專利名稱：一種白英提取物以及包括其的抗癌藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體而言，涉及一種白英提取物、其在抗癌、抗腫瘤方面的醫(yī)藥用途以及包括其的抗癌藥物。
背景技術(shù)：
白英為茄科植物白英Solanum lyratum Thunb.的干燥全草，主產(chǎn)浙江、江蘇、安徽等地。作為傳統(tǒng)中藥已有2000多年的應(yīng)用歷史，具有清熱解毒、祛風(fēng)化痰、祛風(fēng)除濕等功效，并具有抗癌作用，臨床用于多種癌癥的治療。白英的化學(xué)成分研究始于20世紀(jì)60年代，到目前為止，研究人員已經(jīng)從白英中分離出30多種化合物，化合物的類型主要包括留體皂苷類、留體生物堿類、有機(jī)酸類、倍半萜類、甾醇類、香豆素類及其它類型。(1)甾體皂苷類目前從白英的乙醇提取物或水提取物中已分離出多種該類化合物。主要包括替告皂苷元-3_0-i3-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-β-D-吡喃半乳糖苷，新替告皂苷元-3_0-i3-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃半乳糖苷等。(2)甾體生物堿類在白英的眾多化學(xué)成分中，具有明顯生物活性和生理功能的是羥基甾體生物堿，主要為蜀羊泉堿(Soladulcidine)、番茄烯胺CTomatidenol)、α -苦茄堿 (α -Solamarine)、β -苦茄堿(β -Solamarine)、澳洲茄胺(solasodine)、澳洲茄堿 (solasonine)。(3)有機(jī)酸類主要含有咖啡酸，香草酸。其它類型，主要含有倍半萜類化合物去氫假虎刺酮、留醇類化合物過氧麥角甾醇和9，11-去氫過氧麥角留醇、香豆素類6-甲氧基-7-羥基-香豆素、N-(對羥基苯乙基)-對香豆酰胺。雖然白英作為傳統(tǒng)中藥在臨床上應(yīng)用歷史悠久，但是作為現(xiàn)代意義上的藥物，尚未有產(chǎn)品被開發(fā)出來應(yīng)用于臨床，因為目前從白英提取出的物質(zhì)其療效并不理想。現(xiàn)有的白英抗腫瘤藥效學(xué)研究大多數(shù)采用的是水粗提取物進(jìn)行的，也有一部分試驗采用的是正丁醇萃取留體皂苷。無論采用水粗提取物還是正丁醇萃取成分，其組分都不是專屬富集的，而是包含有非常復(fù)雜的多種類型成分，因此其有效組分不清楚。最終大多數(shù)采用體外抗腫瘤藥效學(xué)效果較好，而體內(nèi)整體抗腫瘤藥效不好或不穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種白英提取物，以解決現(xiàn)有技術(shù)中白英提取物的有效成分不明確，體外抗腫瘤藥效學(xué)效果較好，而體內(nèi)整體抗腫瘤藥效不好或不穩(wěn)定的技術(shù)問題。
為了實現(xiàn)上述目的，根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種白英提取物，通過以下步驟制得乙醇提取白英藥材，制得乙醇提取物；精制將乙醇提取物用水分散形成溶液，用弱酸性陽離子交換大孔樹脂柱吸附，依次用乙醇和鹽酸乙醇洗脫，收集鹽酸乙醇洗脫液，用氨水中和至中性，脫鹽制得白英提取物，其中，白英提取物包括 60%的留體生物堿。進(jìn)一步地，弱酸性陽離子交換大孔樹脂柱是D151丙烯酸系弱酸性陽離子交換大孔樹脂。進(jìn)一步地，脫鹽制得白英提取物的步驟是通過采用AB-8型樹脂柱對鹽酸乙醇洗脫液進(jìn)行脫鹽處理實施的。進(jìn)一步地，乙醇提取物水分散步驟包括用乙醇提取物50 60倍體積的水加熱分散或直接分散乙醇提取物。