專利名稱：一種蟾毒靈脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
:本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及ー種蟾毒靈脂質(zhì)體及其制備方法，用于腫瘤，特別是肝癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、胃癌或白血病的治療。
背景技術(shù)：
癌癥是全球發(fā)病率最高的疾病之一。WHO數(shù)據(jù)顯示，僅2008年癌癥病死人數(shù)就高達(dá)7.6億，其中60%來(lái)自低收入或中等收入國(guó)家，且該數(shù)字在未來(lái)將繼續(xù)增加。在超過200種癌癥中，乳腺癌、肺癌、腸癌及胰腺癌患者數(shù)占所有新增病例的54 %。目前，癌癥的治療方法根據(jù)癌癥的類型及階段，主要包括手術(shù)、放療、化療及以上方法聯(lián)合運(yùn)用等。其中，臨床化療藥物種類較多，作用機(jī)制主要為針對(duì)腫瘤細(xì)胞快速分裂的特性殺死細(xì)胞。因此藥物在殺死快速分裂的癌細(xì)胞時(shí)，也能殺死其它正常的快速分裂的細(xì)胞，如骨髄、消化道及毛囊中的細(xì)胞，產(chǎn)生了嚴(yán)重的副作用，損傷了正常組織。據(jù)此，亟需研發(fā)毒副作用小、抗腫瘤療效高的新型治療藥物。提高藥物對(duì)腫瘤的選擇性，減少其在正常組織的分布是抗腫瘤新藥研發(fā)的主要策略。蟾毒靈(3 3，14_ ニ羥-5 0，20(22)_蟾蜍ニ烯羥基內(nèi)酷，5 0，20(22)_蟾蜍ニ烯羥基內(nèi)酯-3 0，14-ニ醇)是中藥蟾酥的主要抗腫瘤成分，是中華大蟾蜍或黑框蟾蜍的耳后腺分泌的白色漿液，可從蟾酥中提取。還可根據(jù)專利US 3134772和US 3687944進(jìn)行人工合成。蟾毒靈是ー種類地高辛的免疫活`性成分，顯示出各種生物活性，如強(qiáng)心、麻酔和刺激血管等。自1994年蟾毒靈抗腫瘤作用發(fā)現(xiàn)至今(Numazawa S, et al.J Cell Physiol,1994,160(1):113-20),已進(jìn)行了大量研究，發(fā)現(xiàn)其具有廣譜抗腫瘤作用。此外，蟾毒靈與其他化療藥物聯(lián)用，如索拉菲尼等，對(duì)腫瘤細(xì)胞顯示出化療增敏作用(Gao Y，et al.MolBiol Rep.2012,39(2) =1683-9) 0近年來(lái)，更多的研究發(fā)現(xiàn)蟾毒靈可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡從而抑制多種癌細(xì)胞的増殖，如肝癌、骨瘤、結(jié)腸癌、肺癌、胰腺癌、卵巣癌、胃癌、前列腺癌及白血病細(xì)胞等(Han KQ, et al.World J Gastroenterol.2007,13 (24):3374-9 ;Amano Y,et al.J Steroid Biochem Mol Biol.2009,114(3-5):144-51 ;Li D, etal.AnticancerDrugs.2009,20(1):59-64 ；Yu CH, et al.Cancer Sc1.2008，99 (12):2467-76 ;Takai N，etal.1nt J Mol Med.2008,21(5):637-43 ;Yeh JY, et al.Prostate.2003,54(2):112-24;Yin JQ, et al.Acta Pharmacol Sin.2007,28 (5):712-20 ;Zhu Z et al.1nt.J.Mol.Sc1.1nt J Mol Sc1.2012，13(2):2025-35 ;Xie CM, et al.Free Radic Biol Med.2011，51 (7):1365-75)。蟾毒靈可通過激活細(xì)胞死亡受體及線粒體通路觸發(fā)癌細(xì)胞凋亡(Sun L,et al.Evid Based Complement AlternatMed.Epub 2011 Jun 18)。這些研究提不蟾毒靈可作為化療藥物用于癌癥的治療。然而，蟾毒靈由于毒性大、水溶性差、半衰期短、治療窗窄，毒性劑量與治療劑量接近等問題，嚴(yán)重制約了其臨床應(yīng)用(Gong LL et al.Food andDrug.2007,9(10):51-3)。