專利名稱：一種廣棗葉總黃酮及其提取方法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種廣棗葉總黃酮及其提取方法和用途，屬于天然藥物及其化學制備領域。
背景技術：
藏蒙醫(yī)藥作為民族用藥的一個組成，一直以來是我國醫(yī)學寶庫重要組成部分。蒙醫(yī)藥的發(fā)展吸收了藏、漢民族醫(yī)藥學之精華，在長期實踐中有機地結合為一體，不斷整理提高、日臻完善，形成了既有鮮明民族特色的完整理論體系、又有豐富臨床經(jīng)驗的近代蒙醫(yī)學門類，可謂歷經(jīng)滄桑，經(jīng)久未衰，顯示出強大生命力和潛在價值與作用。廣棗為蒙醫(yī)常用藥材之一，具有行氣活血、養(yǎng)心、安神之功效，主治氣滯血瘀、胸痹作痛、心悸氣短、心神不寧等。經(jīng)初步統(tǒng)計，在內蒙古成藥標準收載含有廣棗的內服藥101 種。廣棗作為古方用藥早有記載，1990年國家藥典對廣棗入藥開始有記載。廣率Choerospondias axillaris (Roxb. ) Burttet Hill.,又名南酸率，也叫山率子，五眼果，鼻涕果，屬漆科(Anacardiaceac),高大落葉喬木。目前,不論是國家藥典、還是內蒙古成藥標準收載的廣棗及廣棗制劑，都是指廣棗的干燥成熟果實，即廣棗藥材。廣棗和其他植物藥一樣，含有許多化學成分，包括黃酮、有機酸、留醇、揮發(fā)油、香豆素、糖及酸性成分及多種氨基酸，其主要活性成分為黃酮類，即廣棗總黃酮(Total Flavones of Choerospondias Axillaris Fructus)?，F(xiàn)代藥理實驗研究表明，廣率總黃酮具有明顯的抗心律失常作用、耐缺氧和保護心肌缺血作用、抑制血小板聚集和改善血液流變學、并且可以增強小鼠的免疫功能。廣棗總黃酮制劑在醫(yī)藥領域的應用甚廣，研制出來的方劑越來越多，應用廣泛。隨著該植物藥用價值進一步發(fā)掘，勢必對廣棗藥材原料需求產生新的挑戰(zhàn)，因此尋找該藥材的替代物和拓展該藥材植物新的藥用部位就非常重要和必要。早之前民間研制的有廣棗果茶及廣棗葉做成的綠茶(含茶色素)，常喝能起到減肥、降壓、抗氧化、抗心律失常、增強免疫作用。受其啟發(fā)，借鑒銀杏葉研究開發(fā)的成功經(jīng)驗，我們對廣棗藥材(果實)及其葉的有效化學成分廣棗總黃酮進行對比研究實驗，并觀察從廣棗葉中提取的總黃酮化合物的藥理作用。廣棗葉產量充足，不受季節(jié)及大小年的限制，如果廣棗葉也會像銀杏葉代替銀杏入藥那樣或做成各類的藥物制劑，那么廣棗藥用價值必然會更大程度地被推廣，對蒙醫(yī)藥的發(fā)展起到推動作用，為自治區(qū)的經(jīng)濟發(fā)展作出貢獻。目前，廣棗葉被當作廢物丟棄，迄今為止，未見有關廣棗葉的化學成分及其藥理作用的研究報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是要開發(fā)利用至今為止被當作廢物丟棄的廣棗葉資源，尤其是其中的黃酮類有效成分的開發(fā)利用提供一種廣棗葉總黃酮及其提取方法和用途。
本發(fā)明的目的是由以下方式實現(xiàn)的本發(fā)明的廣率葉總黃酮是指廣率[Choerospondiasaxillaris (Roxb. ) Burttet Hill]葉中提取分離的黃酮類化合物的混合物，其特征是所述廣棗葉總黃酮是以廣棗葉為原料提取的黃酮類化合物的混合物。在所述廣棗葉總黃酮中含有花色素、黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇、查耳酮、異黃酮、黃烷醇中的一種或多種物質。廣棗葉總黃酮，其特征在于提取物中總黃酮類化合物的含量> 5. 00% (g/g)。所述廣棗葉總黃酮的提取方法是將廣棗葉用濃度為70% (V/V)乙醇提取，乙醇用量為擬提取物的8倍體積比，提取過程中，用水浴加熱85°C回流提取I. 5h，平行提取3 次，將提取液經(jīng)真空旋轉蒸發(fā)儀濃縮成膏狀；膏狀提取物用50% (v/v)乙醇溶解后，加入石油醚進行攪拌萃取，萃取過程重復進行，直至各次提取物醚層無顏色，收集石油醚下層溶液，濃縮干燥后，再通過乙酸乙酯萃取純化，然后利用聚酰胺柱分離以進一步進行純化。