進(jìn)一步地，鹽酸乙醇是體積百分含量為6%。的鹽酸乙醇。進(jìn)一步地，乙醇提取白英藥材的步驟包括取白英，切段，加10倍生藥量的95%乙醇浸泡過夜，回流提取3小時，過濾；濾渣用10倍生藥量的70%乙醇回流提取兩次，每次3 小時，過濾；合并三次提取液，回收溶劑蒸發(fā)至干，得乙醇提取物。進(jìn)一步地，上述白英提取物包括50% 60%的留體生物堿。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了一種抗癌藥物，該抗癌藥物包括治療有效量的上述任一種白英提取物。本發(fā)明采用弱酸性陽離子交換大孔樹脂專屬性地富集了白英眾多成分中的甾體生物堿，成分較為單一，并且經(jīng)實驗證明了該類物質(zhì)具有顯著的抗腫瘤藥效，且其抗腫瘤的藥效遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于現(xiàn)有技術(shù)中白英的水粗提取物和采用正丁醇萃取的留體皂苷的藥效。
具體實施例方式需要說明的是，在不沖突的情況下，本發(fā)明中的實施例及實施例中的特征可以相互組合。下面將結(jié)合實施例來詳細(xì)說明本發(fā)明。在本發(fā)明的一種典型的實施方式中，提供了一種白英提取物。該白英提取物通過以下步驟制得乙醇提取白英藥材白英藥材在乙醇中回流提取，回收溶劑蒸發(fā)至干，得乙醇提取物；精制將乙醇提取物用水分散形成溶液，用弱酸性陽離子交換大孔樹脂柱吸附， 依次用乙醇和鹽酸乙醇洗脫，收集鹽酸乙醇洗脫液，用氨水中和至中性，脫鹽制得白英提取物，其中，白英提取物包括1 % 60 %的留體生物堿。現(xiàn)有技術(shù)中，本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為白英中抗癌、抗腫瘤的有效組分是留體皂苷，通常用正丁醇富集留體皂苷，當(dāng)然這種富集并不是專屬富集，獲得的留體皂苷中可能包含許多種其他成分，例如少量的留體生物堿。與現(xiàn)有技術(shù)不同的是本發(fā)明采用離子交換型大孔樹脂專屬性地富集了白英眾多成分中的留體生物堿有效組分，并用大量動物實驗證明了該成分對多種小鼠實體瘤具有顯著的抗腫瘤藥效，這是現(xiàn)有研究尚未發(fā)現(xiàn)的，且其抗腫瘤的藥效遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于現(xiàn)有技術(shù)中白英的水粗提取物和采用的正丁醇萃取留體皂苷的藥效。根據(jù)本發(fā)明的典型實施方式，在精制步驟中采用弱酸性陽離子交換大孔樹脂柱對乙醇提取物中的甾體生物堿進(jìn)行專屬富集，優(yōu)選地，采用D151丙烯酸系弱酸性陽離子交換大孔樹脂。在精制步驟中的對鹽酸乙醇洗脫液的脫鹽制得白英提取物的步驟可以采用本領(lǐng)域技術(shù)人員通常使用的液體脫鹽方式進(jìn)行，優(yōu)選地，采用AB-8型樹脂柱對鹽酸乙醇洗脫液進(jìn)行脫鹽處理，因為AB-8型樹脂柱的對鹽酸乙醇洗脫液的脫鹽效果好，且其具有使用壽命長、成本低廉的優(yōu)點。在上述乙醇提取物用水分散步驟中可以采用乙醇提取物10 200倍體積的水進(jìn)行加熱分散或直接分散。優(yōu)選地，采用乙醇提取物50 60倍體積的水加熱分散乙醇提取物，這樣既使上清液容易分離，又保證了充分溶解留體生物堿，并保持合適的上樣濃度，避免上清液過粘，有利于留體生物堿的富集。乙醇提取物用水分散后有部分粘液質(zhì)，使分散液渾濁，根據(jù)本發(fā)明的典型實施方式，為了使乙醇提取物水分散后過吸附柱時更順暢，富集效果更好，可以靜置過夜或離心取上清過弱酸性陽離子交換大孔樹脂柱。乙醇洗脫步驟中使用的乙醇可以是60 % 95 %的乙醇，優(yōu)選地，選用95 %的乙醇。