此外，由于其在體內(nèi)的廣泛分布，更引起了其它臨床副作用，如血管刺激性、過敏性休克、高熱、竇性心動(dòng)過緩等(Dasgupta A,et al.Life Sc1.1998,63(9):781-8 ；Bick RJ, et al.Life Sc1.2002，72(6):699-709 ；Kostakis C，Byard RW.ForensicSci Int.2009,188:el_e5)。目前，將蟾酥溶于生理鹽水制得的華蟾素注射液已在中國(guó)用于臨床癌癥的治療。已有報(bào)道吉西他濱一奧沙利鉬與華蟾素合用可增強(qiáng)晚期膽囊癌病人的化療作用(Qin TJ,et al.World JGastroenterol.2008,14(33):5210-6)。另有研究顯示，對(duì)肝癌及胰腺癌病人使用8倍于標(biāo)準(zhǔn)劑量(20ml/m2/或20 25ml/人/天，含蟾毒靈14.3±0.03ng/ml)的華蟾素注射液未產(chǎn)生明顯毒性(Meng Z.et al.Cancer.2009，115 (22):5309-18)，這意味著成年病人每天耐受的蟾毒靈有效治療劑量可高達(dá)2.g。但是，華蟾素注射液是蟾酥中生物堿的混合物溶液，并且因?yàn)轶付眷`水溶性較差，含有的蟾毒靈含量很低。因此，研發(fā)延長(zhǎng)蟾毒靈在腫瘤病灶內(nèi)持續(xù)時(shí)間、提高腫瘤靶向性、減少毒副作用的新劑型十分必要。脂質(zhì)體是一種內(nèi)水相的封閉的磷脂雙分子結(jié)構(gòu)，我們使用脂質(zhì)體作為蟾毒靈的藥物載體，可通過磷脂膜裝載蟾毒靈解決其水溶性差的問題。此外，用PEG修飾的脂質(zhì)體可將蟾毒靈被動(dòng)靶向至腫瘤部位，減小其毒副作用。近20年來(lái)，脂質(zhì)體已經(jīng)被廣泛用于包載抗腫瘤藥物。已有多種用于臨床或即將用于臨床的抗腫瘤脂質(zhì)體藥物，如阿霉素脂質(zhì)體(Doxil/Caelyx分別由Alza/Johnsonand Johnson在美國(guó)或Schering-Plough在其他國(guó)家銷售)、柔紅霉素脂質(zhì)體(DaunoXome,Gilead)、阿糖胞苷脂質(zhì)體(DepoCyte, Skye Pharma/Enzon/Mundipharma 出品)、順鉬脂質(zhì)體(Lipoplatin，Regulon出品)，其中阿糖胞苷脂質(zhì)體可用于治療腦膜淋巴瘤。脂質(zhì)體可通過磷脂膜結(jié)構(gòu)提高水溶性差的抗癌藥物的溶解度，通過PEG修飾實(shí)現(xiàn)腫瘤的被動(dòng)靶向及通過結(jié)合載體實(shí)現(xiàn)腫瘤的主動(dòng)靶向。傳統(tǒng)的脂質(zhì)體，是通過磷脂分散在水相中形成的，因此兩親性及脂溶性藥物可插入脂質(zhì)體的磷脂膜結(jié)構(gòu)中，而親水性藥物則是直接包入脂質(zhì)體的內(nèi)部水相。脂質(zhì)體載體對(duì)所包含藥物的藥代動(dòng)力學(xué)、組織分布及毒副作用都產(chǎn)生較大的影響。如，臨床實(shí)驗(yàn)證明在保持抗腫瘤活性的同時(shí)使用阿霉素脂質(zhì)體比阿霉素單體的毒性作用明顯減小(SafraT.0ncologist.2003,8Suppl 2:17-24)。但由于脂質(zhì)體可被巨噬細(xì)胞快速捕獲，給藥后其在體內(nèi)的停留時(shí)間只有幾小吋。為了提高脂質(zhì)體在體內(nèi)循環(huán)的半衰期，可將糖脂或親水性聚合物如PEG應(yīng)用于脂質(zhì)體。將生物相容性的聚合物PEG結(jié)合在脂質(zhì)體上，使其具有保護(hù)性的親水的表面，被稱為“ニ代脂質(zhì)體”或“隱形脂質(zhì)體”。PEG在脂質(zhì)體表面形成了位阻效應(yīng)，可阻礙調(diào)理素及血漿蛋白的吸附，減少巨噬細(xì)胞受體與磷脂膜上磷酸基團(tuán)的結(jié)合，從而延遲其在血液循環(huán)中的保留時(shí)間。此外，通過化學(xué)修飾磷脂基團(tuán)或者結(jié)合蛋白、多肽或其他大分子在脂質(zhì)體表面，可改變脂質(zhì)體的藥代動(dòng)力學(xué)屬性。PEG脂質(zhì)體結(jié)合載體如小分子、肽類或單克隆抗體已廣泛的用于腫瘤治療，如結(jié)合葉酸的柔紅霉素和阿霉素脂質(zhì)體(Pan XQ, Lee RJ.AnticancerRes.2005，25 (IA):343-6 ;Shmeeda H，et al.Mol Cancer Ther.2006,5(4):818-24)層粘性蛋白脂質(zhì)體(Zalipsky S, et al.Bioconjug Chem.1995,6(6):705-8)或結(jié)合了 0V-TL3 單克隆抗體的脂質(zhì)體(Vingerhoeds MH, et al.Br J Cancer.1996,74(7):1023-9)。

