專(zhuān)利名稱(chēng)：一種藥物組合物的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種藥物組合物的質(zhì)量控制方法，屬于藥品的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
心腦血管疾病如冠心病、腦血栓、老年性癡呆等均是當(dāng)今世界最常見(jiàn)和危害最大的疾病之一，在許多國(guó)家已成為人口死亡的主要原因之一；據(jù)調(diào)查，近年來(lái)的發(fā)病率有逐年增高趨勢(shì)，而且中、青年患者不斷增加，心腦缺血性疾病已成為危害我國(guó)人民健康的常見(jiàn)病、多發(fā)??；為了達(dá)到防治目的，許多發(fā)明人及藥品企業(yè)對(duì)其做了大量的研究工作。藥物制劑必須要在保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可控安全的基礎(chǔ)之上，才能不斷的更新發(fā)展，為了更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使工藝控制更加嚴(yán)格合理，使消費(fèi)者能全面認(rèn)識(shí)產(chǎn)品質(zhì)地，需要研究、控制該藥物組合物質(zhì)量的方法；目前，在相關(guān)藥物制劑中，一般僅以野黃芩苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1為檢測(cè)指標(biāo)，但是它根本不能全面反應(yīng)產(chǎn)品的質(zhì)量，僅以此用來(lái)控制藥物組合物的質(zhì)量不是十分合理；如果用別的指標(biāo)進(jìn)行控制，由于沒(méi)有現(xiàn)成的檢測(cè)方案、檢測(cè)條件等等，所以比較難于實(shí)施。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的藥物組合物的質(zhì)量控制方法。這種方法向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測(cè)機(jī)構(gòu)提供了檢測(cè)的指標(biāo)、檢測(cè)的手段、技術(shù)方法等等，以便更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴(yán)格合理，使消費(fèi)者能全面認(rèn)識(shí)產(chǎn)品質(zhì)地。
該藥物組合物的藥味組成及配比如下(按重量份)方案一三七1～99重量份燈盞花素30～0.1重量份方案二三七總皂苷0.1～30重量份燈盞花素30～0.1重量份上述藥物組合物的劑型為注射劑或口服制劑；其中注射劑包括直接用于注射給藥的注射液、直接供靜脈滴注的靜脈輸液、需稀釋后用于靜脈滴注的注射用濃溶液和用冷凍干燥法或噴霧干燥法制備的注射用無(wú)菌粉末或無(wú)菌塊狀物；口服制劑包括片劑、分散片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、顆粒劑、丸劑、微丸劑、散劑、滴丸劑、緩釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑、凝膠劑、煎膏劑、浸膏劑和膜劑。臨床上用于治療冠心病、心絞痛、心律失常、腦血栓、老年性癡呆、肝腎綜合癥、心肺病、糖尿病及其并發(fā)癥等疾病。
本發(fā)明是這樣構(gòu)成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容(1)指紋圖譜測(cè)試，包括以三七成分特征為主的指紋圖譜；(2)三七對(duì)照藥材、野黃芩苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中全部或部分成分的鑒別測(cè)試方法；(3)野黃芩苷、總皂苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中全部或部分成分的含量測(cè)試方法。
所述的以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測(cè)試以三七成分特征為主的指紋圖譜采用液相色譜法測(cè)試以三七成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或水稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量三七藥材中的主要活性成分對(duì)照品，包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈或甲醇∶水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測(cè)波長(zhǎng)為190-400nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以三七成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～30個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)藥物組合物中以三七成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)樣品的指紋圖譜；(6)將待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計(jì)算待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；
II.待測(cè)藥物組合物指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過(guò)總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)偏差不得超過(guò)±20％。
所述的以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測(cè)試以三七成分特征為主的指紋圖譜采用液相色譜法測(cè)試以三七成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或水稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱(chēng)取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈∶水，梯度洗脫，，溶劑比例為從0分鐘至12分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測(cè)波長(zhǎng)203±2nm，柱溫30℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以三成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)藥物組合物中以三七成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)樣品的指紋圖譜；(6)將待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計(jì)算待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測(cè)藥物組合物指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過(guò)總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)偏差不得超過(guò)±10％。
