專利名稱：抑制流行性感冒病毒感染及復(fù)制的醫(yī)藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抑制流行性感冒病毒感染及復(fù)制的醫(yī)藥組合物，其可應(yīng)用于流行性感冒的預(yù)防及治療。
背景技術(shù)：
流行性感冒是一種由濾過性病毒所引起的傳染病，該濾過性病毒為一種以核糖核酸為遺傳物質(zhì)的病毒，在病毒分類上屬于正黏液病毒科(Orthomyxoviridae)，依其引起的血清免疫反應(yīng)的不同，可分為流行性感冒病毒A、B或C型(Influenza virusA，B or C)。流行性感冒最常在冬天或早春發(fā)生，病毒通常經(jīng)由口、鼻入侵肺部，病毒種類每年不同，在人口擁擠的地區(qū)或公共場所最易受到感染。追溯歷史上的記載，可以知道此病毒每隔3-4年就引起一次發(fā)燒性呼吸道疾病的流行，至于世界性的大流行，大約每隔10年左右發(fā)生一次，1918年流行性感冒病毒的大流行至少造成二千二百萬人死亡，目前估計(jì)此病毒已造成全世界約六千萬人死亡。除了死亡以外，流行性感冒病毒也使兒童或老年人因而容易感染嚴(yán)重的并發(fā)癥，經(jīng)濟(jì)損失也大，因此，流行性感冒病毒是全世界研究的重點(diǎn)之一。
藍(lán)藻早在幾十億年前就存在于地球，經(jīng)過如此久的生存競爭粹煉，其中所含的精華，諸如藻藍(lán)蛋白、藍(lán)藻精、含硫多糖體，都能有效對抗微生物。美國哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院、伊利諾大學(xué)、日本富山醫(yī)科藥科大學(xué)、以及德國、俄羅斯、墨西哥等國分別研究證實(shí)，藍(lán)藻萃取液，除了對微小病毒科(Picornaviridae)有明顯抑制效果外，對副黏液病毒科(Paramyxoviridae)的麻疹病毒及腮腺炎病毒、人類皰疹病毒、以及HIV均有極佳的抑制效果。
美國專利第6,346,408號公開，及其他相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)(長庚大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所蔡昆男碩士論文)藻類中特有的一群水溶性蛋白-藻藍(lán)蛋白，具有抑制腸病毒及流行性感冒病毒復(fù)制造成細(xì)胞病變的能力，其機(jī)轉(zhuǎn)主要有二1.預(yù)防感染；2.使受感染細(xì)胞中的病毒復(fù)制延后。藻藍(lán)蛋白濃度在0.3uM以上即可全面防止病毒的感染。由細(xì)胞實(shí)驗(yàn)可清楚觀察到，此一濃度對細(xì)胞沒有任何毒性，但能有效保護(hù)細(xì)胞不受病毒侵犯及病變。藻藍(lán)蛋白也可防止流行性感冒病毒感染，有效濃度為0.04uM以上。在病毒與細(xì)胞作用前先加入藻藍(lán)蛋白，其保護(hù)細(xì)胞的效果更佳。
病毒感染會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞病變，目前采用的預(yù)防及治療方法為疫苗及抗病毒劑。其中疫苗預(yù)防雖有成效，但并非全面適用；而在抗病毒劑方面，至今仍未見任何顯著突破。因此如何發(fā)展一種可有效抑制流行性感冒病毒復(fù)制的醫(yī)藥組合物是刻不容緩的工作。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種抑制流行性感冒病毒感染及復(fù)制的醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明的另一目的在于提供萃取前述醫(yī)藥組合物的方法。本發(fā)明的萃取方法可以維持前述醫(yī)藥組合物的生物活性及營養(yǎng)成分。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的抑制流行性感冒病毒感染及復(fù)制的醫(yī)藥組合物，其組成包含有效量的C-藻藍(lán)蛋白、異藻藍(lán)蛋白、藍(lán)藻精或其混合物。
所述的醫(yī)藥組合物，其中前述的混合物包括C-藻藍(lán)蛋白、異藻藍(lán)蛋白或藍(lán)藻精的任二組成混合。
所述的醫(yī)藥組合物，其中前述的混合物包括C-藻藍(lán)蛋白、異藻藍(lán)蛋白及藍(lán)藻精三種組成混合而成。
所述的醫(yī)藥組合物，可進(jìn)一步包含醫(yī)藥可接受的載體、佐藥、賦形劑或添加物。
所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物以包括粉末狀、顆粒狀、液狀、膠狀或膏狀存在。
所述的組合物，其中前述醫(yī)藥組合物以包括食品、飲品、藥品、試劑或營養(yǎng)補(bǔ)充品的形式提供。
