專利名稱：流感病毒活體外快速結(jié)合轉(zhuǎn)化滴鼻液制取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
流感病毒活體外快速結(jié)合轉(zhuǎn)化滴鼻液制取方法是根據(jù)存在于馬齒莧體內(nèi)的半乳糖醛酸具有結(jié)合磷脂、膽固醇、蛋白質(zhì)、糖蛋白、核酸生成易溶于水的半乳糖醛酸苷的生物學(xué)功能與病毒特性、流感病毒囊膜、核衣殼結(jié)構(gòu)及其化學(xué)組成、理化性質(zhì)綜合研制的生物化學(xué)技術(shù)。
背景技術(shù)：
目前，市售的各類抗流感病毒藥物的生產(chǎn)技術(shù)先進(jìn)、治療效果顯著，但所有的抗流感病毒藥物必須要先進(jìn)入機(jī)體方能產(chǎn)生相應(yīng)的抗體或在血液中提高干擾素的水平。為了要達(dá)到高速、高效地中和流感病毒的目的，必須要大劑量的使用，這就注定給機(jī)體帶來相當(dāng)大的毒副作用，而且對流感病毒的侵染幾乎不起防護(hù)作用。

發(fā)明內(nèi)容
一、機(jī)理馬齒莧是一年生肉質(zhì)草本植物，豐富的粘液是循環(huán)體液。粘液中富含半乳糖醛酸，多以鈣、鎂離子的形式存在。半乳糖醛酸是強(qiáng)極性結(jié)合物質(zhì)，分子內(nèi)含有一個(gè)羧酸根負(fù)離子基團(tuán)，能與含帶正電荷離子基團(tuán)的化合物形成離子鍵；分子內(nèi)含有一個(gè)半縮醛羥基很活潑，能與含有羥基、羧基、氨基、硫氫基、硫酚基、酚基的化合物結(jié)合生成易溶于水的、無毒的半乳糖醛酸苷分子。
流感病毒在活體外只具有一般大分子特性。流感病毒結(jié)構(gòu)是最外層囊膜，次外層蛋白質(zhì)，核心是核酸。流感病毒囊膜由內(nèi)向外可分為內(nèi)膜蛋白、類脂和糖蛋白三層。糖蛋白層由兩種糖蛋白刺突組成，一種是血凝素，一種是神經(jīng)氨酸酶。糖蛋白的糖基部分是由半乳糖、甘露糖、巖藻糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖、葡萄糖、唾液酸等結(jié)合的多糖。該糖基側(cè)鏈與肽鏈N末端片段上的蘇氨酸、絲氨酸、天門冬酰氨以糖苷鍵相互結(jié)合成為糖蛋白大分子。
血凝素N末端有一個(gè)疏水區(qū)，是流感病毒侵入宿主細(xì)胞的必須結(jié)合部位。血凝素是由3條糖基多肽鏈以非共價(jià)形式聚合成的三聚體。也就是說三聚體的3條糖基多肽鏈之間是以弱的次級鍵相互吸引的。用強(qiáng)極性半乳糖醛酸分子接觸三聚體時(shí)，3條糖基多肽鏈之間的次級鍵發(fā)生斷裂，糖基多肽鏈上自由的羥基，氨基極性基團(tuán)與半乳糖醛酸分子的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷糖基多肽鏈。三聚體發(fā)生變構(gòu)、質(zhì)變。沒有了N末端的疏水區(qū)，失去與宿主細(xì)胞受體糖蛋白結(jié)合的部位，不能進(jìn)行吸附。
