專利名稱：一種復方油佐劑及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及疫苗佐劑技術領域，特別涉及一種復方油佐劑，還涉及所述復方油佐劑的制備方法及應用。
背景技術：
油性佐劑疫苗是已公知的可有效強化免疫性的疫苗，是目前國內(nèi)外疫苗市場上產(chǎn)品最多的類型之一，油乳劑疫苗有三種類型油包水(W/0)型、水包油(0/W)型和水包油包水(ff/0/ff)型。油包水(W/0)型應用最普遍，是分三步驟，首先通過將司本-85加入白油中、吐溫-80加入抗原水溶液中，再將二者混合物進行乳化制備而成。其顯著優(yōu)點是可獲得高水平持久的免疫增強效果。缺點是較粘稠，注射較困難。同時由于疫苗中白油含量相對較高，常常導致嚴重的接種副反應、形成無菌性化膿損害和接種部位周圍的肉芽腫，可產(chǎn)生外 部可見的浮腫、腫脹、硬結和壞死。而且懷疑在接種部位有留存的可能，這便妨礙了疫苗的使用。水包油(0/W)型是為減少乳劑中油含量建立此法，但未普遍應用。該劑型優(yōu)點是粘度低，易于注射，缺點是免疫原性弱，僅誘導動物體內(nèi)產(chǎn)生較弱的免疫應答，在人用疫苗應用方面已有商業(yè)化應用，如MF59佐劑用于流感疫苗的制作，但是在動物疫苗上尚未推廣應用。水包油包水(W/0/W)劑型兼具有W/0型和0/W型的優(yōu)點，效果很好。常規(guī)的做法是先制備W/0型疫苗，再經(jīng)第二次分散到水相中制備而成。目的是降低黏度，既便于注射又具有良好的免疫原性。但制備技術上難度較大，疫苗穩(wěn)定性差，如能克服此缺點，它是最理想的乳劑疫苗。國內(nèi)外公認的最好此類佐劑為ISA206(法國SEPPIC公司生產(chǎn))。它通過自乳化技術，直接將ISA206與抗原水溶液混合、乳化，一步法即可制備出W/0/W型乳劑疫苗，解決了 W/0/W型乳劑疫苗制備難的問題，而且具有一定的穩(wěn)定性，在全球范圍內(nèi)得到了廣泛應用。其不足之處為所制備的W/0/W型乳劑疫苗穩(wěn)定性還不太令人滿意，而且價格昂貴。專利“一種自乳化疫苗佐劑及其制備方法”(ZL 200510037639. 8)公布了一系列W/0/W型乳劑疫苗的制備方法，但是其配方復雜，田間試驗時有副反應發(fā)生。而且穩(wěn)定性不足12個月，不能滿足生產(chǎn)實際需要，也未見其商品化使用。因此，建立穩(wěn)定、簡便、價廉的W/0/W型乳劑工藝具有極其重要的現(xiàn)實意義和市場價值。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決以上油性佐劑疫苗配方復雜、穩(wěn)定性差、價格昂貴的問題，本發(fā)明提供了一種配方簡單、穩(wěn)定性好、價格便宜的復方油佐劑。本發(fā)明的另一個目的是提供所述復方油佐劑的制備方法。本發(fā)明還提供了所述復方油佐劑的應用。本發(fā)明是通過以下措施實現(xiàn)的
本發(fā)明的復方油佐劑，由白油、油醇聚氧乙烯醚(C18H35O (CH2CH2O)n-H)和聚氧乙烯醚硬脂酸酯三種成分組成。其中，白油所占質量比為80%-95%，油醇聚氧乙烯醚所占質量比為1%-10%，聚氧乙烯醚硬脂酸酯所占質量比為1%-10%。油醇聚氧乙烯醚分子量為400-600，聚氧乙烯醚硬脂酸酯分子量為400-600。所用原料的重量百分比優(yōu)選白油88-92%，油醇聚氧乙烯醚5-9%，聚氧乙烯醚硬脂酸酯1_5%。所述的復方油佐劑，更優(yōu)選白油90%，油醇聚氧乙烯醚7%，聚氧乙烯醚硬脂酸酯
3% ο本發(fā)明復方油佐劑的制備方法分別稱取處方量的白油、油醇聚氧乙烯醚和聚氧乙烯醚硬脂酸酯，均勻混合而成。
所述的復方油佐劑在制備動物疫苗中的應用。所述的應用，將復方油佐劑預熱，與抗原溶液混合，乳化均勻。
所述的應用,優(yōu)選復方油佐劑與抗原溶液按質量比I I. 5:1混合。所述抗原溶液優(yōu)選為豬圓環(huán)病毒液，滅活前每毫升病毒液病毒含量> IO5-5TCID500所述抗原溶液為優(yōu)選為豬口蹄疫抗原水溶液,滅活前每O. 2毫升病毒液病毒含量彡 IO7 0LD500本發(fā)明復方油佐劑的使用方法本發(fā)明對抗原的種類沒有限制，對乳化的裝置也沒有限制。通用W/0/W型乳劑疫苗的制備方法是，將本發(fā)明復方油佐劑預熱25°C以上，與抗原水溶液(室溫)按質量比I I. 5:1進行混合，乳化5 30分鐘即可。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明應用自乳化原理，開發(fā)了一種新復方油佐劑，該復方油佐劑與抗原水溶液經(jīng)過手搖、磁力攪拌或機械擠壓乳化等乳化工藝均可制作成穩(wěn)定的W/0/W型乳劑疫苗，成功解決了 w/0/w型乳劑疫苗制備困難的難題，所制備的乳劑疫苗既便于注射又具有良好的免疫原性，而且穩(wěn)定性比ISA206所制各的W/0/W型乳劑疫苗更好。
