專利名稱：一種治療心腦血管疾病的注射凍干粉針及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物制劑及其制備方法，特別是涉及治療心腦血管疾病的藥物制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
心血管疾病是導(dǎo)致人類死亡的第一病種，隨著社會生活水平的提高以及人口的老齡化，心血管藥物的研究日益重視，應(yīng)用也日益廣泛。缺血性腦中風(fēng)(腦梗塞)在急性發(fā)作期內(nèi)的急救治療是其治療的關(guān)鍵時(shí)機(jī)，因此在發(fā)揚(yáng)中醫(yī)藥傳統(tǒng)優(yōu)勢，開發(fā)速效、高效、急診用藥的中藥注射劑具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種治療心腦血管疾病的藥物制劑及其制備方法；本發(fā)明的目的還在于提供一種注射制劑的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的桃仁 1-4重量份赤芍 1-4重量份川芎 1-4重量份，優(yōu)選配比為桃仁 1重量份赤芍 1重量份川芎 1重量份，還可以是桃仁 2重量份赤芍 3重量份川芎 2重量份按藥劑學(xué)方法，可以將本發(fā)明藥物組合物制備成多種臨床藥物劑型，包括口服制劑或非腸道給藥的劑型。所說的口服制劑選自于片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑當(dāng)中的一種；所說的非腸道給藥劑型選自于注射劑、氣霧劑、栓劑或皮下給藥劑型當(dāng)中的一種。
本發(fā)明藥物還可加入常規(guī)的藥物賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑等。
本發(fā)明制成凍干粉針的制備方法以上3味，取川芎1味，粉碎成粗粉，置超臨界提取釜中，CO2超臨界提取2-3次，每次提取釜壓力20-40Mpar，溫度40-60在℃；分離釜I壓力10-14Mpar，溫度30-40℃；分離釜II壓力4-8Mpar，溫度30-40℃；提取1-2小時(shí)，從分離釜收集，得揮發(fā)油提取物。末次超臨界提取后，分離釜II中連續(xù)式泵入藥材1.2倍量的95％乙醇，共提取1小時(shí)，從分離釜收集提取物，得乙醇提取液。川芎揮發(fā)油提取物加藥材4-10倍量的重蒸餾水，水蒸氣蒸餾，收集藥材2-5倍量的蒸餾液，蒸餾液加入藥材0.1-0.3％量的NaOH，靜置，濾過，得藥液，備用。取桃仁、赤芍2味，加6-12倍量水，煎煮1-2小時(shí)，濾過，藥渣再加6-10倍量水，煎煮1-2小時(shí)，濾過，合并濾液，藥液減壓濃縮至相對密度40℃下1.19，加入清膏2-6倍量85-95％乙醇，使藥液含醇量70-80％，醇沉，靜置8-18小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度40℃下1.24，加入清膏7-10倍量85-95％乙醇，使藥液含醇量80-85％，醇沉，醇液用15-25％NaOH液調(diào)至pH值6-8，靜置8-18小時(shí)，濾過,藥液加入1-2％量的活性炭，攪拌，濾過，藥液與上述川芎醇提液合并，回收乙醇至無醇味，得清膏。清膏加入上述川芎備用液，攪拌，濾過，藥液用注射用水調(diào)節(jié)至含生藥1.0g/ml，加入0.3-0.6％量的甘露醇和0.3-0.6％量的活性炭，100℃保溫10-20分鐘，濾過或離心，藥液超濾，凍干，即得凍干粉針。
本發(fā)明凍干粉針的質(zhì)量控制方法為質(zhì)量控制方法中的鑒別方法選自下述方法中的一種或幾種a.取本品，加甲醇制成每1ml含3mg1瓶，作為供試品溶液。另取苦杏仁苷對照品，加甲醇6ml使溶解的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以12-18∶30-50∶15-25∶3-6二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水為展開劑，展開，取出，噴以磷鉬酸硫酸溶液，在100-105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。在供試品色譜中，與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。其中磷鉬酸硫酸溶液是由磷鉬酸2g加水20ml使溶解，再緩緩加入硫酸30ml，混勻制得。
b.取本品，加甲醇制成每1ml含3mg1瓶，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，用甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以30-50∶3-6∶8-12∶0.1-0.3二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1-2％香草醛硫酸溶液，在100-105℃下加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
c.取本品，加甲醇制成每1ml含3mg1瓶，作為供試品溶液。另取阿魏酸對照品，用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以25-35∶1-3∶1-2甲苯-甲醇-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵-2％鐵氰化鉀的50％乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
質(zhì)量控制方法中的含量測定方法選自下述方法中的一種或幾種a.桃仁照高效液相色譜法(《中國藥典》2000版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，24-28∶72-76甲醇-水為流動(dòng)相；檢測波長為218nm。理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。對照品溶液的制備，精密稱取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷對照品適量，用流動(dòng)相制成每1ml含0.3mg的溶液，即得。供試品溶液的制備，取本品1瓶，加流動(dòng)相6ml溶解，定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)法計(jì)算，即得。本品每瓶含桃仁以苦杏仁苷(C20H27NO11)計(jì)，不得少于26mg。