神經(jīng)氨酸酶是由4條相同的糖基多肽鏈組成的蘑菇狀四聚體，具有酶活性。同樣神經(jīng)氨酸酶4條糖基多肽鏈之間也是以弱的次級鍵相互吸引的。用強(qiáng)極性的半乳糖醛酸接觸四聚體時(shí)，4條糖基多肽鏈之間的次級鍵發(fā)生斷裂，糖基多肽鏈上的自由羥基、氨基極性基團(tuán)與半乳糖醛酸分子的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷糖基多肽鏈。四聚體發(fā)生變構(gòu)、質(zhì)變，導(dǎo)致神經(jīng)氨酸酶失活。
(反應(yīng)式見說明書第6頁(1))類脂層是雙分子層結(jié)構(gòu)，它來自宿主細(xì)胞膜或核膜。在雙層膜結(jié)構(gòu)中，蛋白質(zhì)約占52％。在雙分子層中的蛋白質(zhì)有兩種，一種是外周蛋白，一種是結(jié)構(gòu)蛋白。兩種蛋白質(zhì)的親水基團(tuán)都浮露在雙分子層外部，N末端露在雙分子外側(cè)層，C末端露在雙分子內(nèi)側(cè)層。用強(qiáng)極性半乳糖醛酸接觸蛋白質(zhì)分子時(shí)，親水的氨基、羧基、羥基與半乳糖醛酸分子的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子多肽鏈。
(反應(yīng)式見說明書第7頁(2))在雙分子層膜結(jié)構(gòu)中，脂質(zhì)約占40％，其中磷脂約占脂質(zhì)的60％，還有少量膽固醇。在雙分子層中的磷脂有兩種，一種是磷脂酰膽堿，一種是絲氨酸磷脂。兩種磷脂在內(nèi)外側(cè)層均有分布。外側(cè)層磷脂酰膽堿數(shù)量多；內(nèi)側(cè)層絲氨酸磷脂數(shù)量多。用強(qiáng)極性半乳糖醛酸接觸雙層磷脂分子，磷脂分子極性頭部帶正電荷的氨基與半乳糖醛酸分子上的帶負(fù)電荷的羧酸根相互吸引形成離子鍵，生成易溶于水的磷脂半乳糖醛酸鹽。膽固醇第3號位上有一個(gè)自由羥基，與半乳糖醛酸分子中的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子膽固醇。
(反應(yīng)式見說明書8頁(3)、(4))內(nèi)膜蛋白是包圍在病毒核蛋白外的一層膜六結(jié)構(gòu)，介于核蛋白與類脂雙層膜之間，與脂質(zhì)雙分子層的外周蛋白以弱的次級鍵相互吸引，用強(qiáng)極性的半乳糖醛酸接觸內(nèi)膜蛋白結(jié)構(gòu)時(shí)，內(nèi)膜蛋白與外周蛋白之間的次級鍵發(fā)生斷裂，自由的羥基、氨基極性基團(tuán)與半乳糖醛酸分子上的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子多肽鏈。
(反應(yīng)式見說明書第7頁(2))流感病毒的蛋白質(zhì)卷曲螺旋包繞著螺旋形RNA，該蛋白質(zhì)中有三種分子量較大的蛋白質(zhì)P1、P2、P3蛋白，均為RNA多聚酶，此酶與RNA轉(zhuǎn)錄有關(guān)，其它均為核蛋白。核蛋白是核酸和組蛋白結(jié)合的復(fù)合體。組蛋白是堿性蛋白質(zhì)，富含絲氨酸、精氨酸兩種堿性氨基酸，帶有自由氨基。在核酸外的蛋白質(zhì)呈螺旋狀有規(guī)律地排列，各亞基之間靠二硫鍵、疏水鍵等次級鍵相互吸引形成穩(wěn)定的空間結(jié)構(gòu)。用強(qiáng)極性的半乳糖醛酸分子接觸核蛋白時(shí)，各亞基間的二硫鍵、次級鍵發(fā)生斷裂，同時(shí)，維系亞基分子內(nèi)三級結(jié)構(gòu)的各次級鍵也發(fā)生斷裂，自由的氨基、羥基、羧基極性基團(tuán)與半乳糖醛酸分子的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子多肽鏈，從螺旋狀的核酸分子表面一條條地脫落下來，RNA多聚酶也變構(gòu)失活。