本發(fā)明的廣棗葉總黃酮的用途是作為制備預防和治療心腦血管疾病、免疫功能降低的疾病、與自由基損傷有關的疾病的藥物產品的原料使用。所述預防和治療心腦血管疾病、免疫功能降低的疾病、與自由基損傷有關的疾病的藥物產品包括治療心律失常、動脈硬化、冠心病、腦供血不足、免疫功能低下、癡呆、失眠健忘、腫瘤的藥物產品。所述藥物產品包括保健食品及藥物組合物。所述藥物組合物是本發(fā)明的廣棗葉總黃酮與其他藥物及醫(yī)學上可接受的藥用輔料組成的藥物組合物及制劑。所述制劑包括注射劑、片劑、膠囊劑、膜劑、丸劑、顆粒劑、口服液、滴丸。本發(fā)明的優(yōu)點是原料廣泛，提取成本低，廣棗葉總黃酮的化學成分及其藥理作用與廣棗總黃酮相當，大大提升了廣棗植物的藥用價值。


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圖5、圖6中a_廣棗醇提物乙酸乙酯萃取層，A-廣棗醇提物乙酸乙酯萃取水層，b-廣棗葉醇提物乙酸乙酯萃取層，B-廣棗葉醇提物乙酸乙酯萃取水層；a'_廣棗醇提物乙酸乙酯萃取物過聚酰胺柱，b'_廣棗葉醇提物乙酸乙酯萃取物過聚酰胺柱，S-槲皮素。
具體實施例方式本發(fā)明的實施例是通過對廣棗葉和廣棗中黃酮類成份的提取、含量測定、提取物的檢識、黃酮類化合物的分離鑒別的對比；以及對廣棗葉總黃酮抗心律失常、對免疫功能的影響、保護心肌缺血及抗氧化作用的研究給出的。I.廣棗葉和廣棗中黃酮類成份的提取、含量測定、提取物的檢識、黃酮類化合物的分離鑒別的對比實驗實驗將廣棗和廣棗葉的乙醇提取物用石油醚萃取，經(jīng)乙酸乙酯萃取及聚酰胺柱分離純化后，點樣在硅膠薄層板上進行薄層展開。在紫外燈下觀察到兩者的斑點均在10 15 個以上。在TLC展開板進行顯色反應，板上顯現(xiàn)不同顏色斑點，可知廣棗和廣棗葉所含生物總黃酮的種類多而復雜。本實驗結合上述硅膠薄層展開，TLC板上顯色反應，及紫外-可見分光光度下各斑點組分物質刮板吸收圖譜，最終鑒定出廣棗總黃酮組分有13個，從前沿往下分別為花色素、黃酮醇、黃酮、花色素、查耳酮、二氫黃酮、黃酮醇、兒茶素、黃酮醇、查耳酮、二氫黃酮、橙酮、兒茶素；廣棗葉總黃酮組分有15個，從前沿往下分別為花色素、花色素、花色素、異黃酮、查耳酮、花色素、黃酮醇、二氫黃酮、黃酮醇、黃酮醇、查耳酮、查耳酮、查耳酮、橙酮、橙酮。實驗經(jīng)多次反復對比求證，發(fā)現(xiàn)兩者均含有花色素、黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、查耳酮、橙酮等黃酮類化合物；通過硅膠TLC展開法，TLC顯色法，以及紫外-可見分光光度法等測定，鑒定出廣棗和廣棗葉在薄層板上相對應的黃酮組分斑點主要有6個，從前沿到基線依次為花色素、二氫黃酮、黃酮醇、黃酮醇、查耳酮、橙酮。圖中斑點13'與15兩者Rf值相同，但顯色反應鑒定出來兩者是完全不同的化合組分類型；本實驗對廣棗與廣棗葉總黃酮組分提取分離條件的探討，摸索出一套理想的硅膠薄層層析分離體系，這為今后廣棗和廣棗葉總黃酮提取分離及鑒定提供了可靠的信息，同時為在葉中尋找果對應組分或替代品提供條件。具體過程如下。I. I實驗材料的前處理將購來的或采集來的廣棗及廣棗葉，可見光下檢查是否霉壞、腐爛或者蟲蛀，剔除殘品后分別搗碎，保存好，備用。I. 2總黃酮的提取上述處理過的廣棗和廣棗葉各稱取140g，分別裝在2000mL的三腳圓底燒瓶，用8 倍量的70% (v/v)的乙醇進行水浴加熱回流提取I. 5h，各平行提取3次，收集各次提取的溶液，過濾除掉藥渣，然后在真空旋轉蒸發(fā)儀濃縮成膏。烘箱適溫干燥成固體膏狀物稱量得到粗出膏分別為14. 20g，40. 40g，粗出膏率分別為10. 14%,28. 86%。I. 3石油醚萃取脫脂將上述干燥得到的廣棗和廣棗葉提取物用50% (v/v)乙醇溶解，然后加入石油醚進行攪拌萃取，萃取多次直至各次提取物醚層無顏色。收集石油醚下層溶液，濃縮干燥，稱量，得到廣棗和廣棗葉萃取脂性成分后干膏各為12. 70g，33. 39g，計算得到兩者出膏率各為 9. 07%,23. 85%。I. 4定量測試-標準曲線法定量測定總黃酮含量