脂質(zhì)體表面包裹聞分子也已經(jīng)成為一種提聞其粘附性的有效方法，能夠提聞藥物 ロ服后的生物利用度及穩(wěn)定性(Nguyen S, et al.Eur J Pharm Biopharm.2011, 77 (I):75-83)。這些高分子包括殼聚糖、淀粉、葡聚糖、普魯蘭多糖、果膠等。果膠是植物細(xì)胞壁表面的水溶性多糖，由于它的凝膠作用、生物相容性及無(wú)毒性等特性，已成為ー種有希望的提高藥物ロ服后吸收度及在胃腸道內(nèi)穩(wěn)定性的大分子(Nguyen S,et al.Colloids Surf BBiointerfaces.2011,88(2):664-73)。本發(fā)明提供的蟾毒靈脂質(zhì)體及其制備エ藝，與蟾毒靈単體相比，用于哺乳動(dòng)物后，可増加抗腫瘤作用，同時(shí)減小毒副作用
發(fā)明內(nèi)容
:本發(fā)明的目的在于提供一種蟾毒靈脂質(zhì)體及其制備エ藝，該脂質(zhì)體可用于腫瘤的治療，尤其是肝癌、肺癌、卵巣癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、胃癌或白血病的治療。本發(fā)明的蟾毒靈脂質(zhì)體雙分子層包含磷脂、留醇和PEG修飾物。其中磷脂的含量占脂質(zhì)體雙分子層總重量的20 80%，可選用的磷脂為卵磷脂、磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰こ醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、鞘磷脂(SM)、ニ棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、ニ棕櫚酰磷脂酰こ醇胺(DPPE)、ニ硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)或上述一種或多種的混合物。留醇的含量占脂質(zhì)體雙分子層總重量的10 30%，可選用的留醇為膽固醇、表膽留醇、麥角固醇，豆留醇或膽固醇的PEG修飾物。PEG修飾物的含量占脂質(zhì)體雙分子層總重量的2 50%，可選用的PEG修飾物為PEG-PE、甲氧基聚こニ醇(mPEG) -PE, ニ硬脂酰磷脂酰こ醇胺(DSPE)-PEG或上述ー種或多種的混合物。本發(fā)明的蟾毒靈脂質(zhì)體脂質(zhì)雙分子層和蟾毒靈的重量比為(5 20): I。本發(fā)明的蟾毒靈脂質(zhì)體可采用常規(guī)方法，薄膜法、注入法、凍融法中任ー種方法制備。薄膜法制備包括下述步驟:將蟾毒靈和磷質(zhì)材料分別或同時(shí)溶解于非極性或弱極性溶劑中，如甲醇、こ醇、氯仿、こ酸こ酷、正己烷、こ腈或上述ー種或多種混合液，混合均勻，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓除去有機(jī)溶劑`，瓶壁形成均勻薄膜，再將蒸餾水或緩沖溶液加入薄膜水化，勻質(zhì)、攪拌、渦旋或超聲，得到脂質(zhì)體。こ醇注入法包括下述步驟:將脂質(zhì)材料和蟾毒靈溶于こ醇中，溶解完全后用注射器注入蒸餾水或緩沖溶液，攪拌將こ醇除盡，勻質(zhì)、攪拌、渦旋或超聲，得到脂質(zhì)體；こ醚注入法包括下述步驟:將脂質(zhì)材料和蟾毒靈溶于こ醚或こ醚、甲醇混合物中，溶解完全后用注射器注入蒸餾水或緩沖溶液，攪拌將こ醚除盡，勻質(zhì)、攪拌、渦旋或超聲，得到脂質(zhì)體；凍融法包括下述步驟:將以上任一方法制備的蟾毒靈脂質(zhì)體0 _80°C冰箱或液氮中冷凍，置室溫溶解，再放入0 -80°c冰箱或液氮中冷凍，置室溫溶解，重復(fù)2 8次，得到脂質(zhì)體。上述方法中，水相可以是蒸餾水或緩沖液溶液，如生理鹽水、磷酸緩沖鹽(PBS)、三氨基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl)溶液、4-羥こ基哌嗪こ磺酸(HEPES)溶液或甘露醇溶液等。緩沖液pH為5.0-9.5之間。脂質(zhì)體制備完后可通過擠壓過膜控制其粒徑分布?？赏ㄟ^5 ii m、l ii m, IOOnm,200nm或其它所需孔徑的膜得到相應(yīng)粒徑的脂質(zhì)體。蟾毒靈是ー種有效的抗癌藥物，但其毒性較大限制了應(yīng)用。