(反應(yīng)式見說明書第7頁(2))流感病毒核酸為單股負(fù)鏈RNA。在流感病毒RNA中含腺苷酸23％、鳥苷酸20％、胞苷酸24％、尿苷酸23％。用強(qiáng)極性的半乳糖醛酸接觸裸露的RNA鏈時(shí)，RNA的二級結(jié)構(gòu)之間的氫鍵發(fā)生斷裂，各堿基分子的自由氨基與半乳糖醛酸分子上的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子RNA鏈。流感病毒RNA發(fā)生質(zhì)變，喪失遺傳功能。
(反應(yīng)式見說明書第9頁(5))流感病毒血凝素N末端有一個(gè)疏水區(qū)是病毒侵入宿主細(xì)胞的結(jié)合部位。流感病毒的受體是糖蛋白，存在于敏感動物紅血細(xì)胞及粘膜細(xì)胞表面。既然血凝素N末端有一個(gè)疏水區(qū)是結(jié)合部位，那么在粘膜細(xì)胞表面也一定有一個(gè)疏水區(qū)的空間結(jié)構(gòu)，而且兩個(gè)疏水區(qū)具有相同的烴基組成，烴基分子間又必須在分子結(jié)構(gòu)上構(gòu)成互補(bǔ)，才能形成疏水鍵，達(dá)到病毒與宿主細(xì)胞結(jié)合的目的。用強(qiáng)極性半乳糖醛酸接觸粘膜細(xì)胞表面，受體糖蛋白分子上的自由氨基、羥基極性基團(tuán)與半乳糖醛酸分子上的半縮醛羥基脫水縮合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷糖基多肽鏈。受體糖蛋白的空間構(gòu)象發(fā)生嚴(yán)重的改變，血凝素與宿主細(xì)胞失去結(jié)合位點(diǎn)，無法進(jìn)行吸附，阻斷和關(guān)閉病毒進(jìn)入細(xì)胞的途徑。
已經(jīng)侵入宿主細(xì)胞的流感病毒，其子代會以芽生的形式從鼻腔、口腔粘膜表面釋放出來，此時(shí)鼻腔、口腔粘膜表面的受體糖蛋白已經(jīng)被結(jié)合成為半乳糖醛酸苷糖基多肽鏈，病毒喪失結(jié)合部位，另外，在鼻腔、口腔中過剩的半乳糖醛酸分子會在粘膜表面將釋放出的病毒子代逐一結(jié)合轉(zhuǎn)化成半乳糖醛酸苷分子，溶于水，使其無法進(jìn)行再侵染和傳播。
RNA基因片段不同的序列組合，導(dǎo)致流感病毒血凝素和神經(jīng)氨酸酶活性部位的頻繁改變，進(jìn)而產(chǎn)生不同抗原類型的流感病毒，甚至有些病毒使人群在長期生命過程中積累的特異性免疫功能失去效力，嚴(yán)重危害生命。
從理論上講，RNA基因片段無論是怎樣的組合方式，也無論怎樣與外來基因片段發(fā)生重組，RNA只有A、U、G、C四種堿基是固定不變的，它也只能轉(zhuǎn)錄、合成出二十幾種氨基酸。因此，各種流感病毒糖蛋白上的自由羥基、氨基、羧基都會與強(qiáng)極性的半乳糖醛酸分子結(jié)合，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子糖基多肽鏈，喪失與宿主細(xì)胞結(jié)合的部位。