b.赤芍 照高效液相色譜法(《中國藥典》2000版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，24-28∶72-76甲醇-水為流動(dòng)相；檢測波長為218nm。理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。對照品溶液的制備，精密稱取于60℃干燥至恒重的芍藥苷對照品適量，精密稱定，用流動(dòng)相制成每1ml約含0.4mg的溶液，即得。供試品溶液的制備，取本品1瓶，加流動(dòng)相6ml溶解，定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)法計(jì)算，即得。本品每瓶含赤芍以芍藥苷(C23H28O11)計(jì)，不得少于32mg。
本發(fā)明凍干粉針質(zhì)量控制方法還可采用指紋圖譜的方法
照高效液相色譜法(《中國藥典》2000版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，22-28∶78-72甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相；檢測波長為218nm。理論塔板數(shù)按參照物(苦杏仁苷)峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。參照物溶液的制備，精密稱取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷參照物適量，用流動(dòng)相制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。供試溶液的制備，取本品2瓶，分別加流動(dòng)相6ml溶解，定量轉(zhuǎn)移至50ml的容量瓶中，蕩洗藥瓶3次并轉(zhuǎn)移至容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，得供試液。測定法，分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，參照物用外標(biāo)法計(jì)算，需符合以下標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。本品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似；指紋圖譜應(yīng)有8個(gè)共有峰。
相對保留時(shí)間(峰號)0.348±30％(1)、0.552±30％(2)、1(S)、1.412±30％(3)、1.549±30％(4)、2.024±30％(5)、3.591±30％(6)、4.002±30％(7)；峰面積比值(峰號)1.240±30％(5)、0.451±40％(7)；非共有峰面積不得過總峰面積的5％。(如下表)活血通絡(luò)粉針(凍干)的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜共有峰序號 相對保留時(shí)間 峰面積比值1 0.348(0.244～0.452)2 0.552(0.386～0.718)S 1 13 1.412(1.130～1.694)4 1.549(1.084～2.014)5 2.024(1.417～2.631)1.240(0.992～1.487)6 3.591(2.514～4.668)7 4.002(2.801～5.203)0.451(0.338～0.563)儀器Agilent 1100液相色譜儀；色譜柱Agillent Hypersil ODS C18(4.6×250mm 5μm)；積分方式谷谷積分。其中流動(dòng)相優(yōu)選27∶73甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液。
指紋圖譜苦杏仁苷參照物色譜圖 活血通絡(luò)粉針標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜 本發(fā)明粉針制劑(活血通絡(luò)粉針)主要藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明活血通絡(luò)粉針能明顯降低結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈致急性實(shí)驗(yàn)性不完全性腦缺血大鼠的腦指數(shù)及腦含水量；明顯降低大腦中動(dòng)脈阻斷(MCAO)大鼠的行為學(xué)評分及腦梗塞率；明顯降低大腦中動(dòng)脈缺血再灌注大鼠的行為學(xué)評分、腦梗塞率及腦含水量；能降低麻醉犬的收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓，增加心輸出量、冠脈流量，降低左室內(nèi)壓及左室舒張末期壓，降低總耗氧指數(shù)和總外周阻力，增加腦血流量，降低腦血管阻力；能明顯降低大鼠動(dòng)靜脈旁路血栓濕重及血栓干重，升高血栓濕重抑制率和血栓干重抑制率；明顯降低大鼠血小板最大聚集率，升高聚集抑制率；明顯降低ADP、AA、Coll所誘導(dǎo)的家兔血小板聚集率，升高ADP所誘導(dǎo)的家兔血小板的解聚率；顯著延長大鼠及小鼠的凝血時(shí)間；能有效的抑制大鼠的血漿粘度；能顯著降低大鼠的紅細(xì)胞濾過指數(shù)；對大鼠的血小板總數(shù)、活化部分凝血酶原時(shí)間、凝血酶原時(shí)間和血漿纖維蛋白原無顯著改變。活血通絡(luò)粉針能改善腦梗塞后的神經(jīng)行為障礙、縮小梗塞面積；降低缺血大腦的腫脹程度；對心血管系統(tǒng)具有擴(kuò)張血管，減少外周阻力，降低血壓，減輕心臟負(fù)荷，增加冠脈流量和心輸出量，降低心肌耗氧量；對腦循環(huán)系統(tǒng)具有擴(kuò)張腦血管，降低腦血管阻力，增加腦血流量，改善腦循環(huán)等作用。能明顯抑制血栓形成及抑制血小板聚集；延長凝血時(shí)間、降低血液粘度、改善紅細(xì)胞變形能力。這些作用對于其臨床治療缺血性腦中風(fēng)是十分有效的。
下面實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明。
實(shí)驗(yàn)例1對急性實(shí)驗(yàn)性不完全性腦缺血大鼠的保護(hù)作用試驗(yàn)?zāi)康挠^察受試藥物對結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈大鼠腦指數(shù)及腦含水量的影響，確定藥物對急性實(shí)驗(yàn)性不完全性腦缺血大鼠是否有保護(hù)作用。