洗脫鹽酸乙醇可以是體積百分含量為1%。 10%。的鹽酸乙醇(用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為37%的濃鹽酸與乙醇混合制得)，優(yōu)選地是體積百分含量為6%。的鹽酸乙醇，此濃度的鹽酸乙醇進(jìn)行洗脫，具有降耗減排的優(yōu)勢。乙醇提取白英藥材的步驟可以采用現(xiàn)有技術(shù)中本領(lǐng)用技術(shù)人員通常使用的方法， 優(yōu)選地，采用以下步驟進(jìn)行乙醇提取物的提取取白英，切段，加10倍生藥量的95%乙醇浸泡過夜，回流提取3小時，過濾；濾渣用10倍生藥量的70%乙醇回流提取兩次，每次3小時， 過濾；合并三次提取液，回收溶劑蒸發(fā)至干，得乙醇提取物。當(dāng)然這些溶劑的加入量、乙醇的濃度以及回流提取的時間和次數(shù)可以進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。經(jīng)紫外分光光度法及高效液相色譜法測定，采用上述方法提取得到的白英提取物，包括1 % 60 %的留體生物堿。優(yōu)選地，包括50 % 60 %的留體生物堿。該白英提取物可用于制備抗癌藥物和抗腫瘤藥物，且其藥效顯著，下面將結(jié)合具體實驗進(jìn)一步說明本發(fā)明所提供的白英提取物的有益效果。一、不同提取方法獲得的白英提取物中留體生物堿的含量由于白英藥材不同批次之間留體生物堿含量存在很大的差異，因此通過同種方法提取的留體生物堿也可能存在較大的差異。以下實驗采用三個不同批次白英藥材作為實驗藥材。實施例1制備方法乙醇提取取白英原藥材(茄科植物白英Solanum lyratum Thunb.的干燥全草)，切段，加10倍生藥量的95%乙醇浸泡過夜，回流提取3小時，過濾，濾渣用10倍生藥量的70%乙醇回流提取兩次，每次3小時，過濾，合并三次提取液，回收溶劑蒸發(fā)至干， 得乙醇提取物。精制取乙醇提取物，用50倍體積的水加熱溶解，放置過夜，上清液上樣于D151大孔樹脂柱，用95%乙醇漂洗，再用6%。的鹽酸乙醇洗脫。收集6%。的鹽酸乙醇洗脫液，上AB-8 型大孔樹脂脫鹽，洗脫液濃縮至干，得精制白英提取物。實施例2制備方法乙醇提取取白英原藥材(白英為茄科植物白英Solanum Iytatum Thunb.的干燥全草)，切段，加10倍生藥量的95%乙醇浸泡過夜，回流提取3小時，過濾，濾渣用10倍生藥量的70%乙醇回流提取兩次，每次3小時，過濾，合并三次提取液，回收溶劑蒸發(fā)至于，得乙醇提取物。精制取乙醇提取物，用55倍體積的水加熱溶解，放置過夜，上清液上樣于D151大孔樹脂柱，用95%乙醇漂洗，再用6%。的鹽酸乙醇洗脫。收集6%。的鹽酸乙醇洗脫液，上AB-8 型大孔樹脂脫鹽，洗脫液濃縮至干，得精制白英提取物。實施例3制備方法乙醇提取取白英原藥材(白英為茄科植物白英Solanum Iytatum Thunb.的干燥全草)，切段，加10倍生藥量的95%乙醇浸泡過夜，回流提取3小時，過濾，濾渣用10倍生藥量的70%乙醇回流提取兩次，每次3小時，過濾，合并三次提取液，回收溶劑蒸發(fā)至干，得乙醇提取物。精制取乙醇提取物，用60倍體積的水加熱溶解，放置過夜，上清液上樣于D151大孔樹脂柱，用95%乙醇漂洗，再用6%。的鹽酸乙醇洗脫。收集6%。的鹽酸乙醇洗脫液，上AB-8 型大孔樹脂脫鹽，洗脫液濃縮至干，得精制白英提取物。水提法取白英原藥材(白英為茄科植物白英Solanum lyfatum Thunb.的干燥全草)，切段，加10倍生藥量的水浸泡30分鐘后，回流提取3次，每次1小時，自然冷卻，過濾，棄去濾渣，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去溶劑，得白英水粗提取物。正丁醇提取法取白英原藥材(白英為茄科植物白英Solanum lyratum Thunb.的干燥全草)，切段，加10倍生藥量的95%乙醇加熱回流提取3次，每次1小時，合并提取液，濃縮得乙醇浸膏。用適量水將乙醇浸膏分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收正丁醇萃取液， 得正丁醇部位。表 權(quán)利要求