我們發(fā)現(xiàn)蟾毒靈脂質(zhì)體能增強(qiáng)抗癌作用的同時(shí)減少毒性。經(jīng)靜脈注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射或ロ服的方式作用于哺乳動(dòng)物，蟾毒靈脂質(zhì)體較蟾毒靈單體抗癌作用增強(qiáng)，毒副作用減少。本發(fā)明的蟾毒靈脂質(zhì)體可制備癌癥治療藥物。如，制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸齊U、糖漿粉劑、水劑或混懸劑用于ロ服給藥。對(duì)于片劑可添加乳糖、淀粉、檸檬酸鈉等填充齊U，羧甲基淀粉鈉等崩解劑和硬脂酸鎂、滑石等潤(rùn)滑剤。對(duì)于膠囊劑可添加乳糖、聚こニ醇等填充劑。對(duì)于非腸道給藥或靜脈注射、腹腔注射、肌肉注射或皮下注射給藥，生理鹽水可作為藥學(xué)上可接受的溶媒。其他溶媒包括蒸餾水、緩沖液、0.3%甘氨酸溶液等。該制劑可通過紫外照射或過膜等常規(guī)方法滅菌后，凍干保存。為了達(dá)到生理環(huán)境要求，還需加入藥學(xué)上可接受的PH調(diào)節(jié)劑及壓カ調(diào)節(jié)劑，如氯化鈉、醋酸鈉或鉀鹽等。為了提高脂質(zhì)體穩(wěn)定性，還可參考專利US5605703和EP1325739加入磷脂氧化抑制齊U，包括維生素或其衍生物、丁基輕基甲苯(BHT), chroman, ferrioxamine等上述ー種或多種的混合物。為了提高ロ服生物利用度，還可加入多糖高分子包括殼聚糖、淀粉、葡聚糖、普魯蘭多糖、果膠或上述ー種或多種的混合物。本發(fā)明的蟾毒靈脂質(zhì)體可被用來(lái)治療癌癥，如肝癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、胃癌或白血病。藥物的劑量需依據(jù)疾病的診斷情況及臨床醫(yī)師的判斷給藥，一般為0.01 50mg/kg，最好在 0.1 5mg/kg。
具體實(shí)施例方式下面列舉典型實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)ー步說(shuō)明，但不以任何形式構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例15mg蟾毒靈溶于5mlこ醇中，40mg磷脂，15mg膽固醇,5mgDSPE_PEG溶于氯仿中，將有機(jī)溶液混合于圓底燒瓶中，30°C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去殘留有機(jī)溶剤。磷脂薄膜再加入5mlPBS(5mM,pH 6.4 7.4)水化Ih后，超聲0.5h。制得的脂質(zhì)體在IL水中透析24h，再取少量脂質(zhì)體加甲醇破乳，用HPLC法測(cè)量包封率。該蟾毒靈脂質(zhì)體包封率為58.7%。包封率即磷脂中包入的藥量占加入總藥量的比例。實(shí)施例2制備方法及配料比例同實(shí)施例1，除了用生理鹽水代替PBS，該蟾毒靈脂質(zhì)體包封率為57.3%。實(shí)施例3`4mg蟾毒靈、6mg膽固醇、30mg磷脂及4mg mPEG_PE溶解在IOml氯仿:甲醇(2:1)中，將溶液減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去殘留有機(jī)溶劑，加入Iml PBS(5mM,pH 6.4 7.4)，劇烈渦旋，冰浴中超聲20min。透析完全后取少量脂質(zhì)體加甲醇破乳，用HPLC法測(cè)量包封率。該蟾毒靈脂質(zhì)體包封率為52.5%。實(shí)施例44mg蟾毒靈、6mg膽固醇、30mg磷脂及4mg mPEG-PE溶解在IOmlこ醇中，超聲20min溶解完全。溶液用注射器注入20ml PBS (5mM, pH 6.4 7.4)中，50°C攪拌3h，除去こ醇。制得的脂質(zhì)體在IL水中透析24h，再取少量脂質(zhì)體加甲醇破乳，用HPLC法測(cè)量包封率。該蟾毒靈脂質(zhì)體包封率為83.3%。實(shí)施例54mg蟾毒靈、15mg膽固醇、40mg磷脂及5mg mPEG-PE溶解在IOmlこ醚中，超聲20min溶解完全。溶液用注射器注入20ml 6%甘露醇溶液中，50°C攪拌3h，除去こ醚。制得的脂質(zhì)體在IL水中透析24h，再取少量脂質(zhì)體加甲醇破乳，用HPLC法測(cè)量包封率。該蟾毒靈脂質(zhì)體包封率為56.8%。