1 組別與劑量(1)假手術(shù)組0.9％氯化鈉注射液。(2)模型組0.9％氯化鈉注射液。(3)陽性藥物組0.02％尼莫地平溶液(2mg/kg)。(4)陽性藥物組80％復(fù)方丹參注射溶液(8g/kg)。(5)低劑量組2.5％活血通絡(luò)粉針(0.25g/kg)。(6)中劑量組5％活血通絡(luò)粉針(0.5g/kg)。(7)高劑量組10％活血通絡(luò)粉針(1g/kg)(8)口服中劑量組5％活血通絡(luò)粉針(0.5g/kg)。(9)口服高劑量組10％活血通絡(luò)粉針(1g/kg)。給藥容積為10ml/kg。
2 實(shí)驗(yàn)操作取SD雄性大鼠90只，體重200～250g，隨機(jī)分為9組，即假手術(shù)組、模型組、西藥陽性藥物組、中藥陽性藥物組、活血通絡(luò)粉針低、中、高3個(gè)劑量組及活血通絡(luò)粉針口服中劑量組、高劑量組。1～7組動(dòng)物每天靜脈注射給藥1次，連續(xù)3天；8～9組動(dòng)物每天口服灌胃給藥1次，連續(xù)3天。末次給藥30分鐘后，各鼠以10％水合氯醛麻醉(400mg/kg，ip)，仰位固定，頸正中部切開皮膚，分離出兩側(cè)頸總動(dòng)脈，分別用0號手術(shù)縫線兩端結(jié)扎頸總動(dòng)脈后中間剪斷(其中假手術(shù)組穿線后不結(jié)扎)，縫合皮膚。3小時(shí)后脫頸椎處死，取腦，置已稱重并已烘干至恒重的稱量瓶中稱其濕重；106℃連稱量瓶烘干至恒重，稱其總恒重，將其總恒重減去稱量瓶重即為干重，按下列公式計(jì)算腦指數(shù)和腦含水量，并采用組間t檢驗(yàn)法與模型組進(jìn)行顯著性測定比較。腦指數(shù)＝腦濕重(g)×100/體重(g)，腦含水量(％)＝(腦濕重(g)-腦干重(g))/腦濕重(g)×100％3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果對腦指數(shù)的影響iv活血通絡(luò)粉針0.5g/kg組、1g/kg組動(dòng)物的腦指數(shù)明顯低于模型組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，呈顯著性差異(P＜0.05、P＜0.05)；ig活血通絡(luò)粉針0.5g/kg組、1g/kg組動(dòng)物的腦指數(shù)與模型組比較無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
對腦含水量的影響iv活血通絡(luò)粉針0.5g/kg組、1g/kg組動(dòng)物的腦含水量明顯低于模型組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，呈顯著性差異(P＜0.05、P＜0.01)，且藥物作用隨劑量增加而增強(qiáng)；ig活血通絡(luò)粉針0.5g/kg組、1g/kg組動(dòng)物的腦含水量與模型組比較無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表1。
1對結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈大鼠腦指數(shù)及腦含水量的影響(X±S)劑量給藥 動(dòng)物數(shù) 腦含水量組別 腦指數(shù)(g/kg) 途徑(只)(％)假手術(shù) -- iv 100.744±0.028 77.91±0.58模型 -- iv 100.786±0.021△△79.83±1.23△△△尼莫地平 0.002iv 100.722±0.066** 78.41±0.62**香丹注射液 8iv 100.754±0.079 78.83±0.69*活血通絡(luò)液 0.25 iv 100.771±0.074 79.12±0.93活血通絡(luò)液 0.5 iv 100.748±0.053* 78.71±0.88*活血通絡(luò)液 1iv 100.742±0.046* 78.41±0.79**活血通絡(luò)液 0.5 ig 100.781±0.034 79.24±0.70活血通絡(luò)液 1ig 100.768±0.020 79.05±1.63與假手術(shù)組比較△△P＜0.01，△△△P＜0.001。
與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
實(shí)驗(yàn)例2對大腦中動(dòng)脈阻斷(MCAO)大鼠的保護(hù)作用試驗(yàn)?zāi)康挠^察受試藥物對大腦中動(dòng)脈阻斷(MCAO)大鼠行為學(xué)評分及腦梗塞率的影響，確定藥物對腦缺血大鼠是否有保護(hù)作用。
1 組別與劑量(1)假手術(shù)組0.9％氯化鈉注射液。(2)模型組0.9％氯化鈉注射液。(3)陽性藥物組0.02％尼莫地平溶液(2mg/kg)。(4)陽性藥物組80％復(fù)方丹參注射溶液(8g/kg)。(5)低劑量組2.5％活血通絡(luò)粉針(0.25g/kg)。(6)中劑量組5％活血通絡(luò)粉針(0.5g/kg)。(7)高劑量組10％活血通絡(luò)粉針(1g/kg)給藥容積為10ml/kg。
2 實(shí)驗(yàn)操作取SD雄性大鼠70只，體重250～350g，隨機(jī)分為7組，即假手術(shù)組、模型組、西藥陽性藥物組、中藥陽性藥物組、活血通絡(luò)粉針低、中、高3個(gè)劑量組，各組動(dòng)物每天靜脈注射給藥1次，連續(xù)3天，末次給藥30分鐘后，各鼠以10％水合氯醛麻醉(300mg/kg，ip)，以側(cè)臥位沿右外耳道與右眼外眥連線的中點(diǎn)，垂直于連線切開皮膚約2cm，剪開筋膜，鈍性分離肌肉，暴露出顴弓。用止血鉗咬斷顴弓，將顴弓和下頜骨撐開，用小拉鉤拉住固定于鼠板上，暴露鱗狀骨的大部分，然后在顴骨和鱗狀骨前聯(lián)合的前下方約2～4mm處用臺式電車鉆孔，開一直徑約2mm的小顱窗，此時(shí)透過硬腦膜就可見一條較直且少分支的小血管，即為大腦中動(dòng)脈(MCA)。它幾乎垂直路過嗅束向上而行，用細(xì)針灸針刺破硬腦膜，暴露中動(dòng)脈，確認(rèn)后將電刀置雙極電凝位置，選擇最大檔電凝開關(guān)，除假手術(shù)組不做電凝術(shù)外，其余各組動(dòng)物電凝嗅束內(nèi)1mm至大腦下靜脈之間的一段大腦中動(dòng)脈，電凝4～6秒，電凝時(shí)避免出血及傷害腦組織，可用濕棉球保護(hù)。阻斷大腦中動(dòng)脈后用小塊肌肉組織輕敷于顱窗上，然后逐層縫合傷口。術(shù)后回籠飼養(yǎng)。以上過程均在室溫恒定(24～25℃)情況下進(jìn)行，以利于評價(jià)腦缺血情況。觀察對大鼠局灶性腦缺血行為評分和腦梗塞面積的影響。