所述的以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物的鑒別方法包括以下中的一種或幾種a、藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取待測(cè)藥物組合物適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過(guò)或離心，取濾液或上清液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水或甲醇0.2～60∶0.2～10∶0.3～20或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以0.3％～10％三氯化鋁乙醇或0.3～10％三氯化鋁甲醇溶液或0.3～10％三氯化鐵乙醇溶液，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視或105℃烘1～15分鐘后置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；b、藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或流動(dòng)相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為200～410nm；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；c、藥物組合物中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測(cè)藥物組合物適量，用正丁醇或乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷提取，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取三七對(duì)照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對(duì)照溶液；三七對(duì)照藥材溶液的制備取三七對(duì)照藥材適量，加三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚回流提取，棄去三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚液，殘?jiān)铀柡驼〈蓟虼姿嵋阴ヌ崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙猓鳛閷?duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品，分別加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～3010℃以下放置的下層溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上層為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑或50％硫酸試劑，80℃～160℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾；d、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動(dòng)相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無(wú)干擾。
所述的以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物的鑒別方法包括以下中的一種或幾種a、藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點(diǎn)于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑；b、藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；c、藥物組合物中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測(cè)藥物組合物適量，用正丁醇提取，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取紅參或人參對(duì)照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對(duì)照藥材溶液；三七對(duì)照藥材溶液的制備取三七對(duì)照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為?duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾；d、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無(wú)干擾。
所述的以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物含量的測(cè)試方法應(yīng)包括以下中的一種或幾種a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測(cè)定取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或流動(dòng)相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為200～410nm；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于2mg；b、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測(cè)定取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動(dòng)相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng)(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于2.5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于3.5mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.25mg；每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于6mg；c、藥物組合物中總皂苷的含量測(cè)定取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛-冰醋酸溶液0.1～10ml，高氯酸0.1～15ml，搖勻，30～80℃水浴上加熱3～50分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1為對(duì)照品，同法制得對(duì)照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的分光光度法，在547±10nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1計(jì)，不得少于10mg。
