專利名稱：中藥生物堿類脂質(zhì)體及其制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說(shuō)它是中藥生物堿類脂質(zhì)體及其制劑。
背景技術(shù)：
利用磷脂與所說(shuō)的生物堿(包括小檗堿、小檗胺、千金藤啶堿(千金藤素)、四氫帕馬丁和黃藤素)制成脂質(zhì)體，可以經(jīng)靜脈、肌肉、口腔、鼻腔等途徑給藥。
中藥生物堿類藥物是一類有著較強(qiáng)生理活性化合物，如小檗堿(berberine，Ber)是從黃連等植物中提取出的一種異喹啉類生物堿，對(duì)多種革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌有抑菌作用，臨床上主要用于清熱解毒和治療腸道感染。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)Ber具有多種非抗菌作用，開(kāi)發(fā)了許多新用途，如治療心律失常、高血壓、高血脂癥、糖尿病、消化性潰瘍(胃及十二指腸潰瘍)、口腔潰瘍、結(jié)腸炎、慢性膽囊炎、中耳炎、結(jié)膜炎、皮膚感染、預(yù)防癌癥等(1、袁建喜，安俊榮 黃連素的臨床新用河北中西醫(yī)結(jié)合雜志1999，8(2).-174-175；2、曾明輝 黃連素臨床應(yīng)用新進(jìn)展 河北中西醫(yī)結(jié)合雜志1999，8(3).-344-345；3、韋正步 小檗堿臨床應(yīng)用概況 西北藥學(xué)雜志1998，13(4).-178-179；4、邢周英，胡玉生 幾種老藥的新用途 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)1997，32(4).-441；5、劉一民，王敬東 黃連素非抗菌作用的應(yīng)用進(jìn)展 河北中西醫(yī)結(jié)合雜志1997，6(2).-325-326；6、陶岳多，徐樹(shù)英 黃連素臨床應(yīng)用進(jìn)展 臨床醫(yī)學(xué)1998，18(5).-32-33；7、郝文 黃連素在內(nèi)科疾病中的應(yīng)用 實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志1997，11(2)20；8、鐘中 黃連素在心血管科的應(yīng)用研究 臨床薈萃1996，11(1).-16；9、周元余黃連素在心血管疾病中的應(yīng)用 山東醫(yī)藥工業(yè)1997，16(6).-22-24；10、周保國(guó)，李紅梅 黃連素在心血管疾病中的應(yīng)用研究進(jìn)展 實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合雜志1997，10(7).-609；11、宋云可，劉紅旗 小檗堿對(duì)心血管系統(tǒng)的作用及臨床應(yīng)用 山東醫(yī)藥工業(yè)1997，16(5)。-28-29；12、周本杰 黃連及黃連素抗腫瘤研究概況 中藥材 1998，21(10).-536-537；13、黃林清，傳福 小檗堿抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)研究 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)1997，13(2)-189)。有資料顯示，Ber對(duì)艾氏腹水瘤和NK/LY細(xì)胞均有一定的抑制作用，對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞HNE1、惡性畸胎瘤細(xì)胞NT2/D1、大鼠9L腦腫瘤細(xì)胞也有一定的抑制和殺滅作用。黃林清等在進(jìn)行抗腫瘤的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，Ber體內(nèi)抑瘤作用沒(méi)有體外作用明顯，可能與其腸道吸收較差，在體內(nèi)很難達(dá)到對(duì)腫瘤細(xì)胞有效的血藥濃度。為了提高Ber體內(nèi)抑瘤作用，我們將其制成脂質(zhì)體，同時(shí)還制備了其他生物堿如小檗胺、千金藤啶堿(千金藤素)、四氫帕馬丁和黃藤素脂質(zhì)體。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種中藥生物堿類脂質(zhì)體及其制劑，它能有效提高Ber體內(nèi)抑瘤作用，可在制備多種劑型。本發(fā)明的特征在于其組分和含量為中藥生物堿0.1～2％、磷脂0.5～10％、膽固醇0～5％，以上均為質(zhì)量百分比。