和4-硝基苯酚酯化制備甲基丙烯酰四肽硝酸酯。取Ma-Gly-Phe-Leu-Gly-OH溶解于THF中，緩慢滴加4-硝基苯酚THF溶液，保持室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24h，過(guò)濾，取濾液減壓蒸除溶劑即得Ma-Gly-Phe-Leu-Gly-Onp；(3)合成聚合物-肽鏈共聚物方法以2，2-偶氮二異丁腈(AIBN)為引發(fā)劑，HPMA與10％(mol/mol)MA-Gly-Phe-Leu-Gly通過(guò)自由基沉淀聚合反應(yīng)(單體-AIBN-溶劑12385，wt％)制備得到目標(biāo)產(chǎn)物。具體操作是HPMA(812.5mg，6.9mmol)，MA-Gly-Phe-Leu-Gly-ONp(120mg，0.7mmol)溶解于7.2ml丙酮中，加入AIBN(8.6mg)作為引發(fā)劑，加入3-mercaptopropionic acid(11.2mg)作為鏈轉(zhuǎn)移劑?；旌衔锶芤恨D(zhuǎn)入安瓿中氮?dú)夤呐?min，排盡氧氣，密封置于50℃恒溫聚合反應(yīng)24h，反應(yīng)完畢后減壓蒸除丙酮，固體殘留物溶解于甲醇中，柱層析純化，Sephadex LH-60柱層析，用甲醇洗脫，低分子量和高分子量聚合物棄去，收集分子量為MW10000的部分，收集液加壓濃縮，產(chǎn)物投入無(wú)水乙醚中，析出沉淀即為終產(chǎn)物。產(chǎn)率60％，MW10000，分散度1.3；(4)合成聚合物先導(dǎo)分子取聚合物(3)(317mg，170μmol ONp)溶解于1.2ml DMSO中，保持室溫?cái)嚢柘?，逐滴加入過(guò)量水合肼(1700mg，34mmol)，水合肼預(yù)先溶解于4mlDMF中，繼續(xù)攪拌30min，加水稀釋到總體積50ml，透析，依次用20％乙醇水、稀鹽酸(pH3)、水透析3d，聚合物凍干，產(chǎn)物用過(guò)量的羥基琥珀酰亞胺(HOSu)進(jìn)一步活化，得到具有肼基的共聚物；(5)合成聚合物-肽鏈-潑尼松龍共聚物和過(guò)量的潑尼松龍(0.33g，0.92mmol)混合，混合采用NN-二甲基甲酰胺(1ml)作為溶劑，并滴加一滴醋酸作為催化劑。室溫下攪拌反應(yīng)過(guò)夜，柱層析LH-20分離2次除去未反應(yīng)的低分子量化合物。收集收集分子量為MW10000的部分，收集液減壓濃縮，凍干后得到最終產(chǎn)物P-潑尼松龍(P-Prs)。潑尼松龍產(chǎn)品的含量為50mg/g共聚物。
2、如權(quán)利要求1所述的一種可攜帶糖皮質(zhì)激素作為炎癥靶向藥物的新型制劑的 合成方法，其特征是該合成方法還可以接合其他類固醇藥物，如可的松、氫化可的 松、潑尼松、醋酸潑尼松、潑尼松龍、醋酸潑尼松龍，地塞米松磷酸鈉和倍他米松。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種可攜帶糖皮質(zhì)激素作為炎癥靶向藥物新制劑的合成方法，該方法以水溶性N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺聚合物作為攜帶糖皮質(zhì)激素的載體，通過(guò)下述五個(gè)步驟，合成N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺聚合物與潑尼松龍接合的炎癥靶向制劑(1)合成高分子N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺聚合物；(2)合成短肽鏈；(3)合成聚合物-肽鏈共聚物；(4)合成聚合物先導(dǎo)分子；(5)合成聚合物-肽鏈-潑尼松龍。本發(fā)明合成的新型的靶向制劑，可以把潑尼松龍定向地運(yùn)送到炎癥組織，特別是關(guān)節(jié)炎的發(fā)炎組織中，在炎癥組織中釋放，發(fā)揮良好的抗炎作用，對(duì)正常組織不產(chǎn)生不良反應(yīng)，是一個(gè)十分優(yōu)良的新新型的炎癥靶向制劑。
文檔編號(hào)A61P19/00GK101518654SQ20091012797
公開(kāi)日2009年9月2日 申請(qǐng)日期2009年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月26日
發(fā)明者呂應(yīng)年, 鐵 吳, 燎 崔, 東 王 申請(qǐng)人:廣東醫(yī)學(xué)院