①大鼠局灶性腦缺血行為評分法待MCAO大鼠麻醉清醒后，進(jìn)行行為學(xué)檢測。方法為在MCAO后4小時(shí)及24小時(shí)，按以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分(1)提鼠尾離地面約1尺，觀察前肢情況。正常大鼠兩前肢對稱地伸向地面。有左肩內(nèi)旋，左前肢內(nèi)收者，評為4分。否則0分；(2)將動(dòng)物置平滑地板上，分別推左(或右)肩向?qū)?cè)移動(dòng)，檢查抵抗推動(dòng)的阻力。正常大鼠雙側(cè)阻力明顯對稱。右肩向左側(cè)移動(dòng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)阻力下降者，根據(jù)下降程度的不同，評為1～3分；(3)將動(dòng)物兩前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察兩前肢的肌張力，正常大鼠兩前肢肌張力明顯對稱。發(fā)生左前肢肌張力明顯下降者，根據(jù)下降的輕重，評為1～3分。根據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)評分，滿分10分，分?jǐn)?shù)越高，說明動(dòng)物的行為障礙越嚴(yán)重。評分采用單盲法，并采用組間t檢驗(yàn)法與模型組進(jìn)行顯著性測定比較。
②TTC染色測量腦梗塞面積MCAO后24小時(shí)斷頭取腦，肉眼進(jìn)一步確證右側(cè)大腦中動(dòng)脈已在嗅束與大腦下靜脈之間燒斷，且腦實(shí)質(zhì)無損害者，將腦置冰冷的生理鹽水中(2～3)10min，去除嗅球、小腦和低位腦干后，冠狀切四刀，切成五片。第一刀在腦前極與視交叉連線中間；第二刀在視交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。然后迅速將腦片置5ml含有1％TTC的磷酸緩沖溶液中，避光溫孵30分鐘，其中每隔7～8分鐘翻動(dòng)一次，經(jīng)染色后，正常腦組織呈玫瑰紅色，而梗塞組織呈白色，且界限分明。溫孵完畢后將腦片照相，剪下紅白顏色區(qū)稱重計(jì)算之。然后根據(jù)重量求面積法，分別計(jì)算出五個(gè)腦片共10個(gè)平面的總面積和梗塞去區(qū)域的面積，求出梗塞區(qū)面積占半球總面積的百分比，即梗塞率，并采用組間t檢驗(yàn)法與模型組進(jìn)行顯著性測定比較。
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果顯示，模型組與假手術(shù)組相比，梗塞面積為21.81％，表明大鼠MCAO模型造模成功。
行為學(xué)評分4小時(shí)后，活血通絡(luò)粉針各組動(dòng)物的行為學(xué)評分與模型組比較有所降低，但在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無差異；24小時(shí)后，活血通絡(luò)粉針各組動(dòng)物的行為學(xué)評分相比4小時(shí)呈下降趨勢，模型組則有所上升；活血通絡(luò)粉針各組動(dòng)物的行為學(xué)評分均明顯低于模型組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，均呈顯著性差異(P＜0.05、P＜0.05、P＜0.01)。
對腦梗塞率的影響活血通絡(luò)粉針各組動(dòng)物的腦梗塞率均明顯低于模型組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，均呈顯著性差異(P＜0.01、P＜0.001、P＜0.001)，且藥物作用隨劑量增加而增強(qiáng)。結(jié)果見表2。
2對MCAO大鼠行為學(xué)評分及腦梗塞率的影響(X±S)行為學(xué)評分劑量 動(dòng)物數(shù) 腦梗塞率組別(g/kg) (只) (％)4h 24h假手術(shù)-- 10 2.0±0.02.0±0.0 0.00±0.00模 型-- 10 6.6±2.7△△△7.1±2.3△△△21.81±7.30△△△尼莫地平 0.00210 4.7±2.33.2±1.8*** 5.07±3.93***香丹注射液810 5.7±2.35.2±1.8 11.10±11.70*活血通絡(luò)液0.25 10 5.6±2.04.9±2.0*12.47±5.51**活血通絡(luò)液0.5 10 5.4±2.34.6±2.1*8.54±7.64***活血通絡(luò)液110 4.9±2.34.2±1.8** 2.91±2.35***與假手術(shù)組比較△△△P＜0.001。
與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
實(shí)施例1桃仁 2000g赤芍 2000g川芎 2000g以上3味，取川芎1味，粉碎成粗粉，置超臨界提取釜中，CO2超臨界提取兩次，第一次提取釜壓力35Mpar，溫度50℃；分離釜I壓力12Mpar，溫度35℃；分離釜II壓力6Mpar，溫度35℃；提取1小時(shí)，從分離釜收集，得揮發(fā)油提取物。第二次繼續(xù)進(jìn)行CO2超臨界提取，提取釜壓力35Mpar，溫度50℃；分離釜I壓力12Mpar，溫度35℃；分離釜II壓力6Mpar，溫度35℃；連續(xù)式泵入藥材1.2倍量的95％乙醇，共提取1小時(shí)，從分離釜收集提取物，得乙醇提取液。川芎揮發(fā)油提取物加藥材6倍量的重蒸餾水，水蒸氣蒸餾，收集藥材3倍量的蒸餾液，蒸餾液加入藥材0.1％量的NaOH，靜置，濾過，得藥液，備用。
取桃仁(沸下)、赤芍2味，加10倍量水，煎煮2小時(shí)，濾過，藥渣再加8倍量水，煎煮2小時(shí)，濾過，合并濾液，藥液減壓濃縮至相對密度1.19，(40℃)，加入清膏4倍量95％乙醇，使藥液含醇量75％，醇沉，靜置12小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.24(40℃)，加入清膏9倍量95％乙醇，使藥液含醇量85％，醇沉，醇液用20％NaOH液調(diào)至pH值7.5，靜置12小時(shí)，濾過，藥液加入1％量的活性炭，攪拌，濾過，藥液與上述川芎醇提液合并，回收乙醇至無醇味，得清膏。
清膏加入上述川芎備用液，攪拌，濾過，藥液用注射用水調(diào)節(jié)至含生藥1.0g/ml，加入0.5％量的甘露醇和0.5％量的活性炭，100℃保溫10分鐘，濾過或離心，藥液超濾，膜分子量1萬，分裝1000瓶，每瓶6ml，凍干，即得。每瓶含生藥6g，靜脈滴注。每次1瓶，一日一次，或遵醫(yī)囑。臨用前，先以適量滅菌注射用水充分溶解，再以氯化鈉注射液100或250ml稀釋。