所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物以包括經(jīng)由口服，洼射、吸入、皮下埋植或皮膚貼片方式施用于對象物。
所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于抑制各類流行性感冒病毒的感染與復(fù)制。
所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于抑制A型流行性感冒病毒的感染與復(fù)制。
所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防及/或治療各類流行性感冒。
所述的組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防各類流行性感冒。
所述的組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防及/或治療A型流行性感冒。
本發(fā)明提供的萃取上述醫(yī)藥組合物的方法，包括下列步驟(a)有機(jī)藍(lán)藻粉加入低張緩沖液，充分?jǐn)嚢杈鶆颍?b)室溫以下溫度靜置過夜；(c)分離機(jī)分離純化；(d)收集上層液測光譜，確定成分含量；以及(e)噴霧干燥；利用0-18℃的低溫萃取以維持前述醫(yī)藥組合物的生物活性及營養(yǎng)成分。
所述的方法，其中前述低溫萃取的步驟是于4℃下進(jìn)行。
具體實(shí)施例方式
具體而言，本發(fā)明的抑制流行性感冒病毒感染及復(fù)制的醫(yī)藥組合物，其成分除了包含有效量的C-藻藍(lán)蛋白、異藻藍(lán)蛋白、藍(lán)藻精或其混合物的外，可進(jìn)一步選擇性地包含醫(yī)藥可接受的載體、佐藥、賦型劑或添加物。
前述混合物可由C-藻藍(lán)蛋白、異藻藍(lán)蛋白或藍(lán)藻精的任二組成混合，也可由C-藻藍(lán)蛋白、異藻藍(lán)蛋白及藍(lán)藻精三種組成混合而成。
前述載體可能包含惰性成分，該惰性成分不會(huì)與本發(fā)明的醫(yī)藥組合物內(nèi)的其他成分發(fā)生實(shí)質(zhì)反應(yīng)?？衫脴?biāo)準(zhǔn)藥物劑型技術(shù)，如描述于Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，PA.中的方法。合適的藥物載體包含，例如，但不限于無菌水、生理食鹽水、抑菌食鹽水(包含約0.9％mg/ml苯基醇的食鹽水)、磷酸緩沖液食鹽水，漢克溶液、林格式乳糖液或其他制藥技術(shù)常用的載體。
前述賦型劑可以有多種功能及目的，例如在口服劑型的錠劑制造時(shí)，加入崩散劑以使錠劑能在胃腸道中崩散成小顆粒，以利吸收；又如加入著色劑以增加美觀等；至于其他非口服制劑，例如針劑、懸浮劑、軟膏、栓劑、噴霧等，各有其合適的賦型劑和作用目的。合適的賦型劑應(yīng)可包括，例如，但不限于乳糖、甘露醇、卜聚糖、葡萄糖、麩胺酸、明膠、山梨糖醇、海澡糖、蔗糖、木蜜醇、淀粉、微晶纖維素、甲基纖維素、阿拉伯膠或其各種不同組合等。賦型劑的使用已是本技術(shù)領(lǐng)域的通常知識(shí)。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物并不限于單獨(dú)使用C-藻藍(lán)蛋白、異藻藍(lán)蛋白與藍(lán)藻精混合物，也可搭配其他公知預(yù)防感冒或舒緩感冒癥狀的補(bǔ)充劑或藥物作為佐藥合并使用，前述補(bǔ)充劑或藥物包括，例如，但不限于阿斯匹林、對乙酰氨基酚、雙氟芬酸鈉、鹽酸偽麻黃堿、鹽酸麻黃堿、撲爾敏、苯海拉明、氫溴酸右美沙芬、氯哌斯丁、金剛烷胺、人工牛黃、板藍(lán)根及維生素C等。
前述有效量是指該化合物劑量在提供給一對象后能獲得有益的結(jié)果，或者，該化合物的劑量能在體內(nèi)或體外獲得預(yù)期的活性。以流行性感冒為例，相對于未接受治療的對象而言，有益的臨床結(jié)果包含癥狀的減輕、不適感的舒緩、病程縮減以及加速痊愈等。提供給對象的精確劑量必須依疾病的種類、程度或癥狀及對象個(gè)體體質(zhì)來決定，例如對象的當(dāng)時(shí)健康狀況、年齡、性別、體重及對藥物的忍受度。劑量也與疾病的程度、嚴(yán)重性及種類有關(guān)。熟悉此領(lǐng)域的人士能依據(jù)前述或其他因素來決定適當(dāng)?shù)膭┝俊?br> 本發(fā)明的醫(yī)藥組合物依其使用需要，可依照公知工藝，將其制成粉末狀、噴霧狀、顆粒狀，液狀，膠狀或膏狀。提供的藥物劑型依所選擇的施藥路徑及不同的目標(biāo)病癥或癥狀而改變。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物能由適當(dāng)?shù)穆窂椒茫?，但不限于口服膠囊、懸浮液或藥片，或以非經(jīng)腸方式服用。非經(jīng)腸方式服用包含，例如，系統(tǒng)性服用如由肌肉，靜脈、皮下或腹腔注射。該化合物的服用方式也可以經(jīng)由口服(如飲食內(nèi)含物)，局部注射、吸入(例如支氣管內(nèi)、鼻內(nèi)、口部吸入或鼻內(nèi)滴入)或經(jīng)直腸提供，提供的方式依欲治療的疾病、病癥或癥狀的類型決定。
