專利名稱：一種養(yǎng)血清腦顆粒的hplc指紋圖譜檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種養(yǎng)血清腦顆粒的HPLC指紋圖譜檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
養(yǎng)血清腦顆粒是由當(dāng)歸、川芎、白芍、鉤藤、雞血藤、熟地黃、決明子、夏枯草、細(xì)辛、 延胡索和珍珠母11味中藥，采用現(xiàn)代化制劑工藝技術(shù)精制而成，具有養(yǎng)血平肝、活血通絡(luò)的作用，用于血虛肝亢所致的頭痛、眩暈眼花、心煩易怒、失眠多夢(mèng)等癥，是受國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)的中藥品種。其中當(dāng)歸和川芎中所共有的指標(biāo)性成分阿魏酸，被研究證明具有舒張血管、升高血清白蛋白和防治脂質(zhì)過氧化損傷等作用，被普遍用于防治偏頭痛、冠心病和糖尿病周圍神經(jīng)病變等臨床多發(fā)癥；川芎，夏枯草和鉤藤中所共有的咖啡酸被證明具有阻遏腦內(nèi)MDA 含量增加和SOD活性降低的功能，被用于改善學(xué)習(xí)記憶能力障礙；夏枯草中的迷迭香酸和決明子中的黃芩苷，也被分別證明具有改善腎小球高濾過狀態(tài)，抑制細(xì)胞外基質(zhì)增生和解除發(fā)熱，抗焦慮等作用，是養(yǎng)血清腦顆粒中的重要有效成分。作為多維組分復(fù)雜樣品的整體性評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的有效控制手段，中藥指紋圖譜是目前能夠?yàn)閲?guó)內(nèi)外廣泛接受的全面評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量模式的一種方法。美國(guó)FDA在植物藥制品指導(dǎo)原則中允許申報(bào)者提供產(chǎn)品的色譜指紋圖譜資料，德國(guó)藥用植物學(xué)會(huì)、英國(guó)草藥典、印度草藥典以及加拿大藥用及芳香植物學(xué)會(huì)也都把指紋圖譜作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容之一。 目前有關(guān)于養(yǎng)血清腦顆粒指紋圖譜方面的研究在國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道，為了更好地控制其質(zhì)量，保證臨床用藥的安全性和有效性，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法對(duì)其指紋圖譜進(jìn)行了初步研究， 在方法學(xué)考察的基礎(chǔ)上建立了養(yǎng)血清腦顆粒的高效液相指紋圖譜，并考察制劑中共有峰在藥材中的歸屬，為其質(zhì)量控制提供了更全面的信息。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種養(yǎng)血清腦顆粒的HPLC指紋圖譜檢測(cè)方法，該方法經(jīng)過以下步驟1)養(yǎng)血清腦顆粒供試品溶液的制備，精密稱定養(yǎng)血清腦顆粒用3 1甲醇-水配制成溶液，作為制劑供試品溶液；2)將步驟1得到的溶液注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，分別得到它的色譜圖。本發(fā)明所述的方法，其中所用的甲醇-水的體積比為3 1，采用超聲提取。本發(fā)明所述的方法，其中所述的檢測(cè)方法中，步驟2所述的液相色譜采用Agilent Zorbax C18 柱。本發(fā)明所述的方法，其中所述的檢測(cè)方法中，步驟2所述的液相色譜采用乙腈-0.5%甲酸做流動(dòng)相。本發(fā)明所述的方法，其中所述的檢測(cè)方法中，步驟2所述的液相色譜條件色譜柱AgilentZorbax C18 6mmX 250mm，5 μ m)色譜柱；流動(dòng)相A (0. 5 % 甲酸)-B (乙腈)，線性梯度洗脫0 20min，B (5 % 13 % ) ；20 49min，B (13 % 30 % )； 49 98min，B(30% 75% )；流速為 1. OmL · mirT1 ；柱溫40°C ；檢測(cè)波長(zhǎng)0 32min 為 327nm, 32 98min 為 280nm ；進(jìn)樣量10 μ L ；本發(fā)明還提供了一種養(yǎng)血清腦顆粒的檢測(cè)方法，包括以下步驟(A)取合格的養(yǎng)血清腦顆粒產(chǎn)品，按照上述方法建立養(yǎng)血清腦顆粒標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(B)取待檢養(yǎng)血清腦顆粒，按照上述方法得到指紋圖譜；(C)將步驟⑶得到的指紋圖譜和步驟㈧得到的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比對(duì)，符合即為合格產(chǎn)品，不符合即為不合格產(chǎn)品。本發(fā)明優(yōu)選的測(cè)定方法包括采用以下儀器和藥品Agilentl200高效液相色譜儀及Finnigan TSQ Quantum Discovery液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)；Milli-Q超純水系統(tǒng)(法國(guó)Millipore 公司)；甲醇、乙腈均為色譜純；對(duì)照品阿魏酸，咖啡酸，迷迭香酸和黃芩苷均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；養(yǎng)血清腦顆粒由天津天士力制藥股份有限公司提供。本發(fā)明的檢測(cè)方法，其色譜條件經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果良好。