所說(shuō)的磷脂為卵磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂)、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油。其組分和含量的最佳范圍為中藥生物堿0.5～1％、磷脂0.2～2％、膽固醇0～1％。脂質(zhì)體可以制成注射劑、口服劑型、糖漿、滴劑、噴鼻劑、外用軟膏等制劑。注射劑包括注射液和無(wú)菌粉針。無(wú)菌粉針為注射液中加入適當(dāng)支持劑(或賦形劑)，通過(guò)噴霧干燥和冷凍干燥獲得。所說(shuō)的支持劑為一種或任何兩種或兩種以上混合的多元醇，包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、海藻糖、麥芽糖、甘露醇、山梨醇等。所說(shuō)的生物堿包括小檗堿、小檗胺、千金藤啶堿(千金藤素)、四氫帕馬丁和黃藤素。所說(shuō)的脂質(zhì)體制法為“主動(dòng)載藥法”。所說(shuō)的“主動(dòng)載藥法”為“pH梯度法”。
在制備含藥脂質(zhì)體時(shí)，根據(jù)藥物裝載的機(jī)理不同，可分為“被動(dòng)載藥”與“主動(dòng)載藥”兩大類。傳統(tǒng)上，人們采用最多的方法是“被動(dòng)載藥”法。所謂“被動(dòng)載藥”，即首先將藥物溶于水相或有機(jī)相(脂溶性藥物)中，然后按所選擇的脂質(zhì)體制備方法制備含藥脂質(zhì)體，其共同特點(diǎn)是在裝載過(guò)程中，脂質(zhì)體的內(nèi)外水相或雙分子層膜上的藥物濃度基本一致，決定其包封率的因素為藥物與磷脂膜的作用力、膜材的組成、脂質(zhì)體的內(nèi)水相體積、脂質(zhì)體數(shù)目、分子量及藥脂比(藥物與磷脂膜材比)等。對(duì)于脂溶性的、與磷脂膜親和力高的藥物，“被動(dòng)載藥”法較為適用；而對(duì)于兩親性藥物，其油水分配系數(shù)受介質(zhì)的pH值和離子強(qiáng)度的影響較大，包封條件的較小變化，就有可能使包封率有較大的變化，不適于工業(yè)化大生產(chǎn)。所謂“主動(dòng)載藥”，即通過(guò)內(nèi)外水相的不同離子或化合物梯度進(jìn)行載藥，主要有K+-Na+梯度和H+梯度(即pH梯度)等。由于采用“主動(dòng)載藥”法制備脂質(zhì)體的包封率高、滲漏小，非常適合于工業(yè)化大生產(chǎn)。
評(píng)價(jià)脂質(zhì)體質(zhì)量的指標(biāo)有粒徑、粒徑分布和包封率等。其中包封率是衡量脂質(zhì)體內(nèi)在質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)。常見(jiàn)的包封率測(cè)定方法有分子篩法、超速離心法、超濾法等。我們采用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂法測(cè)定包封率，具有樣品有量少、耗時(shí)短、操作簡(jiǎn)單、成本低等優(yōu)點(diǎn)?！瓣?yáng)離子交換樹(shù)脂法”是利用離子交換作用，將荷正電的未包進(jìn)脂質(zhì)體中的生物堿吸附除去。而包封于脂質(zhì)體中的生物堿，由于脂質(zhì)體荷負(fù)電荷，不能被陽(yáng)離子交換樹(shù)脂吸附除去，從而達(dá)到分離目的，用以測(cè)定包封率。
包封率的測(cè)定取生物堿脂質(zhì)體0.1mL各兩份。一份直接加入10mL容量瓶中，加入6ml 95％乙醇溶解脂質(zhì)體，用磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋至刻度，吸附7～10分鐘，搖勻；另一份加于陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱頂端，吸附7～10分鐘，然后用PBS洗脫，收集滴出液于10mL容量瓶中，加入6ml 95％乙醇溶解脂質(zhì)體，用磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋至刻度，搖勻。于最大吸收波長(zhǎng)處(小檗堿的最大吸收波長(zhǎng)為347nm)測(cè)定吸光度值(A)，并按下式計(jì)算包封率E％＝(A1/A2)×100％其中，E％為包封率；A1為過(guò)陽(yáng)離子柱樣品的A值；A2為未過(guò)陽(yáng)離子柱樣品的A值。下面以小檗堿為例詳細(xì)比較“被動(dòng)載藥法”與“主動(dòng)載藥法”制備脂質(zhì)體的工藝及包封率。
