專利名稱：一種具有抗肝纖維化作用的藥物組合物及制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及中藥制藥技術領域，具體涉及一種從虎眼萬年青提取的具有抗肝纖維化作用的藥物組合物。
背景技術：
虎眼萬年青，又名珍珠草、胡連萬年青、海蔥、葫蘆蘭，為百合科虎眼萬年青屬多年生草木植物。主要分布于東半球溫帶地區(qū)，原產于非洲南部，我國北方有栽培。該藥味甘、 微寒，歸肝、脾經。具有清熱解毒，消堅散結的功能。民間用其全草或球莖入藥，用其鮮汁液涂抹患處以治療疔瘡，內服可治療無名腫毒、肝炎、肝硬化、肝癌、膽囊炎等，而且療效確切，具有極高的藥用價值藥。據(jù)文獻報道，該植物內含虎眼萬年青皂苷，生物堿、黃酮、多糖、香豆素、苯甲酸、單糖、多種氨基酸，大量微量元素及低聚糖高級烷烴混合物等各類化學成分。其中虎眼萬年青皂苷、生物堿、黃酮既是抗腫瘤的藥效成分，又有較強的抗炎作用；多糖組分能增強人體體液免疫和細胞免疫功能，與人參皂苷Rg1相近。肝纖維化是各種病因所致的慢性肝病共同病理過程，是肝硬化發(fā)展的主要環(huán)節(jié)。而我國又是一個肝病高發(fā)國家，每年僅肝硬化的治療費用給國家和個人造成了沉重負擔。因此，防治肝纖維化、肝硬化的發(fā)生、發(fā)展，顯得尤為重要和緊迫。目前臨床仍缺乏高效、無明顯毒副作用的治療肝纖維化藥品。中醫(yī)藥通過多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點的綜合藥理學作用在抗肝纖維化方面展現(xiàn)出優(yōu)勢，顯示了良好的前景。因此應用具有較強抗肝纖維化作用，而無毒副作用的虎眼萬年青提取物為原料的中藥制劑，為臨床治療肝炎、肝硬化、肝癌、膽囊炎等提供了一種新的選擇。本發(fā)明針對上述情況，采用現(xiàn)代藥效學研究方法對虎眼萬年青的有效成分進行篩選，確定了具有抗肝纖維化活性的有效部位，進而經過工藝研究確定了以虎眼萬年青提取物為主要成分的中藥制劑的制備方法。此前，虎眼萬年青的活性成分制備方法多為有機溶劑直接冷浸、回流、超臨界萃取等，尚未有對虎眼萬年青中抗肝纖維化有效成分有針對性的應用大孔樹脂等填料進行提取、制備方法，以及各種口服、外用和注射劑型制劑的制備方法的專利公布。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于提供一種具有抗肝纖維化作用的藥物組合物。用于治療肝炎、肝硬化、肝癌、膽囊炎等疾病?？朔壳芭R床缺乏高效、無明顯毒副作用的治療肝纖維化藥物的不足。本發(fā)明又一個目的是提供一種上述藥物組合物的制備方法。本發(fā)明的藥物組合物的活性成分包括10 70重量份的虎眼萬年青總黃酮、I 20重量份的虎眼萬年青總皂苷、I 10重量份的虎眼萬年青總生物堿、30 70重量份的虎眼萬年青總多糖。
本發(fā)明藥物的制備方法是
I、干燥虎眼萬年青I. Okg粉碎成粗粉(20目)，用70%乙醇(體積比)冷浸兩次，每次15天，合并浸潰液，減壓濃縮呈稠膏(相對密度I. 2，70°C)，加600-800毫升水攪拌，冷卻沉淀。置離心機(1200-1600 rad/min)沉降離心15 30分鐘，取上清液備用。取大孔吸附樹脂D101，按與生藥重量比I :2的比例裝柱，將上述備用的上清液上樣，先用2 4倍柱體積去離子水洗脫，再用4 6倍柱體積20 60%乙醇(體積比)進行梯度洗脫，收集乙醇洗脫液，50 70°C減壓濃縮，50 70°C干燥，粉碎，得虎眼萬年青總黃酮，得率(重量比)為2. 7%。2、干燥虎眼萬年青I. Okg粉碎成粗粉(20目)，用80%乙醇(體積比)加熱回流提取 2次，合并提取液，減壓濃縮呈稠膏(相對密度I. 2，70°C)，加600 800毫升水攪拌，冷卻沉淀。