實(shí)施例64mg蟾毒靈、6mg膽固醇、30mg磷脂及4mg mPEG_PE溶解在IOml氯仿:甲醇(2:1)中，將溶液減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去殘留有機(jī)溶劑，加入Iml PBS(5mM,pH 6.4 7.4)，劇烈渦旋，冰浴中超聲20min。-20°C冰箱冷凍5h，放置室溫溶解，再放入冰箱冷凍，重復(fù)4次。透析完全后取少量脂質(zhì)體加甲醇破乳，用HPLC法測(cè)量包封率。該蟾毒靈脂質(zhì)體包封率為61.8%。實(shí)施例74mg蟾毒靈、6mg膽固醇、30mg磷脂及4mg mPEG-PE溶解在IOml氯仿:甲醇(2: I)中，將溶液在30°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去殘留有機(jī)試劑，薄膜中加入IOml PBS(5mM,pH 6.4 7.4)水化2h，再透過200nm的膜，得到的脂質(zhì)體4°C保存。取Iml脂質(zhì)體分散液加入4ml 0.2%的果膠溶液(柑橘果膠，溶解在的5mM的PBS中)攪拌lh，得到包裹果膠的脂質(zhì)體。以下通過試驗(yàn)例來(lái)進(jìn)ー步闡明本發(fā)明所述脂質(zhì)體對(duì)癌癥的治療效果。試驗(yàn)例1:蟾毒靈和蟾毒靈脂質(zhì)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用人宮頸癌HeLa、肺癌A549、胃癌SGC7901、肝癌HepG2、髓性白血病HL-60和結(jié)腸癌SWl 116細(xì)胞置于DMEM或RPMI 1640培養(yǎng)液(含10%滅活的胎牛血清、100U.mr1青霉素和IOOmg じ1鏈霉素)中，37°C、5% CO2孵箱中培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以3X IO3/孔的密度接種于96孔板，每孔lOOiil，在37°C、5% CO2飽和濕度條件下培養(yǎng)24h。試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照組(培養(yǎng)液)、不同濃度給藥組。每個(gè)培養(yǎng)孔加入I 300nmol/L的蟾毒靈或蟾毒靈脂質(zhì)體(按實(shí)施例1方法制備)，37°C、5% CO2飽和濕度孵箱內(nèi)培養(yǎng)48h后，每孔加入MTT液(5g/l) 20 u L，培養(yǎng)4h后，離心，吸棄培養(yǎng)液，每孔加入150 u L ニ甲基亞砜，輕度振蕩溶解結(jié)晶，置自動(dòng)酶標(biāo)儀570nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，按下列公式計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率:細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率/% = 100-(給藥組OD值-空白對(duì)照OD值)バ對(duì)照組OD值-空白對(duì)照OD值)X 100。
IC50(細(xì)胞増殖50%抑制時(shí)藥物濃度)值由數(shù)學(xué)方法計(jì)算所得。數(shù)據(jù)以}C ±SEM表示，采用t檢驗(yàn)或方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P < 0.05表示兩組間具有顯著性差異。從表1、2結(jié)果可見，在I 300nmol/L濃度范圍內(nèi)，蟾毒靈或蟾毒靈脂質(zhì)體均能明顯抑制6種腫瘤細(xì)胞的増殖，抑制作用具有濃度依賴性。蟾毒靈和蟾毒靈脂質(zhì)體的IC50值差異不明顯，表明蟾毒靈和蟾毒靈脂質(zhì)體的體外抗腫瘤作用相當(dāng)。表I蟾毒靈對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用

權(quán)利要求