精密度試驗(yàn)取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，分別對(duì)各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及峰面積的變化情況進(jìn)行考察，結(jié)果各共有峰保留時(shí)間的RSD小于0. 12%，相對(duì)峰面積的 RSD小于2. 11%，說明儀器的精密度較好，符合指紋圖譜分析的要求。重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品，制備5份制劑供試品溶液，分別進(jìn)樣，以14號(hào)峰作為參考，考察共有峰的保留時(shí)間及相對(duì)峰面積，結(jié)果各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD小于 0. 27%，相對(duì)峰面積的RSD小于3. 89%，說明實(shí)驗(yàn)方法的重復(fù)性較好，符合指紋圖譜分析的要求。穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別放置0，2，4，8，12，Mh，進(jìn)樣測(cè)定，以14號(hào)峰作為參考，考察共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積的變化情況，結(jié)果各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD小于0. 16%，相對(duì)峰面積的RSD小于3. 57%，表明供試品溶液在Mh內(nèi)穩(wěn)定，符合指紋圖譜分析的要求。指紋圖譜的建立指紋圖譜的繪制精密吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。測(cè)定10批養(yǎng)血清腦顆粒樣品的指紋圖譜，并借助國(guó)家藥典委員會(huì)《中藥指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004Α版》軟件，分析10批樣品的指紋圖譜并生成共有峰對(duì)照指紋圖譜(

圖1和圖2、，同時(shí)相似度評(píng)價(jià)結(jié)果顯示10批樣品相似度情況良好(表1)。表1、10批養(yǎng)血清腦顆粒指紋圖譜的相似度測(cè)定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種養(yǎng)血清腦顆粒的HPLC指紋圖譜檢測(cè)方法，其特征在于，經(jīng)過以下步驟1)養(yǎng)血清腦顆粒供試品溶液的制備，精密稱定養(yǎng)血清腦顆粒用1 3-3 1甲醇-水配制成溶液，作為制劑供試品溶液；2)將步驟1得到的溶液注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，分別得到它的色譜圖。
2.如權(quán)利要求1的檢測(cè)方法，其特征在于，其中所用的甲醇-水的體積比為3 1，采用超聲提取或加熱回流提取。
3.權(quán)利要求2的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的檢測(cè)方法中，步驟2所述的液相色譜采用 Agilent Zorbax C18 柱。
4.權(quán)利要求3的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的檢測(cè)方法中，步驟2所述的液相色譜采用乙腈-0.5%甲酸做流動(dòng)相。
5.權(quán)利要求4的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的檢測(cè)方法中，步驟2所述的液相色譜條件色譜柱Agilent Zorbax C18 6mmX 250mm，5 μ m)色譜柱；流動(dòng)相A (0. 5 % 甲酸)-B (乙腈)，線性梯度洗脫0 20min，B (5 % 13 % ) ；20 49min，B (13 % 30 % )； 49 98min，B(30% 75% )；流速為 1. OmL · mirT1 ；柱溫40°C ；檢測(cè)波長(zhǎng)0 32min 為 327nm, 32 98min 為 280nm ；進(jìn)樣量10 μ L ；
6.一種養(yǎng)血清腦顆粒的檢測(cè)方法，包括以下步驟(A)取合格的養(yǎng)血清腦顆粒產(chǎn)品，按照權(quán)利要求1-5的任一方法建立養(yǎng)血清腦顆粒標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(B)取待檢養(yǎng)血清腦顆粒，按照權(quán)利要求1的方法得到指紋圖譜；(C)將步驟(B)得到的指紋圖譜和步驟(A)得到的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比對(duì)，符合即為合格產(chǎn)品，不符合即為不合格產(chǎn)品。
全文摘要
一種養(yǎng)血清腦顆粒的HPLC指紋圖譜檢測(cè)方法，其特征在于，經(jīng)過以下步驟1)養(yǎng)血清腦顆粒供試品溶液的制備，精密稱定養(yǎng)血清腦顆粒用3∶1甲醇-水配制成溶液，作為制劑供試品溶液；2)將步驟1得到的溶液注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，分別得到它的色譜圖。本發(fā)明根據(jù)的養(yǎng)血清腦顆粒自身特點(diǎn)，我們采用高效液相色譜法測(cè)定養(yǎng)血清腦顆粒的指紋圖譜，找到了優(yōu)化的色譜條件，使測(cè)定結(jié)果精密，重復(fù)性和穩(wěn)定性良好。
文檔編號(hào)A61P1/16GK102441057SQ20101050612
公開日2012年5月9日 申請(qǐng)日期2010年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月14日
發(fā)明者佟玲, 倪倩, 李文博, 高鈞 申請(qǐng)人:天津天士力制藥股份有限公司