I. 4. I黃酮最佳吸收波長的選擇在標準曲線法定量測定總黃酮含量前，須要確定黃酮定量測定最佳波長。其方法 取上述萃取后的廣棗溶液(0. 10mg/mL)按制備標準曲線的操作，實驗測得樣品在506nm處有最大吸收值，與文獻所述蘆丁對照品的最佳測定波長510nm相近，如圖I。本實驗對廣棗和廣棗葉提取總黃酮的測定參考一般黃酮量化分析方法以蘆丁為對照品，測定總黃酮含量。1.4. 2標準曲線的制備精密稱取干燥恒重蘆丁對照品10. Omg，用70% (v/v)乙醇稀釋充分溶解后定容至 IOOmL容量瓶里。分別量取上述配好的溶液0. OmL, 2. 5mL, 5. OmL, 7. 5mL, 10. OmL, 12. 5mL于 25mL容量瓶，用移液管吸取70% (V/V)的乙醇溶液使體積至12. 5mL。然后向各容量瓶分別依次加入新鮮配好的I. 0mL5% (g/mL)NaN02溶液，搖勻，靜置6min ;然后加入I. OmL 10% (g/mL)Al(N03)3 溶液，搖勻，靜置 6min 后；加入 10. 0mL4% (g/mL) NaOH 溶液，用 70% (v/v) 的乙醇溶液定容至25mL后搖勻,靜置12min。以試劑作空白，于510nm處進行定量測定。獲得回歸方程A= 12. 125714XC+0. 006524 r = 0. 999795 (見表1-1)。得到的標準曲線(見圖2)。表1-1蘆丁對照品濃度與吸光度
權利要求
1.一種廣棗葉總黃酮，其特征是所述廣棗葉總黃酮是以廣棗葉為原料提取的黃酮類化合物的混合物。
2.根據(jù)權利要求I所述的廣棗葉總黃酮，其特征是在所述廣棗葉總黃酮中含有花色素、黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇、查耳酮、異黃酮、黃烷醇中的一種或多種物質。
3.根據(jù)權利要求I所述的廣棗葉總黃酮，其特征是提取物中總黃酮類化合物的含量 ^ 5. 00% (g/g)。
4.一種根據(jù)權利要求I所述的廣棗葉總黃酮的提取方法，其特征是將廣棗葉用濃度為70% (V/V)乙醇提取，乙醇用量為擬提取物的8倍體積比，提取過程中，用水浴加熱85°C 回流提取I. 5h，平行提取3次，將提取液經(jīng)真空旋轉蒸發(fā)儀濃縮成膏狀；膏狀提取物用50% (v/v)乙醇溶解后，加入石油醚進行攪拌萃取，萃取過程重復進行，直至各次提取物醚層無顏色，收集石油醚下層溶液，濃縮干燥后，再通過乙酸乙酯萃取純化，然后利用聚酰胺柱分離。
5.一種根據(jù)權利要求I所述的廣棗葉總黃酮的用途，其特征是作為制備預防和治療心腦血管疾病、免疫功能降低的疾病、與自由基損傷有關的疾病的藥物產品的原料使用。
6.根據(jù)權利要求5所述的廣棗葉總黃酮的用途，其特征是所述預防和治療心腦血管疾病、免疫功能降低的疾病、與自由基損傷有關的疾病的藥物產品包括治療心律失常、動脈硬化、冠心病、腦供血不足、免疫功能低下、癡呆、失眠健忘、腫瘤的藥物產品。
7.根據(jù)權利要求6所述的廣棗葉總黃酮的用途，其特征是所述藥物產品包括保健食品及藥物組合物。
8.根據(jù)權利要求7所述的廣棗葉總黃酮的用途，其特征是所述藥物組合物是本發(fā)明的廣棗葉總黃酮與其他藥物及醫(yī)學上可接受的藥用輔料組成的藥物組合物及制劑。
9.根據(jù)權利要求8所述的廣棗葉總黃酮的用途，其特征是所述制劑包括注射劑、片劑、膠囊劑、膜劑、丸劑、顆粒劑、口服液、滴丸。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種廣棗葉總黃酮及其提取方法和用途，所述廣棗葉總黃酮是以廣棗葉為原料提取的黃酮類化合物的混合物；其提取方法是采用乙醇提取、石油醚萃取、乙酸乙酯萃取純化、聚酰胺柱分離完成的；其用途是作為制備預防和治療心腦血管疾病、免疫功能降低的疾病、與自由基損傷有關的疾病的藥物產品的原料使用。其優(yōu)點是原料廣泛，提取成本低，廣棗葉總黃酮的化學成分及其藥理作用與廣棗總黃酮相當，大大提升了廣棗植物的藥用價值。
文檔編號A61P25/20GK102579527SQ20121004983
公開日2012年7月18日 申請日期2012年2月24日 優(yōu)先權日2012年2月24日
發(fā)明者劉欣媛, 張東, 李煥婷, 杜建喜, 楊玉梅, 鄔國棟, 邱敏, 郝心敏 申請人:杜建喜, 楊玉梅