1.一種白英提取物，其特征在于，通過以下步驟制得 乙醇提取白英藥材，制得乙醇提取物；精制將所述乙醇提取物用水分散形成溶液，用弱酸性陽離子交換大孔樹脂柱吸附，依序用乙醇和鹽酸乙醇洗脫，收集鹽酸乙醇洗脫液，用氨水中和至中性，脫鹽制得所述白英提取物，其中，所述白英提取物包括1 % 60 %的留體生物堿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白英提取物，其特征在于，所述弱酸性陽離子交換大孔樹脂柱是D151丙烯酸系弱酸性陽離子交換大孔樹脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的白英提取物，其特征在于，所述脫鹽制得白英提取物的步驟是通過采用AB-8型樹脂柱對所述鹽酸乙醇洗脫液進(jìn)行脫鹽處理實施的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白英提取物，其特征在于，所述乙醇提取物水分散步驟包括 用所述乙醇提取物50 60倍體積的水加熱分散或直接分散所述乙醇提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白英提取物，其特征在于，所述鹽酸乙醇是體積百分含量為 6%。的鹽酸乙醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白英提取物，其特征在于，所述乙醇提取白英藥材的步驟包括取白英，切段，加10倍生藥量的95%乙醇浸泡過夜，回流提取3小時，過濾； 濾渣用10倍生藥量的70%乙醇回流提取兩次，每次3小時，過濾； 合并三次提取液，回收溶劑蒸發(fā)至干，得所述乙醇提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白英提取物，其特征在于，所述白英提取物包括50% 60% 的甾體生物堿。
8.一種抗癌藥物，其特征在于，包括治療有效量的權(quán)利要求1 7中任一項所述的白英提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種白英提取物以及包括其的抗癌藥物。該白英提取物通過以下步驟制得乙醇提取白英藥材，將白英藥材在乙醇中回流提取，回收溶劑蒸發(fā)至干，得乙醇提取物；精制將上述乙醇提取物用水形成溶液，用弱酸性陽離子交換大孔樹脂柱吸附，依次用乙醇和鹽酸乙醇洗脫，收集鹽酸乙醇洗脫液，用氨水中和至中性，脫鹽制得白英提取物，其中，白英提取物包括1％～60％的甾體生物堿。本發(fā)明采用弱酸性陽離子交換大孔樹脂，從白英眾多成分中專屬性地富集了甾體生物堿，成分較為單一，并且實驗證明了該類物質(zhì)具有顯著的抗腫瘤藥效，且其抗腫瘤的藥效遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于現(xiàn)有技術(shù)中白英的水粗提取物和采用正丁醇萃取的甾體皂苷的藥效。
文檔編號A61P35/00GK102319319SQ20111027647
公開日2012年1月18日 申請日期2011年9月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月15日
發(fā)明者王建農(nóng) 申請人:中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院