綜合分析和理論推斷；SARS病毒和禽流感病毒也是囊膜和核蛋白結(jié)構(gòu)，也是與粘膜受體糖蛋白結(jié)合，侵入宿主細(xì)胞。然而，粘膜細(xì)胞受體糖蛋白的糖基序列和氨基酸序列是固定不變的；不斷變化的只是病毒糖蛋白的氨基酸序列。用強(qiáng)極性半乳糖醛酸覆蓋結(jié)合轉(zhuǎn)化口腔、鼻腔粘膜受體糖蛋白，使之生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子糖基多肽鏈結(jié)構(gòu)。當(dāng)SARS病毒或禽流感病毒進(jìn)入口腔、鼻腔時(shí)，第一沒有結(jié)合位點(diǎn)；第二會被鼻腔、口腔中過剩的半乳糖醛酸分子迅速結(jié)合轉(zhuǎn)化，生成易溶于水的半乳糖醛酸苷分子，如此，病毒與宿主細(xì)胞雙雙喪失結(jié)合能力，無法侵染與傳播，達(dá)到在活體外摧毀SARS病毒和禽流感病毒的理想目的。
二、滴鼻液制取方法6-10月間采收野生馬齒莧，用剪刀剪下馬齒莧地上部分，摘去有潰爛和創(chuàng)傷的枝葉，在實(shí)驗(yàn)臺上輕輕磕下馬齒莧種子，收集起來，隨時(shí)可以在溫室里播種。將馬齒莧植株用剪刀剪成約5厘米的小段，用清水沖凈馬齒莧表面的塵土，將洗凈的馬齒莧裝入一個(gè)40目的尼龍紗網(wǎng)袋中，扎口，放入甩干桶中，甩去植株表面清水。將實(shí)驗(yàn)用具全部用75％酒精殺菌處理，取一個(gè)不銹鋼盆倒入75％酒精約1000毫升，將洗凈的馬齒莧植株放入酒精盆中，殺菌10秒鐘，取出裝入40目尼龍紗網(wǎng)袋中，扎口，放入甩干桶中，甩去植株表面的酒精，放入一個(gè)瓷盤中，稱取馬齒莧2000克，用榨汁機(jī)(九陽牌)榨取馬齒莧汁液，將榨出的汁液倒入雙層尼龍綢布袋中，放入不銹鋼盆中，用左手抓緊布袋口，右手用不銹鋼飯勺在布袋上來回推擠，隨時(shí)將擠壓出的汁液倒入另一個(gè)不銹鋼盆中，將汁液倒入離心管中4000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，取上清液倒入磨口瓶中，蓋緊蓋子，瓶口再用塑料膜覆蓋，用皮筋扎緊，勿使染菌，1℃冰箱存放，2000克馬齒莧植株可制取200毫升馬齒莧滴鼻液。
采收的鮮馬齒莧植株用清水和酒精處理后，可以放入-10℃以下冰箱存放備用。該技術(shù)、原料豐富、無毒可食、成本低、工藝簡單、無污染產(chǎn)生、符合環(huán)保和綠色醫(yī)藥要求。
具體實(shí)施例方式
馬齒莧滴鼻液適用于健康人和流感患者，無毒、無副作用。
1、健康人使用方法從冰箱取出馬齒莧滴鼻液，倒入表面皿8毫升，立即用75％酒精棉簽擦干凈磨口瓶內(nèi)外瓶口，蓋緊蓋子，用塑料膜和皮筋扎緊，放入冰箱，用注射器(不加針頭)抽取表面皿中的滴鼻液，仰頭慢慢滴入雙鼻孔中2毫升，仰頭1分鐘，讓滴鼻液順鼻腔流到咽部，咽下，取2毫升涂抹在臉上，殺菌、護(hù)膚，將注射器中剩余的部分滴入口中，用此液刷牙處理1分鐘(馬齒莧無毒，有殺菌、抑菌功能，半乳糖醛酸是羧酸鹽，有乳化、凈化作用，強(qiáng)似牙膏。)，每4天處理一次，可以有效地預(yù)防流感病毒。
2、流感患者使用方法與上述處理方法相同，取10毫升滴鼻液，滴入雙鼻孔2毫升，鼻腔內(nèi)的清鼻涕在10秒鐘內(nèi)可吸收干凈并立即恢復(fù)通氣，且再無清鼻涕產(chǎn)生，連續(xù)處理兩次，取2毫升涂抹在臉上，特別是鼻孔周圍，剩余的滴鼻液滴入口中，刷牙、漱口，每天處理3次，3日內(nèi)恢復(fù)健康。