被動(dòng)載藥1、磷酸鹽緩沖液的配制，稱取Na2HPO4·12H2O 3.7g和NaH2PO4·2H220g，加蒸餾水溶解，并稀釋成10000ml，即得(pH5.67)。
2、脂質(zhì)體的制備，將磷脂、膽固醇等按重量比3∶1的比例混和，用適量無(wú)水乙醇溶解，減壓蒸發(fā)，制備磷脂膜后，加入鹽酸小檗堿的PBS溶液(1mg/ml)，制備脂質(zhì)體，并過(guò)0.8um微孔濾膜3遍，即得。三批樣品包封率測(cè)定結(jié)果分別為12.6％、14.3％、13.1％。
3、主動(dòng)載藥3.1檸檬酸緩沖液的配制稱取檸檬酸10.5g，檸檬酸鈉7g，加水溶解，并配成1000ml，混勻，即得(pH3.64)。
3.2 NaHCO3溶液稱取NaHCO350g。加水溶解，并配成1000ml，混勻，即得(pH8.32)。
3.3空白脂質(zhì)體的制備將SPC、CH按重量比3∶1的比例混和，用適量無(wú)水乙醇，于60℃水浴中加熱溶解，減壓蒸發(fā)，制備磷脂膜后，加入檸檬酸緩沖液，水化。將所得脂質(zhì)體用0.8um的微孔濾膜過(guò)濾3～5遍，即得。
3.4不同載藥方式對(duì)包封率的影響(1)加藥順序?qū)Π饴实挠绊憣⒖瞻字|(zhì)體、NaHCO3溶液、鹽酸小檗堿溶液按下列順序混合，于60℃水浴中孵化10分鐘，測(cè)定包封率，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1加藥順序?qū)Π饴实挠绊懡Y(jié)果(n＝3)

由此可知，加藥順序a的包封率最小，d的包封率最大。為了在下面的試驗(yàn)中充分顯示這一差別，選擇此兩種加藥順序進(jìn)行“孵化時(shí)間”、“孵化溫度”、“pH值(梯度值)”和“粒度大小”對(duì)包封率影響的試驗(yàn)。
(2)孵化時(shí)間對(duì)包封率的影響將空白脂質(zhì)體、NaHCO3溶液、鹽酸小檗堿溶液按a、b順序混合后，于水浴中孵化不同時(shí)間，結(jié)果見(jiàn)表2。
表2孵化時(shí)間對(duì)包封率的影響結(jié)果(n＝3)

由此可知，包封率隨著孵化時(shí)間的延長(zhǎng)而增大，當(dāng)孵化時(shí)間為20分鐘時(shí)，包封率趨于平臺(tái)。為了能讓下面的各因素對(duì)包封率影響的差別顯示出來(lái)，選擇孵化時(shí)間10分鐘進(jìn)行試驗(yàn)。
(3)孵化溫度對(duì)包封率的影響將空白脂質(zhì)體、NaHCO3溶液、鹽酸小檗堿溶液按ab順序混合后，于不同溫度水浴中孵化10分鐘，結(jié)果見(jiàn)表3表3孵化溫度對(duì)包封率的影響結(jié)果(n＝3)

由此可知，包封率隨著孵化溫度升高而增大，當(dāng)孵化溫度為60～70℃時(shí)，達(dá)到最大，80℃時(shí)，包封率則下降。
(4)pH值對(duì)包封率的影響將“空白脂質(zhì)體”、“NaHCO3溶液”、“鹽酸小檗堿溶液”按a、b順序混合后，于60℃水浴中孵化10分鐘，結(jié)果見(jiàn)表4。
表4pH值對(duì)包封率的影響結(jié)果

由此可知，pH值對(duì)包封率的影響較復(fù)雜，pH值在較低和較高區(qū)時(shí)，包封率均較低，包封最適pH值為6.33～7.37。
(5)脂質(zhì)體粒徑對(duì)包封率的影響制備空白脂質(zhì)體，分別過(guò)0.8um和0.45um微孔濾膜5次，進(jìn)行整粒，按a、b順序混合后，于60℃水浴中孵化10分鐘，結(jié)果見(jiàn)表5。
表5脂質(zhì)體粒徑對(duì)包封率的影響結(jié)果

由此可知，脂質(zhì)體粒徑對(duì)包封率有一定影響，粒徑小包封率高。
通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)獲得最佳組方、工藝藥物濃度0.5～1mg/ml，磷脂濃度10～30mg/ml。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是本發(fā)明脂質(zhì)體包封率高，滲漏小，提高了Ber體內(nèi)抑瘤作用，提高了有效血藥濃度，從而提高療效。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1小檗堿脂質(zhì)體的制備處方小檗堿0.2g大豆卵磷脂2g乙醇 適量制成50ml制備工藝按“主動(dòng)載藥法”制備。包封率為75.3％。