實(shí)施例2桃仁 1714g赤芍 2000g川芎 2572g以上3味，取川芎1味，粉碎成粗粉，置超臨界提取釜中，CO2超臨界提取兩次，第一次提取釜壓力35Mpar，溫度50℃；分離釜I壓力12Mpar，溫度35℃；分離釜II壓力6Mpar，溫度35℃；提取1小時(shí)，從分離釜收集，得揮發(fā)油提取物。第二次繼續(xù)進(jìn)行CO2超臨界提取，提取釜壓力35Mpar，溫度50℃；分離釜I壓力12Mpar，溫度35℃；分離釜II壓力6Mpar，溫度35℃；連續(xù)式泵入藥材1.2倍量的95％乙醇，共提取1小時(shí)，從分離釜收集提取物，得乙醇提取液。川芎揮發(fā)油提取物加藥材6倍量的重蒸餾水，水蒸氣蒸餾，收集藥材3倍量的蒸餾液，蒸餾液加入藥材0.1％量的NaOH，靜置，濾過，得藥液，備用。
取桃仁(沸下)、赤芍2味，加10倍量水，煎煮2小時(shí)，濾過，藥渣再加8倍量水，煎煮2小時(shí)，濾過，合并濾液，藥液減壓濃縮至相對密度1.19，(40℃)，加入清膏4倍量95％乙醇，使藥液含醇量75％，醇沉，靜置12小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度1.24(40℃)，加入清膏9倍量95％乙醇，使藥液含醇量85％，醇沉，醇液用20％NaOH液調(diào)至pH值7.5，靜置12小時(shí)，濾過，藥液加入1％量的活性炭，攪拌，濾過，藥液與上述川芎醇提液合并，回收乙醇至無醇味，得清膏。清膏加入上述川芎備用液，攪拌，濾過，用加蔗糖50g，甜葉菊甙1g矯味，調(diào)總量至10000ml，過濾、灌裝，滅菌即得口服液；每瓶10ml，每瓶含生藥6g，每次1-2瓶，一日一至三次，或遵醫(yī)囑。
實(shí)施例3本發(fā)明凍干粉針質(zhì)量控制方法鑒別取本品1瓶，加甲醇6ml使溶解，作為供試品溶液。另取苦杏仁苷對照品，加甲醇制成每1ml含3mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以15∶40∶20∶5二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水為展開劑，展開，取出，噴以磷鉬酸硫酸溶液即磷鉬酸2g，加水20ml使溶解，再緩緩加入硫酸30ml，混勻制得，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。在供試品色譜中，與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
取本品1瓶，加甲醇6ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，用甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以40∶5∶10∶0.2二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％香草醛硫酸溶液，在105℃下加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
取本品1瓶，加甲醇6ml使溶解，作為供試品溶液。另取阿魏酸對照品，用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以30∶2.5∶1甲苯-甲醇-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵-2％鐵氰化鉀的50％乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
含量測定桃仁照高效液相色譜法(《中國藥典》2000版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，2773甲醇-水(v/v)為流動(dòng)相；檢測波長為218nm。理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。對照品溶液的制備精密稱取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷對照品適量，用流動(dòng)相制成每1ml含0.3mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品1瓶，加流動(dòng)相6ml溶解，定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)法計(jì)算，即得。本品每瓶含桃仁以苦杏仁苷(C20H27NO11)計(jì)，不得少于26mg。
赤芍 照高效液相色譜法(《中國藥典》2000版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，27∶73甲醇-水(v/v)為流動(dòng)相；檢測波長為218nm。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。對照品溶液的制備精密稱取于60℃干燥至恒重的芍藥苷對照品適量，精密稱定，用流動(dòng)相制成每1ml約含0.4mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品1瓶，加流動(dòng)相6ml溶解，定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)法計(jì)算，即得。本品每瓶含赤芍以芍藥苷(C23H28O11)計(jì)，不得少于32mg。
實(shí)施例4本發(fā)明凍干粉針采用指紋圖譜質(zhì)量控制方法照高效液相色譜法(《中國藥典》2000版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，22-28∶78-72甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相；檢測波長為218nm。理論塔板數(shù)按參照物(苦杏仁苷)峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。參照物溶液的制備，精密稱取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷參照物適量，用流動(dòng)相制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。供試溶液的制備，取本品2瓶，分別加流動(dòng)相6ml溶解，定量轉(zhuǎn)移至50ml的容量瓶中，蕩洗藥瓶3次并轉(zhuǎn)移至容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，得供試液。測定法，分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，參照物用外標(biāo)法計(jì)算，需符合以下標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。本品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似；指紋圖譜應(yīng)有8個(gè)共有峰。