所述的以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物含量的測(cè)試方法是以下一種或幾種方法a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測(cè)定取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm；以外標(biāo)一點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg；
b、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測(cè)定取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng)(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg；c、藥物組合物中總皂苷的含量測(cè)定取待測(cè)藥物適量，置10ml量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.6，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對(duì)照品，同法制得對(duì)照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的分光光度法，在547nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于20mg。
所述的以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射劑的含量測(cè)定結(jié)果，按照重量百分比計(jì)算，野黃芩苷、總皂苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中的全部或部分物質(zhì)的總含量占制劑中扣除輔料和水分外的總固體量的25％以上。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明能更加完善的控制以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量。中藥成分復(fù)雜，如果只用其中一、兩種成分來(lái)說(shuō)明其內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更無(wú)法判斷其藥效的指標(biāo)成分。因此本申請(qǐng)人制定了以三七成分特征為主的指紋圖譜、鑒別和含量測(cè)定來(lái)全面控制藥物組合物的質(zhì)量。但是由于藥物組合物中的各藥材之間所含的化學(xué)成分復(fù)雜，對(duì)指紋圖譜的制定、鑒別和含量測(cè)定造成干擾，導(dǎo)致鑒別、含量測(cè)定和各部分指紋圖譜特征不穩(wěn)定，所以必須控制流動(dòng)相、展開(kāi)劑等色譜條件，才能得到良好的薄層色譜、含測(cè)條件和指紋圖譜。也就是說(shuō)，由于處方中各成分相互之間的干擾影響，導(dǎo)致藥物組合物中三七部分的指紋圖譜特征峰發(fā)生改變，而只有采用本發(fā)明的條件，才能得到理想的薄層色譜、含測(cè)條件和指紋圖譜。
通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明質(zhì)量控制方法對(duì)以燈盞細(xì)辛、三七制成的藥物組合物產(chǎn)品的質(zhì)量控制更為有效，方法精密度、穩(wěn)定性均較高。
實(shí)驗(yàn)例1以三七成分特征為主的指紋圖譜a、實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及樣品對(duì)照品人參皂苷Rg1中國(guó)藥品生物制品檢定所b、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)1.色譜柱的選擇研究過(guò)程中，選用了常規(guī)的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Diamonsil ODS(均為C18，4.6mm×200mm，5μm)三種牌號(hào)的色譜柱，結(jié)果顯示三種牌號(hào)的色譜柱均可達(dá)到較好的分離效果，其中Diamonsil ODS色譜柱分離效果最好，柱效最高，可以達(dá)到5400(以參照物人參皂苷Rg1計(jì)算)。故最終選用Diamonsil ODS色譜柱(4.6mm×200mm，5μm)為實(shí)驗(yàn)研究柱。
2.流動(dòng)相的選擇研究過(guò)程中分別考察了(1)甲醇-水(20∶80)，(2)乙腈-水(10∶90)，(3)乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液(梯度洗脫)(4)乙腈-水(梯度洗脫)(梯度洗脫體積配比為從0分鐘至12分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％)四種流動(dòng)相系統(tǒng)。結(jié)果顯示流動(dòng)相(1)條件下，峰形較差，1小時(shí)內(nèi)出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動(dòng)相(2)流動(dòng)相條件下，峰形較差，分離不好；(3)條件下，峰拖尾嚴(yán)重，出峰不完全；流動(dòng)相(4)條件下，峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而最終被選用。
3.檢測(cè)波長(zhǎng)的確定研究中在乙腈-水(梯度洗脫)流動(dòng)相條件下，分別考察了在不同波段典型波長(zhǎng)203、210、230、254下的色譜峰情況，結(jié)果顯示，在203nm下色譜峰較多，峰形較好，故最終選用203nm±2作為檢測(cè)波長(zhǎng)。
4.儀器、色譜柱及積分參數(shù)4.1儀器參數(shù)選用了液相色譜分析領(lǐng)域主流配置和性能良好的Agilent1100系列高效液相色譜儀，Chemstation色譜工作站。色譜柱為Diamonsil ODS(4.6mm×200mm，5μm)；柱溫40℃，流速1.0ml/min。
4.2積分參數(shù)Slope Sensitivity1，peak width0.05，最小峰面積為參照物(S)峰峰面積的5％，最小峰高為S峰峰高的5％。如此設(shè)定可以避免一些很小面積的色譜峰(單峰面積占總峰面積小于0.5％)的計(jì)算，同時(shí)保證與參照物的相關(guān)性。
5.供試品溶液的制備精密稱(chēng)取本品適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，即得。
6.參照物溶液的制備人參皂苷Rg1為三七主要活性成分之一，其積分面積在指紋圖譜中所占比例較大且較穩(wěn)定，同時(shí)兼顧中間體和藥材的研究，因此選定人參皂苷Rg1作為參照物。
7.指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)根據(jù)10批樣品制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，將供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度均在0.90～1.00之間。
實(shí)驗(yàn)例2藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法為了突出燈盞細(xì)辛的特征，選擇了野黃芩苷作為其特征，但是由于藥材中存在較多與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開(kāi)條件對(duì)野黃芩苷進(jìn)行了展開(kāi)