實(shí)施例2小檗胺脂質(zhì)體的制備處方小檗胺0.1g氫化大豆卵磷脂1g乙醇 適量制成50ml制備工藝同“實(shí)施例1”，包封率為81.3％。
實(shí)施例3千金藤啶堿(千金藤素)脂質(zhì)體的制備處方千金藤啶堿(千金藤素) 0.4g蛋黃卵磷脂 4g膽固醇 1g乙醇 適量制成100ml制備工藝同“實(shí)施例1”，包封率為86.6％。
實(shí)施例4四氫帕馬丁脂質(zhì)體的制備處方四氫帕馬丁 0.5g二硬脂酰磷脂酰膽堿 6g二氯甲烷 適量制成100ml制備工藝同“實(shí)施例1”，包封率為86.6％。包封率為51.0％。
實(shí)施例5黃藤素脂質(zhì)體的制備處方黃藤素0.2g大豆卵磷脂2g二硬脂酰磷脂酰甘油0.2g乙醇 適量制成100ml制備工藝同“實(shí)施例1”，包封率為88.1％。
實(shí)施例6小檗堿脂質(zhì)體外用軟膏劑的制備處方小檗堿脂質(zhì)體 100g卡波姆941 0.5g三乙醇胺 適量甘油 10g制成約110g制備工藝“小檗堿脂質(zhì)體”中加入卡波姆941，分散，加入甘油混勻，用三乙醇胺調(diào)pH值至5～8，即得。
權(quán)利要求
1.中藥生物堿類脂質(zhì)體及其制劑，其特征在于其組分和含量為中藥生物堿 0.1～2％磷脂 0.5～10％膽固醇 0～5％以上均為質(zhì)量百分比。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥生物堿類脂質(zhì)體及其制劑，其特征在于所說(shuō)的磷脂為卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油。
3.一種如權(quán)利要求1所述的中藥生物堿類脂質(zhì)體及其制劑，其特征在于脂質(zhì)體可以制成注射劑、口服劑型、糖漿、滴劑、噴鼻劑、外用軟膏等制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的中藥生物堿類脂質(zhì)體及其制劑，其特征在于注射劑包括注射液和無(wú)菌粉針。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥生物堿類脂質(zhì)體及其制劑，其特征在于無(wú)菌粉針為注射液中加入適當(dāng)支持劑或賦形劑，通過(guò)噴霧干燥和冷凍干燥獲得。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的中藥生物堿類脂質(zhì)體及其制劑，其特征在于所說(shuō)的支持劑為一種或任何兩種或兩種以上混合的多元醇，包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、海藻糖、麥芽糖、甘露醇、山梨醇等。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥生物堿類脂質(zhì)體及其制劑，其特征在于所說(shuō)的生物堿包括小檗堿、小檗胺、千金藤啶堿、四氫帕馬丁和黃藤素。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥生物堿類脂質(zhì)體及其制劑，其特征在于所說(shuō)的脂質(zhì)體制法為“主動(dòng)載藥法”。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的中藥生物堿類脂質(zhì)體及其制劑，其特征在于所說(shuō)的“主動(dòng)載藥法”為“pH梯度法”。
全文摘要
本發(fā)明是一種中藥生物堿類脂質(zhì)體及其制劑，它能夠提高有效血藥濃度，其組分和含量為中藥生物堿0.1～2％、磷脂0.5～10％、膽固醇0～5％，以上均為質(zhì)量百分比，所說(shuō)的磷脂為卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油，脂質(zhì)體可以制成注射劑、口服劑型、糖漿、滴劑、噴鼻劑、外用軟膏等制劑，所說(shuō)的脂質(zhì)體制法為主動(dòng)載藥法中pH梯度法。本發(fā)明脂質(zhì)體包封率高，滲漏小，提高了Ber體內(nèi)抑瘤作用，從而提高療效。
文檔編號(hào)A61K9/127GK1446534SQ02158899
公開(kāi)日2003年10月8日 申請(qǐng)日期2002年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月30日
發(fā)明者鄧意輝, 王紹寧, 吳瓊 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)藥科大學(xué)