置離心機(1200-1600 rad/min)沉降離心15 30分鐘，取上清液備用。取大孔吸附樹脂AB-8，按與生藥重量比I :1的比例裝柱，將上述備用的上清液上樣，先用2 4倍柱體積去離子水洗脫，再用4 6倍柱體積20 70%乙醇進行梯度洗脫，收集乙醇洗脫液，50 70°C減壓濃縮，50 70°C干燥，粉碎，得虎眼萬年青總皂苷，得率(重量比)為I. 2%。3、干燥虎眼萬年青I. Okg粉碎成粗粉(20目)，用60%乙醇(體積比)浸潰48小時后，滲漉提取，滲漉至流出液色淺，減壓濃縮呈稠膏(相對密度I. 2，700C )，加600 800毫升水攪拌，冷卻沉淀。置離心機(1200-1600 rad/min)沉降離心15 30分鐘，取上清液備用。取739型強酸性陽離子樹脂，按與生藥重量比I :3的比例裝柱，將上述各用的上清液上樣，先用2 4倍柱體積去離子水洗脫，再用4 6倍柱體積含0. 25%氨水的30 80%乙醇進行梯度洗脫.收集乙醇洗脫液。50 70°C減壓濃縮，50 70°C干燥，粉碎，得虎眼萬年青總生物堿，得率為0. 7%。4、干燥虎眼萬年青I. Okg粉碎成粗粉(20目)，用水(體積比)煎煮提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮呈稠膏(相對密度I. 2，70°C)，加95%乙醇攪拌均勻，使乙醇濃度達到60-80%，靜置過夜。所得的靜置液進行過濾得沉淀物，將沉淀物溶于水，再加入60-80%乙醇進行沉淀，過濾所得沉淀物，除蛋白(Savage法),在50 70°C干燥,粉碎,得虎眼萬年青總多糖，得率為5. 5%。5、取10 70重量份步驟I得到的虎眼萬年青總黃酮、I 20重量份步驟2得到的虎眼萬年青總皂苷、I 10重量份步驟3得到的虎眼萬年青總生物堿、30 70重量份步驟4得到的虎眼萬年青總多糖混合，即得具有抗肝纖維化作用的藥物組合物。再將前述藥物組合物與常用藥用輔料組配，制成片、膠囊、顆粒等各種常規(guī)口服或肌注藥物制劑，
本發(fā)明的積極效果是經相關藥效學試驗結果表明，本發(fā)明藥物組合物具有顯著的抗肝纖維化作用，對治療肝炎、肝硬化、肝癌、膽囊炎等的治療具有顯著效果。藥效驗證
用本發(fā)明的藥物組合物制劑對四氯化碳誘導的大鼠肝纖維化的影響取清潔級大鼠96只，隨機分為6組，每組各16只，即對照組，模型組，秋水仙堿(0.2mg/kg)組,實施例6中組合物制劑高、中、低劑量(20、10、5 g/kg)組。各組每天ig給藥，體積為20 mL/kg，連續(xù)8周，對照組和模型組給予蒸餾水。再給藥的同時采用CC14制備大鼠肝纖維化模型，除對照組外，其余各組每只大鼠首次于背部sc純CC14 5 mL/kg，以后sc40%CC14花生油3 mL/kg，每周2次，共8周。股動脈取血，常規(guī)分離血清，大鼠處死前禁食24 h0檢測血清中的肝纖維化4項指標PCIII、IV_C、HA、LN。大鼠于平臥狀態(tài)下剖腹，取肝臟、脾臟，稱質量，計算肝臟、脾臟指數(shù)；用肉眼觀察大鼠肝臟的外形、體積、顏色、質地的改變，一部分肝臟用生理鹽水制成10%肝勻漿，用于檢測肝組織中的S0D、GSH-Px的活性與Hyp、MDA水平。
數(shù)據(jù)均以z 土 s表示，采用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進行方差分析。對肝纖維化大鼠血清中肝纖維化4項指標的影響
與對照組相比，模型組大鼠血清中HA、LN、PCIII、IV-C水平均顯著升高G°〈0. 01)，提示造模成功。與模型組比較，實施例6中組合物制劑各劑量組大鼠血清中HA、LN、PCIII、IV-C水平明顯降低(/X0. 01)，實施例6中組合物制劑高劑量組效果最好，并且有明顯的劑量相關性。結果見表I.