經(jīng)過(guò)篩選，確定了以聚酰胺膜為固定相，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸(7-2-1)為展開(kāi)劑，在此條件下，野黃芩苷的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無(wú)干擾。
實(shí)驗(yàn)例3藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法為了突出燈盞細(xì)辛的特征，除了薄層鑒別方法以外，選擇了野黃芩苷作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動(dòng)相對(duì)野黃芩苷進(jìn)行了分離

經(jīng)過(guò)篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)為流動(dòng)相，在此條件下，野黃芩苷保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對(duì)稱(chēng)，陰性無(wú)干擾。
實(shí)驗(yàn)例4藥物組合物人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的薄層色譜鑒別方法為了突出三七的特征，選擇了人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1作為其特征斑點(diǎn)，但是由于藥材中存在較多與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開(kāi)條件對(duì)麥冬進(jìn)行了展開(kāi)

經(jīng)過(guò)篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，在此條件下，人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無(wú)干擾。
實(shí)驗(yàn)例5藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的液相色譜鑒別方法為了突出三七的特征，選擇了人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動(dòng)相對(duì)人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1進(jìn)行了分離

經(jīng)過(guò)篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％，在此條件下，人人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對(duì)稱(chēng)，陰性無(wú)干擾。
實(shí)驗(yàn)例6藥物組合物中野黃芩苷含量測(cè)定1儀器與試藥1.1主要儀器高效液相色譜儀 LC-2010AHT SHIMADZU紫外/可見(jiàn)分光光度儀 TU-1810SPC 北京普析通用儀器有限公司電子分析天平BP211D SARTORIUS超聲波清洗機(jī)KQ250DB昆山市超聲儀器有限公司1.2試藥野黃芩苷 中國(guó)藥品生物制品檢定所甲醇 分析純 北京化工廠(chǎng)乙腈 色譜純 迪馬公司磷酸 分析純 北京化學(xué)試劑公司2野黃芩苷 由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供野黃芩苷，經(jīng)高效液相色譜法(歸一化法)測(cè)定純度為96.40％，符合含量測(cè)定用對(duì)照品要求(在測(cè)定中，按照96.40％的純度進(jìn)行折算)。
3檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取野黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1ml含0.0463mg的溶液，在190～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，野黃芩苷在284nm及335nm處有最大吸收，根據(jù)《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》相關(guān)品種并結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，選擇335nm作為野黃芩苷含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。
4色譜條件色譜儀SHIMADZU LC-2010AHT；色譜柱Diamonsil ODS 250mm×4.6mm 5μm；流動(dòng)相甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量10μl；檢測(cè)波長(zhǎng)335nm。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取野黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.25g，精密稱(chēng)定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
根據(jù)上述色譜條件得到野黃芩苷對(duì)照品、供試品色譜圖，其理論板數(shù)n均大于2000，野黃芩苷色譜峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5，溶劑無(wú)干擾。
5提取時(shí)間的選擇 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.25g(共3份)，精密稱(chēng)定，分置25ml量瓶中，加甲醇適量，分別超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5、10、20min，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
提取時(shí)間考察

結(jié)果表明，超聲處理5min即可提取完全。
6線(xiàn)性關(guān)系考察 精密量取野黃芩苷對(duì)照品溶液(C＝0.978mg/ml)0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VID)測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，野黃芩苷的量(μg)為橫坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
野黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)測(cè)定結(jié)果

回歸方程Y＝3259091.50x-1830.06相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999結(jié)果表明野黃芩苷在0.1886μg～0.9428μg范圍內(nèi)線(xiàn)性良好。
經(jīng)計(jì)算，野黃芩苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)過(guò)原點(diǎn)，因此選用外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)定野黃芩苷的含量。
7精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取野黃芩苷對(duì)照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定5次，考察對(duì)照品溶液精密度，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)下表。
精密度試驗(yàn)

結(jié)果表明，對(duì)照品溶液精密度良好。
8穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)8.1對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取野黃芩苷對(duì)照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，注入液相色譜儀，分別在0、2、4、8、24小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。
對(duì)照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明，對(duì)照品溶液24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
8.2供試品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，分別在0、2、4、8、24小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。
供試品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

結(jié)果表明，供試品溶液24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
9重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取本品，按正文供試品溶液的制備和測(cè)定法項(xiàng)下進(jìn)行操作。
重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

10加樣回收率實(shí)驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.13g(共6份)，精密稱(chēng)定，分置25ml量瓶中，分別精密加入野黃芩苷對(duì)照品溶液(C＝0.6532mg/ml)1.0ml，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
藥物組合物中野黃芩苷的含量為5.462mg/g。
加樣回收率實(shí)驗(yàn)

平均回收率＝97.82％，RSD＝0.97％11樣品含量測(cè)定 取本品三批樣品，按照正文供試品溶液的制備和測(cè)定法項(xiàng)下的操作。
野黃芩苷含量測(cè)定