用于口服投藥的醫(yī)藥組合物可包括固體劑量的形式，例如，但不限于膠囊、錠劑、糖衣錠、藥丸、粉末以及顆粒。也可根據(jù)在此技術(shù)中所熟知的方法，而與膜衣(例如，腸衣)一起制備，或者可將其調(diào)配以提供活性成份的控制釋放，例如，持續(xù)或延長釋放。用于口服投藥的液體劑量形式包括溶液、乳液、懸浮液、糖漿以及酏劑(elixir)。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以食品、飲品、藥品、試劑或營養(yǎng)補(bǔ)充品的形式提供。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物適用于抑制各類流行性感冒病毒的感染與復(fù)制，尤其適用但不限于抑制流行性感冒病毒A的感染與復(fù)制。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防及/或治療各類流行性感冒，尤其適用預(yù)防各類流行性感冒。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防及/或治療各類流行性成冒，尤其適用但不限于預(yù)防及/或治療A型流行性感冒。
公知的有機(jī)藍(lán)藻萃取方式是利用熱水抽出，然而有機(jī)藍(lán)藻所含的蛋白質(zhì)類營養(yǎng)成分容易因?yàn)闇囟冗^高而降解或變質(zhì)導(dǎo)致活性喪失，為克服比一問題，本發(fā)明的另一目的在于提供一萃取前述前述醫(yī)藥組合物的方法，包括下列步驟a.有機(jī)藍(lán)藻粉加入低張緩沖液，充分?jǐn)嚢杈鶆?；b.室溫以下溫度靜置過夜；c.分離機(jī)分離純化；d.收集上層液測光譜，確定成分含量；以及e.噴霧干燥；其特征在于利用低溫萃取以維持前述醫(yī)藥組合物的生物活性及營養(yǎng)成分。前述低張緩沖液的體積較佳為有機(jī)藍(lán)藻粉的十倍，本發(fā)明方法全程較佳在0-18℃下，最佳在4℃下進(jìn)行，而且以低張溶液造成滲透壓差來使細(xì)胞壁和膜通透以幫助有效成分的釋出，相較于公知的萃取技術(shù)，其優(yōu)點(diǎn)在于1.可維持有效成分的生物活性；2.不需利用珠摩破藻可以避免玻璃碎屑污染及產(chǎn)熱造成的活性失效。
本發(fā)明的詳細(xì)實(shí)施態(tài)樣描述于實(shí)施例中。本發(fā)明的其他實(shí)施態(tài)樣，目的與優(yōu)點(diǎn)由下列描述與申請專利范圍可明確了解。
實(shí)施例以下提供一利用本發(fā)明的醫(yī)藥組合物于抑制流行性成冒病毒戒染及復(fù)制的實(shí)施例，然本實(shí)施例并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技術(shù)者，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，當(dāng)可作各種的更動(dòng)與潤飾，因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍，當(dāng)視申請的專利范圍所界定為準(zhǔn)。
實(shí)施例一實(shí)驗(yàn)材料藥品1.低溫萃取的C-藻藍(lán)蛋白、異藻藍(lán)蛋白與藍(lán)藻精混合物；2.麻醉藥物Ketamine；3.A型流行性感冒病毒(Influenza WSN virus，1500pfu、150pfu、15pfu三種濃度。
小鼠自國家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心引進(jìn)親代ICR小鼠，自行繁殖至四周齡大雌性小鼠，每籠飼養(yǎng)8只為1組，室溫控制于16-18℃，光循環(huán)時(shí)間為12小時(shí)。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可抑制小鼠體內(nèi)A型流行性感冒病毒的復(fù)制。
實(shí)驗(yàn)步驟小鼠(female ICR mice)養(yǎng)至五周大時(shí)，將其分為七組進(jìn)行之后的實(shí)驗(yàn)，分別為第I組灌食A型流行性感冒病毒1500pfu以及本發(fā)明的醫(yī)藥組合物。
第II組灌食A型流行性感冒病毒150pfu以及本發(fā)明的醫(yī)藥組合物。