表I實施例6中組合物制劑給藥對CC14致肝纖維化大鼠血清中HA、LN、PCIII、IV-C的影響(^ ± S )
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與對照組比較01 ;與模型組比較= AAZXO. 01 ;與實施例6中組合物制劑高劑量組比較:#尸<0. 05 ##P<0. 01 ；
對肝纖維化大鼠肝臟、脾臟指數(shù)的影響
與對照組比較，模型組大鼠肝臟、脾臟質量明顯增加，肝臟、脾臟指數(shù)明顯升高0°< 0. 05)，提示造模成功。與模型組比較，實施例6中組合物制劑各劑量組大鼠肝臟、脾臟質量明顯降低Gd < 0. 01)，肝臟、脾臟指數(shù)顯著降低(產< 0. 01)，實施例6中組合物制劑高劑量組效果最好，且呈明顯劑量依賴性。結果見表2.表2實施例6中組合物制劑給藥對CC14致肝纖維化大鼠肝脾及肝脾指數(shù)的影響
權利要求
1.一種具有抗肝纖維化作用的藥物組合物，其特征是活性成分中包括10 70重量份的虎眼萬年青總黃酮、I 20重量份的虎眼萬年青總皂苷、I 10重量份的虎眼萬年青總生物堿、30 70重量份的虎眼萬年青總多糖。
2.一種具有抗肝纖維化作用的藥物組合物的制備方法，包括以下步驟 (1)取干燥虎眼萬年青粉碎成20目粗粉，用體積比濃度70%乙醇冷浸兩次，每次15天，合并浸潰液，減壓濃縮成70°C時相對密度I. 2的稠膏，按Ikg干燥虎眼萬年青加600-800毫升水攪拌，冷卻沉淀，置離心機在1200-1600 rad/min下沉降離心15 30分鐘，取上清液備用， 取大孔吸附樹脂D101，按與生藥重量比I :2的比例裝柱，將上述備用的上清液上樣，先用2 4倍柱體積去離子水洗脫，再用4 6倍柱體積的體積比濃度20 60%乙醇進行梯度洗脫，收集乙醇洗脫液，50 70°C減壓濃縮，50 70°C干燥，粉碎，得虎眼萬年青總黃酮，重量比得率為2. 7% ； (2)取干燥虎眼萬年青粉碎成20目粗粉，用體積比濃度80%乙醇加熱回流提取2次，合并提取液，減壓濃縮呈70°C時相對密度I. 2的稠膏，按Ikg干燥虎眼萬年青加600 800毫升水攪拌，冷卻沉淀，置離心機zl200-1600 rad/min下沉降離心15 30分鐘，取上清液備用， 取大孔吸附樹脂AB-8，按與生藥重量比I :1的比例裝柱，將上述備用的上清液上樣，先用2 4倍柱體積去離子水洗脫，再用4 6倍柱體積20 70%乙醇進行梯度洗脫，收集乙醇洗脫液，50 70°C減壓濃縮，50 70°C干燥，粉碎，得虎眼萬年青總皂苷，重量比得率為 I. 2% ； (3)取干燥虎眼萬年青粉碎成20目粗粉，用體積比濃度60%乙醇浸潰48小時后，滲漉提取，滲漉至流出液色淺，減壓濃縮呈70°C時相對密度1.2稠膏，按Ikg干燥虎眼萬年青加600 800毫升水攪拌，冷卻沉淀，置離心機(1200-1600 rad/min)沉降離心15 30分鐘，取上清液備用， 取739型強酸性陽離子樹脂，按與生藥重量比I :3的比例裝柱，將上述各用的上清液上樣，先用2 4倍柱體積去離子水洗脫，再用4 6倍柱體積含0. 25%氨水的30 80%乙醇進行梯度洗脫.收集乙醇洗脫液，50 70°C減壓濃縮，50 70°C干燥，粉碎，得虎眼萬年青總生物堿，得率為0. 7% ； (4)取干燥虎眼萬年青粉碎成20目粗粉，加藥材8-10倍體積的水煎煮提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮呈70°C時相對密度I. 2稠膏，加95%乙醇攪拌均勻，使乙醇濃度達到60-80%，靜置過夜， 所得的靜置液進行過濾得沉淀物，將沉淀物溶于水，再加入60-80%乙醇進行沉淀，過濾所得沉淀物，用Savage法除蛋白，在50 70°C干燥，粉碎，得虎眼萬年青總多糖，得率為5.5% ； (5)取10 70重量份步驟(I)得到的虎眼萬年青總黃酮、I 20重量份步驟(2)得到的虎眼萬年青總皂苷、I 10重量份步驟(3)得到的虎眼萬年青總生物堿、30 70重量份步驟(4)得到的虎眼萬年青總多糖混合，即得具有抗肝纖維化作用的藥物組合物。
全文摘要
一種具有抗肝纖維化作用的藥物組合物及制備方法。克服目前臨床缺乏高效、無明顯毒副作用的治療肝纖維化藥物的不足。本發(fā)明的藥物組合物的活性成分包括10～70重量份的虎眼萬年青總黃酮、1～20重量份的虎眼萬年青總皂苷、1～10重量份的虎眼萬年青總生物堿、30～70重量份的虎眼萬年青總多糖。制備方法包括分別提取虎眼萬年青總黃酮，虎眼萬年青總皂苷，虎眼萬年青總生物堿，虎眼萬年青總多糖，將所得提取物混合，本發(fā)明藥物組合物。將前述藥物組合物與常用藥用輔料組配，制成常規(guī)口服或肌注藥物制劑，本發(fā)明的積極效果是經相關藥效學試驗結果表明，本發(fā)明藥物組合物具有顯著的抗肝纖維化作用，對治療肝炎、肝硬化、肝癌、膽囊炎等的治療具有顯著效果。
文檔編號A61P1/16GK102652791SQ20111020791
公開日2012年9月5日 申請日期2011年7月25日 優(yōu)先權日2011年7月25日
發(fā)明者孫佳明, 楊世杰, 高曉杰, 高陸 申請人:長春康彼達科技有限公司