實(shí)驗(yàn)例8藥物組合物中總皂苷含量測(cè)定1儀器、試藥1.1儀器普析通 TU-1810SPC 紫外/可見(jiàn)分光光度儀SARTORIUS BP211D 電子分析天平1.2試藥香草醛 分析純 天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所甲醇 色譜純 J.T.Baker冰醋酸 分析純 上海試劑一廠(chǎng)高氯酸 分析純 天津市鑫源化工廠(chǎng)純凈水 娃哈哈2方法與結(jié)果2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 精密稱(chēng)取人參皂苷Rg15.14mg，置100ml量瓶中，加適量甲醇超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，在700～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果表明，黃芪甲苷在547nm處有最大吸收，空白無(wú)干擾，因此選擇547nm為分光光度法測(cè)定藥物組合物中總皂苷的檢測(cè)波長(zhǎng)。
2.2對(duì)照品溶液的制備 人參皂苷Rg15mg，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。
2.3供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約50mg，精密稱(chēng)定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VA)，在547nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算，即得。
3線(xiàn)性關(guān)系的考察 精密稱(chēng)取人參皂苷Rg1對(duì)照品5.03mg，置100ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分置10ml具塞試管中，0水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VA)，在547nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo)，黃芪甲苷的量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
回歸方程Y＝0.0062X+0.0047；r＝0.9999人參皂苷Rg1在20.12～100.6μg范圍線(xiàn)性良好。
人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)測(cè)定數(shù)據(jù)

3精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液(0.0503mg/ml)1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，按正文測(cè)定法項(xiàng)下操作，連續(xù)測(cè)定5次。
精密度實(shí)驗(yàn)

5穩(wěn)定性試驗(yàn)5.1對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液(0.0503mg/ml)1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，按正文測(cè)定法項(xiàng)下操作，分別在0、10、20、40、60分鐘時(shí)測(cè)定。
對(duì)照品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

5.2供試品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取本品裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約50mg，按正文測(cè)定法項(xiàng)下進(jìn)行操作，分別在0、10、20、40、60分鐘時(shí)測(cè)定。
供試品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

6重復(fù)性試驗(yàn) 取本品裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約50mg(共5份)，按正文測(cè)定法項(xiàng)下進(jìn)行操作。
重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

7回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約25mg(共5份)，精密稱(chēng)定，分置25ml量瓶中；精密量取人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液(0.674mg/ml)1ml(共5份)，精密稱(chēng)定，分置上述25ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml具塞試管中，按正文測(cè)定法項(xiàng)下進(jìn)行操作，以隨行溶劑為空白，依法測(cè)定吸收度，按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算，即得。
藥物組合物中總皂苷的含量26.52mg/g加樣回收率實(shí)驗(yàn)

平均回收率＝97.99％RSD＝1.03％8三批中試樣品含量測(cè)定取本品樣品三批，按正文所述方法處理。
三批樣品含量測(cè)定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)例9藥物組合物中三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1含量測(cè)定1儀器與試藥1.1儀器Alltech UVIS-201高效液相色譜儀，Alltech HPLC system工作站(美國(guó))KQ250B超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)ZK-30ABX電熱真空干燥箱(北京中興偉業(yè)儀器公司)Mettler AE240電子天平(上海梅特勒公司)1.2試藥三七皂苷R1中國(guó)藥品生物制品檢定所人參皂苷Rg1中國(guó)藥品生物制品檢定所人參皂苷Rb1中國(guó)藥品生物制品檢定所所用甲醇、乙腈均為色譜純，均購(gòu)于德國(guó)Merck公司水為重蒸水，其它試劑均為分析純。
2色譜條件色譜柱Diamonsil(TM)C18，5μm；250×4.6mm；流動(dòng)相乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫；梯度洗脫系統(tǒng)