(1)糖蛋白分子與半乳糖醛酸分子結(jié)合反應(yīng)如下
(2)蛋白質(zhì)分子與半乳糖醛酸分子反應(yīng)如下
(3)磷脂與半乳糖醛酸反應(yīng)如下 (4)膽固醇與半乳糖醛酸分子的半縮醛羥基脫水縮合，生成半乳糖醛酸苷分子膽固醇如下 半乳糖醛酸苷分子膽固醇
(5)半乳糖醛酸分子上的半縮醛羥基與RNA分子堿基上的自由氨基脫水縮合，生成半乳糖醛酸苷分子RNA
權(quán)利要求
1.滴鼻液制取方法6-10月間采收野生馬齒莧，用剪刀剪下馬齒莧地上部分，摘去有潰爛和創(chuàng)傷的枝葉，在實(shí)驗(yàn)臺上輕輕磕下馬齒莧種子，收集起來，隨時(shí)可以在溫室里播種。將馬齒莧植株用剪刀剪成約5厘米的小段，用清水沖凈馬齒莧表面的塵土，將洗凈的馬齒莧裝入一個(gè)40目的尼龍紗網(wǎng)袋中，扎口，放入甩干桶中，甩去植株表面清水。將實(shí)驗(yàn)用具全部用75％酒精殺菌處理，取一個(gè)不銹鋼盆倒入75％酒精約1000毫升，將洗凈的馬齒莧植株放入酒精盆中，殺菌10秒鐘，取出裝入40目尼龍紗網(wǎng)袋中，扎口，放入甩干桶中，甩去植株表面的酒精，放入一個(gè)瓷盤中，稱取馬齒莧2000克，用榨汁機(jī)(九陽牌)榨取馬齒莧汁液，將榨出的汁液倒入雙層尼龍綢布袋中，放入不銹鋼盆中，用左手抓緊布袋口，右手用不銹鋼飯勺在布袋上來回推擠，隨時(shí)將擠壓出的汁液倒入另一個(gè)不銹鋼盆中，將汁液倒入離心管中4000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，取上清液倒入磨口瓶中，蓋緊蓋子，瓶口再用塑料膜覆蓋，用皮筋扎緊，勿使染菌，1℃冰箱存放，2000克馬齒莧植株可制取200毫升馬齒莧滴鼻液。采收的鮮馬齒莧植株用清水和酒精處理后，可以放入-10℃以下冰箱存放備用。該技術(shù)、原料豐富、無毒可食、成本低、工藝簡單、無污染產(chǎn)生、符合環(huán)保和綠色醫(yī)藥要求。
全文摘要
流感病毒活體外快速結(jié)合轉(zhuǎn)化滴鼻液制取方法是根據(jù)存在于植物體內(nèi)的半乳糖醛酸具有結(jié)合磷脂、膽固醇、蛋白質(zhì)、糖蛋白、核酸生成易溶于水的半乳糖醛酸苷的生物學(xué)功能與病毒特性、流感病毒結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成綜合研制的生化技術(shù)。實(shí)驗(yàn)證明該技術(shù)在流感高發(fā)生期間和區(qū)域內(nèi)能有效地防止流感病毒的侵染；已經(jīng)被感染的患者10秒鐘內(nèi)可將鼻腔內(nèi)的清鼻涕吸收干凈，且12小時(shí)內(nèi)干燥成痂，3日內(nèi)恢復(fù)健康。該發(fā)明解決了在鼻腔內(nèi)快速結(jié)合轉(zhuǎn)化摧毀流感病毒和阻斷、關(guān)閉流感病毒侵染途徑的問題。該技術(shù)原料豐富、無毒可食、成本低、工藝簡單、無污染、符合環(huán)保和綠色醫(yī)藥要求。
文檔編號A61P31/16GK1843391SQ200510065460
公開日2006年10月11日 申請日期2005年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月8日
發(fā)明者王麗華, 何金榮, 韓文樵, 于合月, 于一鳴, 于敏 申請人:王麗華, 何金榮, 韓文樵