第III組灌食A型流行性感冒病毒15pfu以及本發(fā)明的醫(yī)藥組合物。
對照組A無灌食病毒，灌食本發(fā)明的醫(yī)藥組合物。
對照組B灌食A型流行性感冒病毒1500pfu以及磷酸鹽緩沖溶液。
對照組C灌食A型流行性感冒病毒150pfu以及磷酸鹽緩沖溶液。
對照組D灌食A型流行性感冒病毒15pfu以及磷酸鹽緩沖溶液。
將小鼠施以Ketamine(1mg per mouse)麻醉，立即灌食A型流行性感冒病毒(Influenza WSN virus.1500pfu、150pfu、15pfu三種濃度)。對照組同樣操作，但不灌食病毒，僅施予PBS。
為了解本發(fā)明的醫(yī)藥組合物抑制病毒的能力，在小鼠接受病毒后的6小時(shí)后開始，每天一次以灌食方式施予本發(fā)明的醫(yī)藥組合物，持續(xù)施以6天。施于劑量以18mg/kg來計(jì)算。小鼠飼養(yǎng)8天，期間每天觀察體重變化或是否死亡。
結(jié)果如表一及表二所示單獨(dú)只以病毒處理的對照組B、C和D的小鼠，分別在病毒感染后的第四天(1500pfu)、第五天(150pfu)及第七天(15pfu)死亡。但是同時(shí)給予病毒及本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的實(shí)驗(yàn)組別的小鼠都存活下來，初期雖然有發(fā)病的輕微癥狀，伴隨著體重減輕的現(xiàn)象，但是漸漸地都恢復(fù)健康，體重也都回升。僅施予本發(fā)明的醫(yī)藥組合物而未施予病毒的對照組，其體重則逐漸增加。
由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物能完全避免A型流行性成冒病毒引起的小鼠死亡。所以可作為抑制A型流行性感冒病毒用。
表一、對照組小鼠體重變化或死亡紀(jì)錄

表二、實(shí)驗(yàn)組小鼠體重變化或死亡紀(jì)錄


結(jié)果顯示，事先服用本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，全部都能從病毒引起的癥狀中康復(fù)，然而對照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物卻會(huì)死亡，顯示本發(fā)明的醫(yī)藥組合物能有效抑制A型流行性感冒病毒的復(fù)制，達(dá)到預(yù)防病毒感染的功效。
再者，比較本發(fā)明的醫(yī)藥組合物與現(xiàn)有市售治療感冒藥物Tamiflu的作用，發(fā)現(xiàn)兩者作用相似，對流行性感冒都有早期預(yù)防及減輕癥狀的功效。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)顯示本發(fā)明的醫(yī)藥組合物與Tamiflu的IC50藥物濃度相近，但本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的細(xì)胞毒性較低，即引起副作用的機(jī)率較低。
另外，于臺(tái)灣第08911092號專利申請“藻膽色素抑制腸病毒及流行感冒病毒復(fù)制造成細(xì)胞病變的方法”顯示在A型流行性感冒病毒感染當(dāng)時(shí)及之后處理以異藻藍(lán)蛋白可以達(dá)到50％抑制病毒濃度(InhibitoryConcentration 50％、IC50)。顯示本發(fā)明的醫(yī)藥組合物組成亦有治療A型流行性感冒的功效。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物在小鼠的動(dòng)物試驗(yàn)中所使用的劑量為18mg/kg，并對于不同濃度的A型流行性感冒病毒感染的小鼠產(chǎn)生不同程度的改善效果。正如本技術(shù)領(lǐng)域的人士所熟知，醫(yī)藥組合物的長期使用可能會(huì)產(chǎn)生劑量依賴(dose-dependent)的現(xiàn)象，即所使用的劑量愈高，其改善的效果愈明顯，因此本醫(yī)藥組合物的用量可隨時(shí)程、癥狀改善程度而有所調(diào)整。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物也適用于小鼠以外的所有哺乳類動(dòng)物，其適用劑量的換算為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知。例如以小鼠劑量與人類劑量的換算而言，可以依照肝表面積換算法；或是于小鼠與人體之間給予1至100的系數(shù)，將小鼠劑量除以該系數(shù)，則得到人體的劑量。然而正如熟悉此領(lǐng)域的人士所公知，提供給對象的精確劑量必須依病毒感染的程度、嚴(yán)重性、種類及對象個(gè)體體質(zhì)，例如一般的健康狀況、年齡、性別、體重及對藥物的忍受度等來決定。