流速1ml/min，兩次進(jìn)樣間隔平衡時(shí)間3min；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量10μl理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1，均在203nm波長(zhǎng)處有最大吸收，因此選用203nm作為本品的檢測(cè)波長(zhǎng)。
3對(duì)照品溶液的制備 取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，分別加甲醇制成每ml含三七皂苷R10.62mg、人參皂苷Rg11.42mg和人參皂苷Rb12.14mg的溶液，作為貯備液；再分別吸取上述溶液各1ml，置同一5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每ml含三七皂苷R10.124mg、人參皂苷Rg10.284mg和人參皂苷Rb10.428mg的對(duì)照品溶液。
4供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中精密稱(chēng)取2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
5陰性供試品溶液的制備 照本品處方稱(chēng)取除三七外的其它成分，按本品制備工藝制成陰性供試品。精密稱(chēng)取2.40572g，照供試品溶液的制備項(xiàng)下方法制備，作為陰性供試品溶液。
6系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 根據(jù)上述色譜條件得到三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、混合對(duì)照品、樣品、陰性色譜圖，理論板數(shù)n大于3000，樣品中各對(duì)照品峰與相近峰分離清晰完全，分離度大于1.5，陰性無(wú)干擾。
7線(xiàn)性關(guān)系的考察 取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，分別加甲醇制成每ml含三七皂苷R10.62mg、人參皂苷Rg11.42mg和人參皂苷Rb12.14mg的溶液，作為貯備液；精密量取前述對(duì)照品貯備液各0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0ml，分置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，依次注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
回歸方程為三七皂苷R1Y＝208361.76X-1972.29r＝0.9995；人參皂苷Rg1Y＝293933.01X-13982.75r＝0.9994；人參皂苷Rb1Y＝192503.18X-9202.56r＝0.9993。
結(jié)果表明三七皂苷R1在0.248-2.480μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好；人參皂苷Rg1在0.568-5.680μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好；人參皂苷Rb1在0.856-8.560μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。
線(xiàn)性關(guān)系試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

8精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品混合溶液(三七皂苷R10.124mg/ml、人參皂苷Rg10.284mg/ml和人參皂苷Rb10.428mg/ml)，連續(xù)測(cè)定5次，考察對(duì)照品溶液精密度。
精密度試驗(yàn)

9穩(wěn)定性試驗(yàn)9.1對(duì)照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取對(duì)照品混合溶液(三七皂苷R10.124mg/ml、人參皂苷Rg10.284mg/ml和人參皂苷Rb10.428mg/ml)，分別在0、2、6、10、24小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，考察對(duì)照品溶液穩(wěn)定性。
對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)

9.2供試品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中精密稱(chēng)取2.48425g，，按正文供試品溶液制備下進(jìn)行操作，分別在0、2、6、10、24小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。
穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。
10重復(fù)性試驗(yàn) 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約2.5g(共5份)，按正文測(cè)定法供試品溶液制備和測(cè)定項(xiàng)下進(jìn)行操作。
重復(fù)性試驗(yàn)

結(jié)果表明，本法重復(fù)性較好。
11、加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約1.25g(共5份)，分別置50ml量瓶中，另精密量取混合對(duì)照品溶液4ml(其中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1的濃度為0.392mg/ml、1.714mg/ml、2.389mg/ml)，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
經(jīng)測(cè)定已知藥物組合物中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1的含量分別是1.411、6.811、8.970mg/g。
三七皂苷R1加樣回收率試驗(yàn)

平均回收率＝97.80％；RSD＝1.12％。
人參苷Rg1加樣回收率試驗(yàn)

平均回收率＝97.75％；RSD＝1.50％。
人參苷Rb1加樣回收率試驗(yàn)