具體實施例方式以下通過具體實施例對本發(fā)明的技術方案進行詳細解釋，但下述實施例并不對本發(fā)明進行任何的限制。實施例I 復方油佐劑在豬口蹄疫疫苗中的應用 (O復方油佐劑的制備
分別稱取白油17. 4g，油醇聚氧乙烯醚I. 6g和聚氧乙烯醚硬脂酸酯I. Og (三者的質量分數(shù)分別為87%、8%和5%)，放入IOOmL潔凈玻璃瓶中、搖勻。115°C、20min滅菌后，室溫保
存?zhèn)溆谩?2)豬口蹄疫病毒液的制備
按照《獸用生物質量質量標準匯編》(2006-2008)，相關要求制備滅活的豬口蹄疫抗原水溶液，滅活前每O. 2暈升病毒液病毒含量應> IO7' 0LD50O(3)豬口蹄疫疫苗的制備
在無菌操作情況下，將上述(I)中制備的復方油佐劑加熱至30°C，取15g放入50mL的燒杯中，另取(2)中制備的豬口蹄疫滅活病毒液15g也放入該燒杯中，同時加入磁力轉子置磁力攪拌器(含加熱功能)上進行攪拌乳化，轉速為2000轉每分鐘，溫度保持30°C，攪拌30分鐘，即成，命名疫苗I。同法用法國SEPPIC公司生產(chǎn)的ISA206佐劑替代本發(fā)明的復方油佐劑，制備對照疫苗，命名對照疫苗A。
(4)疫苗物理性狀和免疫活性的比較見表I。表I疫苗I和對照疫苗A的比較
權利要求
1.一種復方油佐劑，其特征是所用原料的重量百分比如下 白油80-95%， 油醇聚氧こ烯醚1_10%， 聚氧こ烯醚硬脂酸酯 1-10%; 所述油醇聚氧こ烯醚分子量為400-600,所述聚氧こ烯醚硬脂酸酯分子量為400-600。
2.根據(jù)權利要求I所述的復方油佐劑，其特征是所用原料的重量百分比如下 白油88-92%， 油醇聚氧こ烯醚5-9%， 聚氧こ烯醚硬脂酸酯 1_5%。
3.根據(jù)權利要求I所述的復方油佐劑，其特征是所用原料的重量百分比如下白油90%， 油醇聚氧こ烯醚7%， 聚氧こ烯醚硬脂酸酯 3%。
4.一種權利要求1-3中任一項所述的復方油佐劑的制備方法，其特征是將原料混合均勻。
5.—種權利要求1-3中任一項所述的復方油佐劑在制備動物疫苗中的應用。
6.根據(jù)權利要求5所述的應用，其特征是將復方油佐劑預熱，與抗原溶液混合，乳化均勻。
7.根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征是復方油佐劑與抗原溶液按質量比I I.5:1混合。
8.根據(jù)權利要求5或6所述的應用，其特征在于所述抗原溶液為豬圓環(huán)病毒液，滅活前姆暈升病毒液病毒含量> IO5' 5TCID50O
9.根據(jù)權利要求5或6所述的應用，其特征在于所述抗原溶液為豬ロ蹄疫抗原水溶液，滅活前姆0. 2暈升病毒液病毒含量> IO7'0LD50O
全文摘要
本發(fā)明涉及疫苗佐劑技術領域，特別涉及一種復方油佐劑，由白油、油醇聚氧乙烯醚和聚氧乙烯醚硬脂酸酯三種成分組成。白油占80%-95%，油醇聚氧乙烯醚占1%-10%，聚氧乙烯醚硬脂酸酯占1%-10%。油醇聚氧乙烯醚分子量為400-600，聚氧乙烯醚硬脂酸酯分子量為400-600。分別稱取處方量的白油、油醇聚氧乙烯醚和聚氧乙烯醚硬脂酸酯，均勻混合而成。復方油佐劑在制備動物疫苗中的應用。本發(fā)明成功解決了W/O/W型乳劑疫苗制備困難的難題，所制備的乳劑疫苗既便于注射又具有良好的免疫原性，而且穩(wěn)定性比ISA206所制各的W/O/W型乳劑疫苗更好。
文檔編號A61K39/12GK102813922SQ201210332409
公開日2012年12月12日 申請日期2012年9月11日 優(yōu)先權日2012年9月11日
發(fā)明者王金寶, 杜以軍, 齊靜, 吳家強, 李俊, 黃保華, 叢曉燕, 任素芳, 孫文博, 時建立, 郭立輝, 呂偉 申請人:山東省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所