相對保留時(shí)間(峰號)0.348±30％(1)、0.552±30％(2)、1(S)、1.412±30％(3)、1.549±30％(4)、2.024±30％(5)、3.591±30％(6)、4.002±30％(7)；峰面積比值(峰號)1.240±30％(5)、0.451±40％(7)；非共有峰面積不得過總峰面積的5％。(如下表)
活血通絡(luò)粉針(凍干)的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜共有峰序號相對保留時(shí)間 峰面積比值1 0.348(0.244～0.452)2 0.552(0.386～0.718)S 1 13 1.412(1.130～1.694)4 1.549(1.084～2.014)5 2.024(1.417～2.631) 1.240(0.992～1.487)6 3.591(2.514～4.668)7 4.002(2.801～5.203) 0.451(0.338～0.563)儀器Agilent 1100液相色譜儀；色譜柱Agillent Hypersil ODS C18(4.6×250mm 5μm)；積分方式谷谷積分。其中流動(dòng)相優(yōu)選27∶73甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液。
權(quán)利要求
1.一種治療心腦血管疾病的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的桃仁 1-4重量份赤芍 1-4重量份川芎 1-4重量份，
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的桃仁 1重量份赤芍 1重量份川芎 1重量份
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的桃仁 2重量份赤芍 3重量份川芎 2重量份
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物還可加入賦型劑。
5.如權(quán)利要求1、2或3所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為取川芎1味，粉碎成粗粉，置超臨界提取釜中，CO2超臨界提取2-3次，每次提取釜壓力20-40Mpar，溫度40-60在℃；分離釜I壓力10-14Mpar，溫度30-40℃；分離釜II壓力4-8Mpar，溫度30-40℃；提取1-2小時(shí)，從分離釜收集，得揮發(fā)油提取物；末次超臨界提取后，分離釜II中連續(xù)式泵入藥材1.2倍量的95％乙醇，共提取1小時(shí)，從分離釜收集提取物，得乙醇提取液；川芎揮發(fā)油提取物加藥材4-10倍量的重蒸餾水，水蒸氣蒸餾，收集藥材2-5倍量的蒸餾液，蒸餾液加入藥材0.1-0.3％量的NaOH，靜置，濾過，得藥液，備用；取桃仁、赤芍2味，加6-12倍量水，煎煮1-2小時(shí)，濾過，藥渣再加6-10倍量水，煎煮1-2小時(shí)，濾過，合并濾液，藥液減壓濃縮至相對密度40℃下1.19，加入清膏2-6倍量85-95％乙醇，使藥液含醇量70-80％，醇沉，靜置8-18小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度40℃下1.24，加入清膏7-10倍量85-95％乙醇，使藥液含醇量80-85％，醇沉，醇液用15-25％NaOH液調(diào)至pH值6-8，靜置8-18小時(shí)，濾過，藥液加入1-2％量的活性炭，攪拌，濾過，藥液與上述川芎醇提液合并，回收乙醇至無醇味，得清膏；清膏加入上述川芎備用液，攪拌，濾過，藥液用注射用水調(diào)節(jié)至含生藥1.0g/ml，加入0.3-0.6％量的甘露醇和0.3-0.6％量的活性炭，100℃保溫10-20分鐘，濾過或離心，藥液超濾，凍干，即得凍干粉針。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為取川芎1味，粉碎成粗粉，置超臨界提取釜中，CO2超臨界提取兩次，第一次提取釜壓力35Mpar，溫度50℃；分離釜I壓力12Mpar，溫度35℃；分離釜II壓力6Mpar，溫度35℃；提取1小時(shí)，從分離釜收集，得揮發(fā)油提取物；第二次繼續(xù)進(jìn)行CO2超臨界提取，提取釜壓力35Mpar，溫度50℃；分離釜I壓力12Mpar，溫度35℃；分離釜II壓力6Mpar，溫度35℃；連續(xù)式泵入藥材1.2倍量的95％乙醇，共提取1小時(shí)，從分離釜收集提取物，得乙醇提取液；川芎揮發(fā)油提取物加藥材6倍量的重蒸餾水，水蒸氣蒸餾，收集藥材3倍量的蒸餾液，蒸餾液加入藥材0.1％量的NaOH，靜置，濾過，得藥液，備用；取沸下桃仁、赤芍2味，加10倍量水，煎煮2小時(shí)，濾過，藥渣再加8倍量水，煎煮2小時(shí)，濾過，合并濾液，藥液減壓濃縮至40℃下相對密度1.19，加入清膏4倍量95％乙醇，使藥液含醇量75％，醇沉，靜置12小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至40℃下相對密度1.24，加入清膏9倍量95％乙醇，使藥液含醇量85％，醇沉，醇液用20％NaOH液調(diào)至pH值7.5，靜置12小時(shí)，濾過，藥液加入1％量的活性炭，攪拌，濾過，藥液與上述川芎醇提液合并，回收乙醇至無醇味，得清膏；清膏加入上述川芎備用液，攪拌，濾過，藥液用注射用水調(diào)節(jié)至含生藥1.0g/ml，加入0.5％量的甘露醇和0.5％量的活性炭，100℃保溫10分鐘，濾過或離心，藥液超濾，膜分子量1萬，分裝1000瓶，每瓶6ml，凍干，即得。
7.如利要求1、2或3所述的藥物組合物制成凍干粉針的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法包括如下鑒別中的一種或幾種a.取本品，加甲醇制成每1ml含3mg1瓶，作為供試品溶液；另取苦杏仁苷對照品，加甲醇6ml使溶解的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以12-18∶30-50∶15-25∶3-6二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水為展開劑，展開，取出，噴以磷鉬酸硫酸溶液，在100-105℃加熱至斑點(diǎn)清晰；在供試品色譜中，與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；其中磷鉬酸硫酸溶液是由磷鉬酸2g加水20ml使溶解，再緩緩加入硫酸30ml，混勻制得；b.