平均回收率＝97.37％；RSD＝1.35％。
12三批中試樣品含量測(cè)定取本品樣品三批，按正文所述方法處理。
三批樣品含量測(cè)定結(jié)果

具體的實(shí)施方式實(shí)施例1采用液相色譜法測(cè)試以三七成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取本明組方粉針制劑適量，加甲醇稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱(chēng)取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈∶水，梯度洗脫，，溶劑比例為從0分鐘至12分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測(cè)波長(zhǎng)203±2nm，柱溫30℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以上成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為本發(fā)明組方粉針制劑中以三七成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備粉針制劑的指紋圖譜；(6)將本發(fā)明粉針制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計(jì)算粉針的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.粉針指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過(guò)總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對(duì)偏差不得超過(guò)±10％。
實(shí)施例2采用液相色譜法測(cè)試以三七成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取本發(fā)明組方水針制劑適量，加乙醇稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量三七藥材中的主要活性成分對(duì)照品，包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種，用乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為甲醇∶1.5％冰醋酸溶液，梯度洗脫，流速為0.8ml/min、檢測(cè)波長(zhǎng)203nm，柱溫50℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以三七成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～30個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為本發(fā)明組方水針制劑中以三七成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備水針制劑的指紋圖譜；(6)將本發(fā)明組方水針的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計(jì)算待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.待測(cè)藥物組合物指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過(guò)總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對(duì)偏差不得超過(guò)±20％。
實(shí)施例3藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取本發(fā)明組方粉針制劑適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點(diǎn)于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑。
實(shí)施例4藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取本發(fā)明組方粉針制劑適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例5藥物組合物中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取本發(fā)明組方粉針制劑適量，用正丁醇提取，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取紅參或人參對(duì)照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對(duì)照藥材溶液；三七對(duì)照藥材溶液的制備取三七對(duì)照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為?duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。
實(shí)施例6藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取本發(fā)明組方粉針制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無(wú)干擾。
實(shí)施例7藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取本發(fā)明組方分散片適量，加醋酸乙酯提取，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各20μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-甲酸乙酯-乙酸-水12∶5∶2∶1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以0.37％三氯化鋁乙醇溶液，置日光下或紫外光燈365nm下檢視或105℃烘10分鐘后置日光下或紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例8藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取本發(fā)明組方滴丸適量，加乙醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水70％∶30％，檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例9藥物組合物中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取本發(fā)明組方分散片適量，用三氯甲烷提取，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取三七對(duì)照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R，制備對(duì)照溶液；三七對(duì)照藥材溶液的制備取三七對(duì)照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)靡掖既芙猓鳛閷?duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1，分別加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各25μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以正丁醇-甲酸乙酯-水3∶1∶8的上層為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以50％硫酸試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。
實(shí)施例10藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取本發(fā)明組方水針適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-3.0％冰醋酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為1.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)200nm，柱溫50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無(wú)干擾。
實(shí)施例11藥物組合物中野黃芩苷的含量測(cè)定取本發(fā)明組方粉針制劑適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm；以外標(biāo)一點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算，粉針制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg。
實(shí)施例12藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測(cè)定取本發(fā)明組方粉針制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法進(jìn)行計(jì)算，粉針制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng)(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg。
實(shí)施例13藥物組合物中總皂苷的含量測(cè)定取本發(fā)明組方粉針制劑適量，置10ml量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.6，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對(duì)照品，同法制得對(duì)照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的分光光度法，在547nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，粉針制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于20mg。
實(shí)施例14藥物組合物中野黃芩苷的含量測(cè)定取本發(fā)明組方分散片適量，加水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為336nm；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法進(jìn)行計(jì)算，分散片制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于2mg。
實(shí)施例15藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測(cè)定取本發(fā)明組方滴丸制劑適量，置量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-3％冰醋酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為1.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)205nm，柱溫50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法進(jìn)行計(jì)算，滴丸制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng)(4)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于2.5mg；(5)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于3.5mg；(6)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.25mg；每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于6mg。
實(shí)施例16藥物組合物中總皂苷的含量測(cè)定取本發(fā)明組方水針制劑適量，置量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛-冰醋酸溶液0.1～10ml，高氯酸0.1～15ml，搖勻，30～80℃水浴上加熱3～50分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1為對(duì)照品，同法制得對(duì)照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的分光光度法，在547±10nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法進(jìn)行計(jì)算，本發(fā)明組方水針制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1計(jì)，不得少于10mg。
權(quán)利要求
1.一種以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容(1)指紋圖譜測(cè)試，包括以三七成分特征為主的指紋圖譜；(2)三七對(duì)照藥材、野黃芩苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中全部或部分成分的鑒別測(cè)試方法；(3)野黃芩苷、總皂苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中全部或部分成分的含量測(cè)試方法。