其他實(shí)施態(tài)樣所有本說明書所描述的特征皆可以任何形式與其他方法合并使用。本說明書中所描述的特征可以具有相同、相等或相似目的的特征所取代。因此，除了明確強(qiáng)調(diào)的部分外，所有本說明書中描述的特征僅為眾多相等或相似特征中的一個(gè)實(shí)施例。
依據(jù)本說明書描述的內(nèi)容，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員可輕易依據(jù)本發(fā)明的基本特征，在不脫離本發(fā)明的精神與范圍內(nèi)，針對不同使用方法與情況作適當(dāng)改變與修飾。因此，其他實(shí)施態(tài)樣也包含在申請專利范圍中。
權(quán)利要求
1.一種抑制流行性感冒病毒感染及復(fù)制的醫(yī)藥組合物，其組成包含有效量的C-藻藍(lán)蛋白、異藻藍(lán)蛋白、藍(lán)藻精或其混合物。
2.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中前述的混合物包括C-藻藍(lán)蛋白、異藻藍(lán)蛋白或藍(lán)藻精的任二組成混合。
3.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中前述的混合物包括C-藻藍(lán)蛋白、異藻藍(lán)蛋白及藍(lán)藻精三種組成混合而成。
4.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，可進(jìn)一步包含醫(yī)藥可接受的載體、佐藥、賦形劑或添加物。
5.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物以包括粉末狀、顆粒狀、液狀、膠狀或膏狀存在。
6.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中前述醫(yī)藥組合物以包括食品、飲品、藥品、試劑或營養(yǎng)補(bǔ)充品的形式提供。
7.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物以包括經(jīng)由口服，洼射、吸入、皮下埋植或皮膚貼片方式施用于對象物。
8.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于抑制各類流行性感冒病毒的感染與復(fù)制。
9.如權(quán)利要求8所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于抑制A型流行性感冒病毒的感染與復(fù)制。
10.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防及/或治療各類流行性感冒。
11.如權(quán)利要求10所述的組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防各類流行性感冒。
12.如權(quán)利要求10所述的組合物，其中前述醫(yī)藥組合物適用于預(yù)防及/或治療A型流行性感冒。
13.一種萃取權(quán)利要求1的醫(yī)藥組合物的方法，包括下列步驟(a)有機(jī)藍(lán)藻粉加入低張緩沖液，充分?jǐn)嚢杈鶆颍?b)室溫以下溫度靜置過夜；(c)分離機(jī)分離純化；(d)收集上層液測光譜，確定成分含量；以及(e)噴霧干燥；其特征在于利用0-18℃的低溫萃取以維持前述醫(yī)藥組合物的生物活性及營養(yǎng)成分。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中前述低溫萃取的步驟是于4℃下進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種抑制流行性感冒病毒感染及復(fù)制的醫(yī)藥組合物，包含有效量的C－藻藍(lán)蛋白(C－Phycocyanin；C－PC)、異藻藍(lán)蛋白(Allophycocyanin；APC)、藍(lán)藻精(Spirulina Growth Factor；SGF)或其混合物。本發(fā)明還提供一種萃取前述醫(yī)藥組合物的方法，其步驟系包括a.有機(jī)藍(lán)藻粉加入低張緩沖液，充分?jǐn)嚢杈鶆?；b.室溫以下溫度靜置過夜；c.分離機(jī)分離純化；d.收集上層液測光譜，確定成分含量；以及e.噴霧干燥；其特征在于利用低溫萃取以維持前述醫(yī)藥組合物的生物活性及營養(yǎng)成分。
文檔編號A61P31/00GK1861189SQ20051007123
公開日2006年11月15日 申請日期2005年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月13日
發(fā)明者闕壯群, 施信如 申請人:闕壯群