取本品，加甲醇制成每1ml含3mg1瓶，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，用甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以30-50∶3-6∶8-12∶0.1-0.3二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1-2％香草醛硫酸溶液，在100-105℃下加熱至斑點(diǎn)清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；c.取本品，加甲醇制成每1ml含3mg1瓶，作為供試品溶液；另取阿魏酸對照品，用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以25-35∶1-3∶1-2甲苯-甲醇-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵-2％鐵氰化鉀的50％乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
8.如利要求7所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法包括如下鑒別中的一種或幾種a.取本品1瓶，加甲醇6ml使溶解，作為供試品溶液；另取苦杏仁苷對照品，加甲醇制成每1ml含3mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以15∶40∶20∶5二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水為展開劑，展開，取出，噴以磷鉬酸硫酸溶液即磷鉬酸2g，加水20ml使溶解，再緩緩加入硫酸30ml，混勻制得，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰；在供試品色譜中，與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；b.取本品1瓶，加甲醇6ml使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，用甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以40∶5∶10∶0.2二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％香草醛硫酸溶液，在105℃下加熱至斑點(diǎn)清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；c.取本品1瓶，加甲醇6ml使溶解，作為供試品溶液；另取阿魏酸對照品，用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以30∶2.5∶1甲苯-甲醇-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵-2％鐵氰化鉀的50％乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
9.如利要求1、2或3所述的藥物組合物制成凍干粉針的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的含量測定包括如下含量測定中的一種或幾種a.桃仁，照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，24-28∶72-76甲醇-水為流動(dòng)相；檢測波長為218nm；理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷對照品適量，用流動(dòng)相制成每1ml含0.3mg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取本品1瓶，加流動(dòng)相6ml溶解，定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)法計(jì)算，即得；本品每瓶含桃仁以苦杏仁苷計(jì)，不得少于26mg；b.赤芍，照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，24-28∶72-76甲醇-水為流動(dòng)相；檢測波長為218nm；理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取于60℃干燥至恒重的芍藥苷對照品適量，精密稱定，用流動(dòng)相制成每1ml約含0.4mg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取本品1瓶，加流動(dòng)相6ml溶解，定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)法計(jì)算，即得；本品每瓶含赤芍以芍藥苷計(jì)，不得少于32mg。
10.如利要求9所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的含量測定包括如下含量測定中的一種或幾種桃仁，照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，27∶73甲醇-水，v/v為流動(dòng)相；檢測波長為218nm；理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷對照品適量，用流動(dòng)相制成每1ml含0.3mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品1瓶，加流動(dòng)相6ml溶解，定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)法計(jì)算，即得；本品每瓶含桃仁以苦杏仁苷計(jì)，不得少于26mg；赤芍，照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，27∶73甲醇-水，v/v為流動(dòng)相；檢測波長為218nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取于60℃干燥至恒重的芍藥苷對照品適量，精密稱定，用流動(dòng)相制成每1ml約含0.4mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品1瓶，加流動(dòng)相6ml溶解，定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)法計(jì)算，即得；本品每瓶含赤芍以芍藥苷計(jì)，不得少于32mg。