2.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測(cè)試以三七成分特征為主的指紋圖譜采用液相色譜法測(cè)試以三七成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或水稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量三七藥材中的主要活性成分對(duì)照品，包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈或甲醇∶水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測(cè)波長(zhǎng)為190-400nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以三七成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～30個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)藥物組合物中以三七成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)樣品的指紋圖譜；(6)將待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計(jì)算待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.待測(cè)藥物組合物指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過(guò)總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對(duì)偏差不得超過(guò)±20％。
3.按照權(quán)利要求2所述的以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測(cè)試以三七成分特征為主的指紋圖譜采用液相色譜法測(cè)試以三七成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或水稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱(chēng)取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈∶水，梯度洗脫，，溶劑比例為從0分鐘至12分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測(cè)波長(zhǎng)203±2nm，柱溫30℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以上成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)藥物組合物中以三七成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)樣品的指紋圖譜；(6)將待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計(jì)算待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測(cè)藥物組合物指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過(guò)總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對(duì)偏差不得超過(guò)±10％。
4.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物的鑒別方法包括以下中的一種或幾種a、藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取待測(cè)藥物組合物適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過(guò)或離心，取濾液或上清液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水或甲醇0.2～60∶0.2～10∶0.3～20或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以0.3％～10％三氯化鋁乙醇或0.3～10％三氯化鋁甲醇溶液或0.3～10％三氯化鐵乙醇溶液，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視或105℃烘1～15分鐘后置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；b、藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或流動(dòng)相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為200～410nm；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；c、藥物組合物中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測(cè)藥物組合物適量，用正丁醇或乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷提取，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取三七對(duì)照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對(duì)照溶液；三七對(duì)照藥材溶液的制備取三七對(duì)照藥材適量，加三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚回流提取，棄去三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚液，殘?jiān)铀柡驼〈蓟虼姿嵋阴ヌ崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為?duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品，分別加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～30 10℃以下放置的下層溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上層為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑或50％硫酸試劑，80℃～160℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾；d、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動(dòng)相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無(wú)干擾。
5.按照權(quán)利要求4所述的以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物的鑒別方法包括以下中的一種或幾種a、藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點(diǎn)于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑；b、藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；c、藥物組合物中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測(cè)藥物組合物適量，用正丁醇提取，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取紅參或人參對(duì)照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對(duì)照藥材溶液；三七對(duì)照藥材溶液的制備取三七對(duì)照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛。崛∫杭影痹囈?，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓鳛閷?duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾；d、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無(wú)干擾。
6.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物含量的測(cè)試方法應(yīng)包括以下中的一種或幾種a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測(cè)定取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或流動(dòng)相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為200～410nm；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于2mg；b、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測(cè)定取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動(dòng)相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng)(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于2.5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于3.5mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.25mg；每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于6mg；c、藥物組合物中總皂苷的含量測(cè)定取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛-冰醋酸溶液0.1～10ml，高氯酸0.1～15ml，搖勻，30～80℃水浴上加熱3～50分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1為對(duì)照品，同法制得對(duì)照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的分光光度法，在547±10nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1計(jì)，不得少于10mg。
7.按照權(quán)利要求6所述的以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物含量的測(cè)試方法是以下一種或幾種方法a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測(cè)定取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm；以外標(biāo)一點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg；b、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測(cè)定取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng)(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg；c、藥物組合物中總皂苷的含量測(cè)定取待測(cè)藥物適量，置10ml量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.6，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對(duì)照品，同法制得對(duì)照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國(guó)藥典附錄公開(kāi)的分光光度法，在547nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于20mg。
8.按照權(quán)利要求6或7所述的以燈盞花素、三七制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射劑的含量測(cè)定結(jié)果，按照重量百分比計(jì)算，野黃芩苷、總皂苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中的全部或部分物質(zhì)的總含量占制劑中扣除輔料和水分外的總固體量的25％以上。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種由三七或其提取物、有效部位與燈盞花素制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量控制方法包括該組方制劑中三七、燈盞花素的指紋圖譜測(cè)試方法和/或鑒別測(cè)試方法和/或含量測(cè)定方法，本發(fā)明為該組方制劑的質(zhì)量控制提供了一種可靠、穩(wěn)定、全新的方法，使該制劑的工藝控制更加嚴(yán)格合理，質(zhì)量更加穩(wěn)定，同時(shí)為大生產(chǎn)提供了可靠穩(wěn)定的檢測(cè)方法，為確保患者用藥的有效性、安全性提供了數(shù)字化的說(shuō)明。
文檔編號(hào)A61P7/02GK1939372SQ20051010781
公開(kāi)日2007年4月4日 申請(qǐng)日期2005年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月30日
發(fā)明者于文風(fēng) 申請(qǐng)人:北京奇源益德藥物研究所