1.一種蟾毒靈脂質(zhì)體，其特征在干:由脂質(zhì)體雙分子層和蟾毒靈組成，其中脂質(zhì)體雙分子層中包含磷脂、留醇和PEG修飾物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蟾毒靈脂質(zhì)體，其特征在于:所用的磷脂選自卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰こ醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、鞘磷脂、ニ棕櫚酰磷脂酰膽堿、ニ棕櫚酰磷脂酰こ醇胺、ニ硬脂酰磷脂酰膽堿或上述ー種或多種的混合物，且其含量占脂質(zhì)體雙分子層總重量的20 80%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蟾毒靈脂質(zhì)體，其特征在于:磷脂選自卵磷脂、磷脂酰膽堿或ニ硬脂酰磷脂酰膽堿。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蟾毒靈脂質(zhì)體，其特征在于:所用的留醇選自膽固醇、表膽甾醇、麥角固醇，豆留醇或膽固醇的PEG修飾物，且其含量占脂質(zhì)體雙分子層總重量的10 30%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蟾毒靈脂質(zhì)體，其特征在于:所用的PEG修飾物選自PEG-磷脂酰こ醇胺、mPEG-磷脂酰こ醇胺，DSPE-PEG或上述ー種或多種的混合物，且其含量占脂質(zhì)體雙分子層總重量的2 50%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蟾毒靈脂質(zhì)體，其特征在于:脂質(zhì)體雙分子層和蟾毒靈的重量比為(5 20): I。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蟾毒靈脂質(zhì)體，其特征在干:由薄膜法、注入法、凍融法中任ー種方法制備。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的蟾毒靈脂質(zhì)體，其特征在干: 薄膜法制備包括下述步驟:將蟾毒靈和`磷脂材料分別或同時(shí)溶解于非極性或弱極性溶劑中，如甲醇、こ醇、氯仿、こ酸こ酷、正己烷、こ腈或上述ー種或多種混合液，混合均勻，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓除去有機(jī)溶剤，瓶壁形成均勻薄膜，再將蒸餾水或緩沖溶液，如生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、Tris-HCl溶液、HEPES溶液或甘露醇溶液等，加入薄膜水化，勻質(zhì)、攪拌、渦旋或超聲，得到脂質(zhì)體； こ醇注入法包括下述步驟:將磷脂材料和蟾毒靈溶于こ醇中，溶解完全后用注射器注入蒸餾水或緩沖溶液，攪拌將こ醇除盡，勻質(zhì)、攪拌、渦旋或超聲，得到脂質(zhì)體； こ醚注入法包括下述步驟:將磷脂材料和蟾毒靈溶于こ醚或こ醚、甲醇混合物中，溶解完全后用注射器注入蒸餾水或緩沖溶液，攪拌將こ醚除盡，勻質(zhì)、攪拌、渦旋或超聲，得到脂質(zhì)體； 凍融法包括下述步驟:將以上任一方法制備的蟾毒靈脂質(zhì)體0 -80°C冰箱或液氮中冷凍，置室溫溶解，再放入0 _80°C冰箱或液氮中冷凍，置室溫溶解，重復(fù)2 8次，得到脂質(zhì)體。
9.權(quán)利要求1所述的蟾毒靈脂質(zhì)體在制備治療癌癥藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求10所述應(yīng)用，所述癌癥包括肝癌、肺癌、卵巣癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食管癌、胃癌或白血病。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種蟾毒靈脂質(zhì)體，其特征在于該脂質(zhì)體由脂質(zhì)體雙分子層和蟾毒靈組成，其中脂質(zhì)體雙分子層中包含磷脂、甾醇和PEG修飾物。本發(fā)明所述的蟾毒靈脂質(zhì)體可通過薄膜法、注入法或凍融法制備得到，較蟾毒靈單體藥物具有更強(qiáng)的抗癌作用和更低的毒副作用，可用于癌癥包括肝癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食管癌、胃癌或白血病的治療。
文檔編號(hào)A61P35/00GK103083239SQ20121057074
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2012年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月26日
發(fā)明者曹蔚, 王四旺, 李瑛 , 謝艷華, 楊倩 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)