11.如權(quán)利要求1、2或3所述的藥物組合物制成凍干粉針的質(zhì)量控制方法包括如下步驟鑒別a.取本品，加甲醇制成每1ml含3mg1瓶，作為供試品溶液；另取苦杏仁苷對照品，加甲醇6ml使溶解的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以12-18∶30-50∶15-25∶3-6二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水為展開劑，展開，取出，噴以磷鉬酸硫酸溶液，在100-105℃加熱至斑點(diǎn)清晰；在供試品色譜中，與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；其中磷鉬酸硫酸溶液是由磷鉬酸2g加水20ml使溶解，再緩緩加入硫酸30ml，混勻制得；b.取本品，加甲醇制成每1ml含3mg1瓶，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，用甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以30-50∶3-6∶8-12∶0.1-0.3二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1-2％香草醛硫酸溶液，在100-105℃下加熱至斑點(diǎn)清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；c.取本品，加甲醇制成每1ml含3mg1瓶，作為供試品溶液；另取阿魏酸對照品，用甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以25-35∶1-3∶1-2甲苯-甲醇-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵-2％鐵氰化鉀的50％乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；含量測定a.桃仁，照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，24-28∶72-76甲醇-水為流動(dòng)相；檢測波長為218nm；理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷對照品適量，用流動(dòng)相制成每1ml含0.3mg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取本品1瓶，加流動(dòng)相6ml溶解，定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)法計(jì)算，即得；本品每瓶含桃仁以苦杏仁苷計(jì)，不得少于26mg；b.赤芍，照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，24-28∶72-76甲醇-水為流動(dòng)相；檢測波長為218nm；理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取于60℃干燥至恒重的芍藥苷對照品適量，精密稱定，用流動(dòng)相制成每1ml約含0.4mg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取本品1瓶，加流動(dòng)相6ml溶解，定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)法計(jì)算，即得；本品每瓶含赤芍以芍藥苷計(jì)，不得少于32mg。
12.如利要求1、2或3所述的藥物組合物制成凍干粉針的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用了指紋圖譜的方法色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，22-28∶78-72甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相；檢測波長為218nm；理論塔板數(shù)按參照物苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；參照物溶液的制備，精密稱取于60℃干燥至恒重的苦杏仁苷參照物適量，用流動(dòng)相制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；供試溶液的制備，取本品2瓶，分別加流動(dòng)相6ml溶解，定量轉(zhuǎn)移至50ml的容量瓶中，蕩洗藥瓶3次并轉(zhuǎn)移至容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，得供試液；測定法，分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，參照物用外標(biāo)法計(jì)算，需符合以下標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；本品指紋圖譜應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似；指紋圖譜應(yīng)有8個(gè)共有峰；相對保留時(shí)間(峰號)0.348±30％(1)、0.552±30％(2)、1(S)、1.412±30％(3)、1.549±30％(4)、2.024±30％(5)、3.591±30％(6)、4.002±30％(7)；峰面積比值(峰號)1.240±30％(5)、0.451±40％(7)；非共有峰面積不得過總峰面積的5％。
13.如權(quán)利要求1、2或3所述的藥物組合物在制備治療心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療心腦血管疾病的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。該組合物由桃仁、赤芍、川芎組成，對不同組份采用了不同提取方法，最終制成凍干粉針。本發(fā)明同時(shí)提供了該凍干粉針的鑒別、含量測定的質(zhì)量控制方法，也提供了該凍干粉針制劑的指紋圖譜質(zhì)量控制方法。本發(fā)明在治療心腦血管疾病中有很好的效果。
文檔編號A61P9/10GK1507909SQ02156778
公開日2004年6月30日 申請日期2002年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月18日
發(fā)明者彭國平, 肖偉, 戴翔翎, 凌婭, 王振中, 徐漣明, 畢宇安 申請人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司